硫代酰肼类化合物、其制备方法及其应用与流程

1.本发明属于医药技术领域，涉及一种全新的p53活性调节剂的硫代酰肼类化合物及其异构体，本发明还涉及所述化合物的制备方法、包含所述化合物作为活性成分的药物组合物以及其制药应用。本发明的化合物可作为靶向p53的活性调节剂，用于治疗和/或预防与p53蛋白突变相关的肿瘤或癌症中的用途。


背景技术：

2.p53基因自1979年首次被发现，一直以来是研究的热点。在1993年，science杂志将其评为“年度分子”。p53基因编码的蛋白质即p53蛋白，其单体由393个氨基酸残基构成，呈十字形结构，包括n端未折叠的反式激活结构域(tad)和脯氨酸富集区域(prd)，其功能主要是起到转录活化作用；c端是灵活的未折叠区域(ct)，其功能主要是参与蛋白形成四聚体；中间的核心区域是dna结合区域(dbd)，能够与特异的dna序列发生结合而发挥正常的生理功能(demir o,ieong pu,amaro re.full-length p53 tetramer bound to dna and its quaternary dynamics.oncogene.2017,36(10):1451-1460.)。
3.p53蛋白质是迄今为止最重要的肿瘤抑制因子之一，也是人体细胞内对抗癌症的最有效“天然杀手”之一，该蛋白具有转录因子活性，可与其他蛋白质形成复合体发挥不同的生物学功能，包括在细胞生长发育的周期调控、dna修复、衰老或细胞凋亡的过程中都起着关键作用(vousden kh,prives c.blindedby the light:the growing complexity of p53.cell.2009,137(3):413-431.)。
4.然而，p53蛋白也是最易发生突变的蛋白质之一，基因发生突变后，因其结构的空间构象发生了改变，失去了原有的正常的生物学功能，p53基因由抑癌基因转变为癌基因。研究表明，在人类超过一半的肿瘤组织中均发现了p53基因突变，这是肿瘤中最常见的遗传学突变，突变类型包括无义突变、位移突变、错义突变等，但是仍以错义突变突为主。人类肿瘤中p53的热点突变主要集中在高度保守的dna结合域(dbd)，包括r175、g245、r248、r249、r273、r282等位点，这些位点一经突变将导致p53蛋白空间构象的改变而使其与dna结合的稳定性的发生改变，从而改变p53蛋白的正常生物学功能，如促进肿瘤的发生和发展过程(brosh r,rotter v.when mutants gain new powers:news from the mutant p53 field.nat rev cancer.2009,9(10):701-713.)。一般而言，p53蛋白突变多为点突变，小分子化合物可以恢复这种微弱的构象改变，这为设计小分子化合物恢复p53构象提供了重要的科学依据。因此，基于突变型p53蛋白的小分子活性调节剂的药物开发将为肿瘤患者带来重大益处。
5.至目前，公开报道的针对突变型p53蛋白的小分子活性化合物主要有coti-2、zmc1、prima-1、prima-1met(apr-246)、cp-31398、wr1065、stima-1、mira-1，临床研究进展缓慢，而且全球目前尚无被批准的上市药物。因此，我们期望开发新型的靶向p53的活性调节剂以满足尚未满足的临床需求。


技术实现要素：

6.本发明的一个方面，涉及能够调节p53蛋白活性的硫代酰肼类化合物，包括其异构体。
7.本发明另一方面涉及本文所述化合物的制备方法。
8.本发明的又一方面涉及包括本发明化合物作为活性成分的药物组合物，以及本发明化合物或药物组合物用于治疗和/或预防与靶向p53蛋白相关的疾病尤其是用于治疗肿瘤或癌症中的临床应用。
9.本发明涉及式(i)所示的化合物，包括其药学上可接受的盐或其异构体，
[0010][0011]
其中，
[0012]
r1选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、杂芳基(例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基)，其中所述杂芳基可独立地被选自氘、卤素(例如氟、氯、溴或碘)、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷氧基、氰基、氨基、羟基、巯基、硝基、羧基、conh2、磺酰胺基、胺基磺酰基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0013]
r2选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、杂芳基(例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基)，其中所述杂芳基可独立地被选自氘、卤素(例如氟、氯、溴或碘)、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷氧基、氰基、氨基、羟基、巯基、硝基、羧基、conh2、磺酰胺基、胺基磺酰基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0014]
或者，
[0015]
r1和r2与它们共同连接的碳原子一起形成杂芳基(例如二氢喹啉基)或3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环任选被一个或多个可选自卤素、氨基、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以稠合于芳基或杂芳基，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环；
[0016]
r3选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、芳基、芳基氨基、杂芳基、杂芳基氨基、杂芳基氨基芳基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基；所述芳基例如苯基)、含有一个或两个选自氮、氧或硫的杂原子的3-15元单杂环或者多环杂环(例如氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)、3-15元单杂环氨基或者多环杂环氨基，其中所述的芳基氨基、杂芳基氨基、3-15元单杂环或者多环杂环、3-15元单杂环氨基或者多环杂环氨基可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0017]
r4选自氢、氘、c
1-c4烷基氨基、卤代c
1-c4烷基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基、杂芳基
氨基芳基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基；所述芳基例如苯基)、含有一个或两个选自氮、氧或硫的杂原子的3-15元单杂环或者多环杂环(例如氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)、3-15元单杂环氨基或者多环杂环氨基，其中所述的c
1-c4烷基氨基、卤代c
1-c4烷基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基、3-15元单杂环或者多环杂环、3-15元单杂环氨基或者多环杂环氨基可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0018]
或者，
[0019]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成任选地含有一个另外的选自氮、氧或硫的杂原子的3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0020]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成的示例性的3-15元单杂环或者多环杂环包括但不限于：
[0021][0022]
ra选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、芳基、杂芳基(例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基；苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并吡喃基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、苯并噁唑基、呋喃并吡啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、吲哚嗪基、吲哚基、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并噻吩基、异吲哚基、异喹啉基、二氢喹啉基、萘啶基、噁唑并吡啶基、酞嗪基、喋啶基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、吡咯并吡啶基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噻二唑并嘧啶基和噻吩并吡啶基；
优选吡啶基、喹啉基)、杂芳基氨基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基)，其中所述的芳基、杂芳基可被一个或多个独立地选自氢、氘、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷氧基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基、单c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基、双c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0023]
在一个优选的方面，本发明涉及式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，包括其异构体，其中，
[0024]
r1选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、杂芳基，其中所述杂芳基可独立地被选自氘、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷氧基、氰基、氨基、羟基、巯基、硝基、羧基、conh2、磺酰胺基、胺基磺酰基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0025]
r2选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、杂芳基，其中所述杂芳基可独立地被选自氘、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷氧基、氰基、氨基、羟基、巯基、硝基、羧基、conh2、磺酰胺基、胺基磺酰基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0026]
或者，
[0027]
r1和r2与它们共同连接的碳原子一起形成杂芳基(例如二氢喹啉基)或3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环任选被一个或多个可选自卤素、氨基、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以稠合于芳基或杂芳基，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环；
[0028]
r3选自氢、氘；
[0029]
r4选自芳基氨基、杂芳基氨基、杂芳基氨基芳基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基；所述芳基例如苯基)、3-15元单杂环或者多环杂环、3-15元单杂环氨基或者多环杂环氨基，其中所述的芳基氨基、杂芳基氨基、3-15元单杂环或者多环杂环、3-15元单杂环氨基或者多环杂环氨基可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0030]
或者，
[0031]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0032]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成的示例性的3-15元单杂环或者多环杂环包括但不限于：
[0033]
[0034][0035]
ra选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、芳基、杂芳基、杂芳基氨基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基)，其中所述的芳基、杂芳基可被一个或多个独立地选自氢、氘、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷氧基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基、单c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基、双c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0036]
在一个更优选的方面，本发明涉及式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，包括其异构体，其中，
[0037]
r1选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、杂芳基，其中所述杂芳基可独立地被选自氘、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷氧基、氰基、氨基、羟基、巯基、硝基、羧基、conh2、磺酰胺基、胺基磺酰基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0038]
r2选自杂芳基，其中所述杂芳基可独立地被选自卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷氧基、氰基、氨基、羟基、巯基、硝基、羧基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0039]
或者，
[0040]
r1和r2与它们共同连接的碳原子一起形成杂芳基(例如二氢喹啉基)或3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环任选被一个或多个可选自卤素、氨基、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以稠合于芳基或杂芳基，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环；
[0041]
r3选自氢、氘；
[0042]
r4选自杂芳基氨基、杂芳基氨基芳基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、
烷基氨基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0051]
r2选自杂芳基，其中所述杂芳基可独立地被选自卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷氧基、氰基、氨基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0052]
或者，
[0053]
r1和r2与它们共同连接的碳原子一起形成杂芳基(例如二氢喹啉基)或3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环任选被一个或多个可选自卤素、氨基、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以稠合于芳基或杂芳基，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环；
[0054]
r3选自氢、氘；
[0055]
r4选自杂芳基氨基芳基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基；所述芳基例如苯基)、3-15元单杂环或者多环杂环、3-15元单杂环氨基或者多环杂环氨基，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环、3-15元单杂环氨基或者多环杂环氨基可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0056]
或者，
[0057]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0058]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成的示例性的3-15元单杂环或者多环杂环包括但不限于：
[0059][0060]
ra选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、芳基、杂芳基、杂芳基氨基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基)，其中所述的芳基、杂芳基可被一个或多个独立地选自氢、氘、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷氧基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基、单c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基、双c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0061]
在另一个还更优选的方面，本发明涉及式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，包括其异构体，其中，
[0062]
r1选自氢、氘、c
1-c4烷基；
[0063]
r2选自吡啶基，其中所述吡啶基可独立地被选自卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷氧基、氰基、氨基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代；
[0064]
或者，
[0065]
r1和r2与它们共同连接的碳原子一起形成杂芳基(例如二氢喹啉基)或3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环任选被一个或多个可选自卤素、氨基、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以稠合于芳基或杂芳基，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环；
[0066]
r3选自氢、氘；
[0067]
r4选自杂芳基氨基芳基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基；所述芳基例如苯基)、3-15元单杂环或者多环杂
环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0068]
或者，
[0069]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0070]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成的示例性的3-15元单杂环或者多环杂环包括但不限于：
[0071][0072][0073]
ra选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、芳基、杂芳基、杂芳基氨基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基)，其中所述的芳基、杂芳基可被一个或多个独立地选自氢、氘、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷氧基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基、单c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基、双c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0074]
在一个特更优选的方面，本发明涉及式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，包括其异构体，其中，
[0075]
r1和r2与它们共同连接的碳原子一起形成杂芳基(例如二氢喹啉基)或3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环任选被一个或多个可选自卤素、氨基、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以稠合于芳基或杂芳基，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环；
[0076]
r3选自氢、氘；
[0077]
r4选自杂芳基氨基芳基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基；所述芳基例如苯基)、3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0078]
或者，
[0079]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0080]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成的示例性的3-15元单杂环或者多环杂环包括但不限于：
[0081][0082]
ra选自氢、氘、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、芳基、杂芳基、杂芳基氨基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基)，其中所述的芳基、杂芳基可被一个或多个独立地选自氢、氘、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷氧基、羟基c
1-c4烷基、氨基c
1-c4烷基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基、单c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基、双c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环；
[0083]
在另一个特更优选的方面，本发明涉及式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，包括其异构体，其中，
烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基的基团取代，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以稠合于芳基或杂芳基，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环；
[0091]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成3-15元单杂环或者多环杂环，其中所述的3-15元单杂环或者多环杂环可以被一个或多个ra取代，所述的3-15元多环杂环包括但不限于螺环杂环、桥环杂环，其中螺环杂环或桥环杂环可以稠合于芳基或杂芳基；
[0092]
r3和r4与它们共同连接的氮原子一起形成的示例性的3-15元单杂环或者多环杂环包括但不限于：
[0093][0094]
ra选自芳基、杂芳基、杂芳基氨基(所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基，优选吡啶基)，其中所述的芳基、杂芳基可被一个或多个独立地选自氢、氘、氰基、c
1-c4烷基、卤代c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、卤代c
1-c4烷氧基、单c
1-c4烷基氨基、双c
1-c4烷基氨基、单c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基、双c
1-c4烷基氨基c
1-c4烷基的基团取代，所述杂芳基为5-12元的单环或多环。
[0095]
本发明涉及式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，包括但不限于：
[0096]
[0097]
[0098]
[0099]
[0100]
[0101]
[0102]
[0103]
[0104][0105]
各术语定义
[0106]
本发明所述的“卤素”为氟、氯、溴或碘，优先为氟或氯。
[0107]
本发明所述的“烷基”，包括直链或支链的烷基。本发明中所述的c
1-c4烷基，是指碳原子数为1-4的烷基，优先为甲基、乙基、丙基或异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。本发明化合物中的烷基可以是任选取代或未取代的，取代基可以包括烷基、卤素、烷氧基、卤代烷基、氰基、羟基等。本发明烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。
[0108]
本发明所述的“烷氧基”，是指上述烷基与氧原子相连所形成的基团，其中，氧原子具有自由成键能力，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丙氧基、叔丁氧基、环丙氧基等。
[0109]
本发明所述的“烷基氨基”，是指上述烷基与氨基相连所形成的基团，如甲氨基、乙氨基、二甲氨基等。
[0110]
本发明所述的“卤代c
1-c4烷基”和“卤代c
1-c4烷氧基”是指其中一个或多个氢原子被卤素原子取代，特别是氟或氯原子。在一些实施方案中，优选氟代，例如cf3、chf2、ch2f、ch2ch2f、ch2chf2、ch2cf3、ocf3、ochf2、och2f、och2ch2f、och2chf2或者och2cf3。
[0111]
本发明所述的“螺环”是指3-15元单环之间共用一个碳原子(螺原子)的多环烃，其中可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有共轭的π电子体系。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基、双螺环烷基。
[0112]
本发明所述的“桥环”是指3-15元单环之间共用两个以上碳原子的多环烃，其中可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有共轭的π电子体系。根据组成环的数目分为二环烃、三环烃、四环烃等。
[0113]
本发明所述的“杂环”是指含有一个或多个杂原子的未取代和取代的单环或多环非芳香环系，部分不饱和或完全饱和的环体系。优选的杂原子包括n，o和s。单环杂环包括但不限于，吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、桥环、稠环的杂环基，所述的杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环。所述杂环基例如氮杂螺[3.3]庚烷-6-基。
[0114]
本发明所述的“芳基”是指单环或多环芳香环系，如苯环、萘环等。芳基可以是取代的或非取代的。
[0115]
本发明所述的“杂芳基”是指含有碳和至少一个杂原子的芳香环系。优选的杂原子包括n，o和s。杂芳基可以是单环或多环的，取代或未取代的。单环杂芳基可以在环中具有1至4个杂原子，而多环杂芳基可以含有1至10个杂原子。多环杂芳基环可以含有稠合的螺环或桥环。杂芳基可以是取代的或非取代的。所述杂芳基例如呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑
基、噻吩基、四唑基、三嗪基或三唑基；苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并吡喃基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、苯并噁唑基、呋喃并吡啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、吲哚嗪基、吲哚基、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并噻吩基、异吲哚基、异喹啉基、二氢喹啉基、萘啶基、噁唑并吡啶基、酞嗪基、喋啶基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、吡咯并吡啶基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噻二唑并嘧啶基和噻吩并吡啶基。
[0116]
本文所述的“取代的”指基团中的一个或多个氢原子能够独立地被选自相应数目的取代基取代。本领域的技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代位置。
[0117]
本文所述的化合物中，当以化学名称特别指定为(r)-或(s)-异构体时，应分别理解为主要构型为(r)-异构体或(s)-异构体。任何不对称碳原子可以存在于(r)-、(s)-或(r、s)-构型中，优选以(r)-或(s)-构型存在。双键或尤其是环上的取代基可以是顺式(＝z-)或反式(＝e-)或者顺反混合物形式存在。因此本文所述的这些化合物可以作为异构体的混合物，或优选以纯异构体存在，优选以纯非对映异构体或纯对映异构体存在。
[0118]
本发明涉及药物组合物，所述药物组合物含有上述式(i)的化合物，包括异构体作为活性成分。
[0119]
本发明所述的化合物任选地可与其它一种或多种活性成分联合使用，其各自用量和比例可由本领域技术人员根据具体病症和患者具体情况以及临床需要等而进行调整。
[0120]
本发明所述通式(i)的化合物，包括异构体都能够被本领域的技术人员(经验或参考文献)制备得到。
[0121]
本发明中所提供的实施例和制备例进一步阐明并举例说明了本发明所述化合物及其制备方法。应当理解，下述制备例和实施例不以任何方式限制本发明的范围。
[0122]
下面的合成路线描述了本发明的式(i)化合物的制备方法，如下合成方案中所用原料、试剂、催化剂、溶剂等均可通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备或者可商购得到。本发明的全部最终衍生物都可都过合成方案中所描述的方法或其类似方法制得，这些方法都是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些合成方案中应用的全部可变因素如下文定义或根据权利要求中的定义。
[0123]
制备方法
[0124]
下面各变量的定义如前所述，而新变量定义如本节内容所述。另外，通式(i)所述的化合物及涉及的中间体均可通过常见的分离方法进行纯化，如萃取、重结晶及硅胶柱层析分离等。所用200-300目的硅胶和薄层层析硅胶板均由青岛海洋化工厂生产。所用化学试剂为一般试剂的分析纯或化学纯市售商品，使用时未经进一步纯化。
[0125]
本发明提供一种通式(i)所示化合物的制备方法，其特征在于：
[0126][0127]
本领域技术人员知晓如何得到式(i-c)所示化合物。
[0128]
例如，式(i-c)所示化合物可以在适当的碱性条件及溶剂下，并在催化剂下经buchwald-hartwig偶联反应得到，所述催化剂为钯试剂，包括并不限于醋酸钯(pd(oac)2)、1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(binap)、2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(sphos)、二环己基(3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基(1,1'-联苯)-2-基)膦(brettphos)、三(二亚苄基丙酮)二钯(pd2(dba)3)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(pdcl2(dppf))、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(pdcl2(dppf)
·
ch2cl2)、四(三苯基膦)钯(pd(pph3)4)、双(三环己基膦)二氯化钯(pdcl2(p(cy)3)2)；所述碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，包括并不限于三乙胺(tea)、n,n-二异丙基乙基胺(dipea)、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双三甲基硅基氨基锂、醋酸钾(koac)、叔丁醇钠(tbuona)、叔丁醇钾(tbuok)、氢化钠(nah)、磷酸钾(k3po4)、碳酸钠(na2co3)、碳酸钾(k2co3)、氢氧化锂(koh)、氢氧化钠(naoh)；所述溶剂包括并不限于甲苯(toluene)、1,4-二氧六环(1,4-dioxane)、四氢呋喃(thf)、乙腈(ch3cn)、n,n'-二甲基甲酰胺(dmf)，以及这些溶剂与水不同比例形成的混合溶剂；
[0129]
或者，
[0130]
例如，式(i-c)所示化合物可以在适当的碱性条件及溶剂下经亲核取代反应得到，所述碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，包括并不限于三乙胺(tea)、n,n-二异丙基乙基胺(dipea)、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双三甲基硅基氨基锂、醋酸钾(koac)、叔丁醇钠(tbuona)、叔丁醇钾(tbuok)、氢化钠(nah)、磷酸钾(k3po4)、碳酸钠(na2co3)、碳酸钾(k2co3)、氢氧化锂(koh)、氢氧化钠(naoh)；所述溶剂包括并不限于n,n'-二甲基甲酰胺(dmf)、n-甲基吡咯烷酮(nmp)、1,4-二氧六环(1,4-dioxane)、四氢呋喃(thf)、乙腈(ch3cn)；
[0131]
式(i-c)所示化合物经一锅反应得到式(i-d)所示化合物，包括第1阶段经在适当的溶剂条件下经酸或碱试剂脱保护；第2阶段是在适当的溶剂条件下经适当的碱试剂催化下，与n,n'-硫羰基二咪唑(tcdi)反应得到式(i-d)所示化合物，所述的溶剂包括并不限于二氯甲烷(dcm)、1,4-二氧六环(1,4-dioxane)四氢呋喃(thf)、乙腈(ch3cn)、n,n'-二甲基甲酰胺(dmf)；所述酸试剂包括并不限于三氟乙酸(tfa)和盐酸(hcl)；所述碱试剂包括并不限于哌啶、二乙胺；
[0132]
式(i-d)所示化合物在适当的溶剂条件下与水合肼反应得到式(i-e)所示化合物，所述溶剂包括但不限于甲醇(ch3oh)、乙醇(etoh)；
[0133]
式(i-e)所示化合物在适当的溶剂条件下与式(i-f)所示化合物反应得到式(i)所示化合物，所述溶剂包括但不限于甲醇(ch3oh)、乙醇(etoh)；
[0134]
p1是保护基，选自叔丁氧羰基(boc)或9-芴甲氧羰基(fmoc)。
[0135]
本发明提供了一种新颖的硫代酰肼类的p53蛋白的活性调节剂，用于治疗或预防与该靶点相关的肿瘤或癌症。同时，这些化合物或者包含其作为活性成分的药物组合物等可在安全治疗窗口内将对这些疾病的临床疗效达到最大化。
具体实施方式
[0136]
按照上述说明方法，本发明制备了代表性化合物，以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并不限制本发明范围。
[0137]
lc-ms分析方法：
[0138]
质谱条件：仪器thermo msq plus；离子源esi(ea ea-)；锥孔电压30v；毛细管电压3.00kv；源温度350℃；
[0139]
色谱条件：仪器thermo u3000；检测器dad-3000(rs)(二极管阵列检测器)；色谱柱岛津inertsil ods-hl hp 3μm 3.0
×
100mm；流速0.4ml/min；柱温30℃；流动相ch3oh/h2o/hcooh(75/25/0.2)。
[0140]
hplc分析方法(一)：
[0141]
仪器thermo u3000；检测器vwd-3
×
00(rs)(紫外检测器)；色谱柱岛津shim-pack vp-ods 5μm 4.6
×
150mm；流速1.0ml/min；柱温30℃；流动相ach3oh/h2o(85/15)。
[0142]
hplc分析方法(二)：
[0143]
仪器thermo u3000；检测器vwd-3
×
00(rs)(紫外检测器)；色谱柱岛津shim-pack vp-ods 5μm 4.6
×
150mm；流速1.0ml/min；柱温30℃；流动相bch3oh/h2o/tea/hcooh(65/35/0.1/0.2)。
[0144]
hplc分析方法(三)：
[0145]
仪器thermo u3000；检测器vwd-3
×
00(rs)(紫外检测器)；色谱柱岛津shim-pack vp-ods 5μm 4.6
×
150mm；流速1.0ml/min；柱温30℃；流动相cch3oh/h2o(75/25)。
[0146]
hplc分析方法(四)：
[0147]
仪器thermo u3000；检测器vwd-3
×
00(rs)(紫外检测器)；色谱柱岛津shim-pack vp-ods 5μm 4.6
×
150mm；流速1.0ml/min；柱温30℃；流动相dch3oh/h2o(65/35)。
[0148]
hplc分析方法(五)：
[0149]
仪器thermo u3000；检测器vwd-3
×
00(rs)(紫外检测器)；色谱柱岛津shim-pack vp-ods 5μm 4.6
×
150mm；流速1.0ml/min；柱温30℃；流动相ech3oh/h2o(80/20)。
[0150]
hplc分析方法(六)：
[0151]
仪器thermo u3000；检测器vwd-3
×
00(rs)(紫外检测器)；色谱柱岛津shim-pack vp-ods 5μm 4.6
×
150mm；流速1.0ml/min；柱温30℃；流动相fch3oh/h2o(70/30)。
[0152]1h-nmr分析方法：
[0153]1h-nmr在室温下采用brukeravance-400mhz型核磁共振波谱仪在dmso-d6或cdcl3等中以tms为内标物测定，信号峰表示为s(单峰)，d(双峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，dd(双二重峰)。耦合常数(j)的单位为赫兹(hz)。
[0154]
缩略语：
[0155]
1,4-dioxane 1,4-二氧六环；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
dcm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二氯甲烷
[0156]
pe
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
石油醚；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
ea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙酸乙酯
[0157]
toluene
ꢀꢀꢀꢀꢀ
甲苯；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n-hexane
ꢀꢀ
正己烷
[0158]
ch3oh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲醇；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
etoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙醇
[0159]
dmf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n'-二甲基甲酰胺；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三乙胺
[0160]
tfa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三氟乙酸；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
hcl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
盐酸
[0161]
pyridine
ꢀꢀꢀꢀꢀ
吡啶；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
na2so4ꢀꢀꢀꢀ
硫酸钠
[0162]
tcdi
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n'-硫羰基二咪唑；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tf2o
ꢀꢀꢀꢀꢀ
三氟甲磺酸酐
[0163]
k2co3ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
碳酸钾；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
cs2co3ꢀꢀꢀꢀ
碳酸铯
[0164]
tbuona
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
叔丁醇钠；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tbuok
ꢀꢀꢀꢀꢀ
叔丁醇钾
[0165]
n2h4·
h2o水合肼；
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
pd(oac)2ꢀꢀ
醋酸钯
[0166]
binap
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦； pd2(dba)3三(二亚苄基丙酮)二钯
[0167]
sphos
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯
[0168]
brettphos
ꢀꢀ
二环己基(3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基(1,1'-联苯)-2-基)膦
[0169]
tlc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
薄层色谱法
[0170]
按照上述说明方法，本发明制备了代表性化合物i-1—i-25(见表1)。
[0171]
表1本发明所述的代表性化合物i-1—i-25
[0172][0173][0174]
下面结合具体实例进一步阐述本发明内容，但本发明的保护范围并不仅仅局限于
这些实例。本发明所述的百分比除特别注明外，均为重量百分比。说明书中所描述的数值范围，如计量单位、反应条件、化合物物理状态或百分比，均是为了提供明白无误的书面参考。本领域技术人员在实施本发明时，使用在此范围之外或有别于单个数值的温度、浓度、数量、碳原子数等，仍然有可能得到预期结果。
[0175]
实施例1
[0176]
n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-9-(吡啶-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-硫代酰肼i-1
[0177][0178]
中间体：9-(吡啶-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯i-1c的制备(第一步)
[0179]
将市售的i-1a(316.0mg,2.0mmol,1.0eq)和i-1b(508.0mg,2.0mmol,1.0eq)，pd2(dba)3(183.0mg,0.2mmol,0.1eq)，binap(186.6mg,0.3mmol,0.15eq)，tbuok(672.0mg,6.0mmol,3.0eq)，tea(606.0mg,6.0mmol,3.0eq)和toluene(20ml)的混合液在n2保护下加热到110℃并搅拌8h，冷却至环境温度。浓缩反应液，粗品经硅胶柱柱层层析分离后(ea/n-hexane(v/v)＝1/4～1/2洗脱)分离后，浓缩得到黄色固体i-1c。(367.0mg,收率55.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)332.2[m h]

。
[0180]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(9-(吡啶-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲硫酮i-1d的制备(第二步)
[0181]
将i-1c(367.0mg,1.1mmol,1.0eq)溶于dcm(5ml)中，加入tfa(5ml)，在环境温度下搅拌1h，浓缩得棕色油状仲胺的三氟乙酸盐，不经处理直接用于下一阶段反应。将仲胺的三氟乙酸盐溶于dcm(10ml)中，加入tea(333.3mg,3.3mmol,3.0eq)和tcdi(213.8mg,1.2mmol,1.1eq)，在环境温度下搅拌16h。用dcm(200ml)稀释反应液，水洗2次，无水na2so4干燥有机相，浓缩。粗品经制备tlc(ch2cl2/ch3oh(v/v)＝12/1)分离后，得到黄色固体i-1d。(281.0mg,收率74.9％)。lc-ms ms-esi(m/z)342.2[m h]

。
[0182]
中间体：9-((吡啶-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-硫代酰肼i-1e的制备(第三步)
[0183]
将中间体i-1d(281.0mg,0.82mmol,1.0eq)溶于etoh(15ml)中，加入浓度为80％的水合肼(61.5mg,1.23mmol,1.5eq)，所得溶液加热到95℃并搅拌2h，冷却至环境温度。浓缩反应液得到黄色固体i-1e粗品，直接用于下一步反应。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)306.2[m h]

。
[0184]
化合物：n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-9-(吡啶-2-基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-硫代酰肼i-1的制备(第四步)
[0185]
将中间体i-1e(0.82mmol,1.0eq)溶于etoh(15ml)中，加入市售的i-1f(132.5mg,0.90mmol,1.1eq)，所得溶液加热到95℃并搅拌8h，冷却至环境温度。过滤收集固体，并先后用ch3oh(20ml)和etoac(20ml)分别打浆洗涤1次后，得到黄色固体i-1。(107mg,收率30.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)435.2[m h]

。化合物i-1是e式和z式混合物，z/e约为1:0.18。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.77(s,1h),8.59(d,j＝3.6hz,1h),8.18(d,j＝3.2hz,1h),7.44-7.51(m,2h),7.19-7.26(m,1h),6.66(d,j＝8.4hz,1h),6.58(t,j＝6.0hz,1h),4.11(s,4h),3.55(s,4h),3.08(t,j＝6.0hz,2h),2.87(t,j＝6.0hz,2h),2.04(t,j＝6.0hz,2h),1.63-1.66(m,8h)。
[0186]
实施例2
[0187]
(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-4-(吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-硫代酰肼i-2
[0188][0189]
中间体：4-(吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯i-2c的制备
[0190]
黄色固体i-2c是由2-溴吡啶i-1a(474.0mg,3.0mmol,1.0eq)和1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯i-2b(601.0mg,3.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(465.0mg,产率55.9％)。lc-ms ms-esi(m/z)278.2[m h]

。
[0191]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(4-(吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)甲硫酮i-2d的制备
[0192]
黄色固体i-2d是由i-2c(465.0mg,1.68mmol,1.0eq)，tfa(5ml)，tea(509.0mg,5.04mmol,3.0eq)和tcdi(329.7mg,1.85mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(246.0mg,收率51.0％)。lc-ms ms-esi(m/z)288.2[m h]

。
[0193]
中间体：4-(吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-硫代酰肼i-2e的制备
[0194]
黄色固体i-2e是由i-2d(246.0mg,0.86mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(80.6mg,1.3mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)252.1[m h]

。
[0195]
化合物：(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-4-(吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚
烷-1-硫代酰肼i-2的制备
[0196]
黄色固体i-2是由i-2e(0.86mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(139.8mg,0.95mmol,1.1eq)按照实施例1中的第4步类似步骤制备。粗品再经制备tlc(dcm/ch3oh(v/v)＝12/1)分离后，浓缩而得到。(76.0mg,收率23.3％)。lc-ms ms-esi(m/z)381.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm8.14(d,j＝3.6hz,1h),7.69(s,1h),7.34-7.43(m,2h),6.89(s,1h),6.49-6.53(m,2h),4.12-4.22(m,2h),3.80(d,j＝6.0hz,4h),3.61(s,2h),3.16(t,j＝6.0hz,2h),2.80(t,j＝5.6hz,2h),1.95-2.18(m,4h)。
[0197]
实施例3
[0198]
(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-硫代酰肼i-3
[0199][0200]
中间体：7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯i-3c的制备
[0201]
黄色固体i-3c是由2-溴吡啶i-1a(316.0mg,2.0mmol,1.0eq)和2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯i-3b(452.6mg,2.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(417.0mg,收率68.8％)。lc-ms ms-esi(m/z)304.2[m h]

。
[0202]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-基)甲硫酮i-3d的制备
[0203]
黄色固体i-3d是由i-3c(417.0mg,1.38mmol,1.0eq)，tfa(5ml)，tea(418.1mg,4.14mmol,3.0eq)和tcdi(270.9mg,1.52mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(212.0mg,收率49.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)314.1[m h]

。
[0204]
中间体：7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-硫代酰肼i-3e的制备
[0205]
黄色固体i-3e是由i-3d(212.0mg,0.67mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(62.7mg,1.0mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)278.1[m h]

。
[0206]
化合物：(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-硫代酰肼i-3的制备
[0207]
黄色固体i-3是由i-3e(0.67mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(108.9mg,0.74mmol,1.1eq)按照实施例1中的第4步类似步骤制备。粗品再经反相制备色谱(c18柱，ez plus 100d全自动快速中压制备层析系统，a相：水，b相：meoh(5％—100％)，保留时间为50min，b相甲醇为89％时出目标产物峰)分离后，浓缩而得。(115mg,收率42.3％)。lc-ms ms-esi(m/z)407.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.14(s,1h),7.78(d,j＝4.0hz,1h),7.43(s,1h),7.35(d,j＝7.2hz,1h),6.94(t,j＝6.4hz,1h),6.52(d,j＝5.2hz,1h),6.33(s,1h),3.75-3.87(m,4h),3.40-3.59(m,4h),3.13(s,2h),2.81(s,2h),1.97-2.07(m,6h)。
[0208]
实施例4
[0209]
(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-硫代酰肼i-4
[0210][0211]
中间体：7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯i-4c的制备
[0212]
黄色固体i-4c是由2-溴吡啶i-1a(1.58g,10.0mmol,1.0eq)和2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯i-4b(2.26g,10.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(434.0mg,收率14.3％)。lc-ms ms-esi(m/z)303.2[m h]

。
[0213]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲硫酮i-4d的制备
[0214]
黄色固体i-4d是由i-4c(434.0mg,1.43mmol,1.0eq)，tfa(5ml)，tea(433.3mg,4.29mmol,3.0eq)和tcdi(279.8mg,1.57mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(177.0mg,收率39.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)313.1[m h]

。
[0215]
中间体：7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-硫代酰肼i-4e的制备
[0216]
黄色固体i-4e是由i-4d(177.0mg,0.56mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(52.5mg,0.84mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)278.1[m h]

。
[0217]
化合物：(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-7-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-硫代酰肼i-4的制备
[0218]
i-4是由i-4e(0.56mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(91.3mg,0.62mmol,1.1eq)按照实施例1中的第4步类似步骤制备。该混合物再经2次制备tlc(dcm/ch3oh(v/v)＝12/1)分离后，浓缩而得。(46mg,收率20.2％)。lc-ms ms-esi(m/z)407.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.17-8.18(m,1h),7.80(d,j＝4.4hz,1h),7.43-7.48(m,1h),7.38(d,j＝7.6hz,1h),6.97(dd,j＝5.2hz,j＝7.6hz,1h),6.67(d,j＝8.4hz,1h),6.58(dd,j＝5.2hz,j＝7.2hz,1h),3.89-3.99(m,4h),3.53(s,4h),3.14-3.20(m,2h),2.82(s,2h),1.99(s,2h),1.85(s,4h)。
[0219]
实施例5
[0220]
(3ar,6as)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-5-(吡啶-2-基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1h)-硫代酰肼i-5
[0221][0222]
中间体：(3ar,6as)-5-(吡啶-2-基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1h)-甲酸叔丁酯i-5c的制备
[0223]
黄色固体i-5c是由2-溴吡啶i-1a(316.0mg,2.0mmol,1.0eq)和(3ar,6as)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1h)-甲酸叔丁酯i-5b(424.6mg,2.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(390.0mg,收率67.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)290.2[m h]

。
[0224]
中间体：(1h-咪唑-1-基)((3ar,6as)-5-(吡啶-2-基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1h)-基)甲硫酮i-5d的制备
[0225]
黄色固体i-5d是由i-5c(390.0mg,1.35mmol,1.0eq)，tfa(5ml)，tea(409.1mg,4.05mmol,3.0eq)和tcdi(263.7mg,1.48mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(108.0mg,收率26.7％)。lc-ms ms-esi(m/z)300.1[m h]

。
[0226]
中间体：(3ar,6as)-5-(吡啶-2-基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1h)-硫代酰肼i-5e的制备
[0227]
黄色固体i-5e是由i-5d(108.0mg,0.36mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(33.8mg,0.54mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)263.1[m h]

。
[0228]
化合物：(3ar,6as)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-5-(吡啶-2-基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1h)-硫代酰肼i-5的制备
[0229]
i-5是由i-5e(0.36mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(58.9mg,0.40mmol,1.1eq)按照实施例1中的第4步类似步骤制备，粗品经反相制备色谱(c18柱，ez plus 100d全自动快速中压制备层析系统，a相：水，b相：meoh(5％—100％)，保留时间为50min，b相甲醇为85％时出目标产物峰)分离后，浓缩而得。(27.2mg,收率19.2％)。lc-ms ms-esi(m/z)393.2[m h]

。化合物i-5是e式和z式混合物，e/z约为1:1。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.58(s,1h),8.58(s,1h),8.15(s,1h),7.56-7.36(m,2h),7.22(d,j＝4.8hz,1h),6.53-6.59(m,2h),6.35(t,j＝7.8hz,1h).，4.01-4.23(m,3h),3.49-3.75(m,3h),3.18(s,2h),3.06-3.08(m,3h),2.87-2.91(m,3h),2.02(d,j＝5.6hz,2h)。
[0230]
实施例6
[0231]
(e)-2-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-n-(4-(吡啶-2-基氨基)苯基)肼-1-硫代酰胺i-6
[0232][0233]
中间体：(4-(吡啶-2-基氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯i-6c的制备
[0234]
黄色固体i-6c是由2-溴吡啶i-1a(474.0mg,3.0mmol,1.0eq)和(4-氨苯基)氨基甲酸叔丁酯i-6b(624.0mg,3.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(374.0mg,收率65.6％)。lc-ms ms-esi(m/z)286.2[m h]

。
[0235]
中间体：n-(4-(吡啶-2-基氨基)苯基)-1h-咪唑-1-硫代酰胺i-6d的制备
[0236]
黄色固体i-6d是由i-6c(374.0mg,1.31mmol,1.0eq)，tfa(5ml)，tea(396.9mg,3.93mmol,3.0eq)和tcdi(256.6mg,1.44mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(134.0mg,收率34.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)296.1[m h]

。
[0237]
中间体：n-(4-吡啶-2-基氨基)苯基)肼硫代酰胺i-6e的制备
[0238]
黄色固体i-6e是由i-6d(134.0mg,0.45mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(42.1mg,0.68mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)260.1[m h]

。
[0239]
化合物：(e)-2-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-n-(4-(吡啶-2-基氨基)苯基)肼-1-硫代酰胺i-6的制备
[0240]
i-6是由中间体i-6e(0.45mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(72.1mg,0.49mmol,1.1eq)按照化合物i-1中的类似步骤制备而得。(51.3mg,收率29.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)389.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 9.13(s,1h),8.82(s,1h),8.12(d,j＝4.0hz,1h),7.73-7.77(m,3h),7.67(d,j＝7.6hz,1h),7.49-7.55(m,3h),7.24(dd,j＝5.2hz,j＝7.6hz,1h),6.77(d,j＝8.4hz,1h),6.67(t,j＝6.0hz,1h),3.19(d,j＝6.0hz,2h),2.88(d,j＝5.2hz,2h),1.94-2.02(m,2h)。
[0241]
实施例7
[0242]
n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-5-(吡啶-2-基)-1,5-二氮杂环辛烷-1-硫代酰肼i-7
[0243][0244]
中间体：5-(吡啶-2-基)-1,5-二氮杂环辛烷-1-甲酸叔丁酯i-7c的制备
[0245]
黄色固体i-7c是由2-溴吡啶i-1a(316.0mg,2.0mmol,1.0eq)和1,5-二氮杂环辛烷-1-甲酸叔丁酯i-7b(428.0mg,2.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(226.0mg,收率38.8％)。lc-ms ms-esi(m/z)292.2[m h]

。
[0246]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(5-(吡啶-2-基)-1,5-二氮杂环辛烷-1-基)甲硫酮i-7d的制备
[0247]
黄色固体i-7d是由i-7c(226.0mg,0.78mmol,1.0eq)，tfa(5ml)，tea(236.3mg,2.34mmol,3.0eq)和tcdi(153.3mg,0.86mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(76.0mg,收率32.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)302.1[m h]

。
[0248]
中间体：5-(吡啶-2-基)-1,5-二氮杂环辛烷-1-硫代酰肼i-7e的制备
[0249]
黄色固体i-7e是由i-7d(76.0mg,0.25mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(31.3mg,0.37mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)266.1[m h]。
[0250]
化合物：n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-5-(吡啶-2-基)-1,5-二氮杂环辛烷-1-硫代酰肼i-7的制备
[0251]
i-7是由i-7e(0.25mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(39.7mg,0.27mmol,1.1eq)按照化合物i-4中的类似步骤制备而得。(13.5mg,收率26.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)395.2[m h]

。化合物i-5是e式和z式混合物，z/e约为1:0.7。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.71(s,1h),8.57(d,j＝3.6hz,1h),8.15(d,j＝4.0hz,1h),7.50(d,j＝7.6hz,1h),7.46-7.34(m,1h),7.20(dd,j＝7.6,4.4hz,1h),6.55-6.47(m,2h),4.15(s,
2h),3.63(s,2h),3.49(s,2h),3.07(t,j＝6.4hz,2h),2.87(dd,j＝11.0,4.9hz,2h),2.26(s,6h),2.05(d,j＝5.8hz,2h)。
[0252]
实施例8
[0253]
(e)-7-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-硫代酰肼i-8
[0254][0255]
中间体：7-(4-氰基吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯i-8c的制备
[0256]
将市售的4-氰基-2-氟吡啶i-8a(122.0mg,1.0mmol,1.0eq)溶于dmf(15ml)中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯i-4b(226.0mg,1.0mmol,1.0eq)和k2co3(414.0mg,3.0mmol,3.0eq)。所得混合液加热至110℃并搅拌3h，冷却至环境温度。用水(100ml)淬灭反应，用ea(50ml)萃取3次。合并有机相，用饱和食盐水(100ml)洗3次，无水na2so4干燥。浓缩反应液，粗品经硅胶柱柱层层析分离后(ea/n-hexane(v/v)＝1/4～1/2洗脱)分离后，浓缩得到类白色固体i-8c。(317.0mg,收率96.6％)。lc-ms ms-esi(m/z)329.2[m h]

。
[0257]
中间体：2-(2-(1h-咪唑-1-硫代羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)异烟腈i-8d的制备
[0258]
黄色固体i-8d是由中间体i-8c(317.0mg,0.97mmol,1.0eq)，tfa(5ml)，tea(293.9mg,2.91mmol,3.0eq)和tcdi(190.7mg,1.07mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(176.0mg,收率53.7％)。lc-ms ms-esi(m/z)339.1[m h]

。
[0259]
中间体：7-(4-氰基吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-硫代酰肼i-8e的制备
[0260]
黄色固体i-8e是由i-8d(176.0mg,0.52mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(48.8mg,0.78mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)303.1[m h]

。
[0261]
化合物：(e)-7-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-硫代酰肼i-8的制备
[0262]
i-8是由i-8e(0.52mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(83.9mg,0.57mmol,1.1eq)按照化合物i-3的类似步骤制备而得。(37.0mg,收率16.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)432.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.25(d,j＝5.0hz,1h),7.79(d,j＝4.6hz,1h),7.39(d,j＝7.6hz,1h),6.97(dd,j＝7.3,5.1hz,1h),6.83(s,1h),6.71(d,j＝4.9hz,1h),3.90-3.99(m,4h),3.58(s,4h),3.05-3.27(m,2h),2.83(s,2h),1.99(s,2h),1.85(s,4h)。
[0263]
实施例9
[0264]
(e)-4-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-1,4-二氮杂环庚
烷-1-硫代酰肼i-9
[0265][0266]
中间体：4-(4-氰基吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯i-9c的制备
[0267]
白色固体i-9c是由4-氰基-2-氟吡啶i-8a(366.0mg,3.0mmol,1.0eq)和1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯i-2b(601.0mg,3.0mmol,1.0eq)按照中间体i-8c的类似步骤制备而得。(893.0mg,收率98.6％)。lc-ms ms-esi(m/z)303.2[m h]

。
[0268]
中间体：2-(4-(1h-1-硫代羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)异烟腈i-9d的制备
[0269]
黄色固体i-9d是由中间体i-9c(302.0mg,1.0mmol,1.0eq)，tfa(5ml)，tea(303.0mg,3.0mmol,3.0eq)和tcdi(196.0mg,1.1mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(212.0mg,收率67.7％)。lc-ms ms-esi(m/z)313.1[m h]

。
[0270]
中间体：4-(4-氰基吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-硫代酰肼i-9e的制备
[0271]
黄色固体i-9e是由中间体i-9d(212.0mg,0.68mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(63.7mg,1.02mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)277.1[m h]

。
[0272]
化合物：(e)-4-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-硫代酰肼i-9的制备
[0273]
i-9是由i-9e(0.68mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(110.4mg,0.75mmol,1.1eq)按照化合物i-3中的类似步骤制备而得。(72.0mg,收率26.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)406.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.23(d,j＝5.0hz,1h),7.66(s,1h),7.37(d,j＝7.5hz,1h),6.82-6.94(m,1h),6.59-6.77(m,2h),4.14(s,2h),3.40-4.03(m,6h),3.16(t,j＝6.2hz,2h),2.81(t,j＝10.8hz,2h),1.86-2.24(m,4h)。
[0274]
实施例10
[0275]
(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(喹啉-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-10
[0276][0277]
中间体：6-(喹啉-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-10c的制备
[0278]
将喹啉-2-基三氟甲磺酸酯i-10a(636.0mg,2.3mmol,1.0eq)，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯半草酸盐i-10b(662.4mg,2.3mmol,1.0eq)，cs2co3(1.50g,4.6mmol,2.0eq)，pd(oac)2(51.5mg,0.23mmol,0.1eq)，binap(214.6mg,0.35mmol,0.15eq)和
toluene(20ml)置于封管中，用氮气吹扫5min并迅速密封好，加热至100℃并搅拌8h，冷却至环境温度。浓缩反应液，粗品经硅胶柱柱层层析(ea/n-hexane(v/v)＝1/2～1/1)分离后，得到白色固体i-10c。(617.0mg,收率82.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)326.2[m h]

。
[0279]
中间体：(1h-咪唑-1-yl)(6-(喹啉-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲硫酮i-10d的制备
[0280]
黄色固体i-10d是由中间体i-10c(617.0mg,1.9mmol,1.0eq)，tfa(10ml)，tea(575.7mg,5.7mmol,3.0eq)和tcdi(374.2mg,2.1mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(412.0mg,收率64.7％)。lc-ms ms-esi(m/z)336.1[m h]

。
[0281]
中间体：6-(喹啉-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-10e的制备
[0282]
黄色固体i-10e是由中间体i-10d(412.0mg,1.23mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(115.4mg,1.85mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)300.1[m h]

。
[0283]
化合物：(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(喹啉-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-10的制备
[0284]
i-10是由i-10e(1.23mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(198.7mg,1.35mmol,1.1eq)按照化合物i-4中的类似步骤制备而得。(26.0mg,收率4.9％)。lc-ms ms-esi(m/z)429.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 7.88(d,j＝8.8hz,1h),7.81(d,j＝4.2hz,1h),7.77(d,j＝7.9hz,1h),7.61(d,j＝7.9hz,1h),7.55(t,j＝7.6hz,1h),7.41(d,j＝7.5hz,1h),7.23(d,j＝7.3hz,1h),6.96-7.05(m,1h),6.59(d,j＝8.8hz,1h),4.43(s,2h),4.34(s,6h),3.18-3.19(m,2h),2.84(s,2h),2.03(d,j＝15.2hz,2h)。
[0285]
实施例11
[0286]
(e)-6-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-(1-(吡啶-2-基)亚乙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-11
[0287][0288]
中间体：6-(4-氰基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-11c的制备
[0289]
白色固体i-11c是由4-氰基-2-氟吡啶i-8a(610.0mg,5.0mmol,1.0eq)和2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯半草酸盐i-10b(1.44g,5.0mmol,1.0eq)按照中间体i-8c中的类似步骤制备而得。(1.34g,收率89.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)301.2[m h]

。
[0290]
中间体：2-(6-(1h-咪唑-1-硫代羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)异烟腈i-11d的制备
[0291]
黄色固体i-11d是由中间体i-11c(1.34g,4.47mmol,1.0eq)，tfa(10ml)，tea(1.35g,13.41mmol，3.0eq)和tcdi(876.7mg,4.92mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(199.0mg,收率14.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)311.1[m h]

。
[0292]
中间体：6-(4-氰基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-11e的制备
[0293]
黄色固体i-11e是由中间体i-11d(199.0mg,0.64mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(60.0mg,0.96mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)275.1[m h]

。
[0294]
化合物：(e)-6-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-(1-(吡啶-2-基)亚乙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-硫代酰肼i-11的制备
[0295]
i-11是由i-11e(0.64mmol,1.0eq)和2-乙酰基吡啶i-11f(85.2mg,0.70mmol,1.1eq)按照化合物i-3中的类似步骤制备而得。(145.0mg,收率60.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)378.0[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.24(d,j＝5.0hz,1h),7.93(d,j＝4.4hz,1h),7.69(t,j＝7.1hz,1h),7.53(d,j＝7.6hz,1h),7.02
–
7.14(m,1h),6.76(d,j＝4.9hz,1h),6.47(s,1h),4.36(dt,j＝28.8,14.3hz,4h),4.21(s,4h),2.61(s,3h)。
[0296]
实施例12
[0297]
n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-12
[0298][0299]
中间体：6-(吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-12c的制备
[0300]
浅黄色固体i-12c是由2-溴吡啶i-1a(316.0mg,2.0mmol,1.0eq)，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯半草酸盐i-10b(486.0mg,1.0mmol,0.5eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(280.0mg,收率50.9％)。lc-ms ms-esi(m/z)276.2[m h]

。
[0301]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(6-(吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲硫酮i-12d的制备
[0302]
浅黄色固体i-12d是由中间体i-12c(280.0mg,1.02mmol,1.0eq)，tfa(8ml)，tea(0.7ml)和tcdi(199.6mg,1.12mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(240.0mg,收率82.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)286.1[m h]

。
[0303]
中间体：6-(吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-12e的制备
[0304]
黄色固体i-12e是由中间体i-12d(240.0mg,0.84mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(78.7mg,1.26mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)250.1[m h]

。
[0305]
化合物：n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-12的制备
[0306]
黄色固体i-12是由i-12e(160.0mg,0.64mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(103.0mg,0.70mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。(80.0mg,收率33.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)379.2[m h]

。化合物i-12是e式和z式混合物，z/e约为1:0.3。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.92(s,1h),8.57(d,j＝4.4hz,1h),8.16(t,j＝5.8hz,
1h),7.60(d,j＝7.8hz,1h),7.50-7.44(m,1h),7.24(d,j＝4.8hz,1h),6.68-6.62(m,1h),6.32(d,j＝8.4hz,1h),4.80(s,2h),4.48(s,2h),4.19(s,4h),2.89(t,j＝6.1hz,2h),2.71-2.64(m,2h),1.99(d,j＝6.1hz,2h)。
[0307]
实施例13
[0308]
(z)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-13
[0309][0310]
中间体：6-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-13c的制备
[0311]
浅黄色固体i-13c是由2-溴-4-(三氟甲基)吡啶i-13a(450.0mg,2.0mmol,1.0eq)，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯半草酸盐i-10b(486.0mg,1.0mmol,0.5eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(350.0mg,收率51.0％)。lc-ms ms-esi(m/z)344.2[m h]

。
[0312]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(6-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲硫酮i-13d的制备
[0313]
浅黄色固体i-13d是由中间体i-13c(350.0mg,1.02mmol,1.0eq)，tfa(8ml)，tea(0.7ml)和tcdi(199.6mg,1.12mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(220.0mg,收率61.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)354.1[m h]

。
[0314]
中间体：6-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-13e的制备
[0315]
浅黄色固体i-13e是由中间体i-13d(220.0mg,0.62mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(78.7mg,1.26mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(140.0mg,收率71.2％)。lc-ms ms-esi(m/z)318.1[m h]

。化合物：(z)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-13的制备
[0316]
黄色固体i-13是由i-13e(140.0mg,0.44mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(70.7mg,0.48mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。(60.0mg,收率30.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)447.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.94(s,1h),8.57(d,j＝4.2hz,1h),8.38(s,1h),7.61(t,j＝6.5hz,2h),7.24(d,j＝4.8hz,1h),6.31(d,j＝8.7hz,1h),4.80(s,2h),4.50(s,2h),4.26(s,4h),2.89(t,j＝6.1hz,2h),2.74-2.64(m,2h),2.06-1.93(m,2h)。
[0317]
实施例14
[0318]
(z)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(4-甲基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-14
[0319][0320]
中间体：6-(4-甲基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-14c的制备
[0321]
浅黄色固体i-14c是由2-溴-4-甲基吡啶i-14a(342.0mg,2.0mmol,1.0eq)，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯半草酸盐i-10b(486.0mg,1.0mmol,0.5eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(230.0mg,收率39.8％)。lc-ms ms-esi(m/z)290.2[m h]

。
[0322]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(6-(4-甲基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲硫酮i-14d的制备
[0323]
浅黄色固体i-14d是由中间体i-14c(230.0mg,0.79mmol,1.0eq)，tfa(8ml)，tea(0.7ml)和tcdi(199.6mg,1.12mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(150.0mg,收率63.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)300.2[m h]

。
[0324]
中间体：6-(4-甲基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-14e的制备
[0325]
浅黄色固体i-14e是由中间体i-14d(150.0mg,0.50mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(46.9mg,0.75mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(100.0mg,收率76.0％)。lc-ms ms-esi(m/z)264.2[m h]

。化合物：(z)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(4-甲基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-14的制备
[0326]
黄色固体i-14是由i-14e(100.0mg,0.38mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(61.8mg,0.42mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。(50.0mg,收率33.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)393.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.92(s,1h),8.57(d,j＝3.7hz,1h),8.02(d,j＝5.0hz,1h),7.60(d,j＝7.3hz,1h),7.23(s,1h),6.49(d,j＝4.8hz,1h),6.14(s,1h),4.79(s,2h),4.47(s,2h),4.17(s,4h),2.88(t,j＝5.6hz,2h),2.68(s,2h),2.26(s,3h),1.94-20.3(m,2h)。
[0327]
实施例15
[0328]
(z)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(4-甲氧基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-15
[0329][0330]
中间体：6-(4-甲氧基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-15c的制备
[0331]
浅黄色固体i-15c是由2-溴-4-甲氧基吡啶i-15a(561.0mg,3.0mmol,1.0eq)，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯半草酸盐i-10b(730.0mg,1.5mmol,0.5eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(420.0mg,收率45.9％)。lc-ms ms-esi(m/z)306.2[m h]

。
[0332]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(6-(4-甲氧基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲硫酮i-15d的制备
[0333]
浅黄色固体i-15d是由中间体i-15c(420.0mg,1.38mmol,1.0eq)，tfa(8ml)，tea(0.7ml)和tcdi(270.9mg,1.52mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(305.0mg,收率70.2％)。lc-ms ms-esi(m/z)316.2[m h]

。
[0334]
中间体：6-(4-甲氧基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-15e的制备
[0335]
浅黄色固体i-15e是由中间体i-15d(305.0mg,0.97mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(90.9mg,1.46mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(210.0mg,收率77.3％)。lc-ms ms-esi(m/z)280.2[m h]

。
[0336]
化合物：(z)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(4-甲氧基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-15的制备
[0337]
黄色固体i-15是由i-15e(210.0mg,0.75mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(122.2mg,0.83mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。(150.0mg,收率49.0％)。lc-ms ms-esi(m/z)409.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.90(s,1h),8.57(d,j＝3.4hz,1h),7.99(d,j＝5.9hz,1h),7.60(d,j＝7.9hz,1h),7.25-7.22(m,1h),6.26(dd,j＝5.9,2.1hz,1h),5.75(d,j＝2.0hz,1h),4.78(s,2h),4.47(s,2h),4.17(s,4h),3.81(s,3h),2.88(t,j＝6.1hz,2h),2.72-2.65(m,2h),2.01(dd,j＝12.4,6.3hz,2h)。
[0338]
实施例16
[0339]
(z)-6-(5-氰基吡啶-2-基)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-16
[0340][0341]
中间体：6-(5-氰基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-16c的制备
[0342]
浅黄色固体i-16c是由2-溴-5-氰基吡啶i-16a(316.0mg,2.0mmol,1.0eq)，2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯半草酸盐i-10b(486.0mg,1.0mmol,0.5eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(180.0mg,收率30.0％)。lc-ms ms-esi(m/z)301.2[m h]

。
[0343]
中间体：6-(6-(1h-咪唑-1-硫代羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)烟腈i-16d的制备
[0344]
浅黄色固体i-16d是由中间体i-16c(180.0mg,0.58mmol,1.0eq)，tfa(8ml)，tea(0.8ml)和tcdi(114.0mg,0.64mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(160.0mg,收率88.9％)。lc-ms ms-esi(m/z)311.2[m h]

。
[0345]
中间体：6-(5-氰基吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-16e的制备
[0346]
浅黄色固体i-16e是由中间体i-16d(160.0mg,0.51mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(48.1mg,0.77mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(120.0mg,收率85.8％)。lc-ms ms-esi(m/z)275.2[m h]

。
[0347]
化合物：(z)-6-(5-氰基吡啶-2-基)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-16的制备
[0348]
黄色固体i-16是由i-16e(120.0mg,0.43mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(69.2mg,0.47mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。(75.0mg,收率43.2％)。lc-ms ms-esi(m/z)404.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.95(s,1h),8.58(d,j＝4.6hz,1h),8.40(d,j＝2.1hz,1h),7.61(dd,j＝8.9,2.0hz,2h),7.24-7.28(m,1h),6.27(d,j＝8.8hz,1h),4.82(s,2h),4.51(s,2h),4.27(d,j＝16.9hz,4h),2.89(t,j＝6.0hz,2h),2.72-2.63(m,2h),2.01(dd,j＝12.2,6.1hz,2h)。
[0349]
实施例17
[0350]
n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-4-(吡啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-硫代酰肼i-17
[0351][0352]
中间体：4-(吡啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-甲酸叔丁酯i-17c的制备
[0353]
浅黄色固体i-17c是由2-溴吡啶i-1a(1.8g,11.3mmol,1.0eq)，4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-甲酸叔丁酯i-17b(1.2g,5.65mmol,0.5eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。粗品经硅胶柱柱层层析分离后(pe/ea(v/v)＝4/1洗脱)分离后，浓缩得到。(650.0mg,收率20.0％)。lc-ms ms-esi(m/z)290.2[m h]

。
[0354]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(4-(吡啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)甲硫酮i-17d的制备
[0355]
浅黄色固体i-17d是由中间体i-17c(121.1mg,0.42mmol,1.0eq)，tfa(8ml)，tea(0.8ml)和tcdi(82.0mg,0.46mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(110.0mg,收率87.8％)。lc-ms ms-esi(m/z)299.2[m h]

。
[0356]
中间体：4-(吡啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-硫代酰肼i-17e的制备
[0357]
浅黄色固体i-17e是由中间体i-17d(110.0mg,0.37mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(35.0mg,0.56mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(70.0mg,收率72.2％)。lc-ms ms-esi(m/z)263.2[m h]

。
[0358]
化合物：n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-4-(吡啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-硫代酰肼i-17的制备
[0359]
黄色固体i-17是由i-17e(70.0mg,0.26mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(42.7mg,0.29mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。(25.0mg,收率
3.05(m,2h),2.83(t,j＝5.8hz,2h),2.00(s,2h)。
[0370]
实施例20
[0371]
(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-2-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-硫代酰肼i-20
[0372][0373]
中间体：2-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯i-20c的制备
[0374]
黑色固体i-20c是由2-溴吡啶i-1a(474.0mg,3.0mmol,1.0eq)，2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯i-20b(678.0mg,3.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(398.0mg,收率43.8％)。lc-ms ms-esi(m/z)304.2[m h]

。
[0375]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(2-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)甲硫酮i-20d的制备
[0376]
黄色固体i-20d是由中间体i-20c(398.0mg,1.31mmol,1.0eq)和tcdi(256.6mg,1.44mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(304.0mg,收率74.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)314.1[m h]

。
[0377]
中间体：4-(吡啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-硫代酰肼2-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-硫代酰肼i-20e的制备
[0378]
黄色固体i-20e是由中间体i-20d(304.0mg,0.97mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(91.0mg,1.46mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得粗品。(按100％计)。lc-ms ms-esi(m/z)278.1[m h]

。
[0379]
化合物：(e)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-2-(吡啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-硫代酰肼i-20的制备
[0380]
黄色固体i-20是由i-20e(0.97mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(157.5mg,1.07mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。(153.0mg,收率38.8％)。lc-ms ms-esi(m/z)407.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.14(d,j＝4.8hz,1h),7.77(d,j＝4.4hz,1h),7.43(t,j＝7.2hz,1h),7.37(d,j＝7.2hz,1h),7.00-6.92(m,1h),6.61-6.53(m,1h),6.29(d,j＝8.4hz,1h),4.04(s,4h),3.79(s,4h),3.17(d,j＝6.0hz,2h),2.82(s,2h),2.00(s,2h),1.86(d,j＝4.4hz,4h)。
[0381]
实施例21
[0382]
(e)-6-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-((3-氟吡啶-2-基)亚甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-21
[0383][0384]
化合物：(e)-6-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-((3-氟吡啶-2-基)亚甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-21的制备
[0385]
黄色固体i-21是由i-11e(274.0mg,1.0mmol,1.0eq)和3-氟吡啶甲醛i-21f(137.6mg,1.1mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。该混合物进一步用制备tlc(dcm/ch3oh(v/v)＝15/1)处理分离后，浓缩而得到。(55.0mg,收率14.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)382.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.63(s,1h),8.25(d,j＝5.1hz,1h),7.81(d,j＝4.7hz,1h),7.39(t,j＝8.9hz,1h),7.18-7.10(m,1h),6.78(d,j＝5.2hz,1h),6.47(s,1h),4.44(s,2h),4.39(s,2h),4.22(s,4h)。
[0386]
实施例22
[0387]
(z)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(吡啶-2-基氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-22
[0388][0389]
中间体：6-(吡啶-2-基氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-22c的制备
[0390]
浅黄色固体i-22c是由2-溴吡啶i-1a(471.0mg,3.0mmol,1.0eq)，6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯i-22b(636.0mg,3.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(520.0mg,收率60.0％)。lc-ms ms-esi(m/z)290.2[m h]

。
[0391]
中间体：(1h-咪唑-1-基)(6-(吡啶-2-基氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲硫酮i-22d的制备
[0392]
浅黄色固体i-22d是由中间体i-22c(260.0mg,0.9mmol,1.0eq)和tcdi(176.4mg,0.99mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(145.0mg,收率53.7％)。lc-ms ms-esi(m/z)300.2[m h]

。
[0393]
中间体：6-(吡啶-2-基氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-22e的制备
[0394]
浅黄色固体i-22e是由中间体i-22d(145.0mg,0.48mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(45.0mg,0.72mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得。(85.0mg,收率67.3％)。lc-ms ms-esi(m/z)264.2[m h]

。
[0395]
化合物：(z)-n'-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-6-(吡啶-2-基氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-22的制备
[0396]
黄色固体i-22是由i-22e(85.0mg,0.32mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(51.5mg,0.35mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。(47.0mg,收率
37.4％)。lc-ms ms-esi(m/z)393.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 14.85(s,1h),8.56(d,j＝4.0hz,1h),8.08(d,j＝4.3hz,1h),7.60(d,j＝7.6hz,1h),7.43(s,1h),7.25-7.19(m,1h),6.64-6.54(m,1h),6.31(d,j＝8.3hz,1h),4.65(s,2h),4.32(d,j＝46.2hz,2h),4.12(dd,j＝14.2,7.0hz,1h),2.89(t,j＝5.8hz,2h),2.76(s,2h),2.70(s,2h),2.12(t,j＝9.6hz,2h),2.06-1.93(m,2h)。
[0397]
实施例23
[0398]
(e)-2-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-n-(2-(吡啶-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)肼-1-硫代酰胺i-23
[0399][0400]
中间体：(2-(吡啶-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸酯i-23c的制备
[0401]
浅黄色固体i-23c是由2-溴吡啶i-1a(471.0mg,3.0mmol,1.0eq)，(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酸酯i-23b(636.0mg,3.0mmol,1.0eq)按照实施例1中的第一步类似步骤制备而得。(480.0mg,收率55.3％)。lc-ms ms-esi(m/z)290.2[m h]

。
[0402]
中间体：n-(2-(吡啶-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1h-咪唑-1-硫代酰肼i-23d的制备
[0403]
浅黄色固体i-23d是由中间体i-23c(260.0mg,0.9mmol,1.0eq)和tcdi(176.4mg,0.99mmol,1.1eq)按照实施例1中的第二步类似步骤制备而得。(155.0mg,收率57.5％)。lc-ms ms-esi(m/z)300.2[m h]

。
[0404]
中间体：n-(2-(吡啶-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)肼基硫代酰胺i-23e的制备
[0405]
浅黄色固体i-23e是由中间体i-23d(155.0mg,0.51mmol,1.0eq)和浓度为80％的水合肼(48.1mg,0.77mmol,1.5eq)按照实施例1中的第三步类似步骤制备而得。(80.0mg,收率59.6％)。lc-ms ms-esi(m/z)264.2[m h]

。
[0406]
化合物：(e)-2-(6,7-二氢喹啉-8(5h)-亚基)-n-(2-(吡啶-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)肼-1-硫代酰胺i-23的制备
[0407]
黄色固体i-23是由i-23e(80.0mg,0.3mmol,1.0eq)和6,7-二氢喹啉-8(5h)-酮i-1f(48.6mg,0.33mmol,1.1eq)按照实施例1中的第四步类似步骤制备而得。该混合物进一步用制备tlc(dcm/ch3oh(v/v)＝15/1)处理分离后，浓缩而得到。(39.0mg,收率33.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)393.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.12(d,j＝4.5hz,1h),7.78(d,j＝4.4hz,1h),7.42(t,j＝8.4hz,2h),7.00(dd,j＝7.4,5.1hz,1h),6.60-6.50(m,1h),6.25(d,j＝8.3hz,1h),5.63(s,1h),4.64(s,1h),4.06(s,2h),3.94(s,2h),3.15(s,2h),2.83(s,2h),2.67-2.75(m,2h),2.16(t,j＝8.8hz,2h),2.08-1.93(m,2h)。
[0408]
实施例24
[0409]
n'-(二(吡啶-2-基)亚甲基)-6-(吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-24
[0410][0411]
化合物：n'-(二(吡啶-2-基)亚甲基)-6-(吡啶-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-24的制备
[0412]
将中间体i-12e(160.0mg,0.64mmol,1.0eq)溶于etoh(15ml)中，加入二(吡啶-2-基)甲酮(130.0mg,0.70mmol,1.1eq)和冰醋酸(1滴)，所得溶液加热到95℃并搅拌8h，冷却至环境温度。过滤收集固体，并先后用meoh(20ml)和ea(20ml)分别打浆洗涤1次后，得到黄色固体i-24。(120mg,收率45.1％)。lc-ms ms-esi(m/z)416.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.78(d,j＝4.6hz,1h),8.13(d,j＝4.6hz,2h),7.93(d,j＝7.9hz,1h),7.85(t,j＝6.9hz,1h),7.56(t,j＝7.8hz,1h),7.43(dd,j＝11.2,4.4hz,1h),7.37-7.30(m,2h),7.14-7.05(m,1h),6.63-6.57(m,1h),6.28(d,j＝8.3hz,1h),4.43(s,1h),4.20(s,3h),4.12(s,4h)。
[0413]
实施例25
[0414]
6-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-(二(吡啶-2-基)亚甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-25
[0415][0416]
化合物：6-(4-氰基吡啶-2-基)-n'-(二(吡啶-2-基)亚甲基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-硫代酰肼i-25的制备
[0417]
黄色固体i-25是由中间体i-11e(274.0mg,1.0mmol,1.0eq)和二(吡啶-2-基)甲酮(202.6mg,1.1mmol,1.1eq)按照化合物i-24的类似步骤制备而得。(160.0mg,收率36.3％)。lc-ms ms-esi(m/z)441.2[m h]

。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm 8.79(d,j＝4.8hz,1h),8.23(d,j＝5.1hz,1h),8.13(d,j＝5.0hz,1h),7.91(d,j＝7.7hz,1h),7.86(t,j＝7.5hz,1h),7.58(t,j＝7.6hz,1h),7.39-7.34(m,1h),7.31(d,j＝8.2hz,1h),7.14-7.08(m,1h),6.76(d,j＝5.0hz,1h),6.44(s,1h),4.45(s,1h),4.22(s,3h),4.16(s,4h)。
[0418]
体外生物学评价
[0419]
本检测方法用于本发明所述化合物的细胞水平生物学活性评价，包括在四株不同p53状态的细胞系模型中进行化合物生物学活性评价的方法。
[0420]
本检测的目的在于评价不同化合物对野生型或在不同位点发生突变的p53蛋白生物学活性的影响，即化合物是否可通过改变突变p53蛋白的构象重新激活其抑制肿瘤细胞周期和促进肿瘤细胞凋亡的生物学功能。
[0421]
实施例a化合物对不同p53状态肿瘤细胞系半数生长抑制剂量的检测
[0422]
实验主要原理
[0423]
p53是一种著名的抑癌蛋白，其主要的生物学功能是抑制细胞周期和诱导细胞凋亡，在肿瘤细胞中较普遍地存在p53的突变，p53生物学功能的缺失是细胞癌变及肿瘤耐药的驱动因素。
[0424]
在p53蛋白中，包括但不限于r175、y220、g245、r248、r249、r273及r282等氨基酸位点常常会发生错义突变，这类错义突变使得p53蛋白无法形成正确的构象从而失去其生物学功能。
[0425]
本检测方法中使用的四株肿瘤细胞系，分别表达野生型p53蛋白和三种不同形式错义突变的p53蛋白。其中野生型肿瘤细胞系中p53蛋白构象及生物学功能正常，但肿瘤细胞可耐受p53蛋白的周期抑制和凋亡诱导作用；突变型肿瘤细胞系中p53蛋白由于构象异常而无法发挥其生物学功能。理论上，如受测化合物有且仅有使突变型p53蛋白恢复正确构象的功能，当其作用于表达野生型p53蛋白的肿瘤细胞时，并不会表现对肿瘤细胞的杀伤，而当其作用于表达如上所述错义突变p53蛋白的肿瘤细胞时，可以通过恢复p53蛋白构象重新激活对肿瘤细胞的杀伤作用。因此，通过检测和比较化合物对不同p53状态肿瘤细胞系的半数生长抑制剂量，可以评价化合物是否是选择性的突变型p53重激活剂。
[0426]
实验材料与设备
[0427]
人非小细胞肺癌细胞系a549、人乳腺癌细胞系mda-mb-468、人小细胞肺癌细胞系nci-h1048和nci-h1417均购于american type culture collection(atcc)，相关培养条件均参考自atcc。其中，a549表达野生型(wild type,wt)p53蛋白；mda-mb-468、nci-h1048和nci-h1417表达突变型(mutation type,mut)p53蛋白，突变位点分别为r273h、r273c和r175l。alamar blue
tm
细胞活力检测试剂购于sigma-aldrich。forma steri-cycle细胞培养箱购自thermo fisher scientific。
[0428]
实验主要过程
[0429]
将贴壁培养的细胞系a594、mda-mb-468、nci-h1048经胰酶消化后制备成细胞悬液，悬浮培养的细胞系nci-h1417经移液器反复吸打后制备成细胞悬液。上述细胞悬液取样计数，按每孔5000个/190μl接种于96孔细胞培养板中，5％co2、37℃培养箱中培养过夜后，按每孔10μl体积加入不同浓度的受试化合物-培养液混合物，使每孔中受试化合物终浓度分别达到0,0.003,0.01,0.03,0.1,0.3,1,3,10,30μm，每株细胞系、每个受试药物剂量设置3次重复。继续培养72小时后，按相关产品操作手册加入alamar blue
tm
细胞活力检测试剂，检测不同剂量受试化合物作用下培养的不同细胞系的细胞活力，并以0μm剂量孔为参照计算每孔细胞生长抑制百分率，进而通过graphpad prism 7.00软件计算各受试化合物对不同受试细胞系的半数生长抑制剂量(gi
50
)。
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gi
50
值越低表示受试细胞系对受试化合物越敏感、越高表示受试细胞系对受试化合物越耐受。理论上，表达野生型p53蛋白的a549细胞系对选择性的p53突变体变构激活剂不敏感，而表达突变型p53蛋白的mda-mb-468、nci-h1048和nci-h1417细胞系对选择性的p53突变体变构激活剂敏感，上述两种敏感性差异越大，说明受试化合物选择性越强。
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基于上述测试方法，本发明所述化合物的活性数据总结(见表1)。
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表1本发明化合物在p53野生或突变型细胞系中的gi
50
(μm)
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由上述结果可见，本发明所述的化合物对不同p53状态肿瘤细胞系具有很好的体外抑制活性，本发明所述的通式(i)的化合物同样具有该抑制活性。