一种海洋黄酮糖苷的制备方法与流程

1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种海洋黄酮糖苷的制备方法。


背景技术：

2.公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
3.黄酮类化合物是植物在长期自然选择过程中产生的一类次生代谢产物。黄酮类化合物作为重要的天然多酚类产物，不仅广泛存在于高等植物，也存在于许多低等植物中，尤其在芸香科、豆科、石南科、唇形科等高等绿色植物中的分布较多。黄酮类化合物结构类型的复杂多样性注定了其具有广谱的药理活性，同时黄酮类化合物因其相对较低的毒性，在临床应用上对人类多种疾病的预防和治疗发挥了重要作用。
4.天然黄酮类化合物多以苷的形式存在，因糖的种类、数量、连接位置和连接方式不同，可以组成各种各样的黄酮苷。近年来，一方面随着分离技术和结构研究手段的不断进步，人们从植物中分离得到了大量结构新颖的黄酮苷，并阐明了其结构和生物活性；另一方面随着糖化学的发展，出现了越来越多的糖苷化新方法和新试剂，使得复杂黄酮苷的合成成为可能。
5.2008年，meng等从佛罗里达东南部沿海泻湖海洋被子植物halophila johnsonii eiseman中分离得到一种糖链上的6-位羟基被酰化的黄酮糖苷6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷，该海洋黄酮糖苷具有防紫外线辐射的功效。然而发明人发现现有技术中6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷的获取目前为止主要来源于天然植物的提取分离，提取分离获得的目标化合物量较少，难以满足其药理活性研究的需要。现有技术中也未见关于该海洋黄酮苷的制备方法的文献报道。


技术实现要素：

[0006]
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种来源于海洋被子植物halophila johnsonii的海洋黄酮糖苷6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷的制备方法，本发明首次采用化学半合成的方式完成6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷的大量制备，总收率高，反应试剂廉价易得，生产成本低，反应条件温和，可大量制备。
[0007]
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下所述：
[0008]
在本发明的第一方面，提供一种海洋黄酮糖苷的制备方法，所述海洋黄酮糖苷为6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷，制备方法如下：
[0009]
a)以灯盏花乙素为起始原料，在酸性催化剂催化下与甲醇发生酯化反应，得到相应的灯盏花乙素甲酯2；
[0010]
b)将得到的灯盏花乙素甲酯2，在碱性催化剂的存在下与2-溴甲基萘发生醚化反
应，生成化合物3；
[0011]
c)将生成的化合物3在还原剂的存在下，酯基被还原得到相应的醇类化合物4；
[0012]
d)将生成的化合物4在催化剂和缚酸剂存在下发生糖环6-位羟基的选择性酯化反应，得到化合物5；
[0013]
e)将生成的化合物5在催化剂存在下，选择性脱除烯丙基保护基，得到化合物6；
[0014]
f)将生成的化合物6在催化剂存在下，选择性脱除萘亚甲基保护基，得到目标海洋黄酮苷1。
[0015]
本发明的具体实施方式具有以下有益效果：
[0016]
现有技术中来源于海洋被子植物halophila johnsonii的海洋黄酮糖苷6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷的获取目前为止基本来源于天然植物的提取分离，提取分离获得的目标化合物量较少，难以满足其药理活性进一步研究的需要；本发明首次采用化学半合成的方式完成6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷的大量制备，以满足其药理活性研究的需求。本发明以商业可得的灯盏花乙素为起始原料，以线性6步反应，30.9％的总收率首次完成6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷的制备；反应试剂廉价易得，生产成本低；反应条件温和，可大量制备。
附图说明
[0017]
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
[0018]
图1为实施例1中所述海洋黄酮糖苷的核磁共振氢谱(1h-nmr)图；
[0019]
图2为实施例1中所述海洋黄酮糖苷的核磁共振碳谱(
13
c-nmr)图。
具体实施方式
[0020]
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本技术提供进一步的说明。除非另有指明，本技术使用的所有技术和科学术语具有与本技术所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0021]
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0022]
本发明的一种实施方式中，提供了一种海洋黄酮糖苷的制备方法，所述海洋黄酮糖苷为6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷，制备方法如下：
[0023]
a)以灯盏花乙素为起始原料，在酸性催化剂催化下与甲醇发生酯化反应，得到相应的灯盏花乙素甲酯2；
[0024]
b)将得到的灯盏花乙素甲酯2，在碱性催化剂的存在下与2-溴甲基萘发生醚化反应，生成化合物3；
[0025]
c)将生成的化合物3在还原剂的存在下，酯基被还原得到相应的醇类化合物4；
[0026]
d)将生成的化合物4在催化剂和缚酸剂存在下发生糖环6-位羟基的选择性酯化反
应，得到化合物5；
[0027]
e)将生成的化合物5在催化剂存在下，选择性脱除烯丙基保护基，得到化合物6；
[0028]
f)将生成的化合物6在催化剂存在下，选择性脱除萘亚甲基保护基，得到目标海洋黄酮苷1。
[0029]
在一种或多种实施方式中，步骤a)中酸性催化剂为氯化亚砜、浓硫酸、无水四氯化锡中的一种或多种，优选氯化亚砜；
[0030]
优选地，灯盏花乙素与酸性催化剂的摩尔比为1：1.0～1：10.0，优选1：5.0。
[0031]
在一种或多种实施方式中，步骤b)中所述碱性催化剂为无水碳酸钾、n,n-二异丙基乙胺、氢化钠中的一种或多种，优选无水碳酸钾；
[0032]
优选地，化合物2与碱性催化剂的摩尔比优选1：2.0～1：8.0，进一步优选1：5.0；
[0033]
优选地，步骤b)中采用的有机溶剂为n,n-二甲基甲酰胺，四氢呋喃、乙腈中的一种或多种，优选n,n-二甲基甲酰胺。
[0034]
在一种或多种实施方式中，步骤c)中采用的还原剂为硼氢化钠、四氢铝锂、雷尼镍中的一种或多种，优选硼氢化钠；
[0035]
优选地，化合物3与还原剂的摩尔比优选1：2.0～1：20.0，进一步优选1：10.0；
[0036]
优选地，步骤c)中采用的有机溶剂为甲醇，乙醇、异丙醇、四氢呋喃、乙腈中的一种或它们的混合物，优选甲醇。
[0037]
在一种或多种实施方式中，步骤d)中采用的催化剂为二甲基二氯化锡；
[0038]
优选地，所述缚酸剂为n,n-二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯中的一种或多种，优选n,n-二异丙基乙胺；
[0039]
优选地，化合物4与缚酸剂的摩尔比1：1.0～1：5.0，进一步优选1：3.0；
[0040]
优选地，步骤d)中采用的有机溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷、乙腈中的一种或多种，优选四氢呋喃。
[0041]
在一种或多种实施方式中，步骤e)中所述催化剂为四三苯基膦钯，氯化钯，醋酸钯中的一种或多种，优选四三苯基膦钯；优选地，化合物5与催化剂的摩尔比1：0.01～1：0.10，进一步优选1：0.05。
[0042]
在一种或多种实施方式中，步骤f)中所述催化剂为三氟乙酸，浓硫酸，醋酸中的一种或多种，优选三氟乙酸。
[0043]
具体地，合成路线如下：
[0044][0045]
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的解释和说明。
[0046]
实施例1
[0047]
1)化合物2的制备
[0048]
500ml圆底烧瓶中加入200ml无水甲醇，冰浴下缓慢滴加氯化亚砜(7.25ml,100mmol)，滴加完毕撤去冰浴，室温继续搅拌1.0h。然后加入灯盏花乙素(4.62g,10mmol)，室温搅拌9.0h后，tlc(v
乙酸乙酯
:v
异丙醇
:v
水
＝4:2:1)反应完全。直接过滤得灯盏花乙素甲酯2(4.67g,98％)；1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.85(s,1h,5-oh),10.39(s,1h,4
’‑
oh),7.93(d,j＝9.0hz,2h,h-2’,h-6’),7.00(s,1h,h-8),6.94(d,j＝9.0hz,2h,h-3’,h-5’),6.81(s,1h,h-3),5.28(d,j＝7.0hz,1h,h-1”),4.20(d,j＝6.0hz,1h,h-2”),3.70-3.90(3h,m,
other sugarprotons),3.68(3h,s,-och3)；
13
c-nmr(125mhz,dmso-d6):δ182.8,169.7,164.5,161.6,151.3,149.4,147.3,130.8,128.9,121.7,116.4,106.3,102.9,100.2,93.9,75.7,75.4,73.1,71.8,52.4(-och3)。
[0049]
2)化合物3的制备
[0050]
100ml圆底烧瓶中将化合物2(1.19g,2.50mmol)溶于35ml n,n-二甲基甲酰胺中，室温搅拌下依次加入n,n-二异丙基乙胺(2.20ml,12.50mmol)、2-萘甲基溴(1.39g,6.25mmol)。室温搅拌过夜后，tlc(v
二氯甲烷
:v
甲醇
＝20:1)原料消失。将反应体系倒入100ml冰水中，乙酸乙酯(40ml
×
3)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，干法上样柱层析得化合物3(1.65g,87％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.01(s,1h),8.04(t,j＝8.7hz,4h),7.98
–
7.88(m,6h),7.75(d,j＝8.4hz,1h),7.60(d,j＝8.4hz,1h),7.52(dd,j＝9.1,6.7hz,4h),7.26(d,j＝8.7hz,2h),7.15(s,1h),6.94(s,1h),5.75(d,j＝5.2hz,1h),5.56(d,j＝5.3hz,1h),5.47(d,j＝7.5hz,1h),5.45
–
5.37(m,3h),5.28(d,j＝11.2hz,1h),5.14(d,j＝11.2hz,1h),4.26(d,j＝9.5hz,1h),3.66(s,3h),3.46(ddd,j＝14.0,10.6,5.7hz,3h)；
13
c-nmr(150mhz,dmso-d6):δ182.37,169.24,163.86,161.56,156.12,152.87,152.27,135.21,134.09,132.77,132.72,132.65,132.62,131.32,128.43,128.19,127.90,127.83,127.68,127.64,127.56,126.85,126.55,126.41,126.27,126.12,126.06,125.74,123.00,115.52,105.94,103.51,99.33,93.88,75.77,75.34,74.25,72.98,71.37,69.73,52.02；esi-hrms m/z[m h]

calcd for c
44h37o12
:757.2280；found:757.2286.
[0051]
3)化合物4的制备
[0052]
将化合物3(1.20g,1.59mmol)悬浮于甲醇30ml中，室温剧烈搅拌下少量多次加入硼氢化钠(0.91g,23.85mmol)。3.0h后tlc(v
二氯甲烷
∶v
甲醇
＝15：1)检测显示反应完全。向反应体系中加入30ml10％乙酸溶液，乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，有机相减压浓缩得粗品，将所得粗品悬浮于50ml乙酸乙酯，加热回流30分钟后，自然冷却，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，真空干燥得淡黄色固体4(0.98g,85％)。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.00(s,1h),8.17
–
7.85(m,10h),7.76(d,j＝7.3hz,1h),7.60(d,j＝7.7hz,1h),7.52(s,4h),7.25(d,j＝7.5hz,2h),7.09(s,1h),6.95(s,1h),5.60(s,1h),5.40(s,2h),5.22(dt,j＝36.7,14.3hz,5h),4.68(s,1h),3.74(s,1h)；
13
c-nmr(150mhz,dmso-d6):δ182.42,163.88,161.60,156.70,152.71,152.35,135.34,134.15,132.82,132.78,132.70,132.67,131.39,128.51,128.25,127.97,127.89,127.72,127.61,126.94,126.65,126.59,126.48,126.34,126.18,126.11,125.78,123.04,115.58,105.82,103.50,100.17,94.40,77.34,76.88,74.30,73.42,69.76,69.65,60.71,54.95；esi-hrms m/z[m h]

calcd for c
43h37o11 729.2330,found 729.2314.
[0053]
4)化合物5的制备
[0054]
室温氮气保护下将化合物4(0.73g,1.0mmol)及二甲基二氯化锡(33.0mg,0.15mmol)溶于无水四氢呋喃(20ml)。室温搅拌10min后，0℃下依次加入n,n-二异丙基乙胺(530μl,3.0mmol)以及对香豆酰氯7(0.33g,1.5mmol)。10min后撤去冰浴，室温搅拌过夜。加入甲醇终止反应，将反应体系浓缩，向残余物中加入50ml乙酸乙酯，依次用20ml 1m盐酸，20ml饱和食盐水洗涤。合并有机相、无水硫酸钠干燥、减压浓缩柱层析得白色固体5(0.71g,78％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.00(s,1h),8.10
–
7.85(m,10h),7.75(d,j＝8.3hz,1h),7.52(dt,j＝24.2,12.4hz,6h),7.24(d,j＝8.3hz,2h),7.12(d,j＝8.4hz,2h),7.04(s,
1h),6.85(s,1h),6.63(d,j＝8.3hz,2h),6.32(d,j＝16.0hz,1h),6.06
–
5.89(m,1h),5.73(t,j＝6.9hz,1h),5.50(d,j＝5.1hz,1h),5.42(d,j＝4.7hz,1h),5.39
–
5.10(m,6h),4.59(d,j＝10.9hz,1h),4.45(d,j＝4.7hz,2h),4.25
–
4.11(m,1h),3.92(d,j＝7.6hz,1h),3.61
–
3.50(m,2h),3.32(dd,j＝14.1,9.1hz,1h)；
13
c nmr(150mhz,dmso-d6)δ182.33,166.33,163.70,161.48,159.87,156.42,152.75,152.24,144.51,135.26,134.09,133.29,132.80,132.75,132.69,132.66,131.33,129.76,128.22,127.93,127.85,127.70,127.68,127.58,126.97,126.67,126.52,126.45,126.31,126.13,126.08,125.72,125.72,122.86,117.68,115.37,114.87,114.71,105.83,103.27,99.66,94.14,76.57,74.29,74.05,73.22,70.11,69.69,68.23,63.53；esi-hrms m/z[m h]

calcd for c
55h47o13
:915.3011；found:915.3016.
[0055]
5)化合物6的制备
[0056]
将化合物5(482mg,0.50mmol)溶于10ml无水甲醇及10ml无水四氢呋喃的混合溶剂中，氮气保护下加入四三苯基膦钯(28.8mg,0.025mmol)。室温搅拌反应10min后，加入无水碳酸钾(207mg,1.50mmol)。1.0h后tlc监测显示反应完全，加入阳离子树脂中和、过滤、浓缩柱层析得化合物6(354mg,81％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.99(s,1h),9.97(s,1h),8.02(t,j＝9.1hz,5h),7.92(dd,j＝14.0,7.2hz,5h),7.75(d,j＝8.3hz,1h),7.60(d,j＝8.6hz,1h),7.57
–
7.48(m,4h),7.44(d,j＝15.9hz,1h),7.17(t,j＝8.2hz,4h),7.05(s,1h),6.88(s,1h),6.54(d,j＝8.4hz,2h),6.25(d,j＝15.9hz,1h),5.67(d,j＝5.4hz,1h),5.45(d,j＝5.3hz,1h),5.40
–
5.33(m,3h),5.32
–
5.26(m,2h),5.14(d,j＝11.2hz,1h),4.53(d,j＝11.0hz,1h),4.22
–
4.10(m,1h),3.89(d,j＝7.9hz,1h),3.50(dd,j＝13.9,7.8hz,1h),3.17(d,j＝5.1hz,1h)；
13
c nmr(150mhz,dmso-d6)δ182.35,166.49,163.79,161.53,159.73,156.44,152.73,152.24,145.01,135.24,134.10,132.80,132.73,132.67,131.30,130.01,128.27,128.21,127.92,127.86,127.68,127.57,126.95,126.65,126.59,126.44,126.30,126.13,126.07,125.79,124.76,122.90,115.57,115.43,113.58,105.82,103.32,99.72,94.20,76.55,74.26,73.97,73.18,70.01,69.73,63.40；esi-hrms m/z[m h]

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52h43o13
:875.2698；found:875.2703.
[0057]
6)6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷1的制备
[0058]
0℃下将化合物6(350mg,0.4mmol)溶于22ml三氟乙酸/甲苯(v/v＝10:1)的混合溶剂体系中，保温继续搅拌30min。随后，自然升温至室温继续搅拌反应3.0h。向反应体系中加入30ml甲苯，减压浓缩后sephadex lh-20柱层析得6-羟基芹菜素-7-o-(6
”‑
o-[e]-对香豆酰基)-β-吡喃葡萄糖苷1(172mg,73％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.72(s,1h,5-oh),10.41(s,1h,4
”‑
oh),10.03(s,1h,4
’‑
oh),8.59(s,1h,6-oh),7.93(s,2h,h-2’,h-6’),7.48(d,j＝16.2hz,1h,h-7
”’
),7.27(s,2h,h-2
”’
,h-6
”’
),6.94(d,j＝9.4hz,3h,h-8,h-3’,h-5’),6.79(s,1h,h-3),6.59(s,2h,h-3
”’
,h-5
”’
),6.30(d,j＝16.0hz,1h,h-8
”’
),5.52(s,1h,oh from sugarring),5.43(s,1h,oh from sugarring),5.31(s,1h,oh from sugarring),5.12(s,1h,h-1”),4.47(d,j＝11.4hz,1h,h-6”b),4.24(s,1h,h-6”a),3.87(s,1h,h-5”)；
13
c nmr(150mhz,dmso-d6)δ182.34(c-4),166.54(c-9
”’
),164.07(c-2),161.28(c-6’),159.81(c-4
”’
),151.26,149.04(c-7),146.72(c-9),145.08(c-7
”’
),130.44(c-2),130.36(c-6
”’
),130.04(c-6),128.31(c-2’,c-6’),124.73(c-1
”’
),121.19
(c-1”),116.00(c-3’,c-5’),115.84(c-3
”’
),115.63(c-5
”’
),113.50(c-8
”’
),105.78(c-10),102.37(c-3),100.32(c-1”),93.59(c-8),75.66(c-3”),73.79(c-5”),72.95(c-2”),70.06(c-4”),63.45(c-6”)；esi-hrms m/z[m h]

calcd for c
30h27o13
:595.1451；found:595.1428.
[0059]
实施例2
[0060]
实施例1步骤1)中，将催化剂氯化亚砜替换为浓硫酸，其它操作同实施例1，该步骤所得相应产物的收率为85％。
[0061]
实施例3
[0062]
实施例1步骤2)中，将缚酸剂n,n-二异丙基乙胺替换为无水碳酸钾，其它操作同实施例1，该步骤所得相应产物的收率为87％。
[0063]
实施例4
[0064]
实施例1步骤3)中，将溶剂甲醇替换为乙醇，硼氢化钠的用量由15个当量替换为10铬当量，其它操作同实施例1，该步骤所得相应产物的收率为77％。
[0065]
实施例5
[0066]
实施例1步骤4)中，将溶剂四氢呋喃替换为二氯甲烷，将缚酸剂n,n-二异丙基乙胺替换为三乙胺，其它操作同实施例1，该步骤所得相应产物的收率为70％。
[0067]
实施例6
[0068]
实施例1步骤5)中，将催化剂四三苯基膦钯换为醋酸钯，其它操作同实施例1，该步骤所得相应产物的收率为74％。
[0069]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。