一种维C金-胶原肽纳米复合材料及其应用的制作方法

一种维c金-胶原肽纳米复合材料及其应用
技术领域
1.本发明属于生物工程技术领域，涉及一种维c金-胶原肽纳米复合材料及其应用。


背景技术：

2.目前市场上具有大量富含胶原蛋白的护肤品，但由于胶原蛋白独特的结构，使其具有稳定的性质，难以分解，生物利用度低。因此，涂抹包含胶原蛋白护肤品只能把胶原蛋白输送到皮肤的最表层，无法直接进入真皮层，达到抗皱功效。与胶原蛋白相比，小分子量的胶原肽具有良好的吸水性和溶解性，更易于吸收，能够刺激皮肤胶原纤维的再生，促进胶原蛋白的合成，从而达到填充凹陷、有效的减缓和预防静态皱纹的增生。但是，胶原肽分子量过小，导致其结构不稳定，易被机体破坏分解成氨基酸，进而失去生物活性。由此，寻求纳米技术对胶原肽此类分子进行改造，拟得到更具优异性能的复合材料。
3.纳米金(aunp)即指金的微小颗粒，其直径在1～100nm，具有高电子密度、介电特性和催化作用，能与多种生物大分子结合，且不影响其生物活性。采用氯金酸还原法可以方便地制备各种不同粒径的纳米金，其颜色依直径大小而呈红色至紫色。目前，纳米金颗粒偶联肽治疗技术迅速发展，越来越多的纳米金因其惰性的本质、毒性低和经济成本等内在优势被应用于临床试验。
4.胶原蛋白稳定性好，难以分解，生物利用度低，抗皱效果差。小分子量的胶原肽在体内生理环境中不稳定，容易被降解，影响其生物活性效果。直接将纳米金与胶原肽结合，无法避开金离子前体转化为金原子核苛刻反应条件，从而难以保证胶原肽与纳米金结合后仍具备胶原肽的生物活性。因此，研发一种多肽衍生的纳米复合材料，提高小分子量的胶原肽稳定性，充分发挥小分子量的胶原肽的生物活性，实现更好的抗皱效果。


技术实现要素：

5.本发明目的在于解决小分子量的胶原肽在体内生理环境中不稳定，容易被降解，影响胶原肽发挥抗皱效果的问题。
6.基于上述目的，本发明提供了一种维c金-胶原肽纳米复合材料来解决本领域内的这种需要。
7.一方面，本发明涉及一种维c金-胶原肽纳米复合材料，所述维c金-胶原肽为通过au-s键将纳米金和多肽结合的复合物，所述胶原肽氨基酸序列如seq id no.1所示；所述seq id no.1为：
8.ac-gp-(hyp)-gf-(hyp)-gergp-(hyp)-gp-(hyp)-nh2。
9.另一方面，本发明涉及一种维c金-胶原肽纳米复合材料的制备方法，其包括将haucl4·
xh2o与维c抗坏血酸混合形成维c纳米金溶液，加入包含如seq id no.1所示胶原肽的溶液混合均匀。
10.进一步地，本发明提供的维c金-胶原肽纳米复合材料的制备方法中，每0.005mol haucl4配合0.04～0.24mol维c抗坏血酸和0.27～27g所述胶原肽。
11.进一步地，本发明提供的维c金-胶原肽纳米复合材料的制备方法中，所述胶原肽分子量1521da。
12.具体地，本发明提供的维c金-胶原肽纳米复合材料的制备方法中，包括：将4.5ml纯水、0.5ml haucl4·
xh2o(10mm)、0.4ml维c抗坏血酸(0.1～0.6m)依次混合，搅拌至溶液变成酒红色，即形成纳米金溶液。称取0.27～27mg的胶原肽(colp2)，溶解于21.6ml的纯水中，超声完全溶解后将其加入至纳米金溶液中，搅拌混匀，即完成维c金-胶原肽纳米复合材料的制备。
13.本发明应用纳米技术，将胶原肽和纳米金结合，制备的维c金-胶原肽纳米复合材料在消除/减少皮肤褶皱方面表现出优异的效果。有效成分包含维c金-胶原肽纳米复合材料的药物用于面部表情肌麻痹松弛，已达到改善面部轮廓和消除或减少褶皱的功效。由此本发明进一步请求保护所述维c金-胶原肽纳米复合材料在消除/减少皮肤褶皱的皮肤外用剂中的应用，在减缓或预防因胶原蛋白紊乱引起皮肤表面出现真性皱纹的皮肤外用剂中的应用，在制备护肤品中的应用，在制备护肤品制备抗衰、抗皱和/或美白护肤组合物中的应用。基于上述应用，本发明进一步请求保护包含所述维c金-胶原肽纳米复合材料的一种皮肤外用剂、一种皮肤外用组合物、一种药物组合物。
14.与现有技术相比，本发明的有益效果或优点：
15.本发明提供了维c金-胶原肽纳米复合材料，由其制备的皮肤外用剂和/或护肤品用于面部表情肌麻痹松弛，已达到改善面部轮廓和消除或减少褶皱的功效，特别适用于减缓或预防因胶原蛋白紊乱引起皮肤表面出现的真性皱纹。
附图说明
16.图1为胶原肽hplc图。
17.图2为胶原肽esi-ms图。
18.图3为维c金-胶原肽纳米复合材料涂抹眼部前后viisa图像采集结果图。
具体实施方式
19.下面，结合实施例对本发明的技术方案进行说明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
20.实施例1
21.本实施例提供了维c金-胶原肽纳米复合材料所用胶原肽的制备试验。
22.采用全化学合成多肽技术，采用由kent及其同事开发的boc化学固相肽合成(spps)或abi提供的hbtu/hobt为基础的fmoc法优化的hbtu活化/diea原位中和方案，在cs bio 336x自动肽合成仪中的mbha树脂上合成所有肽。在hf(boc化学)或含有88％tfa，5％苯酚，5％h2o和2％tips(fmoc化学)的试剂混合物中裂解和去保护后，用冷乙醚沉淀粗产物并通过制备型c18反相hplc方法纯化至均一。通过电喷雾电离质谱(esi-ms)确定分子量。在冷冻干燥机上冷冻干燥，得到目标产物。
23.图1为胶原肽hplc图，由图1可得，胶原肽(colp2)于7.08min出现单一色谱峰，经hplc鉴定其纯度在97％以上。
24.图2为胶原肽esi-ms图，由图2可得，胶原肽(colp2)分子量为1521da。
25.实施例2
26.本实施例提供了胶原肽浓度为0.01mg/ml制备的维c金-胶原肽纳米复合材料。
27.将4.5ml纯水、0.5ml haucl4(10mm)、0.4ml维c抗坏血酸(0.1m)依次混合，设置搅拌转速650rpm，搅拌至溶液变成酒红色，即形成纳米金溶液。称取0.27mg的胶原肽(colp2)，溶解于21.6ml的纯水中，超声完全溶解后将其加入至纳米金溶液中，搅拌混匀，即完成维c金-胶原肽纳米复合材料的制备。
28.实施例3
29.本实施例提供了胶原肽浓度为0.1mg/ml制备的维c金-胶原肽纳米复合材料。
30.将4.5ml纯水、0.5ml haucl4(10mm)、0.4ml维c抗坏血酸(0.2m)依次混合，设置搅拌转速650rpm，搅拌至溶液变成酒红色，即形成纳米金溶液。称取2.7mg的胶原肽(colp2)，溶解于21.6ml的纯水中，超声完全溶解后将其加入至纳米金溶液中，搅拌混匀，即完成维c金-胶原肽纳米复合材料的制备。
31.实施例4
32.本实施例提供了胶原肽浓度为1mg/ml制备的维c金-胶原肽纳米复合材料。
33.将4.5ml纯水、0.5ml haucl4(10mm)、0.4ml维c抗坏血酸(0.6m)依次混合，设置搅拌转速650rpm，搅拌至溶液变成酒红色，即形成纳米金溶液。称取27mg的胶原肽(colp2)，溶解于21.6ml的纯水中，超声完全溶解后将其加入至纳米金溶液中，搅拌混匀，即完成维c金-胶原肽纳米复合材料的制备。
34.实施例5
35.本实施例提供了维c金-胶原肽纳米复合材料用于抗皱的试验。
36.随机选取健康受试者3人，以体积份数计，使用含10％维c金-胶原肽纳米复合材料制备的眼霜涂抹于眼部，其中，所述维c金-胶原肽纳米复合材料中胶原肽的加入浓度分别为0.01mg/ml、0.1mg/ml和1mg/ml。采用viisa对受试者图像采集，对比涂抹纳米金-胶原肽前后眼部皱纹和纹理的变化情况。
37.如图3所示，通过对比涂抹纳米金-胶原肽眼霜前后眼部皱纹变化发现，使用前眼部皱纹纹理比较多的受试者，在使用含胶原肽分别为0.01mg/ml、0.1mg/ml和1mg/ml的维c金胶原肽纳米复合材料后，眼部皱纹纹理都明显得到了改善。
38.如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。