一种含绿原酸的饲料及其制备方法和应用

1.本发明属于饲料技术领域，特别涉及一种含绿原酸的饲料及其制备方法和应用。


背景技术：

2.鱼胶是鱼鳔的干制品，是海洋八珍之一，与燕窝、鱼翅齐名，其本身是典型的高蛋白低脂肪食品，其干重粗蛋白含量在80％以上，而脂肪含量较低。特别是，鱼胶富含胶原蛋白(含量可达鱼鳔干重60％以上)。胶原蛋白是鱼胶的主要营养组分和品质评价指标之一。
3.浅色黄姑鱼(nibea coibor)，俗称白奈、金丝鮸，是石首科鮸鱼，肉质鲜美，其鳔厚实，是生产白花胶的特色养殖鱼类，白花胶是四大名胶之一(优质鱼胶市场价格为10000元/kg-15000元/kg)，经济价值高。此外，浅色黄姑鱼适合海水网箱养殖具有生长快、个体大、鱼鳔大、抗病强等诸多优点，在我国东南沿海等地多有养殖。然而，目前国内浅色黄姑鱼的养殖模式建立投喂冰鲜野杂鱼为主的基础上，其不仅养殖成本较高，而且容易造成水体环境污染、鱼病感染风险加大等一系列问题，另外需要不断投喂冰鲜野杂鱼，不稳定的饲料供给不利于浅色黄姑鱼养殖业的可持续发展。


技术实现要素：

4.本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种含绿原酸的饲料及其制备方法，本发明的饲料能够有效促进黄姑鱼生长，提高鱼鳔的重量。
5.本发明的第一方面提供一种饲料，所述饲料按照质量百分比包括如下组分：绿原酸0.02-0.04％、蛋白源原料55-71％、脂肪源原料6-9％、糖源原料16-22％和辅料1.5-12.5％。
6.绿原酸(chlorogenic acid，cha)又名咖啡鞣酸、咖啡单宁酸，是由咖啡酸(caffeic acid)的1位羧基与奎宁酸(quinin acid)的3位羟基脱水缩合形成的一种多酚类物质。绿原酸是杜仲提取物中的重要单体成分，具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗菌、保肝利胆、降压、抗肿瘤、调血脂、兴奋中枢神经等药理作用。相关研究表明将绿原酸作为添加剂添加到鸡、猪饲料中，有促进生长的作用。然而绿原酸是否能够作为浅色黄姑鱼的功能性饲料添加剂，从而促进浅色黄姑鱼的生长及提高鱼鳔重量仍不清楚。申请人经研究发现，通过控制绿原酸在饲料中的添加量，在饲料中添加0.02-0.04％的绿原酸，能够有效促进浅色黄姑鱼生长，提高鱼鳔的重量。
7.优选地，所述绿原酸占所述饲料的质量百分比为0.02％或0.04％。控制绿原酸的添加量为0.02％，可有效促进浅色黄姑鱼生长，提高鱼鳔的重量和降低饲料系数。控制绿原酸的添加量为0.04％，可有效提高浅色黄姑鱼鱼鳔中胶原蛋白的含量。
8.优选地，所述饲料由如下质量百分比的营养成分组成：粗蛋白43.66-43.87％、粗脂肪10.09-10.73％，余量为碳水化合物、粗纤维、灰分和水分。
9.优选地，所述蛋白源原料包括鱼粉、酪蛋白和大豆浓缩蛋白中的至少一种；所述脂
肪源原料包括鱼油和/或卵磷脂；所述糖源原料包括木薯淀粉和/或α-淀粉；所述辅料包括甜菜碱、微晶纤维素、复合维生素、复合矿物质、磷酸二氢钙和丙氨酸中的至少一种。
10.优选地，所述饲料按照质量百分比包括如下组分：绿原酸0.02-0.04％、鱼粉32-38％、大豆浓缩蛋白17-23％、酪蛋白6-10％、鱼油4-6％、大豆卵磷脂2-3％、木薯淀粉13-15％、α-淀粉3-7％、微晶纤维素1.5-5.5％、甜菜碱0-1％、磷酸二氢钙0-1％、丙氨酸0-1％、复合维生素0-2％、复合矿物质0-2％。
11.优选地，按照质量百分比包括如下组分：绿原酸0.02-0.04％、鱼粉32-35％、大豆浓缩蛋白17-20％、酪蛋白6-8％、鱼油4-6％、大豆卵磷脂2.5-3％、木薯淀粉14-15％、α-淀粉4-5％、微晶纤维素3.5-5.5％、甜菜碱0.5-1％、磷酸二氢钙0-1％、丙氨酸0.5-1％、复合维生素1-2％、复合矿物质1-2％。
12.优选地，按照质量百分比包括如下组分：绿原酸0.02-0.04％、鱼粉35-38％、大豆浓缩蛋白20-23％、酪蛋白8-10％、鱼油4-6％、大豆卵磷脂2.5-3％、木薯淀粉14-15％、α-淀粉4-5％、微晶纤维素1.5-3.5％、甜菜碱0.5-1％、磷酸二氢钙0-1％、丙氨酸0.5-1％、复合维生素1-2％、复合矿物质1-2％。
13.本发明的第二方面提供本发明所述的饲料的制备方法，包括以下步骤：
14.将各组分进行混合，膨化制粒，得到所述饲料。
15.优选地，本发明所述的饲料的制备方法，包括以下步骤：
16.s1、将除鱼油外的其他组分预先粉碎并过60-80目筛，混合后加入水进行膨化制粒，膨化的温度为100-120℃，得到半成品；
17.s2、将鱼油喷涂在所述半成品的表面，干燥，得到所述饲料。
18.本发明的第三方面提供本发明所述的饲料在浅色黄姑鱼饲养中的应用。
19.相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
20.本发明饲料通过添加0.02-0.04％的绿原酸，能够有效促进浅色黄姑鱼生长，降低浅色黄姑鱼的饲料系数，特别是能够有效提高浅色黄姑鱼的鱼鳔重量以及鱼鳔中胶原蛋白的含量，从而提高鱼鳔的品质。
具体实施方式
21.为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。
22.以下实施例或对比例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
23.杜仲绿原酸购于陕西林州生物科技有限公司，绿原酸(chlorogenic acid)，其分子式：c
16h18
o9，分子量：345.30，别名氯原酸、咖啡鞣酸，cas no.：327-97-9，化学名3-咖啡酰奎尼酸，从杜仲叶中提取，通过hplc检测其浓度为98％。
24.实施例1
25.一种饲料，按照质量百分比包括如下组分：杜仲绿原酸0.02％、鱼粉35％、大豆浓缩蛋白20％、酪蛋白8％、鱼油6％、大豆卵磷脂2.5％、木薯淀粉14％、α-淀粉5％、微晶纤维素5.48％、甜菜碱0.5％、磷酸二氢钙1％、丙氨酸0.5％、复合维生素1％、复合矿物质1％。
26.本实施例饲料的制备方法，包括以下步骤：
27.s1、按照质量百分比称取各组分，将除鱼油外的其他组分预先粉碎并过60目筛，混合后加入水进行膨化制粒，膨化的温度为110℃，得到半成品；
28.s2、将鱼油喷涂在半成品的表面，干燥，得到饲料。
29.实施例2
30.一种饲料，按照质量百分比包括如下组分：杜仲绿原酸0.04％、鱼粉35％、大豆浓缩蛋白20％、酪蛋白8％、鱼油6％、大豆卵磷脂2.5％、木薯淀粉14％、α-淀粉5％、微晶纤维素5.46％、甜菜碱0.5％、磷酸二氢钙1％、丙氨酸0.5％、复合维生素1％、复合矿物质1％。
31.本实施例饲料的制备方法同实施例1。
32.对比例1
33.与实施例1的区别在于，对比例1中不添加杜仲绿原酸，缺少的含量由微晶纤维素补充，其他组分和制备方法同实施例1。
34.上述实施例1-2以及对比例1的饲料配方见表1所示。
35.表1
[0036][0037]
上述实施例1-2以及对比例1的饲料营养成分见表2所示。
[0038]
表2
[0039]
[0040][0041]
注：表2中，数据为平均值
±
标准误(n＝3)；在同行数据中，上角标无相同小写字母标注者表示相互间差异显著(p《0.05)。
[0042]
本发明饲料的效果试验
[0043]
养殖试验在广东汕头南澳县吴平寨村汕头大学南澳临海试验站海上鱼排网箱中进行，鱼苗购自广东汕头南澳本地鱼苗，并将购置的鱼苗使用活水船运至汕头大学南澳临海实验站。将实验鱼苗分别转入3m
×
3m
×
2m的海水网箱中禁食24h，之后以越群牌海水鱼种苗商品饲料投喂实验鱼，暂养2周，按照体重5％的日总投饵量分别在7:00、12:00和18:00进行三次投喂，选取健康、规格一致的浅色黄姑鱼作为实验鱼，每天定时记录海水温度，发现有死鱼及时捞出。
[0044]
将上述实施例1-2以及对比例1的饲料作为实验饲料进行实验，实验实施按照每个处理三个重复，设计3种等脂等氮实验饲料，展开为期10周的养殖试验。
[0045]
暂养的实验鱼经驯化两周后，在正式实验开始前将实验鱼禁食24h，将大小一致、健康的暂养鱼从3m
×
3m
×
2m的海水网箱中捞出放至一个拖网箱中，从拖网箱中随机选取25尾(初重8.78
±
0.35g)放入含有0.02％2-苯氧基乙醇海水的小圆桶中麻醉，用半干毛巾擦除鱼体表水分逐条称重后放入对应试验网箱中。每组设置3个平行，其中每个平行对应一个1m
×
1m
×
2m小网箱，每个小网箱中放置25尾浅色黄姑鱼，共计使用9个网箱，225尾浅色黄姑鱼。按分组标记记录重量，正式实验开始前两天如出现实验鱼死亡，可称重后补充新鱼，记录死鱼重量和新补充的鱼体重量。
[0046]
正式实验开始后，浅色黄姑鱼分别使用实验饲料进行喂食。每天按照体重3％进行饲料投喂，投喂两次，分别在7:00和17:30，根据浅色黄姑鱼日增重率的预测，一周调整一次投饵量。记录各个网箱每周总投饲量。每周定期记录海水温度，发现有死鱼及时捞出。其中养殖期间海区温度为26-29℃。
[0047]
在养殖实验结束后，禁食24h，并将所有的实验鱼放入含有0.02％2-苯氧基乙醇海水中麻醉，用半干毛巾擦除鱼体表水分逐条称重、测量体长，计算生长性能指标，测试结果见表3所示。
[0048]
表3
[0049]
指标对比例1实施例1实施例2初重(g)8.5
±
0.148.67
±
0.228.67
±
0.17末重(g)53.23
±
1.47b59.66
±
0.63a52.41
±
1.04b增重率(％)527.06
±
16.17b588.89
±
10.8a505.08
±
15.05b特定生长率(％)2.62
±
0.04b2.76
±
0.02a2.57
±
0.04b饲料系数2.86
±
0.04b2.62
±
0.01a3.02
±
0.01c鳔重(g)0.38
±
0.01a0.43
±
0.01b0.39
±
0.01a存活率(％)65.33
±
10.4153.33
±
9.6162.67
±
2.67
[0050]
注：表3中，数据为平均值
±
标准误(n＝3)；在同行数据中，上角标无相同小写字母标注者表示相互间差异显著(p《0.05)。
[0051]
由表3的各生长指标可以看出，与对比例1组相比，实施例1组的末重、增重率、特定生长率、鳔重均得到显著性增加，饲料系数显著性降低，表明在饲料中添加0.02％的杜仲绿原酸可以有效促进浅色黄姑鱼生长，降低饲料系数，提高鱼鳔的重量。
[0052]
随后将鱼体进行解剖，取出鱼鳔，称重并于-20℃冰箱保存，以备测定鱼鳔胶原蛋白含量。鱼鳔胶原蛋白含量的测试方法：用羟脯氨酸(hyp)测定试剂盒(南京建成，a030-2-1)测定浅色黄姑鱼鱼缥的羟脯氨酸含量。测定原理为：羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色，根据其呈色的深浅可推算出其含量。测试步骤可根据羟脯氨酸(hyp)测定试剂盒上的说明书进行测试：1、取30-100mg浅色黄姑鱼鱼鳔放入试管中，准确加水解液1ml，混匀。加盖后于95℃或者沸水浴水解20分钟(水解10分钟时混匀一次，目的是使水解更充分)。2、将试管流水冷却后加指示剂10ul，摇匀；再准确加入调整ph甲液1.0ml，混匀(此时溶液应为红色)；然后用200ul的加样器吸取ph调整乙液向管内逐滴加入，每滴加入后均要混匀，直至液体中指示剂的颜色变成黄绿色(亦即红色消失时)，此时ph值在6.0-6.8(约加入ph调整乙液100ul-500ul)。3、加双蒸水至10ml，混匀；取3-4ml稀释的水解液加适量活性炭(20-30mg，以上清液离心后澄清无色为准)，混匀，3500转/分离心10分钟，取上清液1ml作检测。4、分别取1ml上清液、1ml的5ug/ml标准应用液和1ml双蒸水，各加入0.5ml试剂一后混匀，静置10分钟，再各加入0.5ml试剂二后混匀，静置5分钟，然后各加入0.5ml试剂三后混匀，60℃水浴15分钟，冷却后，3500转/分离心10分钟，取上清液于波长550nm，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。测试方法中所用的水解液、调整ph甲液、ph调整乙液、标准应用液等均为羟脯氨酸(hyp)测定试剂盒中搭配的相关物质。
[0053]
由于羟脯氨酸具有特殊性，羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4％，在弹性蛋白中占极少量，其它蛋白中均不存在，因此可根据鱼鳔中羟脯氨酸的含量换算得到鱼鳔胶原蛋白的含量。计算公式为：
[0054][0055]
胶原蛋白(％湿重)＝羟脯氨酸(ug/mg湿重)
÷
0.134
÷
1000；
[0056]
测试结果见表4所示。
[0057]
表4
[0058][0059]
注：表4中，数据为平均值
±
标准误(n＝3)；在同行数据中，上角标无相同小写字母标注者表示相互间差异显著(p《0.05)。
[0060]
由表4可知，与对比例1组相比，实施例2组的胶原蛋白含量显著提高，表明在饲料
中添加0.04％的杜仲绿原酸可以有效提高鱼鳔中的胶原蛋白含量。
[0061]
综上所述，在饲料中添加0.02％的杜仲绿原酸，能够有效促进浅色黄姑鱼生长，降低饲料系数，提高鱼鳔的重量；饲料中添加0.04％的绿原酸可以有效促进鱼鳔中胶原蛋白沉积，提高胶原蛋白的含量。
[0062]
以上对本发明的较佳实施方式进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明精神的前提下还可作出种种的等同变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本技术权利要求所限定的范围内。