TrkB正别构调节剂

trkb正别构调节剂
技术领域：
：1.本发明涉及包含“lit-tb”衍生物的药物组合物领域。更特别地，其涉及用于治疗神经退化性疾病并且更特别地用于治疗亨廷顿病(huntington’sdisease)的“lit-tb”衍生物。本发明还涉及“lit-tb”衍生物和其制备。2.在下文描述中，[]之间的参考文献是指实例末尾的参考文献表。
背景技术：
：：[0003]亨廷顿病为遗传性疾病，会导致大脑中的神经细胞逐渐分解(退化)。亨廷顿病对一个人的功能能力有广泛的影响，并且通常会导致运动、思维(认知)和精神障碍。[0004]亨廷顿病(hd)为一种罕见的常染色体显性神经退化性疾病，特征在于运动控制受损、认知功能障碍、行为改变和情绪障碍。纹状体和其它区域如大脑皮层的进行性神经退化导致患者在首次出现症状后10-20年内死亡[1]。[0005]取决于发病年龄，hd可以分为两种形式：更传统的成人发病的hd和不太普遍的青少年发病的hd(jhd)，也称为hd的westphal变体。患有成人发病的hd的患者出现症状的平均年龄在30-50岁之间，而jhd发病发生在20岁之前。两种形式之间有一些症状重叠；然而，成人发病的hd与jhd之间有运动功能紊乱模式差异。舞蹈样运动(异常、不自主的运动)通常为患有成人发病的hd的患者的第一个观察到的症状。[0006]随着疾病恶化，称为运动机能减退的肌肉运动部分或完全丧失变得更加明显。相反，从jhd发病中通常会看到运动机能减退，而舞蹈症在这些患者中的症状不太明显并且在一些情况下可能根本不存在。在jhd个体中经常观察到癫痫，但在成人发病的hd中不存在癫痫发作。症状严重程度随着时间推移而升高，并且从hd诊断时间到死亡的平均潜伏期对于成人发病的hd患者为10-20年，而对于jhd患者不到10年。[0007]hd是由遗传缺陷造成，所述遗传缺陷导致胞嘧啶、腺嘌呤和鸟嘌呤(cag)重复序列在亨廷顿基因(htt)内扩增，从而导致突变亨廷顿蛋白(mhtt)产生。尽管野生型亨廷顿蛋白(htt)的功能仍有待完全阐明，但已经证实mhtt对大脑内的特定神经元发挥毒性作用。[0008]htt在全身多个亚细胞位置中无处不在地表达。尽管htt的功能仍有待完全确定，但研究表明，其与一系列其它蛋白质相互作用，所述蛋白质参与若干个细胞过程，包括细胞内信号传导、代谢和基因转录。近年来，已经出现越来越多的证据表明亨廷顿基因中的遗传缺陷导致对htt的正常生物功能的破坏，并且除了mhtt的毒性功能获得之外，这还可以在hd的病理学中发挥作用[2-4]。[0009]亨廷顿基因位于染色体4p16.3上。三核苷酸cag重复序列伸长段处于外显子1中的这个基因的开端。这些三联体重复序列中的每一个都编码氨基酸谷氨酰胺，并且因此这个cag三联体重复序列编码谷氨酰胺串，所述谷氨酰胺串也称为多谷氨酰胺段(亨廷顿病研究协作组(huntington’sdiseaseresearchcollaborativegroup)，1993年)。正常亨廷顿基因具有范围在六个与26个cag重复序列之间的多谷氨酰胺段。这些cag重复序列的数量在患有hd的人中显著增加，并且超过36个重复序列与hd发展有关[5-6]。[0010]亨廷顿的发现为hd发病机制提供了新的视角，但导致选择性死亡和神经元损失的机制仍然未知。[0011]在进行旨在增加关于hd发病机制的理解的调查的同时，还努力寻找针对这种破坏性疾病的可能疗法。在这方面，注意力集中于在针对人类神经退化性疾病的新治疗策略中使用神经营养因子[7]。[0012]bdnf为生长因子的神经营养素家族的成员，其与trkb酪氨酸激酶受体特异性结合，从而介导神经营养信号传导[8-9]。bdnf为成人大脑中最丰富的神经营养因子，并且其在正常发育期间和成人大脑损伤之后促进各种神经细胞群的存活、生长和可塑性。鉴于其对神经元的营养作用和其在高级认知功能中的中枢作用，bdnf已经迅速成为众多大脑病症，包括神经系统病症、神经退化性疾病和精神病症的病理生理学的关键因素。[0013]bdnf对在hd中死亡的纹状体神经元具有促进存活的活性的事实产生了以下观点：内源性营养支持的减少可能会造成疾病发作和/或恶化。这一假设引起了人们对bdnf和/或bdnf模拟物作为潜在治疗剂的兴趣，并且患有hd的人的大脑皮层和纹状体以及所述疾病的许多小鼠和细胞模型中的bdnf含量降低的报道加强了这一假设[10-12]。[0014]亨廷顿蛋白(huntingtin)与bdnf之间存在分子关系，因为正常(但非突变体)亨廷顿蛋白促进bdnf生产和轴突运输。[0015]归因于bdnf基因转录减少。[0016]尽管没有提出基础分子机制来解释其它神经系统疾病诸如帕金森病(parkinson’sdisease，pd)或阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)中减少的神经营养支持，但已知hd中的亨廷顿蛋白突变会降低bdnf启动子的转录活性，从而减少bdnf基因的转录并减少大脑皮层中的蛋白质生产。[0017]一项对hd患者的大脑皮层、尾状核和壳核执行的研究已经在人类身上证实了这一点。这项研究还表明尾状核和壳核中的bdnf表达减少，并表明bdnf过剩可能对hd具有治疗作用。[0018]野生型亨廷顿蛋白通过在bdnf启动子ii水平下起作用来刺激bdnf基因转录，而亨廷顿蛋白中病理性cag扩增的存在消除了维持hd中的bdnf转录的能力。[0019]归因于hd中的bdnf转运减少。[0020]突变亨廷顿蛋白基因敲入细胞、小鼠和hd死后组织的生化研究表明，驱动bdnf囊泡的复合物在hd中发生了变化。因此，这些结果可能意味着野生型亨廷顿蛋白控制bdnf从皮层到纹状体的转运，并且这种转运在hd中受到影响。[0021]许多小鼠和人类研究倾向于将hd中的纹状体bdnf的缺陷归因于以下两个因素的组合：皮层中的bdnf生产减少以及这种神经营养素从皮层到纹状体的转运减少。其中涉及正常亨廷顿蛋白的两个过程在hd中同时被破坏。[0022]此外，报道通过显示突变亨廷顿蛋白基因敲入细胞和hd小鼠模型中的trkb蛋白含量降低来表明突变亨廷顿蛋白影响hd中的trkb含量[13]。在来自三名hd患者的纹状体中也发现trkb受体显著减少，并且在来自四名hd受试者的皮层样品中也检测到trkb含量减少。需要进行其它调查来理解trkb下调的程度和一致性。[0023]为了克服hd中的bdnf减少诱发的问题，已经对r6/1小鼠执行了实验以评估bdnf提供的潜在体内益处[14]。发现bdnf有效增加了脑蛋白的表达以及表达脑蛋白的纹状体细胞即hd中受影响最大的细胞的数量。[0024]然而，尽管有这些有前景的结果，但bdnf补充也产生了许多问题：如果量太少，那么其可能不足以产生所需作用，如果量太大，那么其可能会带来危险。事实上，不受控制的bdnf施用可能会干扰其它机制诸如活动依赖性神经元可塑性，并可能会诱发严重的副作用诸如癫痫活动[15]。[0025]尽管有药物可用于帮助管控亨廷顿病的症状，但其当前为重要的未满足的需求，因为没有治疗可以预防与所述病况相关的身体、精神和行为衰退。[0026]显而易见，bdnf为hd中的缺失的关键因素之一，并且内源性bdnf生产的增加可以产生治疗作用，控制bdnf中枢和外周浓度非常重要。技术实现要素：[0027]本发明允许基于trkb的正别构调节剂(pam)的新治疗解决方案。[0028]也称为别构增强剂或增效剂的“正别构调节剂”(pam)意谓在不直接激活受体的情况下诱导受体对一级配体的反应效应放大的化合物。在本发明内，pamtrkb活性与bdnf增效对trkb受体功能活性的影响有关，其通过特异性trkb受体磷酸化检定在体外或体内测量。[0029]本发明的化合物和组合物具有若干性质，诸如对神经突长出的影响、bdnf增效、bbb(血脑屏障)渗透、良好的脑生物可用性、细胞存活率增加、trkb选择性和神经保护作用，从而赋予对于这种潜在的pam以引人关注的药物特征，这可以解决一些神经退化性疾病诸如亨廷顿病、帕金森病和阿尔茨海默病。[0030]本发明的化合物和组合物能够增效trkb介导的bdnf功能作用，并开辟了一种新的治疗方法来对抗hd。[0031]在第一方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含：[0032](a)式i所示lit-tb化合物：[0033][0034]其中，[0035]-r1选自包含h、卤素、c1到c10饱和或不饱和、被取代或未被取代的、脂肪族、杂脂肪族、环状、脂环族、杂脂环族的芳基、杂芳基、烷芳基或烷基杂芳基的组，或r1为式ia的基团：[0036][0037]其中，[0038]ra为任选地被一个或多个醚或酰胺官能团间断的直链c1到c10烷基链，[0039]a2为酰胺官能团，[0040]rb为任选地支化的c1到c6烷基链，[0041]fl为荧光基团或其非荧光类似基团，[0042]-g表示键或-g1-g2-连接子，其中[0043]·g1为键或任选地包含杂原子诸如n或o的c1到c4被取代或未被取代的烷基链，并且[0044]·g2表示c1到c10饱和或不饱和、被取代或未被取代的、脂肪族、杂脂肪族、环状、脂环族、杂脂环族的芳基、杂芳基、烷芳基或烷基杂芳基，[0045]-x1和x2相同或不同，独立地表示ch或n，[0046]-x3为c或n，[0047]-x4为n或nh，[0048]-y表示n或ch，[0049]-r为1到3的整数，[0050]-a为酰胺或胺官能团，优选地a为c(o)nh、nhc(o)或nh，[0051]-m等于0、1或2，[0052]-m’等于0、1或2，并且m m’≤3[0053]-t为0到5的整数，[0054]-每个r6基团相同或不同，选自包含h、氟化物、任选地支化的c1到c6烷基链和c1到c6烷氧基的组，[0055]-t1和t2相同或不同，独立地表示ch2、chr6或c＝o，[0056]-z选自包含键、h和任选地支化的c1到c3烷基链的组，所述任选地支化的c1到c3烷基链任选地包含杂原子，所述杂原子选自包含o或n的组，[0057]-当z为h时，r2为空，或r2选自包含h和任选地被一个或多个r7基团取代的5或6元芳香族或非芳香族环或杂环的组，每个r7基团相同或不同，选自包含h、卤化物、cn、no2、nh2、conh2、任选地支化的c1到c6烷基链和任选地支化的c1到c6烷氧基的组，两个r7基团任选地共价键结以形成环，[0058]或其药学上可接受的盐，和[0059](b)药学上可接受的赋形剂或载剂。[0060]在本公开内，表示单键或双键，这取决于x3和x4的性质，相邻的键可以为单键或双键。[0061]在本公开内，表示一个基团和其与主分子的连接点。[0062]式i所示化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐以及昔萘酸盐。关于合适的盐的评论，参阅stahl和wermuth的《药用盐手册：性质、选择和用途(handbookofpharmaceuticalsalts:properties,selection,anduse)》(wiley-vch,德国魏因海姆(weinheim,germany)，2002年)。[0063]一般来说，术语“被取代的”，无论其是否在术语“任选地”之后，以及含于本发明的化学式中的取代基，是指给定结构中的氢自由基被指定取代基自由基替代。当任何给定结构中的超过一个位置可以被超过一个选自特定组的取代基取代时，所述取代基在每个位置处可以相同或不同。如本文所用的术语“被取代的”预期包括有机化合物的所有允许的取代基。[0064]如本文所用的术语“脂肪族”是指非芳香族基团。脂肪族基团可以为环状的。脂肪族基团可以为饱和的，如己烷，或不饱和的，如己烯和己炔。开链基团(直链或支链)不含有任何类型的环，因此为脂肪族的。脂肪族基团可以为饱和的，由单键(烷烃)连接，或不饱和的，带有双键(烯烃)或三键(炔烃)。“杂脂肪族”基团为携带一个或多个杂原子的脂肪族基团，最常见的杂原子为氧、氮和硫。[0065]如本文所用的术语“烷基”是指直链和支链烷基。类似的惯例适用于其它通用术语诸如“烯基”、“炔基”等。在某些实施例中，如本文所用的“低碳数烷基”用于表示那些具有约1-6个碳原子的烷基(被取代的、未被取代的、支化的或未支化的)。说明性烷基包括但不限于例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、烯丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、异戊基、叔戊基、正己基、仲己基、部分等，此外，其可以携带一个或多个取代基。烯基包括但不限于例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-l-基等。代表性炔基包括但不限于乙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丙炔基等。[0066]一般来说，如本文所用的术语“芳香族部分”或“芳基”是指稳定的被取代或未被取代的不饱和的单环或多环烃部分，其优选具有3-14个碳原子，包含至少一个满足芳香性休克尔规则(hacklerule)的环。芳香族部分的实例包括但不限于苯基、茚满基、茚基、萘基、菲基和蒽基。“杂芳基”既为杂环的，又为芳香族的。[0067]如本文所用的术语“卤素”是指选自氟、氯、溴和碘的原子。[0068]如本文所用的术语“独立地”是指这些术语所提及的取代基、原子或部分彼此独立地选自变量表(即，其可以一致或相同)的事实。[0069]如技术人员将理解，所有数字，包括那些表达成分的量、性质诸如分子量、反应条件等的数字，都为近似值，并且被理解为在所有情况下任选地被术语“约”修饰。这些值可以取决于由所属领域的技术人员试图利用本文描述的教导内容来获得的期望性质而变化。还应理解，所述值固有地含有由在其对应的测试测量中发现的标准偏差必然导致的可变性。[0070]技术人员还将容易地认识到，在成员以共同方式分组在一起，诸如在马库什组(markushgroup)中的情况下，本发明不仅涵盖作为整体列出的整个组，而且涵盖所述组的单独的每个成员和主组的所有可能的子组。另外，出于所有目的，本发明不仅涵盖主组，而且涵盖没有一个或多个组成员的主组。因此，本发明设想明确排除所叙述组的任何一个或多个成员。因此，附带条件可以适用于任何公开的类别或实施例，由此可以从所述类别或实施例中排除任何一个或多个所叙述的要素、种类或实施例，例如在明确的否定限制中所使用。[0071]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中r1选自包含h、c1到c10饱和或不饱和、被取代或未被取代的、脂肪族、杂脂肪族、环状、脂环族的芳基、杂芳基、烷芳基或烷基杂芳基的组。优选地，r1可以选自包含h、烷基(例如甲基、乙基)、环烷基(例如环丙基、环戊基)、芳烷基(例如苄基、苯乙基)、杂环芳基(例如哌啶)或杂芳基(例如吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,4-三嗪基、1,3,5-三嗪基、噁唑基、咪唑基)的组，r1任选地被取代。[0072]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中r1为荧光基团fl。荧光基团f1可以选自包含bdp558/568、bdp581/591、bdp630/650、bdpr6g、bdpfl、bdptmr、bdptr、香豆素343、花青3、花青3.5、花青5、花青5.5、花青7、花青7.5、dy-647p1、荧光素、磺基花青3、磺基花青5、磺基花青5.5、磺基花青7、磺基花青7.5、芘、罗丹明x、其衍生物或其非荧光类似物。[0073]“荧光基团”(或荧光团)意谓可以在光激发时重新发射光的基团。荧光团通常含有几个组合的芳香族基团，或具有几个π键的平面或环状分子。[0074]如本文所用的“衍生物”为通过化学反应衍生自类似化合物的化合物或基团。举例来说，荧光基团在连接之前通常可以为nhs酯。当被接枝到化合物上时，荧光衍生物为相同基团，但无nhs部分。[0075]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中g表示键或-g1-g2-连接子，其中g1为键或任选地包含杂原子诸如n或o的c1到c4被取代或未被取代的烷基链，并且g2表示c1到c10饱和或不饱和、被取代或未被取代的、脂肪族、杂脂肪族、环状、脂环族的芳基、杂芳基、烷芳基或烷基杂芳基。优选地，g1可以为键，并且g2可以为饱和或不饱和、被取代或未被取代的c2到c6脂肪族或杂脂肪族基团或饱和或不饱和、被取代或未被取代的5元、6元或7元环或杂环。[0076]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中r1-g-通过杂原子与分子的其余部分连接，所述杂原子优选为氮。[0077]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中r1-g-选自包含下式的基团的组：[0078][0079]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中r1-g-选自包含下式的基团的组：[0080][0081]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中x1和x2相同或不同，可以独立地表示ch或n。[0082]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中x3可以表示c或n。[0083]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中x4可以表示n。[0084]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中当x4为n或nh时，x1、x2和x3中的至少一个为n。在化合物的所述基团中，当x4包含氮时，x1、x2、x3可能不会同时包含一个碳原子。[0085]有利地，x1和x2不同时表示ch。[0086]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中x4为n或nh。优选地，当x4为nh时，x3为c。优选地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中x3为n并且x4为n。[0087]有利地，a可以为酰胺或胺官能团，优选地a为-c(o)nh-、-nhc(o)-或–nh-。优选地，a为酰胺基团。[0088]有利地，m可以等于0、1或2，m’可以等于0、1或2，并且m m’≤3。优选地，m＝m’＝1。[0089]有利地，t可以为0到5的整数。优选地，t为0、1或2。[0090]有利地，t1和t2相同或不同，可以独立地表示ch2、chr6或c＝o。[0091]有利地，lit-tb化合物可以包含一个或多个r6基团。从r6到环中心的键表示所述环内的任何可用位置都可以携带r6基团，包括t1和t2。当环上的一个碳原子携带r6基团时，其以所述碳原子替代h键。每个r6基团可以相同或不同，并且可以选自包含h、氟化物、任选地支化的c1到c6烷基链和任选地支化的c1到c6烷氧基的组。优选地，m＝1并且m’＝1，t为0、1或2，r6为f、cl、me或ome，t1为ch2或c＝o并且t2为ch2。[0092]有利地，z可以选自包含键、h和任选地支化的c1到c3烷基链的组，所述任选地支化的c1到c3烷基链任选地包含杂原子，所述杂原子选自包含o或n的组。优选地，z为–ch2-、-ch2-ch2-或-ch2-ch2-ch2-，或z为-(ch2)n-，其中n为1、2或3。[0093]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中r2选自包含h、环烷基(例如环戊基)、芳烷基(例如苄基、苯乙基)、杂环芳基(例如哌啶基、哌嗪基)或杂芳基(例如吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,4-三嗪基、1,3,5-三嗪基、噁唑基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、吡唑基、1,3,4-噁二唑基、1,3,4-噻二唑基)的组。任选地，r2被1、2或3个r7基团取代。[0094]有利地，lit-tb化合物可以选自式i所示化合物的组，其中r2选自包含h、环烷基(例如环戊基)、芳烷基(例如苄基、苯乙基)、杂环芳基(例如哌啶)或杂芳基(例如吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,4-三嗪基、1,3,5-三嗪基、噁唑基、咪唑基)的组。任选地，r2被1、2或3个r7基团取代。[0095]有利地，r2可以选自下式ib的组：[0096][0097]其中，每个r7a、r7b、r7c可以独立地选自包含h、f、cl、me、ome、et、pr、ipr、bu、cn、no2、nh2、conh2的组。[0098]有利地，g1可以为键，并且g2可以为–y1(r4)-r3-y2(r5)-，并且lit-tb化合物可以选自式ii所示化合物的组：[0099][0100]其中，[0101]-r1、x1、x2、x3、x4、r、a、m、m’、t、r6、t1、t2、z和r2定义如上，[0102]-y1、y2和y3相同或不同，独立地表示n或ch，[0103]-r4和r5相同或不同，独立地选自包含h、任选地包含杂原子的任选地支化的c1到c3烷基的组，所述杂原子选自包含o和n的组，r4和r5可以任选地共价键结在一起以形成环状部分，[0104]-r3为直链或支链c2到c6烷基链。[0105]有利地，g1可以为键，并且g2可以为–y1(r4)-r3-y2(r5)-，并且lit-tb化合物可以选自式iia所示化合物的组：[0106][0107]其中，[0108]-r1、x1、x2、x3、x4、r、a、m、m’、t、r6、z、r2、y1、y2、y3、r3、r4和r5定义如上。[0109]有利地，g1可以为键，并且g2可以为lit-tb化合物可以选自式iii所示化合物的组：[0110][0111]其中，[0112]-r1、x1、x2、x3、x4、y1、y2、y3、r、a、m、m’、t、r6、t1、t2、z和r2定义如上。[0113]有利地，g1可以为键，并且g2可以为lit-tb化合物可以选自式iiia所示化合物的组：[0114][0115]其中，[0116]-r1、x1、x2、x3、x4、y1、y2、y3、r、a、m、m’、t、r6、z和r2定义如上。[0117]有利地，x3和x4为n，y2为nh，g1可以为键，并且g2可以为y1(r4)-ch2-ch2-nh，并且lit-tb化合物可以选自式iv所示化合物的组：[0118][0119]其中，[0120]-r1、r4、x1、x2、y1、y3、r、a、m、m'、t、r6、t1、t2、z和r2定义如上。[0121]有利地，x3和x4为n，y2为nh，g1可以为键，并且g2可以为y1(r4)-r3-ch2-ch2-nh-，并且lit-tb化合物可以选自式iva所示化合物的组：[0122][0123]其中，[0124]-r1、r4、x1、x2、y1、y3、r、a、m、m'、t、r6、z和r2定义如上。[0125]有利地，组合物可以包含药学上可接受的赋形剂或载剂。在本发明的上下文中，可以使用任何药学上可接受的赋形剂或载剂。[0126]有利地，组合物可以为水性组合物。[0127]有利地，组合物的ph可以包含于5到9范围内。[0128]有利地，组合物中式i、ii、iii或iv所示lit-tb化合物的浓度可以包含于1pm到100μm范围内。[0129]在本技术中，当定义范围时，包括下限和上限。[0130]有利地，本发明的组合物可以允许在10nm浓度的lit-tb衍生物下将0.4nmbdnf反应增效超过或等于10％，优选超过或等于20％，并且更优选超过或等于30％。[0131]有利地，trkb磷酸化检定中的半最大有效浓度(ec50)小于或等于10mm。[0132]有利地，关于相关trka和trkc受体的正别构调节的选择性高于或等于50。[0133]在另一方面，本发明涉及用于药物或药剂中的包含如上文定义的式i、ii、iia、iii、iiia、iv或iva所示lit-tb化合物的药物组合物。[0134]本发明的第三方面为用于治疗神经退化性疾病、代谢障碍、情绪障碍、脊髓损伤、脑卒中和缺血的包含如上文定义的式i、ii、iia、iii、iiia、iv或iva所示lit-tb化合物的药物组合物。[0135]在本发明的上下文中，神经退化性疾病可以为但不限于例如阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化、弗里德赖希病(friedreich'sdisease)、亨廷顿病、路易体病(lewybodydisease)、帕金森病、脊髓性肌萎缩、代谢紊乱(其可以为但不限于例如肥胖、2型糖尿病)、情绪障碍(其可以为但不限于例如抑郁症、焦虑症、精神分裂症、双相情感障碍、自闭症谱系障碍)。[0136]术语“治疗(treating/treat/treatment)”包括(i)预防疾病、病理性或医学病况发作(例如，防治)；(ii)抑制疾病、病理性或医学病况或阻止其发展；(iii)缓解疾病、病理性或医学病况；和/或(iv)减轻与疾病、病理性或医学病况相关的症状。因此，术语“治疗(treat/treatment/treating)”延伸到防治并且包括预防(prevent/prevention/preventing)、降低、停止或逆转所治疗病况或症状的恶化或严重程度。因此，术语“治疗”适当时包括医学、治疗性和/或防治性施用。[0137]“有效量”是指有效治疗疾病、病症和/或病况或产生所叙述效果的量。举例来说，有效量可以为有效减少正在治疗的病况或症状的恶化或严重程度的量。确定治疗有效量完全在所属领域的技术人员的能力范围内。术语“有效量”旨在包括本文所述的化合物的量，或本文所述的化合物的组合5的量，例如，所述量在宿主中有效治疗或预防疾病或病症或治疗疾病或病症的症状。因此，“有效量”一般意谓提供期望效果的量。[0138]在第四方面，本发明涉及如上文定义的式i、ii、iii或iv所示化合物，不包括n-(1-苄基-4-哌啶基)-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺和n-(1-苄基-4-哌啶基)-3-[6-(1-哌啶基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺。[0139]当阅读下文实例时，技术人员也可以显而易知其它优点，所述实例由附图绘示，仅出于说明目的给出而非穷举。附图说明[0140]-图1表示在存在ngf/trka或bdnf/trkb的情况下lit-tb001对trk磷酸化、erk磷酸化和神经突长出的影响。nnr5pc12–trka和nnr5pc12–trkb细胞分别为被trka和trkb稳定转染的ngf无反应突变pc12细胞[16]。通过在存在或不存在不同浓度(0.1、10和1000nm)的tb001的情况下分别加入bdnf(1nm)或ngf(2nm)15min之后量化酪氨酸706(y706)处的磷酸化trk含量来评估nnr5pc12–trkb或nnr5pc12–trka细胞中trka和trkb的激活，如先前一般[17]。通过量化相同细胞中的磷酸化erk来评估下游信号传导路径的激活。在初始处理后48小时，通过计数携带直径超过2个细胞的神经突的细胞的数量来确定神经突长出，如先前所述[17]。在所有三项检定中，lit-tb001对trkb信号传导显示出高选择性，如增加的bdnf诱导而非ngf诱导的磷酸化trk、磷酸化erk和神经突长出所证明。[0141]-图2表示10μm浓度的lit-tb001对45种激酶(表达多样性激酶组，eurofinsdiscovey，商品编号p10)的催化活性的细胞内抑制。对于每种激酶，通过tr-fretlance技术测量化合物对atp诱导的激酶介导的底物磷酸化的影响。[0142]-图3表示lit-tb001(0、0.5和1.0mg/kg)的急性腹腔施用对小鼠大脑的trkb表达区域中的trkb磷酸化的影响。左：向成年c57bl/6雄性小鼠腹腔注射盐水(0.9％nacl)或lit-tb001(0.5或1mg/kg)。1小时后(除非另有说明)，将小鼠斩首，收集血液并在冰上迅速取出大脑。随后，解剖皮层和海马体，并使用磷酸化y806-trkb选择性抗体快速处理组织以进行蛋白质印迹分析[17]。显示了在腹腔注射盐水溶液或tb001(0.5或1mg/kg)1小时的小鼠皮层中执行的代表性蛋白质印迹。使用抗trkb抗体来量化trkb的总量。使用抗微管蛋白作为装载物对照。右：与盐水处理相比，注射lit-tb001后的小鼠海马体和皮层中的磷酸化trkb量化显示出显著的体内trkb增效(*p《0.05，**p《0.01，单向anova)。trkb磷酸化水平被计算为每个区域中磷酸化trkb与总trkb带之间的比率。具体实施方式[0143]实例[0144]i.合成方法[0145]以下合成方法和方案说明了可以制备本发明化合物的一般程序。起始材料已经从商业来源获得或通过使用所属领域的普通技术人员熟知的方法制备。举例来说，本发明化合物可以根据或类似于实例部分中详细描述的合成途径来制备。特别地，通式(i)所示化合物和其药学上可接受的盐可以根据以下方案中描述的方法来合成，其中x表示卤素并且r表示通式(i)的相应位置处的任何基团。虽然以下方案中基团r的编号与通式(i)中基团的名称不同，但应理解这些方案解释了式(i)所示化合物的制备，因此这些基团r是根据通式(i)中相同连接位置处的相应基团来加以定义。通过正相或反相色谱法使用dionexultimate300用以下参数进行中间体和最终产物的纯化：流速：0.5ml/min，柱温：30℃，溶剂系统：a(meoh)和b(0.05％tfa于h2o中)，t＝0min到1min：50％到60％b，随后为t＝1min到t＝10min：60％到100％b，和t＝10min到t＝15min：100％b。[0146]一般程序a[0147]使n-芳烷基哌啶类似物1与环状酸酐2缩合，得到丙酸(或同源物)衍生物4a-c。在酯基加碱水解后，以乙基丙二酰氯为起始物的缩合产生2-[(1-苄基哌啶-4-基)氨基甲酰乙酸4c。使上述化合物4和市售的3-氯-6-肼基哒嗪5进行肽型偶合，得到酰肼衍生物6，之后使其在135℃下强酸性条件下环化成三唑并哒嗪7。最后，通过在碱性条件下使6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪衍生物7与各种杂环仲胺8偶合，获得最终式9-14所示化合物(方案1)。[0148]方案1(参看式iii)[0149][0150]条件：a)琥珀酸酐或戊二酸酐、etoac，25℃，12h；b)乙基丙二酰氯、dcm、et3n，25℃；c)naoh/meoh、随后为2nhcl→ph6；d)bop、nmm、dcm，12h；e)acoh，135℃，2h；f)8a-g、et3n、etoh，135℃，2h或回流，12h。[0151]4-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)-4-氧代丁酸4a(m’＝1，m＝1，n＝1，r＝1)[0152]将琥珀酸酐2a(1.5eq.，394mg，3.94mmol)溶解于etoac(5ml)中。添加4-氨基-1-苄基哌啶1a(1eq.，526mg，0.566ml，2.63mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌过夜(18h)，得到羧酸4a。过滤白色沉淀物并用etoac洗涤(m＝763mg，产率＝100％)。[0153]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.76(d,j＝7.7hz,1h),7.35–7.22(m,5h),3.51(dtd,j＝11.0,7.0,3.9hz,1h),3.45(s,2h),2.77–2.71(m,2h),2.42–2.37(m,2h),2.31–2.26(m,2h),2.00(ddd,j＝11.8,9.2,2.5hz,2h),1.68(dd,j＝12.9,3.9hz,2h),1.42–1.31(m,2h)。13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ173.8,170.2,138.4,128.8,128.2,126.9,62.1,51.9,45.9,31.5,30.1,29.2。[0154]n-(1-苄基哌啶-4-基)-4-(2-(6-氯哒嗪-3-基)肼基)-4-氧代丁酰胺(6a)(m’＝1，m＝1，n＝1，r＝1)[0155]将[(1-苄基哌啶-4-基)氨基甲酰基]丙酸4a(1eq.，285mg，0.982mmol)和bop(1.2eq.，520mg，1.18mmol)悬浮于dmf(6.3ml)中。添加nmm(1.5eq.，148mg，0.162ml，1.47mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌15min。随后，添加3-氯-6-肼基哒嗪5(1.2eq.，170mg，1.18mmol)，并且将反应物在室温下搅拌过夜(20h)。[0156]添加meoh和二氧化硅并蒸发粗物质。然后，在硅胶色谱(洗脱物meoh/etoac/et3n；1/9/0.3)上纯化所吸附的于硅胶上的化合物，得到呈黄色固体状的化合物6a(m＝379mg，产率＝93％)。[0157]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.47(d,j＝9.5hz,1h),7.39–7.31(m,5h),7.13(d,j＝9.5hz,1h),3.78–3.70(m,3h),3.03(d,j＝11.4hz,2h),2.60–2.40(m,6h),1.94–1.87(m,2h),1.64–1.54(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ174.7,173.8,161.5,149.6,131.28,131.27,129.66,129.65,129.4,118.4,63.2,52.9,47.0,31.5,31.4,29.9。[0158]n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(m’＝1，m＝1，n＝1，r＝1)[0159]向微波小瓶装填n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-[n'-(6-氯哒嗪-3-基)肼羰基]丙酰胺6a(1eq.，361mg，0.866mmol)和乙酸(2ml)。将小瓶适当加盖并将混合容器在135℃下加热2h。将混合物冷却至室温并蒸发。将粗物质与环己烷共蒸发并通过硅胶色谱法(etoac/meoh/et3n，9/1/0.3)纯化，得到呈白色固体状的化合物7a(m＝289mg，产率＝84％)。[0160]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.22(d,j＝9.7hz,1h),7.40(d,j＝9.7hz,1h),7.37–7.27(m,5h),3.73–3.62(m,3h),3.43(t,j＝7.4hz,2h),2.97(dt,j＝12.4,3.9hz,2h),2.83(t,j＝7.3hz,2h),2.36–2.26(m,2h),1.91–1.83(m,2h),1.56(dtd,j＝13.3,11.2,3.8hz,2h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.0,151.2,150.9,144.5,136.9,131.0,129.5,128.9,127.2,124.6,63.5,53.0,47.4,32.9,31.7,21.0。[0161]lc-ms[m h] ＝399.17[0162]实例1：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺9a(lit-tb001)[0163]将n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(1eq.，191mg，0.479mmol)溶解于etoh(2.5ml)中。添加1-甲基哌嗪8a(2eq.，95.9mg，0.106ml，0.958mmol)和et3n(2eq.，96.9mg，0.133ml，0.958mmol)，并且将反应物在回流下加热过夜。蒸发产物并稀释于meoh中。添加含hcl的et2o(2m)(过量)，并且将反应物在室温下搅拌1.5h。蒸发混合物，并且通过硅胶色谱法使用梯度(acoet/meoh/et3n；9/1/0.5到5/1/0.5)纯化粗物质，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的9a(lit-tb001)(m＝221.2mg，产率＝86％)。[0164]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.87(d,j＝10.2hz,1h),7.33–7.23(m,6h),3.66–3.59(m,5h),3.49(s,2h),3.35–3.32(m,2h),2.82(dt,j＝12.0,3.6hz,2h),2.75(dd,j＝8.0,7.1hz,2h),2.58(t,j＝5.1hz,4h),2.35(s,3h),2.09(td,j＝11.8,2.6hz,2h),1.82–1.75(m,2h),1.52–1.41(m,2h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.7,150.0,143.9,138.6,130.7,129.3,128.4,124.7,116.5,63.7,55.4,53.3,47.9,46.4,46.1,33.2,32.3,21.2。[0165]lc-ms(esi)[m h] ＝463.29[0166]n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-[6-(哌啶-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺9b(lit-tb002)[0167]遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(0.6ml)中的n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(1eq.，38mg，0.0953mmol)、哌啶8b(2eq.，16.4mg，19μl，0.191mmol)和et3n(2eq.，19.3mg，26.5μl，0.191mmol)。蒸发粗物质。添加(h2o/meoh；9/1，1ml)溶液以形成固体。对固体进行超声处理，并在存在庚烷的情况下进行研磨，然后过滤并用庚烷洗涤，得到呈浅褐色固体状的期望产物。蒸发滤液并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，得到产物的另一种级分。将两种产物组合，盐化并冻干，得到呈浅褐色固体状的9b(lit-tb002)(m＝24.5mg，产率＝53％)。[0168]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.82(d,j＝10.2hz,1h),7.33–7.23(m,6h),3.66–3.62(m,5h),3.51(s,2h),3.34–3.31(m,2h),2.84(d,j＝11.6hz,2h),2.75(t,j＝7.7hz,2h),2.11(t,j＝11.7hz,2h),1.80(d,j＝13.1hz,2h),1.75–1.67(m,6h),1.47(q,j＝11.9hz,2h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.3,156.7,149.9,143.8,138.5,130.7,129.3,128.4,124.3,116.9,64.0,53.3,48.0,47.9,33.2,32.3,26.5,25.5,21.2。[0169]lc-ms(esi)[m h] ＝448.19[0170]n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-[4-苄基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺9c(lit-tb005)[0171]遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(1.2ml)中的n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(1eq.，100mg，0.25mmol)、1-苄基哌嗪8c(2eq.，88,3mg，87μl，0.5mmol)和et3n(2eq.，50.7mg，70μl，0.50mmol)。将反应混合物在135℃下加热2h。蒸发粗物质并通过硅胶急骤色谱法(etoac/meoh/et3n：9/1/0.5)纯化，盐化并冻干，得到呈棕色固体状的9c(lit-tb005)(m＝74mg，产率＝55％)。[0172]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.76(d,j＝10.2hz,1h),7.30-7.12(m,11h),3.57-3.51(m,4h),3.49(s,2h),3.45(s,2h),3.22(t,j＝7.5hz,2h),2.76(dt,j＝12.4hz,j＝2.8hz,2h),2.64(t,j＝7.5hz,2h),2.55-2.46(m,4h),2.09-2.00(m,2h),1.69(dtj＝12.8hz,j＝3.8hz,2h),1.37(qd,j＝11.8hz,j＝2.8hz,2h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ171.8,168.7,164.0,155.4,148.6,145.3,142.5,137.1,137.0,129.3,129.2,128.0,127.9,127.1,127.0,123.2,115.2,62.6,62.4,52.1,51.8,46.5,45.2,31.8,30.919.7[0173]lc-ms(esi)＝538.32[m/z],448.27(-bn)[0174]n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-[6-(哌啶-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺9d(lit-tb007)[0175]遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(2.5ml)中的n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(1eq.，110mg，0.276mmol)、哌嗪8d(2eq.，47.5mg，0.552mmol)和et3n(2eq.，55.8mg，76.7μl，0.552mmol)。蒸发粗物质并通过硅胶色谱法(dcm/meoh/et3n；4/1/0到4/1/0.1)纯化，得到呈淡黄色固体状的9d(lit-tb007)(m＝108mg，产率＝87％)。[0176]1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ7.78(d,j＝10.1hz,1h),7.30–7.18(m,4h),6.89(d,j＝10.1hz,1h),6.61(d,j＝8.3hz,1h),3.78–3.70(m,1h),3.52–3.48(m,4h),3.44(s,2h),3.33(t,j＝7.3hz,2h),2.99–2.95(m,4h),2.84(t,j＝7.2hz,2h),2.74(d,j＝11.7hz,2h),2.05(t,j＝11.3hz,2h),1.80(dd,j＝13.2,3.8hz,2h),1.45(qd,j＝11.2,3.5hz,2h)。13cnmr(101mhz,氯仿-d)δ171.1,155.1,148.8,142.7,138.4,129.2,128.3,127.1,124.5,113.6,63.1,52.3,47.1,46.7,45.6,32.7,32.0,20.4。[0177]lc-ms(es apci)[m h] ＝449.2[0178]n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺9e(lit-tb030)[0179]遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(0.6ml)中的n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(1eq.，38mg，0.0953mmol)、1-苯基哌嗪8e(2eq.，31.9mg，30μl，0.191mmol)和et3n(2eq.，19.3mg，26.5μl，0.191mmol)。蒸发粗物质。添加(h2o/meoh；9/1，1ml)溶液以形成固体。对固体进行超声处理，并在存在庚烷的情况下进行研磨，然后过滤并用庚烷洗涤，得到期望产物。将产物盐化并冻干，得到呈浅褐色固体状的9e(lit-tb030)(m＝25.8mg，产率＝49％)。[0180]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.89(d,j＝10.1hz,1h),7.37(d,j＝10.2hz,1h),7.33–7.22(m,7h),7.02(d,j＝8.1hz,2h),6.87(t,j＝7.5hz,1h),3.79–3.76(m,4h),3.66–3.60(m,1h),3.50(s,2h),3.37–3.28(m,6h),2.83(d,j＝11.8hz,2h),2.76(t,j＝7.7hz,2h),2.10(t,j＝11.7hz,2h),1.78(d,j＝12.8hz,2h),1.46(q,j＝11.3,10.6hz,2h),nh(不可见)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.3,156.8,152.6,150.1,144.0,138.2,130.8,130.2,129.3,128.5,124.7,121.5,117.8,116.7,63.9,53.2,50.4,47.9,46.9,33.3,32.2,21.2。[0181]lc-ms(esi)[m h] ＝525.22[0182]n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺9f(lit-tb004)[0183]遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(1.2ml)中的n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(1eq.，100mg，0.25mmol)、2-(1-哌嗪基)嘧啶8f(1eq.，41.2mg，35.5μl，0.25mmol)和et3n(2eq.，50.7mg，70μl，0.50mmol)。将反应混合物在135℃下加热2h。蒸发粗物质并通过硅胶急骤色谱法(etoac/meoh/et3n：9/1/0.5)纯化，盐化，用无水et2o研磨并冻干，得到呈棕色固体状的9f(lit-tb004)(m＝50mg，产率＝38％)。[0184]lc-ms[m h] ＝529.2；551.2(m na)[0185]3-(6-([1,4'-双哌啶]-1'-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)-n-(1-苄基哌啶-4-基)丙酰胺9g(lit-tb003)[0186]遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(1.2ml)中的n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(1eq.，100mg，0.25mmol)、4-哌啶基哌啶8g(2eq.，84.4mg，0.50mmol)和et3n(2eq.，50.7mg，70μl，0.50mmol)。将反应混合物在135℃下加热2h。蒸发粗物质并通过硅胶急骤色谱法(etoac/meoh/et3n：9/1/0.5)纯化，用无水et2o研磨，盐化并冻干，得到呈棕色固体状的9g(lit-tb003)(m＝100mg，产率＝75％)。[0187]lc-ms[m h] ＝531.4。[0188]n-(1-苄基哌啶-4-基)-4-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丁酰胺10a(lit-tb009)[0189]遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(1.1ml)中的n-(1-苄基哌啶-4-基)-4-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丁酰胺7b(1eq.，100mg，0.24mmol)、1-甲基哌嗪8a(2eq.，48.5mg，0.48mmol)和et3n(2eq.，49.0mg，67μl，0.48mmol)。将反应混合物在135℃下加热1.5h。蒸发粗物质并通过硅胶急骤色谱法(etoac/meoh/et3n：9/1/0.5)纯化，用无水et2o研磨，盐化并冻干，得到呈棕色固体状的10a(lit-tb009)(m＝55mg，产率＝48％)。[0190]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.86(d,1h,j＝10.2hz),7.50-7.42(m,2h),7.37-7.30(m,3h),7.29(d,1h,j＝10.2hz),3.80-3.60(m,5h),3。40-3.25(m,6h),2.99-3.10(m,5h),2.81(s,3h),2.22(t,2h,j＝7.2hz),2.10-1.90(m,4h),1.65-1.80(m2h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ174.7,156.2,150.6,144.0,132.4,131.2,130.6,130.4,125.5116.6,61.4,54.0,52.7,51.9,44.7,44.0,36.0,29.6,24.4,23.3。[0191]lc-ms[m h] ＝477.2[0192]3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)-n-(1-苯乙基哌啶-4-基)丙酰胺11a(lit-tb011)[0193]遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(1.1ml)中的3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)-n-(1-苯乙基哌啶-4-基)丙酰胺7c(1eq.，100mg，0.24mmol)、1-甲基哌嗪8a(2eq.，48.5mg，0.48mmol)和et3n(2eq.，49.0mg，67μl，0.48mmol)。将反应混合物在微波照射下在150℃下加热1.5h。蒸发粗物质并通过硅胶急骤色谱法(etoac/meoh/et3n：9/1/0.5)纯化，用无水et2o研磨，盐化并冻干，得到呈浅黄色固体状的10a(lit-tb009)(m＝70mg，产率＝61％)。[0194]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.2(d,j＝10.2hz,1h),7.85(d,j＝10.2hz,1h),7.34-7.07(m,5h),4.58-4.47(m,2h),3.89-3.77(m,1h),3.69-3.57(m,4h),3.48(t,j＝13.3hz,2h),3.42-3.36(m,2h),3.35-3.22(m,4h),3.06-2.97(m,4h),2.90(s,3h),2.85-2.81(m,2h),2.10-1.88(m,2h),1.82-1.69(m,2h)13cnmr(101mhz,甲醇-d4)174.6,156.7,156.4,137.5,137.4,130.0,129.8,128.3,124.6,118.5,59.0,53.7,53.0,45.8,44.3,43.6,32.4,31.5,30.2,20.8。[0195]lc-ms[m h] ＝477.2[0196]n-(1-苄基哌啶-4-基)-2-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)乙酰胺12a(lit-tb008)遵循用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(0.75ml)中的n-(1-苄基哌啶-4-基)-2-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)乙酰胺7d(1eq.，100mg，0.26mmol)、1-甲基哌嗪8a(1.5eq.，39.0mg，0.39mmol)和et3n(2eq.，52.6mg，72μl，0.52mmol)。将反应混合物在微波照射下在150℃下加热1.5h。蒸发粗物质并通过硅胶急骤色谱法(dcm/meoh/et3n：8/2/0.1)纯化，盐化并冻干，得到呈浅褐色固体状的12a(lit-tb008)(m＝70mg，产率＝60％)。[0197]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.96(d,j＝10.2hz,1h),7.42-7.32(m,6h),4.40-4.29(m,2h),4.20(s,2h),4.05-3.98(m,2h),3.87-3.82(m,1h),3.60-3.52(m,2h),3.43(d,j＝12.4hz,2h),3.30-3.25(m,2h),3.01(t,j＝12.2hz,2h),2.86(s,3h),2.12-2.04(m,2h),1.74(q,j＝12.2hz,2h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ168.7,160.1,156.5,142.3,138.6,132.4,131.3,130.4,125.1117.6,61.6,53.7,52.6,46.3,44.3,43.6,32.0,30.0。[0198]lc-ms[m h] ＝449.2[0199]或者，化合物9-14可以如方案2中所绘示按三步顺序制备。使肼基哒嗪5与环状酸酐2在二噁烷中在120℃下缩合，在一个步骤中得到三唑并哒嗪丙酸(或同源物)15。在存在氯甲酸异丁酯的情况下使上述化合物1和15进行肽型偶合，产生先前描述的三唑并哒嗪酰胺7a-f。最后，如实例1中所描述，用哌啶或哌嗪衍生物8a-g进行亲核性芳香族取代，得到通式9-14所示产物。[0200]流程2(参看式iii)[0201][0202]条件：a)琥珀酸酐或戊二酸酐、二噁烷，120℃，12h；b)氯甲酸异丁酯、diea、dcm，25℃，2h；c)8a-g、et3n、etoh，150℃，1h30。[0203]实例2：n-(1-苄基哌啶-3-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺13a(m＝0，m’＝2，n＝1，r＝1)(lit-tb055)[0204]步骤1：3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酸15[0205]将琥珀酸酐(1.18eq.，500mg，3.46mmol)溶解于二噁烷(5ml)中。添加3-氯-6-肼基哒嗪5(1.18eq.，420mg，0.566ml，4.07mmol)，并且将反应混合物加热2小时，得到三唑并哒嗪基丙酸15。过滤白色沉淀物，用et2o洗涤，得到标题化合物15(m＝437mg，产率＝56％)。[0206]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.93(bs,1h),8.44(d,j＝9.6hz,1h),7.49(d,j＝9.6hz,1h),3.27(t,j＝7.2hz,2h),2.88(t,j＝7.2hz,2h)。13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ173.5,149.2,149.0,143.3,127.5,122.9,30.2,19.4。[0207]步骤2：n-(1-苄基哌啶-3-基)-3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺7e[0208]将3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酸15(1.0eq.，119mg，0.52mmol)悬浮于dcm(3ml)、接着为diea(2eq.，129.2mg，0.17ml，1.05mmol)中。然后，将于dcm(0.5ml)中的氯甲酸异丁酯(1.2eq.，86.1mg，82.2μl，0.63mmol)滴加到溶液中，并将所得混合物在室温下搅拌30min。接着，引入1-苄基哌啶-3-胺(1eq.，100mg，0.52mmol)并再维持搅拌2小时。蒸发挥发物，然后通过硅胶柱色谱法使用dcm/meoh：90/10作为洗脱物纯化粗物质，得到呈淡黄色固体状的标题化合物7e(m＝50mg，产率＝24％)。[0209]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.23(d,j＝9.7hz,1h),7.42(d,j＝9.7hz,1h),7.35-7.30(m,4h),7.29-7.24(m,1h),3.94-3.85(m,1h),3.56(s,2h),3.43(t,j＝7.5hz,2h),2.84j＝7.5hz,2h),273-2.66(m,1h),2.14(t,j＝11.7hz,1h),2.04-1.94(m,1h),1.86-1.77(m,1h),1.76-1.68(m,1h),1.66-1.55(m,1h),1.33-1.22(m,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ129.2,127.9,127.0,125.8,123.3,62.6,57.5,52.8,45.9,31.5,29.5,22.9,19.6。[0210]步骤3：n-(1-苄基哌啶-3-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺(m＝0，m’＝2，n＝1，r＝1)[0211]使用实例1中描述的用于合成lit-tb001类似物的相同程序a并且以于etoh(0.5ml)中的n-(1-苄基哌啶-3-基)-3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺7e(1eq.，50mg，0.12mmol)、1-甲基哌嗪8a(2eq.，25.1mg，27.8μl，0.25mmol)和et3n(2eq.，25.4mg，34.8μl，0.25mmol)为起始物，135℃，持续1.5h。在盐化和冻干之后，获得呈淡黄色固体状的标题化合物13a(m＝28.6mg，产率＝43％)。[0212]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.98(d,j＝10.2hz,1h),7.51-7.43(m,5h),7.41(d,j＝10.2hz,1h),4.16(s,2h),4.06-3.96(m,1h),3.90-3.76(m,4h),3.36(t,j＝7.3hz,2h),3.29-3.15(m,2h),3.10-3.00(m,4h),2.92-2.67(m,2h),2.81(t,j＝12.3hz,2h),2.68(s,3h),1.99-1.87(m,2h),1.85-1.74(m,1h),1.59-1.47(m,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.7,156.5,150.0,144.0,132.0,130.6,130.1,125.1,116.6,62.4,56.15,54.6,53.4,45.9,45.5,44.9,32.8,29.0,22.5,20.9。[0213]lc-ms[m h] ＝462.28[0214]或者，化合物9-14还可以通过在氰基硼氢化钠的帮助下在存在适当的苯烷基醛的情况下还原胺化n-boc保护的哒嗪并三唑17a-f来制备(方案3)。化合物17易于通过使用氯甲酸异丁酯作为激活剂，与市售的n-boc保护的氨基哌啶衍生物(或同源物)16进行肽型偶合而获自上述羧酸15(方案3)。[0215]方案3(参看式iii)[0216][0217]条件：a)16、氯甲酸异丁酯、diea、dcm，25℃，2h；b)tfa、dcm，1h；c)ph(ch2)n-1cho、nabh3cn、diea、etoh；c)8a-g、et3n、etoh，135℃，1h30。[0218]实例3：n-(1-苄基氮杂环庚烷-4-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺14(m＝1，m’＝2，n＝1，r＝1)(lit-tb056)[0219]步骤1：4-(3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰氨基)氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯17f(m＝1，m’＝2，r＝1)[0220]将3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酸15(1.0eq.，116.3mg，0.51mmol)悬浮于dcm(4ml)、接着为diea(2eq.，134.7mg，898μl，1.04mmol)中。将氯甲酸异丁酯(1.2eq.，84.2mg，1.20ml，0.61mmol)溶解于dcm(0.5ml)中，滴加到先前溶液中，并将所得混合物在室温下搅拌30min。将4-氨基氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(1eq.，110mg，0.51mmol)溶解于dcm(0.5ml)中，滴加，并且再维持搅拌2小时。蒸发挥发物，然后通过硅胶柱色谱法使用etoac/meoh：80/20作为洗脱物纯化粗物质，得到呈淡黄色油状的标题化合物17(m＝129mg，产率＝59％)。[0221]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.12(d,j＝9.7hz,1h),7.31(d,j＝9.6hz,1h),3.69-3.59(m,1h),3.49-3.38(m,1h),3.33(t,j＝7.5hz,2h),3.32-3.25(m,2h),3.17-3.06(m,1h),2.71(2.70)(t,j＝7.5hz,2h),1.89-1.79(m,1h),1.78-1.67(m,2h),1.69-1.31(m,3h),1.37(1.36)(s,9h,顺反几何学)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ172.4,157.3,151.2,150.9,144.6,127.3,124.7,81.0(79.9),51.2(51.0),47.4(46.8),44.0(43.6),35.7(35.5),34.2(33.9),32.9,28.7,25.6(25.5),21.0。[0222]步骤2：n-(1-苄基氮杂环庚烷-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7f(m＝1，m’＝2，r＝1)。[0223]向4-(3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰氨基)氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯17f(1eq.，129mg，0.30mmol)于dcm(1.5ml)中的冰冷溶液中添加tfa(0.5ml)，并且将所得混合物搅拌2h。将粗反应物真空浓缩，并且用庚烷共沸去除tfa。化合物不经进一步纯化即用于还原胺化步骤中。将粗物质溶解于meoh(2ml)中。添加苯甲醛(2.2eq.，71.2mg，68μl)、接着为nabh3cn(3.6eq.，69mg，1.1mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌过夜。蒸发挥发物并且将粗物质溶解于etoac(25ml)中。将有机相用盐水洗涤，干燥并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法使用etoac:meoh(90:10)作为洗脱物纯化残余物，得到呈黄色油状的2-(1-苄基哌啶-4-基)-4-苯基哒嗪-3(2h)-酮(m＝92mg，产率＝71％)。[0224]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.17(d,j＝9.6hz,1h),7.48-7.39(m,5h),7.35(d,j＝9.6hz,1h),4.21(s,2h),3.93-3.83(m,1h),3.37(t,j＝7.3hz,2h),3.30-3.08(m,4h),2.77(t,j＝7.3hz,2h),2.07-1.96(m,2h),1.92-1.73(m,3h),1.63-1.50(m,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ172.9,151.4,150.9,144.7,132.1,131.0,130.4,127.4,127.0,124.8,62.3,55.8,51.5,50.1,33.8,33.0,30.4,21.7,21.0。[0225]步骤3：n-(1-苄基氮杂环庚烷-4-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺14[0226]使用实例1中描述的用于合成lit-tb001类似物的相同程序a并且以于etoh(0.5ml)中的n-(1-苄基氮杂环庚烷-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7f(1eq.，92mg，0.22mmol)、1-甲基哌嗪8a(2eq.，40.2mg，44.6μl，0.40mmol)和et3n(2eq.，45.2mg，62.1μl，0.2mmol)为起始物，在盐化和冻干之后，获得呈淡黄色固体状的标题化合物14(m＝23.5mg，产率＝11％)。[0227]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.79(d,j＝10.2hz,1h),7.36-7.28(m,5h),7.25(d,j＝10.1hz,1h),3.89(s,2h),3.87-3.79(m,1h),3.56(t,j＝4.5hz,4h),3.24(t,j＝7.4hz,2h),2.99-2.75(m,4h),2.66(t,j＝7.4hz,2h),2.51(t,j＝5.1hz,4h),2.28(s,3h),1.90-1.80(m,2h),1.79-1.59(m,3h),1.54-1.43(m,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ171.6,155.3,152.2,142.6,129.9,128.5,128.4,123.3,115.2,61.4,54.7,53.9,50.3,48.7,45.0,44.6,32.6,31.7,30.7,21.7,19.7。[0228]lc-ms[esi]:476.30(m/z)[0229]一般程序b[0230]在丙酰胺链上携带不同被取代的哌啶的式20所示化合物的制备可以沿用各种合成途径，使用常规方法进行(方案4)。以易于获得的6-氯-三唑并哒嗪n-boc保护的哌啶17a为起始物，与8aj进行snar反应，产生相应的6-n-甲基哌嗪18a。在存在nabh(oac)3的情况下进行保护性boc基团的脱保护和用适当的卤代烷基衍生物进行的直接烷基化(方法a，参见实例4)或用适当的醛进行的还原胺化((方法b)，参见实例5)，得到本发明的实例。[0231]方案4(参看式iii)[0232][0233]条件：a)8a、et3n、etoh，135℃，1h30；b)4nhcl/二噁烷；c)tfa、dcm，2h；d)rx、k2co3、dmf、氩气，-5℃(30min)→室温(过夜)；e)rcho；nabh(oac)3、meoh[0234]4-(3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯17a[0235]使用针对17f的制备所描述的相同程序并且以3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酸15a(1.0eq.，200mg，0.89mmol)和4-氨基-1-boc哌啶(1.0eq.，180mg，0.89mmol，cas编号：87120-72-7)为起始物，得到呈浅褐色固体状的标题化合物(m＝234mg，产率＝64％)。[0236]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.43(d,j＝9.7hz,1h),7.95(d,j＝8.0hz,1h),7.48(d,j＝9.7hz,1h),3.81(d,j＝14.3hz,2h),3.75-3.65(m,1h),3.27(t,j＝7.5hz,2h),2.93-2.75(m,2h),2.68(t,j＝7.5hz,2h),1.68(dd,j＝12.9hz,j＝4.1hz,2h),1.39(s,9h),126-1.14(m,2h)。13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ170.1,154.4,149.4,149.1,143.2,127.4,122.8,79.1,46.1,32.0,31.8,28.5,20.0。[0237]4-(3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯18a[0238]遵循使用用于合成lit-tb001类似物的一般程序a，使用于etoh(0.8ml)中的4-(3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯17a(1eq.，50mg，0.12mmol)、1-甲基哌嗪8a(2eq.，16.4mg，19μl，0.191mmol)和et3n(2eq.，24.75mg，34μl，0.24mmol)。蒸发粗物质，通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，得到呈白色固体状的标题化合物(m＝45mg，产率＝78％)。[0239]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.90(d,j＝10.2hz,1h),7.36(d,j＝10.2hz,1h),3.98(d,j＝13.7hz,2h),3.81(tt,j＝10.8,4.1hz,1h),3.68(t,j＝5.2hz,4h),3.36(dd,j＝7.9,7.2hz,2h),2.96–2.85(m,2h),2.78(t,j＝7.5hz,2h),2.62(t,j＝5.1hz,4h),2.38(s,3h),1.80(dd,j＝13.1,3.8hz,2h),1.46(s,9h),1.37–1.25(m,2h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,156.4,150.0,144.0,124.7,116.6,81.1,55.4,47.9,46.46,46.44,46.1,33.2,32.6,28.7,21.1。[0240]3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)-n-(哌啶-4-基)丙酰胺19(lit-tb021)[0241]将4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(67mg，0.14mmol)溶解于dcm(0.7ml)中。添加4nhcl于二噁烷中的溶液(10eq.，1.42mmol，0.35ml)，并将反应混合物在室温下搅拌30min。收集沉淀物，用无水et2o洗涤三次，并干燥(m＝27mg，产率＝43％)。[0242]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.89(d,j＝10.2hz,1h),7.34(d,j＝10.2hz,1h),3.79-3.68(m,1h),3.66(t,j＝5.1hz,4h),3.34(t,j＝7.6hz,2h),3.03(dt,j＝12.7hz,j＝4.1hz,2h),2.76(t,j＝7.6hz,2h),2.65(td,j＝12.2hz,j＝2.8hz,2h),2.60(t,j＝5.1hz,4h),2.36(s,3h),1.81(dd,j＝12.9hz,j＝3.8hz,2h),1.37(qd,j＝12.0hz,j＝6.0hz)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.3,156.9,150.2,144.1,124.9,116.8。55.5,48.0,46.6,46.3,45.8,33.3,33.1,21.3。[0243]lc-ms[m h] ＝372.24[0244]实例4：n-{1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20a(lit-tb017)[0245]将4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(17.2mg，0.0364mmol)溶解于dcm(0.3ml)中。添加tfa(10eq.，41.5mg，27μl，0.364mmol)并将反应混合物在室温下搅拌2h。蒸发粗物质，然后与dcm/庚烷共蒸发两次。干燥后，将粗物质在氩气下溶解于无水dmf中。添加k2co3(5eq.，25.2mg，0.182mmol)，并将反应混合物在-5℃下搅拌30min。添加1-(溴甲基)-4-甲氧基苯(1eq.，7.32mg，5.25μl，0.0364mmol)，并将混合物在-5℃下搅拌0.5h，然后在室温下搅拌过夜。添加水(几滴)，并且通过反相色谱法(h2o/meoh)直接纯化粗物质。蒸发产物并稀释于meoh中。添加含hcl的et2o(2m)(过量)，并且将反应物在室温下搅拌1.5h。蒸发混合物，稀释于水中并冻干。获得呈淡黄色固体状的标题化合物20a(m＝6.9mg，产率＝30％)。[0246]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.89(d,j＝10.2hz,1h),7.35(d,j＝10.2hz,1h),7.24(d,j＝8.1hz,2h),6.89(d,j＝8.1hz,2h),3.79(s,3h),3.68–3.60(m,5h),3.52(s,2h),3.36–3.31(m,2h),2.88(d,j＝11.6hz,2h),2.76(t,j＝7.7hz,2h),2.61–2.58(m,4h),2.37(s,3h),2.18(t,j＝11.6hz,2h),1.81(d,j＝13.0hz,2h),1.48(q,j＝12.0hz,2h),nh(不可见)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.3,160.8,156.8,150.1,143.9,132.2,129.5,124.7,116.6,114.8,63.1,55.7,55.4,53.0,47.7,46.4,46.1,33.2,32.0,21.2。[0247]lc-ms(esi)[m h] ＝493.20[0248]n-{1-[(3-氯苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20b(lit-tb018)[0249]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，14.9mg，0.0315mmol)、3-氯苄基溴(1.1eq.，7.35mg，4.69μl，0.0347mmol)和k2co3(5eq.，21.8mg，0.158mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20b(m＝9.4mg，产率＝52％)。[0250]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.89(d,j＝10.1hz,1h),7.39–7.22(m,5h),3.67–3.50(m,5h),3.50(s,2h),3.33(t,j＝11.0hz,2h),2.82(d,j＝11.8hz,2h),2.76(t,j＝7.6hz,2h),2.61–2.58(m,4h),2.36(s,3h),2.12(t,j＝11.8hz,2h),1.80(d,j＝12.9hz,2h),1.47(q,j＝11.9hz,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.1,143.9,141.3,135.3,130.8,130.4,128.9,128.5,124.7,116.6,63.2,55.4,53.3,47.9,46.4,46.1,33.2,32.4,21.2。[0251]lc-ms(esi)[m h] ＝497.17[0252]n-{1-[(2-氯苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20c(lit-tb019)[0253]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，14.8mg，0.0313mmol)、2-氯苄基溴(1.1eq.，7.08mg，4.47μl，0.0344mmol)和k2co3(5eq.，21.6mg，0.157mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20c(m＝11.2mg，产率＝63％)。[0254]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.0hz,1h),7.47(d,j＝6.9hz,1h),7.42(d,j＝6.8hz,1h),7.38–7.27(m,3h),3.83(s,2h),3.72–3.69(m,5h),3.35–3.31(m,2h),3.02(d,j＝11.8hz,2h),2.80–2.69(m,6h),2.49–2.43(m,2h),2.45(s,3h),1.86(d,j＝12.9hz,2h),1.57(q,j＝11.5hz,2h。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.1,143.9,132.4,130.5,129.7,127.9,124.7,116.5,60.1,55.4,53.4,47.9,46.4,46.1,33.2,32.5,21.2。[0255]lc-ms(esi)[m h] ＝497.16[0256]n-{1-[(4-氟苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20d(lit-tb020)[0257]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，16.3mg，0.0345mmol)、4-氟苄基氯(1.1eq.，5.49mg，4.52μl，0.0379mmol)和k2co3(5eq.，23.8mg，0.172mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20d(m＝5.1mg，产率＝27％)。[0258]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.2hz,1h),7.35–7.31(m,3h),7.04(t,j＝8.6hz,2h),3.67–3.62(m,5h),3.50(s,2h),3.35–3.30(m,2h),2.83(d,j＝11.5hz,2h),2.75(t,j＝7.6hz,2h),2.60–2.58(m,4h),2.35(s,3h),2.12(t,j＝11.8hz,2h),1.79(d,j＝12.9hz,2h),1.46(q,j＝12.0hz,2h)。13cnmr(126mhz,methanol-d4)δ173.2,163.6(d,j＝244.1hz),156.8,150.1,143.9,134.6(d,j＝3.2hz),132.5(d,j＝8.0hz),124.7,116.6,115.9(d,j＝21.5hz),63.0,55.4,53.2,47.9,46.4,46.1,33.2,32.4,21.2。19fnmr(376mhz,甲醇-d4)δ-117.5。[0259]lc-ms(esi)[m h] ＝481.18[0260]n-{1-[(2-氟苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20e(lit-tb022)[0261]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，16.3mg，0.0345mmol)、2-氟苄基溴(1.1eq.，7.17mg，4.58μl，0.0379mmol)和k2co3(5eq.，23.8mg，0.172mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20e(10.9mg，产率＝57％)。[0262]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.1hz,1h),7.42–7.27(m,3h),7.15(t,j＝7.6hz,1h),7.08(t,j＝9.4hz,1h),3.67–3.65(m,5h),3.59(s,2h),3.35–3.31(m,2h),2.86(d,j＝11.8hz,2h),2.75(t,j＝7.7hz,2h),2.60–2.58(m,4h),2.36(s,3h),2.17(t,j＝11.7hz,2h),1.79(d,j＝12.9hz,2h),1.47(q,j＝12.0hz,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,162.9(d,j＝245.2hz),156.8,150.1,143.9,133.3(d,j＝4.2hz),130.6(d,j＝8.3hz),125.1(d,j＝3.6hz),125.0,124.7,116.6,116.2(d,j＝22.6hz),56.0(d,j＝1.9hz),55.4,53.1,47.8,46.4,46.1,33.2,32.3,21.2。19fnmr(376mhz,甲醇-d4)δ-119.35。[0263]lc-ms(esi)[m h] ＝481.19[0264]3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]-n-[1-(1-苯乙基)哌啶-4-基]丙酰胺20f(lit-tb023)[0265]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，19.4mg，0.0411mmol)、(1-溴乙基)苯(1.1eq.，8.36mg，6.19μl，0.0452mmol)和k2co3(5eq.，28.4mg，0.205mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20f(m＝14.4mg，产率＝64％)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.0hz,1h),7.36–7.22(m,6h),3.66–3.64(m,4h),3.57(t,j＝11.4hz,1h),3.48(q,j＝6.7hz,1h),3.35–3.31(m,2h),3.07(d,j＝11.6hz,1h),2.80–2.72(m,3h),2.60–2.57(m,4h),2.35(s,3h),2.08(dt,j＝34.5,11.9hz,2h),1.78(dd,j＝34.3,13.0hz,2h),1.56–1.38(m,2h),1.41(d,j＝6.7hz,3h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.1,143.9,143.4,129.4,129.0,128.5,124.7,116.6,66.4,55.4,51.0,50.4,47.9,46.4,46.1,33.2,32.4,21.2,19.7。[0266]lc-ms(esi)[m h] ＝477.21[0267]n-{1-[(2-甲基苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20g(lit-tb024)[0268]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，17.7mg，0.0375mmol)、2-甲基苄基溴(1.1eq.，7.62mg，5.52μl，0.0412mmol)和k2co3(5eq.，25.9mg，0.187mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20g(m＝13.3mg，产率＝65％)。[0269]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.2hz,1h),7.33(d,j＝10.1hz,1h),7.23–7.21(m,1h),7.14–7.10(m,3h),3.67–3.64(m,5h),3.49(s,2h),3.35–3.31(m,2h),2.85(d,j＝11.5hz,2h),2.75(t,j＝7.6hz,2h),2.61–2.58(m,4h),2.36(s,3h),2.35(s,3h),2.15(t,j＝11.8hz,2h),1.78(d,j＝12.8hz,2h),1.45(q,j＝11.9hz,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.1,143.9,138.7,137.0,131.4,131.2,128.4,126.6,124.7,116.6,61.4,55.4,53.5,48.0,46.4,46.1,33.2,32.5,21.2,19.5。[0270]lc-ms(esi)[m h] ＝477.24[0271]3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]-n-[1-(吡啶-4-基甲基)哌啶-4-基]丙酰胺20h(lit-tb025)[0272]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，20.5mg，0.0434mmol)、4-(氯甲基)吡啶盐酸盐(1.1eq.，7.83mg，0.0477mmol)和k2co3(5eq.，30mg，0.217mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20h(m＝13.9mg，产率＝56％)。[0273]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.49–8.43(m,2h),7.88(d,j＝10.2hz,1h),7.43–7.40(m,2h),7.33(d,j＝10.2hz,1h),3.68–3.60(m,5h),3.56(s,2h),3.35–3.31(m,2h),2.80(d,j＝11.9hz,2h),2.75(t,j＝7.6hz,2h),2.61–3.58(m,4h),2.36(s,3h),2.14(td,j＝11.8,2.5hz,2h),1.83–1.76(m,2h),1.53–1.44(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.3,150.1,150.0,144.0,125.8,124.7,116.6,62.5,55.4,53.5,47.9,46.4,46.1,33.2,32.5,21.2。[0274]lc-ms(esi)[m h] ＝464.18[0275]n-{1-[(3,4-二氯苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20i(lit-tb026)[0276]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，19.2mg，0.0406mmol)、3,4-二氯苄基氯(1.1eq.，8.74mg，6.2μl，0.0447mmol)和k2co3(5eq.，28.1mg，0.203mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20i(m＝15.6mg，产率＝64％)。[0277]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.1hz,1h),7.50(d,j＝2.0hz,1h),7.45(d,j＝8.2hz,1h),7.33(d,j＝10.2hz,1h),7.24(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),3.69–3.58(m,5h),3.47(s,2h),3.35–3.31(m,2h),2.83–2.77(m,2h),2.75(t,j＝7.6hz,2h),2.60–2.57(m,4h),2.35(s,3h),2.11(td,j＝11.8,2.6hz,2h),1.79(dd,j＝12.9,3.9hz,2h),1.53–1.41(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.1,143.9,140.1,133.2,132.3,132.0,131.4,130.2,124.7,116.6,62.5,55.4,53.3,47.9,46.4,46.1,33.2,32.4,21.2。[0278]lc-ms(esi)[m h] ＝531.11[0279]n-(1-苯甲酰基哌啶-4-基)-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺盐酸盐20j(lit-tb027)[0280]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，20.2mg，0.0427mmol)、3苯甲酰氯(1.1eq.，6.61mg，5.46μl，0.047mmol)和k2co3(5eq.，29.5mg，0.214mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20j(m＝8.2mg，产率＝32％)。[0281]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.91(d,j＝10.2hz,1h),7.48–7.44(m,3h),7.41–7.35(m,3h),4.47(d,j＝13.4hz1h),3.93(tt,j＝10.5,4.2hz,1h),3.77–3.63(d,j＝5.3hz,5h),3.36(t,j＝7.4hz,2h),3.23–3.02(m,2h),2.83–2.76(m,6h),2.50(s,3h),2.00–1.73(m,2h),1.51–1.30(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.3,172.5,156.8,150.0,144.0,137.0,131.1,129.8,127.8,124.7,116.6,55.4,47.8,46.4,46.1,42.1,33.2,32.2,21.1。[0282]lc-ms(esi)[m h] ＝477.17[0283]n-{1-[(4-氯苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20k(lit-tb028)[0284]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，19.8mg，0.0419mmol)、4-氯苄基氯(1.1eq.，9.47mg，0.0461mmol)(1.1eq.，6.61mg，5.46μl，0.047mmol)和k2co3(5eq.，29mg，0.209mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20k(m＝10.8mg，产率＝45％)。[0285]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.1hz,1h),7.33(d,j＝10.2hz,1h),7.31–7.29(m,4h),3.69–3.58(m,5h),3.48(s,2h),3.35–3.31(m,2h),2.81(d,j＝11.8hz,2h),2.74(t,j＝7.5hz,2h),2.60–2.57(m,4h),2.35(s,3h),2.10(td,j＝11.8,2.5hz,2h),1.78(dd,j＝13.5,3.7hz,2h),1.54–1.41(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.1,143.9,137.5,134.2,132.2,129.4,124.7,116.6,63.0,55.4,53.2,47.9,46.4,46.1,33.2,32.4,21.2。[0286]lc-ms(esi)[m h] ＝497.16[0287]n-[1-(环己基甲基)哌啶-4-基]-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20l(lit-tb031)[0288]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，19.8mg，0.0419mmol)、ki(1eq.，7.73mg，0.0466mmol)和4-甲基苯-1-磺酸环己基甲酯(1.1eq.，13.7mg，0.0512mmol)以及k2co3(5eq.，32.2mg，0.233mmol)，在85℃下过夜。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20l(m＝4.1mg，产率＝16％)。[0289]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.92(d,j＝10.2hz,1h),7.38(d,j＝10.2hz,1h),3.74–3.61(m,5h),3.38(t,j＝7.6hz,2h),2.87(d,j＝11.8hz,2h),2.80(t,j＝7.6hz,2h),2.64–2.62(m,4h),2.40(s,3h),2.18(d,j＝6.8hz,2h),2.06(t,j＝11.6hz,2h),1.84–1.70(m,7h),1.35–1.21(m,3h),1.37–1.17(m,3h),0.98–0.90(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.1,144.0,124.7,116.6,66.9,55.4,54.0,48.1,46.4,46.1,36.4,33.2,33.2,32.3,27.7,27.2,21.2。[0290]lc-ms(esi)[m h] ＝469.24[0291]n-{1-[(5-甲基-1h-咪唑-4-基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20m(lit-tb032)[0292]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.5ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，22mg，0.0466mmol)、ki(1eq.，7.73mg，0.0466mmol)和4-(氯甲基)-5-甲基-1h-咪唑(1.1eq.，6.69mg，0.0512mmol)以及k2co3(5eq.，32.2mg，0.233mmol)，在85℃下5h。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20m(m＝7.8mg，产率＝30％)。[0293]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.95(d,j＝10.2hz,1h),7.57(s,1h),7.40(d,j＝10.2hz,1h),3.74–3.72(m,4h),3.70–3.63(m,1h),3.55(s,2h),3.42–3.39(m,2h),2.93(d,j＝11.6hz,2h),2.82(t,j＝7.6hz,2h),2.67–2.65(m,4h),2.43(s,3h),2.27(s,3h),2.26–2.21(m,2h),1.87(dd,j＝13.2,3.8hz,2h),1.57–1.50(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,150.1,143.9,134.8,124.7,116.6,55.4,52.9,47.8,46.4,46.1,33.2,32.3,21.2。[0294]lc-ms(esi)[m h] ＝467.21[0295]n-{1-[(2,4-二氟苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20n(lit-tb040)[0296]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.3ml)中的4-{3-[6-4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，26mg，0.055mmol)、2,4-二氟苄基溴(1.1eq.，12.5mg，7.78μl，0.0605mmol)和k2co3(5eq.，38mg，0.275mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20n(m＝25.6mg，产率＝81％)。[0297]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.93(d,j＝10.2hz,1h),7.49–7.44(m,1h),7.38(d,j＝10.2hz,1h),7.01–6.95(m,2h),3.72–3.70(m,4h),3.70–3.63(m,1h),3.60(s,2h),3.40–3.37(m,2h),2.88(d,j＝11.9hz,2h),2.80(t,j＝7.6hz,2h),2.65–2.63(m,4h),2.41(s,3h),2.23–2.18(m,2h),1.88–1.80(m,2h),1.56–1.48(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,163.9(dd,j＝247.0,12.0hz),162.9(dd,j＝248.0,12.5hz),156.8,150.1,143.9,134.3(dd,j＝9.6,5.9hz),124.7,121.5(dd,j＝14.7,3.7hz),116.5,112.1(dd,j＝21.6,3.8hz),104.4(dd,j＝26.8,25.7hz),55.5,55.4,53.0,47.8,46.5,46.1,33.2,32.4,21.2。19fnmr(376mhz,甲醇-d4)δ-113.2,-114.8。[0298]lc-ms(esi)[m h] ＝499.21[0299]n-{1-[(4-氟-2-甲基苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺20o(lit-tb044)[0300]遵循用于合成20a的一般程序b，使用于dmf(0.4ml)中的4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯18a(1eq.，24.7mg，0.0523mmol)、1-(溴甲基)-4-氟-2-甲基苯(1.1eq.，11.7mg，8.02μl，0.0575mmol)和k2co3(5eq.，36.1mg，0.261mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的20o(m＝14.8mg，产率＝50％)。[0301]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.87(d,j＝10.2hz,1h),7.33(d,j＝10.2hz,1h),7.21(dd,j＝8.4,6.0hz,1h),6.88(dd,j＝9.9,2.7hz,1h),6.83(td,j＝8.5,2.8hz,1h),3.67–3.60(m,5h),3.42(s,2h),3.35–3.31(m,2h),2.80(d,j＝11.6hz,2h),2.75(t,j＝7.6hz,2h),2.58(t,j＝5.1hz,4h),2.35(s,3h),2.35(s,3h),2.09(td,j＝11.7,2.5hz,2h),1.76(dd,j＝13.5,4.0hz,2h),1.42(qd,j＝11.6,3.8hz,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,163.3(d,j＝243.4hz),156.8,150.1,143.9,141.4(d,j＝7.7hz),133.4(d,j＝2.9hz),132.8(d,j＝8.3hz),124.7,117.7(d,j＝21.0hz),116.6,112.9(d,j＝20.9hz),60.8,55.4,53.4,48.1,46.4,46.1,33.2,32.6,21.2,19.5。19fnmr(471mhz,甲醇-d4)δ-118.5。[0302]lc-ms(esi)[m h] ＝495.28[0303]n-{1-[(4-甲氧基-2-甲基苯基)甲基]哌啶-4-基}-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,甲醛(2eq.，6.78mg，0.0698mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌10min。将nabh(oac)3(2eq.，15.6mg，0.0698mmol)溶解于无水meoh(0.5ml)中并且添加到反应混合物中。将反应物在室温下搅拌40h。添加水，并通过反相色谱法(h2o/meoh)直接纯化粗物质，用hcl水溶液(2m)盐化并冻干，得到呈白色固体状的20r(m＝3.7mg，产率＝20％)。[0314]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.16(d,j＝0.9hz,1h),7.90(d,j＝10.2hz,1h),7.86(d,j＝0.9hz,1h),7.36(d,j＝10.2hz,1h),3.69–3.65(m,4h),3.65–3.58(m,1h),3.52(s,2h),3.37–3.33(m,2h),2.90(d,j＝11.8hz,2h),2.76(t,j＝7.6hz,2h),2.60(t,j＝5.1hz,4h),2.37(s,3h),2.22–2.12(m,2h),1.81(dd,j＝13.4,3.8hz,2h),1.52–1.44(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.2,156.8,153.4,150.1,144.0,139.0,137.2,124.7,116.6,55.4,53.8,53.1,47.8,46.4,46.1,33.2,32.3,21.2。[0315]lc-ms(esi)[m h] ＝454.24[0316]一般程序c[0317]在一般程序c中，二酰化肼基哒嗪5，接着在酸性条件下环化22，得到丙酸乙酯三唑并哒嗪23(方案5)。与仲胺反应，产生在位置6中具有各种胺取代的三唑并哒嗪24。水解羧酸酯并与伯胺25偶合，产生在六元脂肪环上具有另一个分集点的最终类似物26(方案5)。[0318]方案5(参看式ii和iii)[0319][0320]条件：a)21、na2so4、diea、dmf，48h，室温；b)acoh，135℃，过夜；c)nr1r2、et3n、etoh，回流过夜；d)lioh、thf/h2o，1h，室温；e)hatu、net3、dmf，过夜。[0321]4-[2-(6-氯哒嗪-3-基)-2-(4-乙氧基-4-氧代-丁酰基)肼基]-4-氧代-丁酸乙酯22[0322]将3-氯-6-肼基哒嗪5(1eq.，600mg，4.15mmol)溶解于无水dmf(10ml)中。添加na2so4(50mg)和diea(2.2eq.，1180mg，1.51ml，9.13mmol)，并且将反应混合物冷却至0℃并搅拌15min。然后，滴加乙基琥珀酰氯21(1.2eq.，819mg，0.708ml，4.98mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌过周末。蒸发dmf，并通过硅胶色谱法(etoac/庚烷，1/1、5/1到1/0)纯化粗物质，得到呈白色固体状的22(m＝1g，产率＝61％)。[0323]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.51(d,j＝9.4hz,1h),7.15(d,j＝9.4hz,1h),4.15(qd,j＝7.1,6.0hz,4h),2.72–2.54(m,8h),1.26(td,j＝7.1,1.9hz,6h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ174.4,174.3,174.1,173.3,161.6,149.6,131.3,118.2,61.8,61.7,30.0,29.9,29.32,29.28,14.48,14.46。[0324]3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酸乙酯23[0325]将4-[2-(6-氯哒嗪-3-基)-2-(4-乙氧基-4-氧代-丁酰基)肼基]-4-氧代-丁酸乙酯22(1eq.，960mg，3.52mmol)溶解于乙酸(38.6eq.，8157mg，7.78ml，135mmol)中，并且将反应物在135℃下加热过夜。将粗物质冷却至室温并蒸发。通过硅胶色谱法(庚烷/etoac，1/1、1/5到0/1)纯化粗物质，得到呈白色固体状的化合物23(m＝586mg，产率＝96％)。[0326]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.26(d,j＝9.7hz,1h),7.45(d,j＝9.7hz,1h),4.16(q,j＝7.1hz,2h),3.47(t,j＝7.3hz,2h),3.04(t,j＝7.3hz,2h),1.26(t,j＝7.1hz,3h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.5,151.2,150.6,144.6,127.3,124.6,61.9,31.2,20.4,14.4。[0327]3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酸乙酯24a[0328]将3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酸乙酯23(1eq.，586mg，2.3mmol)溶解于etoh(2.5ml)中。添加1-甲基哌嗪(2eq.，460mg，0.51ml，4.6mmol)和et3n(2eq.，465mg，0.64ml，4.6mmol)，并且将反应物在回流下加热过夜。将粗物质冷却至室温并蒸发。通过硅胶色谱法(etoac/meoh/et3n；9/1/0.5到7/1/0.5)纯化粗物质，得到呈淡黄色固体状的24a(m＝728mg，产率＝99％)。[0329]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.97(d,j＝10.2hz,1h),7.39(d,j＝10.2hz,1h),4.12(q,j＝7.1hz,2h),3.90–3.85(m,4h),3.36(t,j＝7.4hz,2h),3.24–3.19(m,4h),2.97(t,j＝7.4hz,2h),2.80(s,3h),1.21(t,j＝7.1hz,3h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.7,156.4,149.9,144.0,125.3,116.5,61.9,54.3,31.3,20.5,14.4。[0330]实例6：3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]-n-(1-甲基-哌啶-4-基)丙酰胺26a(lit-tb016)[0331]将3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酸乙酯24a(1eq.，30mg，0.0942mmol)稀释于thf/h2o混合物(1/1；6ml)中。添加lioh(5eq.，19.8mg，0.471mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1h。用hcl(2m)酸化粗物质，蒸发并稀释于无水dmf(0.5ml)中。添加hatu(2.5eq.，89.6mg，0.236mmol)和et3n(2.5eq.，23.8mg，32.7μl，0.236mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌15min。然后，添加1-甲基哌啶-4-胺25a(1.2eq.，13.3mg，14.6μl，0.113mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过反相色谱法(meoh/h2o)直接纯化粗物质，产生粘性油。执行第二次纯化以产生期望化合物。蒸发产物并稀释于meoh中。添加含2m-hcl的et2o(过量)，并且将反应物在室温下搅拌1.5h。蒸发混合物，稀释于水中并冻干，得到呈白色固体状的26a(m＝2.9mg，产率＝7％)。[0332]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.2hz,1h),7.34(d,j＝10.2hz,1h),3.68–3.63(m,5h),3.33(t,j＝7.5hz,2h),2.93–2.85(m,2h),2.76(t,j＝7.5,2h),2.61–2.57(m,4h),2.36(s,3h),2.34(s,3h),2.25(t,j＝11.8hz,2h),1.88–1.83(m,2h),1.54–1.47(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.4,156.8,150.1,144.0,124.7,116.6,68.9,55.4,46.4,46.1,45.8,33.1,31.9,26.5,21.1。[0333]lc-ms(esi)[m h] ＝387.17[0334]n-(1-苄基-4-哌啶基)-3-[6-[2-(二甲氨基)乙氨基]-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺26b(lit-tb051)[0335]将3-[6-[2-(二甲氨基)乙氨基]-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酸乙酯24b(1eq.，18mg，0.0588mmol)稀释于thf/h2o混合物(1/1；6ml)中。添加lioh(5eq.，12.3mg，8.62μl，0.294mmol)并将反应混合物在室温下搅拌1h。用hcl(2m)酸化粗物质，蒸发并稀释于无水dmf(0.5ml)中。将硫酸盐加入混合物中并搅拌5min。添加hatu(1.2eq.，26.8mg，0.0705mmol)和et3n(2.5eq.，14.9mg，20.4μl，0.147mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌15min。然后，添加4-氨基-1-苄基哌啶25b(1.5eq.，16.8mg，18μ，0.0881mmol)，并且将反应混合物在60℃下搅拌3h。经硅藻土垫过滤粗物质并用meoh洗涤。蒸发滤液，并通过反相色谱法(meoh/h2o)纯化，使用hcl水溶液(2m)盐化并冻干，得到呈白色固体状的26b(m＝14.3mg，产率＝46％)。[0336]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.74(d,j＝9.9hz,1h),7.34–7.24(m,5h),6.81(d,j＝9.9hz,1h),3.68–3.60(m,1h),3.58–3.53(m,4h),3.35–3.29(m,2h),2.87(d,j＝11.7hz,2h),2.78–2.73(m,4h),2.41(s,6h),2.18–2.12(m,2h),1.81(dd,j＝13.4,3.9hz,2h),1.55–1.42(m,2h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.2,155.8,149.9,144.3,138.2,130.8,129.4,128.6,124.0,119.4,63.9,58.2,53.2,47.8,45.4,39.7,33.2,32.2,21.1。[0337]lc-ms(esi)[m h] ＝451.26[0338]n-(1-苄基-2-氧代哌啶-4-基)-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺26c(lit-tb033)[0339]遵循用于合成26a的一般程序c，使用于thf/h2o(1/1；6ml)中的3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酸乙酯11a(1.5eq.，54.9mg，0.173mmol)和lioh(5eq.，24.1mg，0.575mmol)。用于无水dmf(1ml)中的hatu(1.2eq.，52.5mg，0.138mmol)、et3n(5eq.，58.2mg，80μl，0.575mmol)和4-氨基-1-苄基哌啶-2-酮25c(1eq.，23.5mg，0.115mmol)处理粗物质。[0340]通过反相色谱法(meoh/h2o)直接纯化粗物质。执行半制备型色谱法(meoh/h2o 0.05％hcl)以分离产物。将化合物盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的26c(m＝8.5mg，产率＝14％)。[0341]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.78(d,j＝10.2hz,1h),7.26–7.20(m,3h),7.17–7.14(m,3h),4.56–4.41(m,2h),4.00(tdd,j＝9.1,5.7,3.3hz,1h),3.57–3.55(m,4h),3.27–3.16(m,4h),2.68(t,j＝7.5hz,2h),2.62(ddd,j＝17.4,5.7,1.6hz,1h),2.51–2.49(m,4h),2.26(s,3h),2.23(dd,j＝17.9,9.2hz,1h),1.89(ddt,j＝13.0,4.8,3.1hz,1h),1.68–1.59(m,1h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.6,170.5,156.8,150.0,144.0,138.1,129.7,129.0,128.6,124.7,116.6,55.4,50.9,46.4,46.1,45.5,45.1,38.5,33.0,29.2,21.0。[0342]lc-ms(esi)[m h] ＝477.19[0343]n-(4-苄基环己基)-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺26d(lit-tb034)[0344]遵循用于合成26a的一般程序c，使用于thf/h2o(1/1；6ml)中的3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酸乙酯24a(1.5eq.，50.2mg，0.158mmol)和lioh(5eq.，22.1mg，0.526mmol)。用于无水dmf(1ml)中的hatu(1.2eq.，48mg，0.126mmol)、et3n(5eq.，53.2mg，73μl，0.526mmol)和4-苄基环己-1-胺25d(1eq.，19.9mg，0.105mmol)处理粗物质。通过反相色谱法(meoh/h2o)直接纯化粗物质。执行半制备型色谱法(meoh/h2o 0.05％hcl)以分离产物。将化合物盐化并冻干，得到呈浅淡黄色固体状的26d(m＝11.3mg，产率＝22％)。[0345]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ8.26(d,j＝9.7hz,1h),7.93(d,j＝9.8hz,1h),7.22–7.19(m,2h),7.14–7.07(m,3h),4.59(d,j＝14.2hz,2h),3.66(d,j＝11.5hz,2h),3.60–3.48(m,3h),3.43(t,j＝6.5hz,2h),3.35–3.28(m,2h),2.96(s,3h),2.85–2.82(m,2h),2.46(d,j＝7.0hz,2h),1.81(d,j＝9.3hz,2h),1.70(d,j＝11.0hz,2h),1.47(ddt,j＝11.3,7.7,3.8hz,1h),1.19–1.11(m,2h),1.07–0.96(m,2h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ172.1,157.5,150.5,142.1,141.0,130.1,129.2,126.8,122.6,122.6,53.8,50.2,44.4,44.1,43.7,40.3,33.5,32.7,31.9,20.7。[0346]lc-ms(esi)[m h] ＝462.20[0347]3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]-n-(1-苯基哌啶-4-基)丙酰胺26e(lit-tb035)[0348]遵循用于合成26a的一般程序c，使用于thf/h2o(1/1；6ml)中的3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酸乙酯24a(1.5eq.，60mg，0.188mmol)和lioh(1.5eq.，60mg，0.188mmol)。用于无水dmf(1ml)中的hatu(1.2eq.，57.3mg，0.151mmol)、et3n(5eq.，63.6mg，87.3μl，0.628mmol)和1-苯基哌啶-4-胺1-苯基哌啶-4-胺25e(1eq.，22.1mg，0.126mmol；cas63921-23-3)处理粗物质。通过反相色谱法(meoh/h2o)直接纯化粗物质。将化合物盐化并冻干，得到呈浅淡黄色固体状的26e(m＝20.9mg，产率＝34％)。[0349]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.1hz,1h),7.34(d,j＝10.2hz,1h),7.23–7.17(m,2h),6.99–6.94(m,2h),6.81(tt,j＝7.3,1.1hz,1h),3.77(tt,j＝10.8,4.2hz,1h),3.69–3.63(m,4h),3.61–3.56(m,2h),3.35(t,j＝7.6hz,2h),2.82–2.74(m,4h),2.59(t,j＝5.1hz,4h),2.35(s,3h),1.92–1.88(m,2h),1.61–1.53(m,2h),nh。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.3,156.8,152.8,150.1,144.0,130.0,124.7,121.1,118.2,116.6,55.4,50.2,48.0,46.4,46.1,33.2,32.5,21.2。[0350]lc-ms(esi)[m h] ＝449.17[0351]用于制备lit-tb001的3-氟-4-氨基哌啶类似物的一般程序d[0352]方案6(参看式i)[0353][0354]条件：a)tfa、dcm，2h，室温；b)rx、k2co3、dmf、氩气，-5℃(30min)→室温(过夜)。根据一般程序c(化合物23→化合物26)通过使对映纯的4-氨基-3-氟哌啶与3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酸乙酯24a进行肽型偶合获得β-氟哌啶类似物27a-d。[0355](3s,4r)-3-氟-4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯27a[0356]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.90(d,j＝10.2hz,1h),7.36(d,j＝10.2hz,1h),4.64(d,j＝48.9hz,1h),4.35(s,1h),4.14(d,j＝12.6hz,1h),4.00(dddd,j＝30.8,12.3,4.9,2.2hz,1h),3.67(dd,j＝6.2,4.1hz,4h),3.39–3.34(m,2h),2.83(t,j＝7.6hz,2h),2.61(t,j＝5.1hz,4h),2.38(s,3h),1.74(qd,j＝12.7,4.5hz,1h),1.62(ddd,j＝10.1,5.2,2.6hz,1h),1.46(s,9h),1.35–1.29(m,2h),nh(不可见)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.5,156.9,156.8,150.0,144.0,124.7,116.6,88.5(d,j＝177.3hz),81.4,55.4,50.1(d,j＝18.9hz),46.4,46.1,33.0,32.9,28.6,23.7,21.1,14.4。[0357]19fnmr(471mhz,甲醇-d4)δ-205.7。[0358]实例7：n-[(3s,4r)-1-苄基-3-氟哌啶-4-基]-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺28a(lit-tb047)[0359]将(3s,4r)-3-氟-4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯27a(1eq.，30.4mg，0.062mmol)溶解于dcm(0.7ml)中。添加tfa(10eq.，70.7mg，46μl，0.62mmol)并将反应混合物在室温下搅拌2h。蒸发粗物质，然后与dcm/庚烷共蒸发(3次)。干燥后，将粗物质在氩气下溶解于无水dmf中。添加k2co3(5eq.，42.8mg，0.31mmol)，并将反应混合物在-5℃下搅拌30min。添加苄基溴(1.1eq.，11.7mg，8.15μl，0.0682mmol)，并将混合物在-5℃下搅拌0.5h，然后在室温下搅拌过夜。添加水(几滴)，并通过反相色谱法(h2o/meoh)直接纯化粗物质，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的标题化合物28a(m＝18.8mg，产率＝55％)。[0360]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.2hz,1h),7.37–7.22(m,6h),4.61(d,j＝49.3hz,1h),3.84(dd,j＝30.4,12.2hz,1h),3.65(t,j＝4.8hz,4h),3.63–3.48(m,2h),3.37–3.31(m,2h),3.11(t,j＝11.8hz,1h),2.90(d,j＝11.7hz,1h),2.85–2.77(m,2h),2.59(t,j＝4.8hz,4h),2.36(s,3h),2.29–2.15(m,2h),1.89(q,j＝13.0,12.5hz,1h),1.63(d,j＝13.0hz,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.5,156.8,150.0,144.0,138.3,130.5,129.3,128.4,124.7,116.6,89.0(d,j＝177.1hz),63.3,56.3(d,j＝18.9hz),55.4,52.7,50.0(d,j＝18.5hz),46.4,46.1,32.9,27.0,21.1。19fnmr(376mhz,甲醇-d4)δ-201.6。[0361]lc-ms(esi)[m h] ＝481.25[0362]n-[(3s,4s)-1-苄基-3-氟哌啶-4-基]-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺28b(lit-tb048)[0363]遵循用于合成28a的一般程序d，使用于dmf(0.5ml)中的(3s,4s)-3-氟-4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯27b(1eq.，26mg，0.053mmol)、苄基溴(1.1eq.，9.97mg，6.97μl，0.0583mmol)和k2co3(5eq.，36.6mg，0.265mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的28b(m＝13.0mg，产率＝44％)。[0364]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.3hz,1h),7.35–7.25(m,6h),4.46–4.21(m,1h),3.88–3.75(m,1h),3.65(t,j＝4.9hz,4h),3.61–3.53(m,2h),3.37–3.33(m,2h),3.10(dd,j＝11.0,5.7hz,1h),2.82–2.76(m,3h),2.59(t,j＝4.9hz,4h),2.36(s,3h),2.16–2.06(m,2h),1.89(d,j＝12.5hz,1h),1.46(q,j＝11.7hz,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.9,156.8,150.0,144.0,138.7,130.4,129.4,128.5,124.7,116.6,90.6(d,j＝177.8hz),63.2,57.1(d,j＝25.0hz),55.4,52.6(d,j＝18.4hz),52.4,46.4,46.1,33.3,30.4(d,j＝6.9hz),21.1。19fnmr(376mhz,甲醇-d4)δ-189.7。[0365]lc-ms(esi)[m h] ＝481.25[0366]n-[(3r,4r)-1-苄基-3-氟哌啶-4-基]-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺28c(lit-tb049)[0367]遵循用于合成28a的一般程序d，使用于dmf(0.5ml)中的(3r,4r)-3-氟-4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯17c(1eq.，22.4mg，0.0457mmol)、苄基溴(1.1eq.，8.59mg，6.01μl，0.0502mmol)和k2co3(5eq.，31.6mg，0.228mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的28c(m＝13.4mg，产率＝54％)。[0368]1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.1hz,1h),7.36–7.25(m,6h),4.34(dtd,j＝49.7,9.4,4.7hz,1h),3.80(tdd,j＝11.2,9.2,5.0hz,1h),3.68–3.64(m,4h),3.61–3.53(m,2h),3.38–3.34(m,2h),3.13–3.06(m,1h),2.82–2.75(m,3h),2.59(t,j＝5.1hz,4h),2.36(s,3h),2.16–2.08(m,2h),1.89(dtt,j＝13.6,5.8,3.0hz,1h),1.46(dtdd,j＝12.9,11.7,4.2,1.0hz,1h)。13cnmr(126mhz,甲醇-d4)δ173.9,156.8,150.0,144.0,138.6,130.4,129.4,128.5,124.7,116.6,90.6(d,j＝177.9hz),63.2,57.1(d,j＝25.0hz),55.4,52.6(d,j＝18.5hz),52.4,46.4,46.1,33.3,30.4(d,j＝6.8hz),21.1。19fnmr(471mhz,甲醇-d4)δ-189.7。[0369]lc-ms(esi)[m h] ＝481.26[0370]n-[(3r,4s)-1-苄基-3-氟哌啶-4-基]-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺18d(lit-tb054)[0371]遵循用于合成28a的一般程序d，使用于dmf(0.5ml)中的(3r,4s)-3-氟-4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯17d(1eq.，24mg，0.0489mmol)(1.1eq.，9.2mg，6.44μl，0.0538mmol)和k2co3(5eq.，33.8mg，0.245mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈淡黄色固体状的28d(m＝13.4mg，产率＝49％)。[0372]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.2hz,1h),7.36–7.24(m,6h),4.61(ddd,j＝49.3,3.8,2.1hz,1h),3.84(dddd,j＝30.2,12.3,5.0,2.5hz,1h),3.66(t,j＝5.1hz,4h),3.55(dd,j＝42.3,13.0hz,2h),3.37–3.33(m,2h),3.15–3.08(m,1h),2.93–2.88(m,1h),2.82(t,j＝7.6hz,2h),2.59(t,j＝5.1hz,4h),2.36(s,3h),2.31–2.14(m,2h),1.94–1.84(m,1h),1.63(dd,j＝13.0,3.9hz,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.54,156.78,150.02,143.95,138.28,130.55,129.31,128.43,124.71,116.57,89.02(d,j＝177.1hz),63.26,56.29(d,j＝19.0hz),55.39,52.73,50.02(d,j＝18.5hz),46.43,46.11,32.94,27.04(d,j＝1.7hz),21.11。19fnmr(376mhz,甲醇-d4)δ-201.62。[0373]lc-ms(esi)[m h] ＝481.23[0374]n-[(3s,4s)-3-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌啶-4-基]-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺29b(lit-tb052)[0375]遵循用于合成28a的一般程序d，使用于dmf(0.7ml)中的(3s,4s)-3-氟-4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯27b(1eq.，34mg，0.0693mmol)、4-甲氧基苄基氯(1.1eq.，12.2mg，10.5μl，0.0762mmol)和k2co3(5eq.，47.9mg，0.347mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈白色固体状的29b(m＝15.2mg，产率＝58％)。[0376]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.2hz,1h),7.34(d,j＝10.2hz,1h),7.24–7.19(m,2h),6.90–6.85(m,2h),4.33(dtd,j＝49.7,9.4,4.7hz,1h),3.84–3.73(m,1h),3.78(s,3h),3.66(t,j＝5.1hz,4h),3.55–3.47(m,2h),3.37–3.33(m,2h),3.11–3.06(m,1h),2.80(t,j＝7.7hz,2h),2.80–2.74(m,1h),2.59(t,j＝5.1hz,4h),2.36(s,3h),2.12–2.05(m,2h),1.89(dtd,j＝10.7,5.4,2.8hz,1h),1.45(qd,j＝12.0,3.9hz,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.89,160.6,156.8,150.0,144.0,131.6,130.4,124.7,116.6,114.7,90.7(d,j＝177.8hz),62.6,57.0(d,j＝24.9hz),55.7,55.4,52.6(d,j＝18.4hz),52.3,46.4,46.1,33.3,30.4(d,j＝7.0hz),21.1。19fnmr(376mhz,甲醇-d4)δ-189.7。[0377]lc-ms(esi)[m h] ＝511.27[0378]n-[(3r,4r)-3-氟-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌啶-4-基]-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺29c(lit-tb053)[0379]遵循用于合成28a的一般程序d，使用于dmf(0.7ml)中的(3r,4r)-3-氟-4-{3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰氨基}哌啶-1-甲酸叔丁酯27c(1eq.，48.3mg，0.0985mmol)、4-甲氧基苄基氯(1.1eq.，17.3mg，15μl，0.108mmol)和k2co3(5eq.，68mg，0.492mmol)。蒸发粗物质，并通过反相色谱法(h2o/meoh)纯化，盐化并冻干，得到呈白色固体状的29c(m＝17.3mg，产率＝66％)。[0380]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.88(d,j＝10.2hz,1h),7.34(d,j＝10.2hz,1h),7.24–7.19(m,2h),6.90–6.85(m,2h),4.33(dtd,j＝49.7,9.4,4.7hz,1h),3.84–3.74(m,1h),3.79(s,3h),3.66(t,j＝5.1hz,4h),3.55–3.47(m,2h),3.37–3.33(m,2h),3.12–3.06(m,1h),2.80(t,j＝7.7hz,2h),2.80–2.74(m,1h),2.59(t,j＝5.1hz,4h),2.36(s,3h),2.12–2.05(m,2h),1.89(dtd,j＝10.7,5.4,2.8hz,1h),1.46(qd,j＝12.0,3.9hz,1h)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.9,160.6,156.8,150.0,144.0,131.6,130.4,124.7,116.6,114.7,90.7(d,j＝177.8hz),62.6,57.0(d,j＝25.0hz),55.7,55.4,52.6(d,j＝18.4hz),52.3,46.4,46.1,33.3,30.4(d,j＝6.9hz),21.1。19fnmr(376mhz,甲醇-d4)δ-189.7。[0381]lc-ms(esi)[m h] ＝511.25[0382]三唑并吡啶制备[0383]或者，已经如方案7中所报告制备了化合物9a(lit-tb001)的卡巴斯特(carbaisostere)。在存在氯甲酸异丁酯的情况下，以已知的肼-溴吡啶衍生物35为起始物，与丙酸4a进行反应，得到酰肼36，之后在光延条件下在存在tmsn3的情况下将其环化成三唑并吡啶37。在布赫瓦尔德交叉偶合反应条件(buchwaldcrosscouplingreactioncondition)下获得最终化合物38。[0384]方案7[0385][0386]条件：nh2-nh2，100℃，参见《合成(synthesis)》,47(20),3169-3178；2015年；b)4a、氯甲酸异丁酯、diea、thf，25℃，12h；c)diad、pph3、tmsn3、thf，12h；d)pd(oac)2、binap、cs2co3、二噁烷，105℃，12h。[0387]实例8：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)丙酰胺38(lit-tb006)[0388]步骤1：n-(1-苄基哌啶-4-基)-4-(2-(5-溴吡啶-2-基)肼基)-4-氧代丁酰胺36[0389]将4-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)-4-氧代丁酸4a(1.0eq.，300mg，1.56mmol)悬浮于thf(6ml)、接着为nmm(1.2eq.，193.7mg，0.21ml)中。然后，将氯甲酸异丁酯(0.5g，0.49ml)滴加到溶液中，并将所得混合物在室温下搅拌30min。接着，添加5-溴-2-肼基吡啶(1eq.，300mg，1.59mmol)并再维持搅拌一小时。蒸发挥发物并且将粗物质溶解于etoac(30ml)中。用1nna2co3(15ml)、水(15ml)、盐水(20ml)洗涤有机相一次，并且经na2so4干燥，过滤并减压浓缩。然后，通过硅胶柱色谱法使用0％到3％net3/etoac:meoh9:1的梯度纯化残余物，得到呈白色固体状的标题化合物(212mg，29％)。[0390]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.62(s,1h),8.11(s,1h),7.50(d,1h,j＝8.0hz),7.29-7.20(m,5h)；6.96(s,1h),6.54(d,1h,j＝8.0hz),5.93(d,1h,j＝4.0hz),3.73-3.65(m,1h),3.45(s,2h),2.76(d,2h,j＝4.0hz),2.49(dd,2h,j＝8.0hz,j＝4.0hz),2.04(t,2h,j＝12.0hz),1.79(d,2h,j＝12hz),1.40(dq,2h,j＝12hz,j＝4.0hz)。13cnmr(101mhz,cdcl3)δ172.5,171.3,158.1,148.7,140.5,129.3,128.4,127.3,110.9,108.3,63.1,52.3,46.9,32.1,31.4,29.7。[0391]步骤2：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)丙酰胺37[0392]将diad(109，8g，107.7μl，2.5当量)和tms-n3(62.56mg，0.54mmol，72.08μl)于thf(0.4ml)中的溶液缓慢添加到三苯基膦(142.4，0.53mmol，2.5当量)、n-(1-苄基哌啶-4-基)-4-(2-(5-溴吡啶-2-基)肼基)-4-氧代丁酰胺(100mg，0.21mmol)于thf(1.2ml)中的溶液中，并且将所得混浊混合物在室温下搅拌过夜。向混合物中添加硅胶并蒸发挥发物。使用0％到3％et3n/etoac-meoh9:1的梯度对粗产物进行急骤色谱，得到呈淡黄色固体状的标题化合物(m＝53.2mg，产率＝55％)。[0393]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.68(s,1h),7.62(d,1h,j＝8.0hz),7.48(d,1h,j＝8.0hz),7.33-7.25(m,5h),3.67-3.61(m,1h),3.65(s,2h),2.90(d,2h,j＝12.0hz),2.79(t,2h,j＝8.0hz),2.24(t,1h,j＝12.0hz),1.80(m,2h),2.26(dq,2h,j＝12.0hz,j＝4.0hz)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ173.1,149.6,148.3,137.2,133.1,130.9,129.4,128.8,125.3,116.9,109.8,63.6,53.0,47.5,33.6,31.8,21.1。[0394]步骤3：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)丙酰胺38(lit-tb006)[0395]向微波小瓶(被烘箱干燥并处于氩气下)装填n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-溴-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)丙酰胺37(100mg，0.23mmol，1当量)、1甲基哌嗪(22.64mg，25μl，0.23mmol)、cs2co3(147.3mg，0.45mmol，2当量)，添加pd(oac)2(1.02mg，2mol％)和binap(8.45mg，6mol％)、接着为二噁烷(1.05ml)。将小瓶适当加盖，并将混合容器抽真空并用氩气回填(过程重复3次)并在105℃下加热过夜。在冷却到室温之后，添加硅胶并将所得混合物蒸发至干。使用etoac/meoh/et3n8:2:0.3作为洗脱物对粗物质进行急骤色谱，得到标题化合物(m＝40mg，产率＝38％)。[0396]lc-ms(esi)[m h] ＝462,2979[0397]咪唑并吡啶制备[0398]本发明还提供了一种用于制备通式44所示咪唑并吡啶衍生物的方法。说明性通用合成方法在方案8中给出。涉及溴-咪唑并吡啶、米氏酸(meldrumacid)和甲醛的三组分迈克尔型(threecomponentmichael-type，3cc)反应使用已知程序产生相应的3-咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基丙酸[18]。在存在催化量的l-脯氨酸的情况下进行所述反应，得到相应的“迈克尔型”米光加合物(yonemitsuadduct)41，首先通过乙醇分解和铜催化的伴随脱羧将其转化为稳定的酯42，然后在连续的碱水解和经典的肽偶合反应之后将其转化为相应的酰胺43。最后，进行布赫瓦尔德型交叉偶合反应，产生目标化合物44(lit-tb013)。[0399]方案8(参看式iii)[0400][0401]条件：a)5mol％l-脯氨酸、mecn，50℃，10h；b)cu、吡啶-etoh10:1，回流3h；c)koh、etoh-h2o，50℃，10h，1nhcl(ph＝6)；d)1、bop、nmm、dcm，12h；e)pd(oac)2、binap、cs2co3、二噁烷，105℃，12h。[0402]实例9：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)丙酰胺44(lit-tb013)[0403]步骤1：3-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)丙酸乙酯42[0404]将6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶(1.50g，7.61mmol，1当量)、米氏酸(1eq.，1.10g，7.61mmol)、多聚甲醛(1eq.，228.6mg，7.61mmol)和l-脯氨酸(43.8mg，5mol％)悬浮于乙腈(29.23ml)中，并将反应混合物在50℃下在氮气气氛下搅拌过夜。通过过滤收集沉淀产物并用二乙醚彻底洗涤。干燥固体(m＝1.83g，5.18mmol，产率＝68％)。将所得化合物41(1eq.，1.50g，4.25mmol)溶解于吡啶/etoh(10:1v/v，5.5ml)中，添加铜粉(12.75mg，0.20mmol)，并使混合物回流3h。减压除去溶剂。使用etoac作为洗脱物对粗物质进行急骤色谱，得到标题化合物42(m＝500mg，产率＝40％)。[0405]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.04(d,1h,j＝1.2hz),7.43(d,1h,j＝9.2hz),7.36(s,1h),7.15(dd,1h,j＝9.2hz,j＝1.2hz),4.09(q,2h,j＝7.2hz),3.10(t,2h,j＝15.2hz),2.72(t,2h,j＝14.8hz),1.19(t,2h,j＝7.2hz)。13cnmr(101mhz,cdcl3)δ172.5,151.6,131.8,126.9,123.2,123.1118.7,112.6,107.1,60.9,32.0,19.4,14.2。[0406]步骤2：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)丙酰胺43[0407]在0℃下将3-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)丙酸乙酯42(1eq.，500mg，1.68mmol)溶解于etoh(10ml)中，然后用氢氧化钾(2eq.，189mg，3.36mmol，于1mlh2o中)处理。将所得混合物在环境温度下搅拌1小时。蒸发挥发物，并将粗物质溶解于h2o(20ml)中并用etoac(15ml)萃取。除去有机溶剂，并用1nhcl酸化剩余的水溶液直到ph达到约4。将生成的固体过滤并减压干燥，得到3-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)丙酸(m＝340mg，产率＝75％)。[0408]将获得的酸(200mg，0.74mmol，1当量)和bop(349.5mg，0.74mmol)悬浮于dcm(5.0ml)中。添加nmm(112.8ml，122μl，1.11mmol，1.5当量)，并且将反应混合物在室温下搅拌15min。随后，添加1-苄基哌啶-4-胺(141.5mg，0.74mmol，1当量)，并且将反应物在室温下搅拌过夜(20h)。添加meoh和二氧化硅并蒸发粗物质。然后，在硅胶色谱(洗脱物meoh/acoet8/2)上纯化所吸附的于硅胶上的化合物，得到黄色标题化合物43(m＝379mg，产率＝93％)。[0409]步骤3：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)咪唑并[1,2-a]49哒嗪-3-基)丙酰胺44(lit-tb013)[0410]向微波小瓶(被烘箱干燥并处于氩气下)装填n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-溴咪唑并[1,2-a]49哒嗪-3-基)丙酰胺43(1eq.，50mg，0.11mmol)、甲基哌嗪(12.5mg，13.8μl，0.12mmol)、cs2co3(2eq.，73.8mg，0.23mmol)，添加pd(oac)2(0.8mg，3mol％)和binap(4.2mg，6mol％)、接着为二噁烷(1.0ml)。将小瓶适当加盖，并将混合容器抽真空并用氩气回填(过程重复3次)并在105℃下加热过夜。在冷却到室温之后，添加硅胶并将所得混合物蒸发至干。使用etoac/meoh/et3n8:2:0.3对粗物质进行第一急骤色谱、接着为反相c18急骤色谱(10％到100％meoh/h2o 0.05％hcl)，得到标题化合物44(m＝7mg，产率＝13％)。[0411]lc-ms[m h] ＝461.2[0412]咪唑并哒嗪制备[0413]使用米氏酸和甲醛进行的先前迈克尔型(3cc)反应可以扩展到咪唑并哒嗪衍生物(方案9)。所述反应能够在于咪唑并吡啶部分(cpd46)的位置6上存在给电子基团(ome)的情况下形成相应的丙酸47。在存在licl和对甲苯磺酸的情况下执行去甲基化反应，在使用pocl3进行氯化反应、接着与1进行肽偶合反应之后产生6-氯咪唑-哒嗪酰胺49。最后，如先前所描述，通过在碱性条件下使49与各种杂环仲胺8偶合，获得最终式50所示化合物。[0414]方案9(参看式iii)[0415][0416]条件：a)meona、meoh，18h；a)5mol％l-脯氨酸、mecn，50℃，36h；blicl、ptsoh水合物、dmf，150℃，16h；c)pocl3、catdmf，150℃，16h；d)1、bop、nmm、dcm，12h；e)etoh，微波，150℃，2h。[0417]实例10：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)丙酰胺50(lit-tb014)制备[0418]步骤1：6-甲氧基咪唑并[1,2-b]哒嗪46[0419]在环境温度下将甲醇钠(7.35eq.，7.76g，143.6mmol)添加到6-氯咪唑并[1,2-bb]哒嗪(3.0g，19.54mmol)于无水甲醇(8ml)中的溶液中，并将反应混合物搅拌18小时。蒸发除去挥发物，并将黄色油状残余物溶解于二氯甲烷(100ml)中。用水(5×100ml)洗涤溶液，直到水性洗涤液变成中性。将有机溶液干燥(mgso4)并除去溶剂。获得呈白色固体状的标题化合物(m＝8.87g，产率＝91％)。[0420]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.36(d,j＝9.3hz,1h),6.85(d,j＝9.3hz,1h),6.61(s,1h)13cnmr(101mhz,cdcl3)δ160.2,137.3,132.4,127.3,116.8,112.1,54.4。[0421]步骤2：3-(6-甲氧基咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)丙酸47[0422]将6-甲氧基咪唑并[1,2-b]哒嗪(1eq.，1.0g，6.7mmol)、米氏酸(1eq.，0.97g，6.70mmol)、多聚甲醛(1eq.，201.3mg，6.70mmol)和l-脯氨酸(38.6mg，5mol％)悬浮于乙腈(30ml)中，并将反应混合物在50℃下在氮气气氛下搅拌36h。通过过滤收集沉淀产物，并用二乙醚彻底洗涤，并干燥，产生呈白色固体状的标题化合物(m＝1.0g，产率＝67％)。[0423]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.71-12.01(bs,1h),7.96(d,j＝9.6hz,1h),7.43(s,1h,j＝9.6hz),6.81(d,j＝9.6hz,1h),3.97(s,3h)。13cnmr(101mhz,cdcl3)δ173.5,159.5,136.5,129.9,127.6,127.5,110.3,54.3,31.1,18.8。[0424]步骤3：3-(6-羟基咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)丙酸48[0425]将获得的酸(1eq.，920mg，4.16mmol)悬浮于dmf(11.5ml)中。添加licl(5eq.，881.6mg，20.8mmol)、接着为ptsoh水合物(5eq.，3.95g，20.79mmol)，并将所得混合物在150℃下在氮气气氛下加热过夜。蒸发dmf并将粗物质悬浮于水中。通过过滤收集沉淀产物，并用二乙醚彻底洗涤，并干燥，产生标题化合物48(m＝600mg，产率＝70％)。[0426]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.71-11.68(bs,1h),7.96(d,j＝9.6hz,1h),7.43(s,1h,j＝9.6hz),6.83(d,j＝9.6hz,1h),3.10(t,j＝7.1hz,2h),2.73(t,,j＝7.5hz,2h)。[0427]lc-ms[m h] ＝208.0[0428]步骤4：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)丙酰胺50(littb014)[0429]将3-(6-羟基咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)丙酸(1eq.，200mg，0.96mmol)和n(me)4cl(1eq.105.8mg，0.96mmol)悬浮于pocl3(1.1ml)中，并将所得混合物在氮气气氛下加热过夜。在室温下冷却后，蒸发dmf，并通过急骤色谱法，使用etoac/meoh/acoh(8:2:0.5)作为洗脱物纯化粗物质，产生3-{6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基}丙酸(100mg，46％)。lc-ms(es apci):282.2[m na ],208.0[m h] [0430]将上述产物(1eq.,50mg，0.22mmol)、bop(1.2eq.,117.6mg,0.22mmol)和nmm(1.5eq.，33.6mg，0.33mmol)悬浮于dcm(1.5ml)中，并将反应混合物在室温下搅拌15min。然后，添加4-氨基-1-苄基哌啶(42.17mg，45.3μl，0.22mmol)，并将反应物在室温下搅拌过夜(20h)。然后，向所得混合物中添加水(15ml)，并用dcm(3×8ml)萃取水溶液两次。将有机相组合，经na2so4干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶急骤色谱法，使用etoac/meoh8/2作为洗脱物纯化所得油，产生n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯咪唑并[1,2-b]吡啶-3-基}丙酰胺49(65mg，74％)。lc-ms[m h] ＝398.2[0431]使用与针对9a(lit-tb001)所描述相同的程序a并以上述产物49(1eq.40mg，0.10mmol)和1-甲基哌嗪(20.14mg，22.3μl，0.20mmol，2当量)为起始物，以65％产率获得标题化合物。[0432]lc-ms(es apci):484.2[m na ],462.2[m h ]。[0433]三唑并哒嗪制备[0434]本发明还提供了一种用于制备适当的式56所示n取代的-三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙基哌啶-4-胺的方法(方案10)。以n-苄基哌啶-4-酮51为起始物，在存在nabh3cn的情况下与4-氨基丁酸甲酯进行胺化反应，获得哌啶-4-氨基-乙基丁酸n-苄酯52。为了避免分子内环化，首先对53进行n-boc保护(cpd53)，然后在皂化后进行到在所属领域熟知的条件下与肼基哒嗪5进行肽型偶合反应。在强酸性条件(135℃)下环化，接着在存在8a-g的情况下进行snar型胺化反应，产生目标产物56。[0435]方案10(参看式iii)[0436][0437]条件：a)h2n-(ch2)3co2et、acoh、nabh(aco)3、dcm，25℃，12h；b)boc2o、dcm、et3n，24h；c)naoh、meoh、接着为1nhcl(ph＝6)；d)bop、nmm、dcm，12h；e)acoh，150℃，2h；f)etoh，150℃，微波，1h。[0438]实例11：1-苄基-n-(3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙基)哌啶-4-胺56a(lit–tb015)制备[0439]步骤1：4-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)丁酸酯52[0440]向1-苄基哌啶-4-酮51(1eq.，1.00g，5.28mmol)于ch2cl2(35ml)中的冰冷溶液中添加4-氨基丁酸甲酯盐酸盐(1eq.，0.88g，5.28mmol)、乙酸(3.5eq.，1.1ml，18.49mmol)、et3n(1.5eq.，802mg，1.1ml，3mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(3eq.，3.5g，3mmol)。使混合物达到室温并搅拌16h。在那时之后，用饱和碳酸氢钾溶液洗涤所述溶液，干燥(na2so4)并浓缩。通过急骤色谱法，使用etoac-meoh(8:2)纯化粗物质，产生4-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)丁酸乙酯52(m＝1.15g，产率＝71％)。[0441]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25-7.21(m,4h),7.20-7.14(m,1h),4.05(q,2h,j＝7.0hz).343(s,2h),2.82-2.75(m,2h),2.62-2.61(bs,1h),2.59(t,2h,j＝7.2hz),2.43-2.36(m,1h),2.28(t,2h,j＝7.2hz),1.93-1.63(m,4h),1.33(dq,2h,j＝11.8hz,j＝3.6hz)。13cnmr(101mhz,cdcl3)δ174.6,138.3,129.2,128.3,127.0,62.9,52.7,48.7,42.7,31.4,29.0,18.1。[0442]步骤2：4-((1-苄基哌啶-4-基)(叔丁氧羰基)氨基)丁酸乙酯53[0443]向4-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)丁酸乙酯(1eq.，1.2g，3.94mmol)于dcm(15ml)中的搅拌溶液中添加et3n(2eq.，797.7mg，7.88mmol)、接着为boc2o(1.5eq.，1.29g，1.26mmol)，并将所得混合物搅拌过夜。在那时之后，用水洗涤所述溶液，干燥(na2so4)并浓缩。通过急骤色谱法纯化粗物质，产生标题化合物53(m＝1.35g，产率＝85％)。[0444]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.28-7.11(m,5h),4.06(q,2h,j＝7.2hz),3.96-3.79(m,1h),3.41(s,2h),3.11-2.99(m,2h),2.98(d,2h,j＝12.0hz),2.20(t,2h,j＝7.7hz),2.02-1.91(m,2h),1.79-1.70(m,2h),1.68-1.63(m,4h),1.39(s,8h),1.19(t,3h,j＝7.2hz)13cnmr(101mhz,cdcl3)δ173.2,155.6,129.1,128.2,127.0,79.5,63.0,60.3,53.3,42.2,31.9,30.1,25.8,14.3。[0445]步骤3：(1-苄基哌啶-4-基)(4-(2-(6-氯哒嗪-3-基)肼基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯54[0446]将4-((1-苄基哌啶-4-基)(叔丁氧羰基)氨基)丁酸乙酯53(1eq.，1.3g，3.21mmol)稀释于meoh(5ml)中。添加1nnaoh(15ml)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将粗物质用2nhcl酸化到ph＝6，蒸发。将粗产物(1eq.,1.0g，2.66mmol)、bop(1.2eq.，1.4g，2.66mmol)和nmm(2.5eq.，0.67g，730μl，6.64mmol)悬浮于dcm(1.5ml)中，并将反应混合物在室温下搅拌15min。然后，添加3-氯-6-肼基哒嗪5(1eq.，384mg，2.66mmol)，并将反应物在室温下搅拌过夜(20h)。挥发物蒸发后，通过硅胶急骤色谱法，使用etoac/meoh/et3n8/2/0.3作为洗脱物直接纯化粗物质，产生标题化合物(m＝1.0g，产率＝75％)。[0447]1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.50(bs,1h),7.52(bs,1h),7.42-729(m,5h),7.27(d,1h,j＝9.5hz),7.04(d,1h,j＝9.9hz),4.30-4.13(m,2h),4.04-3.89(m,1h),3.7(t,2h,j＝4.9hz),3.45(bs,2h),3.15-3.04(m,2h),2.83(t,2h,j＝12.1hz),2.27(t,2h,j＝7.2hz),1.85-1.77(m,4h),1.36(s,9h)。[0448]lc-ms(es apci):501(m-h ),401(-boc)[0449]步骤4：1-苄基-n-(3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙基)哌啶-4-胺56a(lit–tb015)[0450]向微波小瓶装填4-((1-苄基哌啶-4-基)(叔丁氧羰基)氨基)丁酸乙酯54(1eq.，400mg，0.82mmol)和乙酸(1.87ml)。将小瓶适当加盖并将混合容器在110℃下加热2h。将混合物冷却至室温并蒸发。将粗物质与环己烷共蒸发并与冷醚一起研磨。通过过滤收集白色固体(210mg，lc/ms385.2[m h])，产生化合物55，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。[0451]使用针对9a(lit-tb001)所描述的相同的程序a并以化合物55(1eq.，100mg，0.25mmol)和1-甲基哌嗪8a(2eq.，100.1mg，57.6μl)为起始物，在微波照射下获得标题化合物56a(m＝40mg，产率＝34％)。[0452]lc-ms[m h] ＝449.2；471.2(m na)[0453]57(lit-tb-058)制备[0454]本发明还提供了一种对6-氯三唑并哒嗪衍生物进行还原脱卤的方法。特别地，在卤素/金属交换中在存在pd(pph3)4和hcooh作为还原剂的情况下使用7a-f作为底物(参见方案11)。[0455]方案11(参看式i)[0456][0457]条件：a)pd(pph3)4(4mol％)、hcooh(1eq.)、tea(12eq.)、dmf，100℃，45min，微波。[0458]实例12：3-([1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)-n-(1-苄基哌啶-4-基)丙酰胺57a(lit-tb058)制备[0459]向n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-{6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基}丙酰胺7a(1eq.，100mg，0.25mmol)于无水dmf(2ml)中的溶液中添加tea(12eq.，314.6mg，0.43ml，3.1mmol)、pd(pph3)4(4mol％,11.6mg)。将小瓶适当加盖并脱气，并将内容物在室温下搅拌10min。然后，添加甲酸(1eq.，11.54mg，9.5μl，1mmol)于无水dmf(0.4ml)中的溶液，并将反应混合物通过微波照射在100℃下加热45min。将其冷却后，将反应混合物浓缩并通过硅胶急骤色谱法，使用dcm/meoh、90/10 2％nh3纯化，盐化后得到呈黄色固体状的标题化合物(m＝26mg，产率＝26％)。[0460]1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.58(dd,j＝4.2hz,j＝1.6hz,1h),8.2(dd,j＝9.5hz,j＝1.6hz,1h),7.36(dd,j＝9.5hz,j＝4.3hz),7.35-7.31(m,4h),7.31-7.25(m,1h),3.71-3.60(m,1h),3.52(s,2h),3.49(t,j＝7.5hz,2h),2.92-2.80(m,2h),2.84(t,j＝7.5hz,2h),2.13(dt,j＝11.6hz,j＝2.0hz,2h),1.82(dd,j＝13.1hz,j＝3.5hz),1.5(dq,j＝11.9hz,j＝3.5hz,2h).)。13cnmr(101mhz,甲醇-d4)δ171.7,149.5,146.0,144.4,137.1,129.4,127.9,127.0,123.9,121.1,62.6,51.9,46.5,31.6,30.9,19.7。[0461]lc-ms[m h] ＝365.20[0462]类似物60a-f制备[0463]本发明还提供了一种在铃木-宫浦条件(suzuki–miyauracondition)下借助于n-甲基-哌啶-3-烯-4-基硼酸酯58、接着为经pd/c氢化来在位置6处直接引入4-甲基四氢吡啶部分的方法(方案12)。[0464]方案12(参看式i)[0465][0466]条件：a)pdcl2dppf.ch2cl2、k2co3、dmf/h2o；b)h2、pd/c、meoh[0467]实例13：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(6-(1-甲基哌啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺60a(lit-tb059)制备[0468]将n-(1-苄基-4-哌啶基)-3-(6-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)丙酰胺7a(200mg，0.50mmol，1.0eq.)溶解于二甲基甲酰胺(10ml)中。在添加硼酸频哪醇酯58(110mg，0.50mmol，1.0eq.)、碳酸钾(210mg，1.50mmol，3.0eq.)和2滴水之后，通过氩气鼓泡将反应混合物脱气20分钟。分批添加钯复合物pdcl2dppf.ch2cl2(41mg，0.05mmol，0.1eq.)，并将反应容器密封并在80℃下加热18h。冷却后，真空除去溶剂，并且通过急骤色谱法[柱24g；洗脱剂：etoac/meoh；梯度：100/0→100/0(2cv)、100/0→70/30(12cv)、接着为70/30→70/30(3cv)]纯化残余物，得到呈深红色粉末状的化合物59(120mg，产率52％)。通过lcms:m/z＝460.2(m h)证实。[0469]将n-(1-苄基-4-哌啶基)-3-[6-(1-甲基-3,6-二氢-2h-吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙烯酰胺59(120mg，0.26mmol，1.0eq.)溶解于甲醇(30ml)中。在活性炭上添加10％钯(145mg，0.14mmol，0.5eq.)之后，将反应混合物在氢气压力(4巴)下在20℃下氢化6h。通过垫过滤反应混合物并且在真空下蒸发溶剂。通过急骤色谱法[柱4g；洗脱剂：dcm/meoh；梯度：90/100→80/20(10cv)]纯化残余物，得到呈浅褐色粉末状的化合物8(53mg，产率44％)。进行进一步冻干以去除痕量溶剂。[0470]1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.98(d,j＝9.6hz,1h),7.33-7.22(m,5h),7.02(d,j＝9.6hz,1h),6.08(d,j＝7.7hz,1h),3.82-3.72(m,1h),3.49-3.43(m,4h),3.04-2.99(m,2h),2.89(t,j＝7.1hz,2h),2.79-2.74(m,3h),2.35(s,3h),2.17-2.06(m,4h),1.98-1.93(m,4h),1.93-1.83(m,2h),1.53-1.39(m,2h)。[0471]13cnmr(75mhz,cdcl3)δ170.7,160.2,149.3,143.8,138.3,129.1(2c),128.2(2c),127.0,124.7,119.9,63.0,55.3(2c),52.2(2c),46.6,46.3,41.7,32.5,32.0(2c),30.8(2c),20.3。[0472]lcms:m/z＝462.2(m h)。[0473]吡唑并吡啶制备[0474]或者，在4步顺序中，三唑并哒嗪环可以被一般结构66的吡唑并吡啶环替代，如以下方案13中所绘示。[0475]方案13(参看式i)[0476][0477]条件：a)3,4-二氢-2h-吡喃、ptsoh、thf；b)pdcl2dppf.ch2cl2、k2co3、甲苯/etoh；c)nme-哌嗪、mecn，160℃，4h微波；d)pd/c(10％)、h2、etoh；e)hcl6n、mecn；f)edci、hobt、h2o、et3n、dcm。[0478]实例14：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)丙酰胺66a(lit-tb060)制备[0479]步骤1：5-氯-3-碘-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶62[0480]将5-氯-3-碘-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶1(1.0g，3.60mmol，1.0eq.)、3,4-二氢-2h-吡喃(650mg，7.70mmol，0.7ml，2.1eq.)和对甲苯磺酸(150mg，0.80mmol，0.2eq.)溶解于thf(10ml)中并在60℃下搅拌18h。在冷却到室温之后，添加nahco3饱和溶液(50ml)并用乙酸乙酯(3×75ml)萃取混合物。使有机层经硫酸镁干燥并真空蒸发。通过急骤色谱法[柱80g；洗脱剂：环己烷/dcm；梯度：100/0→100/0(3cv)、100/0→0/100(20cv)]纯化残余物，得到呈无色胶状的化合物3(1.30g，产率99％)。[0481]步骤2：(e)-3-(5-氯-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)丙烯酸乙酯64[0482]将5-氯-3-碘-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-b]吡啶62(1.0g，2.75mmol，1.0eq.)溶解于甲苯(10ml)与乙醇(5ml)的混合物中。在添加硼酸频哪醇酯63(810mg，3.58mmol，1.3eq.)和碳酸钾(2m)水溶液(5.60mmol，2.8ml，2.0eq.)之后，通过氩气鼓泡将反应混合物脱气20分钟。分批添加钯复合物(115mg，0.14mmol，0.05eq.)，并将反应容器密封并在110℃下加热18h。在冷却到室温之后，添加水(20ml)并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取混合物。使有机层经硫酸镁干燥并真空蒸发。通过急骤色谱法[柱80g；洗脱剂：环己烷/etoac；梯度：90/10→60/40(20cv)]纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物64(m＝475mg，产率＝51％)。通过lcms:m/z＝336.3(m h)证实。[0483]步骤3：3-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)丙酸65[0484]将(e)-3-(5-氯-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)丙-2-烯酸乙酯64(470mg，1.40mmol，1.0eq.)溶解于n-甲基哌嗪6(5ml)与mecn(5ml)的混合物中。将反应混合物在微波照射下在160℃下加热4h。真空蒸发溶剂，并且通过急骤色谱法[柱24g；洗脱剂：dcm/meoh；梯度：90/10→80/20(20cv)]纯化残余物，得到呈棕色油状的化合物7(340mg，产率60％)。通过lcms:m/z＝400.50(m h)证实。[0485]将(e)-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基]丙-2-烯酸乙酯(330mg，0.83mmol，1.0eq.)溶解于乙醇(30ml)中。在活性炭上添加10％钯(100mg，0.09mmol，0.1eq.)之后，将反应混合物在氢气压力(4巴)下在50℃下氢化24h。通过(100mg，0.09mmol，0.1eq.)之后，将反应混合物在氢气压力(4巴)下在50℃下氢化24h。通过垫过滤反应混合物，并且真空蒸发溶剂，得到呈棕色油状的3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基]丙酸(m＝335mg，产率＝99％)。通过lcms:m/z＝402.1(m h)证实。[0486]将3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基]丙酸(330mg，0.83mmol，1.0eq.)溶解于乙腈(5ml)中。在添加hcl(6n)水溶液(5.0ml)之后，将反应混合物在微波照射下在100℃下加热30分钟。真空蒸发溶剂，并且用二氯甲烷(3×20ml)洗涤含水残余物。蒸发水层并真空干燥，得到与盐复合混合的化合物65。残余物不经任何进一步纯化即用于下一步骤中。通过ms:m/z＝290.25(m h)证实。[0487]步骤4：n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)丙酰胺66a[0488]将粗3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基]丙酸65(粗物质，0.83mmol理论值，1.0eq.)和1-苄基哌啶-4-胺10(280mg，1.47mmol，0.30ml，1.8eq.)溶解于二甲基甲酰胺(10ml)中。将edci.hcl(315mg，1.66mmol，2.0eq.)、hobt(225mg，1.66mmol，2.0eq.)和et3n(725mg，7.17mmol，1.0ml，8.6eq.)添加到反应混合物中，将其在室温下搅拌24h。过滤反应混合物并将滤液在高真空下蒸发至干。向残余物中添加水(10ml)。依次用乙酸乙酯(3×20ml)和二氯甲烷(3×20ml)洗涤残余水溶液。蒸发水层并真空干燥。将残余物溶解于异丙醇中并通过二异丙醚沉淀。研磨和过滤后，真空蒸发滤液。在二氯甲烷中再次研磨，接着过滤，引起在滤液中检测到目标化合物11。通过急骤色谱法[柱24g；洗脱剂：etoac/meoh；梯度：100/0→100/0(3cv)、100/0→70/30(15cv)、随后为70/30→70/30(15cv)、接着为dcm/nh3(7n)于meoh中；梯度：100/0→100/0(3cv)、100/070/30(15cv)、随后为70/30→70/30(5cv)]纯化含有11的残余物，得到与edci衍生物混合的化合物11。通过半制备型hplc(gilsonplc2020，柱c8princetonspher.60-10μm，梯度：水/乙腈(0.1％hcooh)95/5→95/5，10分钟和95/5→0/100，25分钟)进行第二次纯化，接着为直接冻干，得到呈浅褐色粉末状的纯化合物66(22mg，产率7％)(0.3eq.甲酸盐)。通过溶解于二噁烷(5.0ml)中并添加含hcl(4n)溶液的二噁烷(5.0ml)来制备66的盐酸盐形式。在室温下搅拌1h后，蒸发溶剂并将残余物冻干，得到呈浅褐色粉末状的呈盐酸盐形式的66a(m＝22mg，产率＝5％)。[0489]1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ7.78(d,j＝7.6hz,1h),7.71(d,j＝9.2hz,1h),7.33-7.22(m,5h),7.02(d,j＝9.2hz,1h),3.65-3.30(m,7h),3.05-2.98(m,2h),2.80-2.72(m,2h),2.65-2.50(m,5h),2.31(s,3h),2.11-2.25(m,2h),1.70-1.65(m,2h),1.43-1.35(m,2h)。13cnmr(75mhz,dmso-d6):δ170.8,163.3,155.4,137.5,136.4,129.3,129.0,128.2,127.1,120.6,109.4,61.7,54.0,51.7,45.5,45.3,45.0,34.1,31.1,21.7。[0490]lcms:m/z＝462.2(m h)。[0491]荧光类似物(lit-tb043)合成[0492]如方案14中所指示，可以通过使荧光探针(例如dy-647p1-nhs-酯)与适当取代的伯胺偶合来制备化合物9a(lit-tb001)的荧光类似物。[0493]方案14(参看式ia)[0494][0495]条件：a)67、k2co3、dmf，80℃，16h；b)pph3、meoh/h2o，室温过夜；c)dy-647p1-nhs-酯、diea、dmso，室温，过夜。[0496](2e)-1-[6-[2-[2-[2-[4-[3-[3-[(1-苄基-4-哌啶基)氨基]-3-氧代-丙基]-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基]哌嗪-1-基]乙氧基]乙氧基]乙氨基]-6-氧代-己基]-2-[(2e,4e)-5-[1-(2-甲氧基乙基)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-吲哚-1-鎓-2-基]戊-2,4-二烯亚基]-3,3-二甲基-吲哚啉-5-磺酸盐；二盐酸盐(lit-tb043)制备[0497]步骤1：3-(6-(4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基)-n-(1-苄基哌啶-4-基)丙酰胺盐酸盐68[0498]将n-(1-苄基哌啶-4-基)-3-[6-(哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]丙酰胺9d(1eq.，10.4mg，0.0232mmol)、甲磺酸2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙酯67(1.5eq.，8.81mg，0.0348mmol)和k2co3(2eq.，6.41mg，0.0464mmol)溶解于无水dmf(0.2ml)中。用氩气冲洗反应物三次，并将混合物在80℃下搅拌16h。经硅藻土垫过滤粗物质并用meoh洗涤。蒸发滤液，得到淡黄色固体(化合物69)，将其溶解于meoh/h2o混合物(3/1，1ml)中。添加pph3(2.5eq.，15.2mg，0.058mmol)并将反应物在室温下搅拌过夜。将dmso添加到粗物质中，然后蒸发混合物。通过反相色谱法(h2o 0.05％hcl/meoh)纯化剩余的dmso相，得到呈白色固体状的化合物(m＝7.0mg，产率＝44％)。[0499]步骤2：(2e)-1-[6-[2-[2-[2-[4-[3-[3-[(1-苄基-4-哌啶基)氨基]-3-氧代-丙基]-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-6-基]哌嗪-1-基]乙氧基]乙氧基]乙氨基]-6-氧代-己基]-2-[(2e,4e)-5-[1-(2-甲氧基乙基)-3,3-二甲基-5-磺酸根基-吲哚-1-鎓-2-基]戊-2,4-二烯亚基]-3,3-二甲基-吲哚啉-5-磺酸盐；二盐酸盐69(lit-tb043)[0500]将3-[6-(4-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基}哌嗪-1-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]-n-(1-苄基哌啶-4-基)丙酰胺盐酸盐68(1eq.，0.855mg，0.00124mmol)和dy-647p1-nhs-酯(1eq.，1mg，0.00124mmol)溶解于无水dmso(0.3ml)中。添加diea(5eq.,0.802mg,1.03μl,0.0062mmol)，并用ar冲洗反应物三次。将反应物在室温下搅拌过夜。通过反相色谱法(h2o 0.05％hcl/meoh)直接纯化粗物质，得到呈蓝色固体状的lit-tb043(m＝1.58mg，产率＝98％)。[0501]lc-ms[2na(m/2)]＝646[0502]ii.结果[0503]材料[0504]重组人类bdnf和ngf获自peprotech。重组人类trkbecd-fc获自r&dsystems，而bdnf-生物素购自alomonelabs。aav-gcamp6f病毒是在宾夕法尼亚大学载体部(upennvectorcore)生产。磷酸酶抑制剂鸡尾酒2购自罗氏(roche)，而蛋白酶抑制剂complete超鸡尾酒购自西格玛(sigma)。抗体获自不同来源，如下：多克隆抗trkb、抗磷酸化酪氨酸(4g10)和抗py816-trkb来自密理博(millipore)；单克隆抗trkb来自bdbiosciences，抗磷酸化s473akt、抗akt、抗磷酸化erk1/2、抗erk1/2、抗py516-trkb和抗py706/707-trkb来自cellsignaling，hrp结合的链霉亲和素来自amershambiosciences，并且抗βiii-微管蛋白来自密理博。[0505]向小鼠腹腔施用[0506]向成年c57bl/6雄性小鼠腹腔注射呈范围为0.1到5.0mg/kg的不同剂量的盐水(0.9％nacl)或lit-tb001(溶解于盐水溶液中)。注射10μl/g体重的体积。1小时后(除非另有说明)，将小鼠斩首，收集血液并在冰上迅速取出大脑。随后，解剖皮层和海马体，并在冰冷pbs中快速洗涤组织，并在4℃下转移到冰冷增溶缓冲液中，之后均质化。将样品在4℃下以10,000×g离心10min。测定蛋白质浓度，装载等量蛋白质，并如上所述执行蛋白质印迹。[0507]trkb选择性[0508]trk典型(别构)激动剂的研发受到对受体缺乏选择性的限制，因为存在三种最常见和类似的trk受体类型：trka、trkb和trkc。这些受体中的每一种都对某些类型的神经营养素具有不同的结合亲和力。由这些不同类型的受体引发的信号传导的差异对于生成不同的生物反应至关重要。[0509]trkbpam在选择性方面可能具有一些优势。因此，已经体外评估作为增效性trkbpam的lit-tb001针对trkb的选择性(图1)。[0510]在存在bdnf(trkb)或ngf(trka)的情况下在pc12-trkb或pc12-trka细胞中测试了lit-tb001对信号传导激活和生物功能的选择性。在表达trka或trkb的细胞中重述了关键实验以测试tb选择性：trk磷酸化、erk磷酸化和神经突长出(图1)。[0511]在pc12-trka细胞中，在存在或不存在ngf的情况下，lit-tb001不会诱导erk或trka磷酸化。pc12-trkb细胞中的erk和trkb磷酸化仅在存在bdnf的情况下被诱导。在功能水平上对神经突长出进行相同观察。[0512]总而言之，lit-tb001增效bdnf而非ngf依赖性信号传导路径(perk和ptrkb)和生物功能(神经突长出)。这些结果表明tb化合物对trk家族的选择性。[0513]接下来执行激酶组特征以测试lit-tb001对其它激酶的选择性。具有45种激酶的激酶组特征显示出良好的trkb选择性，因为lit-tb001在10μm浓度下不会激活或阻断测试激酶的催化活性(其中与trkb最类似的trka证实了我们之前的结果)(图2)。[0514]trkb磷酸化检定中的lit-tb衍生物的体外活性[0515]下表1中列举了trkb磷酸化检定中的lit-tb衍生物的体外活性：[0516][0517][0518]a在皮层神经元中在10nm或0.4nmpam浓度的bdnf诱导的trkb磷酸化时的体外增效( ：《20％， ：20-35％， ：》35％)。为了进行比较，bdnf浓度增加10倍(0.4到4nm)引起所述检定中的55％增效。[0519]体内目标参与[0520]在外周注射后，评估了小鼠大脑中lit-tb001的体内trkb参与。c57bl6雄性小鼠接受0.5和1mg/kg的腹腔注射1小时，之后小心地取出它们的大脑并次解剖它们的皮层和海马体。已知bdnf和trkb在这两个区域中起着关键作用。通过蛋白质印迹分析酪氨酸816处的trkb磷酸化水平(图3)。这些结果明确表明，低剂量(0.5和1mg/kg，腹腔)lit-tb001在小鼠中全身施用后1h可有效增加大脑中的trkb激活。[0521]参考文献表[0522][1]vonsattelj.p.,difigliam.,《神经病理学与实验神经病学杂志(j.neuropathol.exp.neurol.)》,57,369-384,1998年。[0523][2]lis-h,lix-j.,多种途径促成亨廷顿病的发病机制(multiplepathwayscontributetothepathogenesisofhuntingtondisease)。《分子神经退化性疾病(molecularneurodegeneration)》,1,19,2006年。[0524][3]harjesp.,wankere.e.,寻找亨廷顿功能：互动伙伴讲述许多不同的故事(thehuntforhuntingtinfunction:interactionpartnerstellmanydifferentstories)。《生物化学科学趋势(trendsbiochem.sci)》,28,425-433,2003年。[0525][4]schultej.,littletonj.t.,亨廷顿蛋白的生物功能和其与亨廷顿病病理学的相关性(thebiologicalfunctionofthehuntingtinproteinanditsrelevancetohuntington’sdiseasepathology)。《当前神经病学趋势(currenttrendsinneurology)》,5,65-78,2011年。[0526][5]亨廷顿病研究协作组(thehuntington’sdiseasecollaborativeresearchgroup)，一种在亨廷顿病染色体上扩增且不稳定的含有三核苷酸重复序列的新基因(anovelgenecontainingatrinucleotiderepeatthatisexpandedandunstableonhuntington’sdiseasechromosomes),《细胞(cell)》,72,971-983,1993年。[0527][6]roosrac,亨廷顿病：临床综述(untington’sdisease:aclinicalreview)；《orphanet罕见疾病杂志(orphanetjournalofrarediseases)》,5,40,2010年。[0528][7]koliatsosv.e.,mocchettii.,《细胞死亡和神经系统疾病(celldeathanddiseasesofthenervoussystem)》,humanapress,新泽西州托托华(totowa,nj),545-591,1999年。[0529][8]barbacidm.,神经营养素受体的trk家族的结构和功能性质(structuralandfunctionalpropertiesofthetrkfamilyofneurotrophinreceptors),《纽约科学院年鉴(ann.nyacad.sci)》.,766,442-458,1995年。[0530][9]leibrockj.,lottspeichf.,hohna.,hoferh.,hengererb.,masiakowskip.,thoenenh.,bardey.a.,大脑源性神经营养因子的分子克隆与表达(molecularcloningandexpressionofbrain-derivedneurotrophicfactor),《自然(nature)》,341,149-152,1989年。[0531][10]ferreri.,goutane.,marinc.,reym.j.,ribaltat.,亨廷顿病的大脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactorinhuntingtondisease),《大脑研究(brainresearch)》,866,257-261,2000年。[0532][11]zuccatoc.,ciammolaa.,rigamontid.,leavittb.r.,goffredod.,contil.,macdonaldm.e.,friedlanderr.m.,silaniv.,haydenm.r.,timmuskt.,sipiones.,cattaneoe.,亨廷顿病的亨廷顿蛋白介导的bdnf基因转录的损失(lossofhuntingtin-mediatedbdnfgenetranscriptioninhuntington’sdisease)。《科学(science)》,293,493-498,2001年。[0533][12]gauthierl.r.,charrinb.c.,borrell-pagèsm.,dompierrej.p.,rangoneh.,cordelièresf.p.,demeyj.,macdonaldm.e.,lessmannv.,humberts.,saudouf.亨廷顿通过增强沿微管的bdnf囊泡转运来控制神经元的神经营养性支持和存活(huntingtincontrolsneutrophicsupportandsurvivalofneuronsbyenhancingbdnfvesiculartransportalongmicrotubules)。《细胞(cel)》l,118,127-138,2004年。[0534][13]ginéss.,boschm.,marcos.,gavaldàn.,díaz-hernándezm,.lucasj.j.,canalsj.m.,alberchj.,亨廷顿病小鼠模型和人脑中trkb受体的减少的表达(reducedexpressionofthetrkbreceptorinhuntington’sdiseasemousemodelsandinhumanbrain)。《欧洲神经科学杂志(eur.j.neurosci)》.,23,649-658,2006年。[0535][14]canalsj.m.,pinedaj.r.,torres-perazaj.f.,boschm.,martín-r.,m.t.,mengodg.,ernforsp.,alberchj.,大脑源性神经营养因子调节与亨廷顿病脑啡肽能神经元退化相关的运动机能障碍的发作和严重程度(brain-derivedneurotrophicfactorregulatestheonsetandseverityofmotordysfunctionassociatedwithenkephalinergicneuronaldegenerationinhuntington’sdisease)。《神经科学杂志(j.neurosci》),24,7727-7739,2004年。[0536][15]binderd.k.,crolls.d.,gallc.m.,scharfmanh.e.,bdnf和癫痫：好事太多？(bdnfandepilepsy:toomuchofagoodthing？)《神经科学趋势(trendsneurosci)》,24,47-53,2001年。[0537][16]green,s.h.,rydel,r.e.,connolly,j.l.greene,l.a.,具有低而非高亲和力神经生长因子受体的pc12细胞突变体既不响应也不内化神经生长因子(pc12cellmutantsthatpossesslow-butnothigh-affinitynervegrowthfactorreceptorsneitherrespondtonorinternalizenervegrowthfactor)。《细胞生物学杂志(j.cell.biol)》.102,830-843,1986年。[0538][17]cazorla,m.,premont,j.,mann,a.,girard,n.,kellendonk,c.,rognan,d.,鉴别在小鼠中具有抗焦虑和抗抑郁活动性的低分子量trkb拮抗剂(identificationofalow-molecularweighttrkbantagonistwithanxiolyticandantidepressantactivityinmice)。《临床研究杂志(j.clin.invest.)》121,1846-1857,2011年。[0539][18]gerencsér,j.,panka,g.,nagy,t.,egyed,o.,dorman,g.,urge,l.和darvas,f.,涉及米氏酸的3-咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基-丙酸衍生物的平行制备程序(procedurefortheparallelpreparationof3-imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl-propionicacidderivativesinvolvingmeldrum'sacid)。《组合化学杂志(j.comb.chem.)》7,530-538,2005年。当前第1页12当前第1页12