内皮细胞特异性pfn1基因敲除小鼠模型的构建方法与流程

技术特征：
1.一种内皮细胞特异性pfn1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于：具体包括以下步骤：(1)基于sgrna的设计原则，在鼠尾5’端和3’端靶位点构建cas9/sgrna质粒，构建打靶载体；(2)cas9/sgrna、打靶载体显微注射到小鼠受精卵中，将构建好的以c57bl/6基因背景的pfn1-flox / 小鼠与c57bl/6基因背景的ve-cdherin-cre小鼠杂交，得到第1代杂合后代小鼠；(3)对第1代杂合后代小鼠经过基因鉴定，选取pfn1-flox / 和ve-cadherin-cre / 双阳性的小鼠继续相互杂交得到第2代杂合后代小鼠；(4)重复步骤(2)至第5代杂合后代小鼠；(5)选取4周大小的第5代杂合后代小鼠雄性pfn1-flox / -ve-cdherin-cre / 的小鼠；(6)为步骤(4)选取的雄性pfn1-flox / -ve-cdherin-cre / 的小鼠连续腹腔注射5天他莫昔芬，注射剂量为10mg/kg，诱导pfn1-flox / -ed-cre / 小鼠特异性敲除内皮细胞pfn1。2.根据权利要求1所述的一种内皮细胞特异性pfn1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于：所述ve-cdherin为内皮细胞特异性标记物。3.根据权利要求1所述的一种内皮细胞特异性pfn1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于：所述cas9/sgrna质粒构建包括：(1)基于sgrna的设计原则，在鼠尾5’端和3’端靶位点区域共设计14条sgrna：5’guideguide#1：cgggagggtaccggatatag gggguide#2：ttcttaggagcccggacgcc tggguide#3：gggggagcggaagttcgaat gggguide#4：atatccggtaccctcccgcc cggguide#5：aagttcccctacgccgggcc cggguide#6：aagttcccctacgccgggcc cggguide#7：acttaattagagagcccccg ggg3’guideguide#8：ataccactatagaggggcct aggguide#9：ccattacatactaattcaac tggguide#10：ccagttgaattagtatgtaa tggguide#11：gcaggcttggacccattctc tggguide#12：gagaatgggtccaagcctgc gggguide#13：ccaagcctgcgggtgaggca gggguide#14：ccctgcctcacccgcaggct tgg(2)按照已设计sgrna序列合成oligos，通过退火聚合的方式连入pcs载体，连接产物转化后送样测序验证正确。

技术总结
本发明属于动物模型及其应用领域，尤其涉及一种内皮细胞特异性pfn1基因敲除小鼠模型的构建方法。其首先将构建好的以C57BL/6基因背景的pfn1-flox / 小鼠与C57BL/6基因背景的VE-Cdherin-Cre小鼠杂交，得到第1代杂合后代小鼠；选取双阳性的小鼠继续相互杂交得到第2代杂合后代小鼠至第5代杂合后代小鼠；选取4周大小的第5代杂合后代小鼠雄性小鼠；通过连续腹腔注射5天他莫昔芬，诱导小鼠特异性敲除内皮细胞pfn1。皮细胞pfn1。皮细胞pfn1。


技术研发人员：陈美芳 杨达峰 杨梅 肖智林 李振宇 丁志勇 蹇静 喻南 张丽辉
受保护的技术使用者：中南大学湘雅医院
技术研发日：2021.09.15
技术公布日：2022/3/8