含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂的破乳方法和包埋率检测方法与流程

含有桉油精、柠檬烯和
α-蒎烯的口服乳剂的破乳方法和包埋率检测方法
技术领域
1.本发明涉及医药领域。具体地，本发明涉及含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂的破乳方法和桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的包埋率检测方法


背景技术：

2.含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯(简称桉柠蒎)、水、表面活性剂、助表面活性剂形成水包油型微乳液。
3.包封率是指被包裹的桉柠蒎在口服乳剂中占活性成分总量的百分比，是制剂制备工艺和质量评价的重要指标，也是提高药物治疗指数、降低药物不良反应并减小药物剂量的关键。因此包封率是对桉柠蒎口服乳剂质量评价的重要考察项目。其计算公式如下：
[0004][0005]
由上式可知，计算桉柠蒎口服乳剂的包封率，需要检测乳剂中桉柠蒎的总量与游离的桉柠蒎量。桉柠蒎总量的测定，需要对微乳液进行破乳，将桉柠蒎从微乳滴中释放出来，测得的包封率才准确可靠。游离的桉柠蒎油量直接提取即可实现。
[0006]
由于桉柠蒎口服乳剂的粒径为纳米级别，形成的微乳液非常稳定，导致破乳比较困难。因此，目前针对桉柠蒎口服乳剂的桉柠蒎包埋率的检测方法仍有待研究。


技术实现要素：

[0007]
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术问题。为此，本发明提出了含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂的破乳方法、含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的包埋率检测方法以及含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂质量控制方法，利用该破乳方法可以使口服乳剂完全破乳，以释放其中包埋的桉油精、柠檬烯和α-蒎烯，从而准确地测定其包埋率，重复性好，适于推广应用。
[0008]
在本发明的一个方面，本发明提出了一种含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂的破乳方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将所述口服乳剂与异丙醇进行混合。
[0009]
由于桉柠蒎口服液的粒径为纳米级别，微乳液非常稳定，发明人尝试了多种常规的破乳方法，例如采用乙腈、无水硫酸钠、浓hcl、冷冻等方法，即便是在超声、离心等辅助处理后，均无法实现乳剂的快速、完全破乳。甲醇和乙醇、正辛醇均不能破乳。尝试采用葡聚糖凝胶树脂g25和g50柱层析将乳剂分层提取，也无法实现完全破乳。进而，发明人经过大量理论分析和实验优化，发现采用异丙醇可以有效地实现破乳目的，其与界面膜作用后，取代油水界面膜上的乳化剂，形成新的界面膜。该界面膜的弹性、张力、寿命都有所降低。由于异丙醇的化学结构式中有支链且分子量小，在外力下(如手动振摇)，异丙醇的支链分子能够进入表面活性剂分子结构空隙，界面膜破裂，使桉柠蒎从膜内释放出来。由于异丙醇的溶解性较好，破乳后所有成分均与其互溶，整个体系形成澄清透明、稳定的溶液，桉柠蒎完全溶解，
且不会影响桉柠蒎的质构和特性，有助于后续对桉柠蒎实施检测，例如测定包埋率，应用前景广泛。
[0010]
根据本发明的实施例，上述含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂的破乳方法还可以具有如下附加技术特征：
[0011]
根据本发明的实施例，所述口服乳剂与异丙醇的体积比为1：(4～8)。当异丙醇的添加量较低时，需要辅助超声、离心处理，才能够实现乳剂的完全破乳，整个实验过程步骤繁琐、花费时间较长。并且，由于口服乳剂中含有油脂(如大豆油)，且桉柠蒎在油脂中溶解度较好，若要准确测定桉柠蒎含量，需要将油脂完全溶解。若异丙醇较少，则整个体系中水含量相对较高，很难用极性较强或者极性大于异丙醇的溶剂(如甲醇、乙醇、乙腈等)将体系完全溶解，形成澄清透明的溶液。因此，需要用极性弱的溶剂(如正己烷)对主成分进行萃取，在收集萃取液的步骤中，很难将上清液收集完全并对其准确测定，因此，检测到的桉柠蒎含量不够准确。
[0012]
为此，发明人进一步增加了异丙醇的添加量，当口服乳剂与异丙醇的体积比为1：(4～8)时，无需辅助超声、离心等设备，仅采用手动振摇即可实现完全破乳，得到澄清透明的溶液。并且，整个体系中含水量降低，口服乳剂中的成分在异丙醇中溶解较好，实验结果表明在所选异丙醇比例下，桉柠蒎及油脂可以很好地溶解在异丙醇中，形成澄清透明溶液，因此，不需要再对主成分进行萃取。整个破乳过程步骤少、操作简单、耗时少、活性成分无损失，检测的含量结果准确可靠。
[0013]
根据本发明的实施例，口服乳剂包括桉油精、柠檬烯、α-蒎烯、油脂、乳化剂、助乳化剂和水。本发明对于油脂、乳化剂和助乳化剂的类型不做严格限定，可以采用本领域公知的物质，具体可以根据实际情况灵活选择。
[0014]
在本发明的另一方面，本发明提出了一种含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的包埋率检测方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：采用前面所述破乳方法对含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂进行破乳处理，得到破乳液；用第一稀释剂将所述破乳液进行稀释，得到破乳样品溶液；将所述口服乳剂与第二稀释剂进行混合，静置，取上清液，得到未破乳样品溶液；将桉油精、柠檬烯、α-蒎烯和第三稀释剂进行稀释，得到对照品溶液；分别测定所述破乳样品溶液、未破乳样品溶液和对照品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量；基于所述破乳样品溶液、未破乳样品溶液和对照品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量，确定所述口服乳剂中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的包埋率。
[0015]
如前所述，采用异丙醇可以快速、完全地破乳。并且，由于异丙醇的溶解性较好，破乳后所有成分均与其互溶，整个体系形成澄清透明、稳定的溶液，桉柠蒎油完全溶解，且不会影响桉柠蒎的质构和特性，从而准确地测定其包埋率，重复性好。无需辅助超声、离心等处理，整个检测步骤操作简便、用时短。
[0016]
根据本发明的实施例，所述第一稀释剂选自乙酸乙酯。若增加异丙醇的添加量以取代稀释剂的添加，一方面由于异丙醇价格偏高，增加了检测成本。另一方面，针对油脂含量偏高的口服乳剂而言，即便是提高异丙醇添加量也很难将油脂完全溶解，需添加比其极性弱的乙酸乙酯助溶。发明人经过大量实验筛选，乙酸乙酯可以溶解桉柠蒎、油脂、表面活性剂、水等成分，并与异丙醇共同形成均一体系。而且，乙酸乙酯对破乳起到一定的促进作用，进一步实现完全破乳。其他溶剂，例如正己烷，虽然也可以溶解所有成分，但是其与异丙
醇的互溶性偏低，容易产生分层，即有部分桉柠蒎溶于正己烷中，部分溶于异丙醇中，后续仅检测正己烷中的桉柠蒎含量，会造成异丙醇中的桉柠蒎损失，导致包埋率检测结果偏低。
[0017]
根据本发明的实施例，所述第二稀释剂选自正己烷或环己烷。采用第二稀释剂稀释口服乳剂，以便于将游离的桉柠蒎(即未被包埋的桉柠蒎)溶解其中。发明人经过大量实验筛选，正己烷和环己烷可以有效地萃取出游离的桉柠蒎，以便于后续测定其含量。若采用其他溶剂，例如乙酸乙酯，其会起到一定的破乳作用，导致包埋的桉柠蒎游离出来，从而使得包埋率的检测结果偏高。
[0018]
根据本发明的实施例，所述第三稀释剂选自乙酸乙酯或正己烷。乙酸乙酯和正己烷均可以有效地溶解桉柠蒎，形成均一体系，以便于后续测定其含量。
[0019]
根据本发明的实施例，所述破乳样品溶液、未破乳样品溶液和对照品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量是采用气相色谱法进行检测的。由此，以便提高检测结果的准确性，且操作简便。
[0020]
根据本发明的实施例，基于下列公式计算所述口服乳剂中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的包埋率：包埋率＝(所述破乳样品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量之和—所述未破乳样品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量之和)
×
100％
÷
(所述破乳样品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量之和)。由此，可以计算得到口服乳剂中桉柠蒎的包埋率。
[0021]
需要说明的是，前面针对含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂的破乳方法所描述的特征和优点，同样适用于该包埋率检测方法，在此不再赘述。
[0022]
在本发明的又一方面，本发明提出了一种含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的口服乳剂质量控制方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：按照前面所述包埋率检测方法确定所述口服乳剂的包埋率；若所述口服乳剂的包埋率小于阈值，则指示所述口服乳剂质量不达标；若所述口服乳剂的包埋率大于等于阈值，则指示所述口服乳剂质量达标。如前所述，采用前述检测包埋率的方法可以准确测定口服乳剂中桉柠蒎的包埋率，从而可以判断该口服乳剂的质量是否符合要求。具体地，阈值大小不作严格限定，可以根据实际需要灵活选择。
[0023]
需要说明的是，前面针对包埋率检测方法所描述的特征和优点，同样适用于该质量控制方法，在此不再赘述。
[0024]
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
[0025]
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0026]
桉柠蒎口服乳剂的组成：
[0027]
桉油精14份、柠檬烯15份、α-蒎烯6份、大豆油15份、吐温80和司盘80复合乳化剂2份、1,2-丙二醇6份、水30份。
[0028]
实施例1
[0029]
(1)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置于同一50ml容量瓶中，加乙酸乙酯溶解、稀释并定容至刻度，即得。
[0030]
(2)破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.5ml置于10ml容量瓶中，加3ml异丙醇，轻轻摇匀后，得到澄清透明的溶液。加乙酸乙酯稀释、定容至刻度，摇匀，即得。
[0031]
(3)未破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.5ml置于10ml容量瓶中，加正己烷稀释、定容至刻度，摇匀，萃取，静置10min后，取上清液，即得。
[0032]
(4)对照品溶液、破乳样品溶液、未破乳样品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。按外标法计算三种主成分的含量，根据包封率的计算公式，计算桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率分别为69.7％、87.6％、88.5％。
[0033]
包埋率＝(所述破乳样品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量之和—所述未破乳样品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量之和)
×
100％
÷
所述破乳样品溶液中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯含量之和。
[0034]
实施例2
[0035]
(1)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置于同一100ml容量瓶中，加乙酸乙酯溶解、稀释并定容至刻度，即得。
[0036]
(2)破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.2ml置于10ml容量瓶中，加1ml异丙醇，轻轻摇匀后，得到澄清透明的溶液。加乙酸乙酯稀释、定容至刻度，摇匀，即得。
[0037]
(3)未破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.2ml置于10ml容量瓶中，加正己烷稀释、定容至刻度，摇匀，萃取，静置10min后，取上清液，即得。
[0038]
对照品溶液、破乳样品溶液、未破乳样品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。按外标法计算三种主成分的含量，根据包封率的计算公式，计算桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率分别为67.3％、86.7％、88.5％。
[0039]
实施例3
[0040]
(1)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置于同一100ml容量瓶中，加乙酸乙酯溶解、稀释并定容至刻度，即得。
[0041]
(2)破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.5ml置于10ml容量瓶中，加4ml异丙醇，轻轻摇匀后，得到澄清透明的溶液。加乙酸乙酯稀释、定容至刻度，摇匀，即得。
[0042]
(3)未破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.5ml置于10ml容量瓶中，加正己烷稀释、定容至刻度，摇匀，萃取，静置10min后，取上清液，即得。
[0043]
对照品溶液、破乳样品溶液、未破乳样品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。按外标法计算三种主成分的含量，根据包封率的计算公式，计算桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率分别为67.5％、87.8％、88.3％。
[0044]
实施例4
[0045]
(1)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置于同一100ml容量瓶中，加乙酸乙酯溶解、稀释并定容至刻度，即得。
[0046]
(2)破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.5ml置于10ml容量瓶中，加3ml乙醇，轻轻摇匀后，为淡白色乳状溶液。加乙酸乙酯稀释、定容至刻度，摇匀，即得。
[0047]
(3)未破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.5ml置于10ml容量瓶中，加正己烷稀释、定容至刻度，摇匀，萃取，静置10min后，取上清液，即得。
[0048]
对照品溶液、破乳样品溶液、未破乳样品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。按外标法计算三种主成分的含量，根据包封率的计算公式，计算桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率分别为12.9％、1.7％、3.9％。
[0049]
实施例5
[0050]
(1)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置于同一100ml容量瓶中，加乙酸乙酯溶解、稀释并定容至刻度，即得。
[0051]
(2)破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.2ml置于10ml容量瓶中，加1ml异丙醇，轻轻摇匀后，得到澄清透明的溶液。加乙酸乙酯稀释、定容至刻度，摇匀，即得。
[0052]
(3)未破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂0.2ml置于10ml容量瓶中，加环己烷稀释、定容至刻度，摇匀，萃取，静置10min后，取上清液，即得。
[0053]
对照品溶液、破乳样品溶液、未破乳样品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。按外标法计算三种主成分的含量，根据包封率的计算公式，计算桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率分别为68.1％、86.7％、88.2％。
[0054]
对比例1
[0055]
(1)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置于同一50ml容量瓶中，加正己烷溶解、稀释并定容至刻度，即得。
[0056]
(2)破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂10ml置于20ml样品瓶中，加5ml异丙醇，摇匀后，超声20min，得到浑浊的悬浊液的溶液。12000转/min离心10min后，转移至25ml分液漏斗中，加2ml正己烷连续萃取三次。收集上清液后，准确称重。取上清液300mg，置于10ml容量瓶中，加正己烷稀释、定容至刻度，摇匀，即得。
[0057]
(3)未破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂10ml置于100ml容量瓶中，加正己烷稀释、定容至刻度，摇匀，萃取，静置10min后，取上清液，即得。
[0058]
(4)对照品溶液、破乳样品溶液、未破乳样品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。按外标法计算三种主成分的含量，根据包封率的计算公式，计算桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率分别为60.0％、84.9％、86.2％。
[0059]
在该对比例中，由于异丙醇的添加量过少，破乳不完全，导致桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率偏低。并且，需要辅助超声和离心处理以实现破乳。另外，由于口服乳剂中含有大豆油，且桉柠蒎在大豆油中溶解度较好，若要准确测定桉柠蒎含量，需要将大豆油完全溶解。由于采用的异丙醇较少，则整个体系中水含量相对较高，很难用极性较强或者极性大于异丙醇的溶剂(如甲醇、乙醇、乙腈等)将体系完全溶解，形成澄清透明的溶液。因此，需要用极性弱的溶剂(如正己烷)对主成分进行萃取，在收集萃取液的步骤中，很难将上清液收集完全并对其准确测定，因此，检测到的桉柠蒎含量不够准确。整个检测过程步骤多、操作复杂、用时长。
[0060]
对比例2
[0061]
(1)对照品溶液：精密称取工作对照品桉油精50mg、柠檬烯35mg、α-蒎烯12mg，置于同一100ml容量瓶中，加正己烷溶解、稀释并定容至刻度，即得。
[0062]
(2)破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂1ml置于15ml离心管中，准确称定，加10ml乙腈，摇匀后，在恒温水浴振荡器中，以150转/min的速度水平振荡30min。之后在2500转/min离心20min，后转移至50ml容量瓶中，加正己烷定容至刻度，摇匀静置。取上清液
用于检测。
[0063]
(3)未破乳样品溶液：取乳白色的桉柠蒎口服乳剂1ml置于5ml离心管中，2500转/min离心20min，后转移至50ml容量瓶中，加正己烷稀释、定容至刻度，摇匀，萃取，静置10min后，取上清液，即得。
[0064]
(4)对照品溶液、破乳样品溶液、未破乳样品溶液各取1μl，注入气相色谱仪检测。按外标法计算三种主成分的含量，根据包封率的计算公式，计算桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率分别为14.1％、60.4％与64.6％。
[0065]
在该对比例中，采用乙腈进行破乳，破乳效果不佳，导致桉油精、柠檬烯、α-蒎烯的包封率均偏低。并且，需要辅助振荡器加以破乳，整个检测过程步骤多、操作复杂、用时长。
[0066]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0067]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。