一种同义突变结合删除突变的流感病毒的致弱方法及致弱流感病毒株和应用与流程

技术特征：
1.一种同义突变结合删除和突变的流感病毒的致弱方法，其特征在于，包括以下步骤：对a型流感病毒m基因中m2基因和m1基因重叠的部分进行同义突变，保证m1氨基酸序列的完整和不变，同时，在m2基因跨膜区进行终止密码子突变和删除部分核苷酸序列，利用反向遗传操作系统，拯救出致弱流感病毒株。2.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述致弱方法的背景毒株包括a/puerto rico/8/1934。3.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述同义突变包括将m基因的第715位碱基到第760位碱基突变为如seq id no.1所示的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述终止密码子突变包括将m基因的第761位碱基到第766位碱基突变为如seq id no.2所示的核苷酸序列。5.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述删除部分核苷酸序列包括：删除m基因第767位碱基到第877位碱基任意位置和长度的核苷酸序列。6.根据权利要求5所述的致弱方法，其特征在于，所述删除部分核苷酸序列包括：删除m基因的第767位碱基到第774位碱基；删除m基因的第767位碱基到第794位碱基；删除m基因的第767位碱基到第817位碱基；删除m基因的第767位碱基到第839位碱基；或，删除m基因的第767位碱基到第877位碱基。7.基于权利要求1～6任一项所述致弱方法制备得到的致弱流感病毒株。8.根据权利要求7所述的致弱流感病毒株，其特征在于，所述致弱流感病毒株以a/puerto rico/8/1934为背景，对m基因进行同义突变、终止密码子突变和删除部分核苷酸序列的修饰。9.一组用于制备权利要求7或8所述致弱流感病毒株的缺陷型质粒，其特征在于，所述缺陷型质粒含同义突变结合删除和突变的流感病毒的m基因。10.权利要求1～6任一项所述的致弱方法或权利要求7或8所述的致弱流感病毒株或权利要求9所述的缺陷型质粒在制备和生产流感致弱病毒疫苗中的应用。

技术总结
本发明涉及一种同义突变结合删除突变的流感病毒的致弱方法及致弱流感病毒株和应用，属于致弱病毒疫苗技术领域。本发明所述致弱方法包括以下步骤：对A型流感病毒M基因中M2基因和M1基因重叠的部分进行同义突变，保证M1氨基酸序列的完整和不变，同时，在M2基因跨膜区进行终止密码子突变和删除部分核苷酸序列，利用反向遗传操作系统，拯救出致弱流感病毒株。本发明所述致弱方法获得的病毒增殖过程稳定，没有回复野生型的可能性；高剂量接毒时可以在MDCK细胞中生长繁殖，具有限制性复制能力；安全性佳，免疫效果好，可以作为减毒活疫苗候选株。株。株。


技术研发人员：毛水花 周孟云 陈瑞婷 刘晓菲 宋家升
受保护的技术使用者：浙江迪福润丝生物科技有限公司
技术研发日：2022.01.27
技术公布日：2022/4/22