一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法

1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法。


背景技术：

2.在医学上，癌是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类；癌症具有细胞分化和增殖异常、生长失去控制、浸润性和转移性等生物学特征，其发生是一个多因子、多步骤的复杂过程，分为致癌、促癌、演进三个过程，癌症的治愈率较低，因此才有“谈癌色变”这一说法，随着医疗行业的不断发展，医疗领域通过不断的实验研究发现，环杷明在癌症治疗上具有一定的效果，环杷明通过诱导肿瘤细胞分化，以及凋亡将这些肿瘤细胞除去从而实现治疗作用，而对正常的组织细胞，包括正常表皮基底层及毛囊的未分化细胞无影响；环杷明通过非基因毒性机制引起细胞凋亡，因此与放疗及当前使用的绝大多数化疗药物通过损伤dna发挥作用的方法不一样。这些先前的癌症化疗药物所不能达到的新效果使环杷明适于癌症治疗，适于治疗bcc’s其他肿瘤；专利“cn1525859b”中提出“环杷明在制备治疗基底细胞癌及其它肿瘤的药物中的应用”该方案中提出通过环杷明局部处理诱导的基底细胞癌细胞的分化及细胞凋，由此可以得知环杷明在治疗癌症上有一定的效果；藜芦是一种中药材，可以分离出环杷明，但是现有手段中没有提出高效简便的分离手段，造成藜芦内环杷明的提取量不高等的问题出现，鉴于此，我们提出一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法。


技术实现要素：

3.本发明的目的是针对背景技术中存在的现有手段中藜芦内环杷明的提取量不高，且提取步骤复杂，使用多种加工设备，提取的难度和投入量大等的问题，提出一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法。
4.本发明的技术方案：一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法，包括以下步骤：
5.步骤一：选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入10-40ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液；
6.步骤二：将步骤一种获得的提取液通过布式蒸发器浓缩至10ml，采用5％乙酸将浓缩提取液的ph值调至4，加入10ml50℃的石油醚，混匀，弃掉石油醚层；
7.步骤三：步骤二中获得产物中加入10ml的二氯甲烷提取液，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为a部分；
8.步骤四：步骤三中剩余下层液体内加入10ml的二氯甲烷，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为b部分；
9.步骤五：将步骤三和步骤四中剩余的乙醇层蒸干，记为c部分；
10.步骤六：将a部分、b部分和c部分提取物溶解于hplc测定溶液中，对提取物分离和
测定，获得最终产物环杷明。
11.优选的，所述步骤一中选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入20ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液。
12.优选的，所述步骤一中选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入30ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液。
13.优选的，所述步骤一中选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入40ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液。
14.优选的，所述步骤一中选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入10ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液。
15.优选的，所述乙醇为a级，所述离心设备转速为7000转。
16.优选的，所述hplc采用等度洗脱，所述等度洗脱液采用硝酸铈铵、水和四氢呋喃的混合组合物，且硝酸铈铵、水和四氢呋喃的质量比为42:57.9:0.1。
17.与现有技术相比，本发明具有如下有益的技术效果：
18.本发明通过藜芦为原料来获取环杷明，有效的降低了环杷明的获取成本，通过乙醇获得提取液，并将提取液的进行浓缩，并通过乙酸调整ph值，通过石油醚混匀浓缩提取液，并结合二氯甲烷将处理后的提取液不同层进行处理，获得a部分、b部分和c部分，最后通过hplc获得最终测定合格的环杷明，其中使用的提取分离设备投入量少，提取难度低，且提取方法简单高效；
19.综上所述，本发明提出的环杷明提取和分离方法能够高效提取并分离藜芦抗癌有效成分环杷明，且使用设备成本低，提取分离方法简便易操作，适合推广使用。
具体实施方式
20.下文结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
21.实施例一
22.本发明提出的一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法，包括以下步骤：
23.步骤一：选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入20ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液，乙醇为a级，离心设备转速为7000转；
24.步骤二：将步骤一种获得的提取液通过布式蒸发器浓缩至10ml，采用5％乙酸将浓缩提取液的ph值调至4，加入10ml50℃的石油醚，混匀，弃掉石油醚层；
25.步骤三：步骤二中获得产物中加入10ml的二氯甲烷提取液，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为a部分；
26.步骤四：步骤三中剩余下层液体内加入10ml的二氯甲烷，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为b部分；
27.步骤五：将步骤三和步骤四中剩余的乙醇层蒸干，记为c部分；
28.步骤六：将a部分、b部分和c部分提取物溶解于hplc测定溶液中，对提取物分离和测定，获得最终产物环杷明；hplc采用等度洗脱，等度洗脱液采用硝酸铈铵、水和四氢呋喃的混合组合物，且硝酸铈铵、水和四氢呋喃的质量比为42:57.9:0.1。
29.实施例二
30.本发明提出的一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法，本实施例包括以下
步骤：
31.步骤一：选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入30ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液，乙醇为a级，离心设备转速为7000转；
32.步骤二：将步骤一种获得的提取液通过布式蒸发器浓缩至10ml，采用5％乙酸将浓缩提取液的ph值调至4，加入10ml50℃的石油醚，混匀，弃掉石油醚层；
33.步骤三：步骤二中获得产物中加入10ml的二氯甲烷提取液，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为a部分；
34.步骤四：步骤三中剩余下层液体内加入10ml的二氯甲烷，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为b部分；
35.步骤五：将步骤三和步骤四中剩余的乙醇层蒸干，记为c部分；
36.步骤六：将a部分、b部分和c部分提取物溶解于hplc测定溶液中，对提取物分离和测定，获得最终产物环杷明；hplc采用等度洗脱，等度洗脱液采用硝酸铈铵、水和四氢呋喃的混合组合物，且硝酸铈铵、水和四氢呋喃的质量比为42:57.9:0.1。
37.实施例三
38.本发明提出的一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法，本实施例包括以下步骤：
39.步骤一：中选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入40ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液，乙醇为a级，离心设备转速为7000转；
40.步骤二：将步骤一种获得的提取液通过布式蒸发器浓缩至10ml，采用5％乙酸将浓缩提取液的ph值调至4，加入10ml50℃的石油醚，混匀，弃掉石油醚层；
41.步骤三：步骤二中获得产物中加入10ml的二氯甲烷提取液，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为a部分；
42.步骤四：步骤三中剩余下层液体内加入10ml的二氯甲烷，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为b部分；
43.步骤五：将步骤三和步骤四中剩余的乙醇层蒸干，记为c部分；
44.步骤六：将a部分、b部分和c部分提取物溶解于hplc测定溶液中，对提取物分离和测定，获得最终产物环杷明；hplc采用等度洗脱，等度洗脱液采用硝酸铈铵、水和四氢呋喃的混合组合物，且硝酸铈铵、水和四氢呋喃的质量比为42:57.9:0.1。
45.实施例四
46.本发明提出的一种藜芦抗癌直效成分环杷明提取与分离方法，包括以下步骤：
47.步骤一：选用处理后的冻干藜芦为原料，将冻干藜芦放在离心管中，加入10ml的乙醇混匀，通过离心设备离心10min，获得提取液，乙醇为a级，离心设备转速为7000转；
48.步骤二：将步骤一种获得的提取液通过布式蒸发器浓缩至10ml，采用5％乙酸将浓缩提取液的ph值调至4，加入10ml50℃的石油醚，混匀，弃掉石油醚层；
49.步骤三：步骤二中获得产物中加入10ml的二氯甲烷提取液，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为a部分；
50.步骤四：步骤三中剩余下层液体内加入10ml的二氯甲烷，混匀，静止，吸取提取液并置于新的玻璃管中，重复用10ml二氯甲烷提取并合并提取液，蒸干，记为b部分；
51.步骤五：将步骤三和步骤四中剩余的乙醇层蒸干，记为c部分；
52.步骤六：将a部分、b部分和c部分提取物溶解于hplc测定溶液中，对提取物分离和测定，获得最终产物环杷明；hplc采用等度洗脱，等度洗脱液采用硝酸铈铵、水和四氢呋喃的混合组合物，且硝酸铈铵、水和四氢呋喃的质量比为42:57.9:0.1。
53.采用冻干藜芦100g，通过实施例一至实施例四中的制备方法对环杷明提取和分离，提取的环杷明的质量和纯度入下表所示：
[0054] 实施例一实施例二实施例三实施例四提取质量(g)12.3618.2114.5513.56纯度(％)80.6588.2382.0483.54
[0055]
结合上述表格可得实施例二中的提取环杷明中提取质量最高，获得率高，以及获得的环杷明纯度最高。
[0056]
上述具体实施例仅仅是本发明的几种优选的实施例，基于本发明的技术方案和上述实施例的相关启示，本领域技术人员可以对上述具体实施例做出多种替代性的改进和组合。