红茶叶提取物及其制备方法与流程

1.本说明书中公开红茶叶提取物及其制备方法。


背景技术：

2.茶(tea)是全世界上除了水之外消费最多的饮料之一，例如，有绿茶等非发酵茶(non
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fermented tea)、乌龙茶等半发酵茶(semi-fermented tea)、红茶等发酵茶(fermented tea) 等。即，根据是否有发酵，区分为未发酵的绿茶和作为发酵茶的乌龙茶、红茶等，根据发酵程度之差，区分为作为部分发酵茶的乌龙茶和作为完全发酵茶的红茶。
3.所述发酵茶会根据发酵的时间、温度等条件而味道、颜色等不同，这是因为通过发酵，茶叶中存在的氧化酶发生作用而生成茶黄素(theaflavin)、茶红素(thearubigin)、茶褐素(t heabrownin)等成分，通过所述成分，发酵茶的味道、颜色等发生变化。即，具有特殊的香味和颜色的发酵茶的品质可以由茶叶的发酵(氧化)程度来决定。
4.然而，现有的与发酵茶有关的技术大部分是主要局限在发酵方法，尚未有对提取条件的研究，另外，对发酵茶的特定成分的具体研究很少，由此与提取方法有关的技术也有很多不足之处。在大韩民国公开专利第10-2017-0125545号中公开了红茶、普洱茶的成分在前脂肪细胞中抑制ptp1b的表达，然而仍旧需要与各个具体成分有关的有效的提取技术以及由此发挥优秀效果的组合物的开发。
5.【现有技术文献】
6.【专利文献】
7.(专利文献1)大韩民国公开专利第10-2017-0125545号


技术实现要素：

8.技术问题
9.本公开是为了解决如上所述问题而提出的，本公开的目的在于，提供以高含量含有茶褐素的红茶叶提取物及其制备方法。
10.技术方案
11.为了达成所述本公开的目的，本公开提供以高含量含有茶褐素的红茶叶提取物及其制备方法。
12.根据本发明的一实施例的红茶叶提取物，其以提取物的总重量为基准，含有超过5重量％的量的茶褐素。
13.另外，本发明提供一种组合物，其作为有效成分含有所述红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素。
14.另外，本发明提供一种在制备具有选自由抗氧化用、抗老化用、抗炎用以及因应激现象受损的皮肤修复用而成的组中的一种以上的用途的组合物中，所述红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素的用途。
15.根据本发明的一实施例的一种红茶叶提取物的制备方法，包括：在硬水中热水提
取红茶叶的步骤。
16.发明效果
17.根据本公开，通过以高含量含有茶褐素，从而具有抗氧化效果、抗老化效果、抗炎效果以及因应激现象受损的皮肤修复效果优秀的优点。
附图说明
18.图1至图5是示出根据一例的提取物的成分分析结果的图表；
19.图6是示出细胞毒性评价结果的图表；
20.图7是示出细胞内活性氧生成评价结果的图表；
21.图8以及图9是示出mmp-1表达抑制功效评价结果的图表；
22.图10是示出abts自由基清除能力评价结果的图表；
23.图11是示出线粒体膜电位恢复能力评价结果的图表；
24.图12至图14是示出mmp-1表达抑制功效评价结果的图表；
25.图15是示出细胞毒性评价结果的图表；
26.图16是示出人il-8基因表达功效评价结果的图表。
具体实施方式
27.本说明书中使用的术语是考虑到在本公开中的功能而尽量选择目前广泛使用的一般术语，然而其可以根据从事本领域的技术人员的意图、判例或者新技术的出现等而不同。另外，在特定情况下，还有申请人任意选定的术语，该情况下会在对应的发明的说明部分中详细记载其含义。因此，本公开中使用的术语不应作为单纯的术语的名称而应基于该术语所具有的含义和在本公开的整体内容进行定义。
28.未作其他定义时，不仅是技术上或者科学上的术语，在此使用的所有术语都应具有与本发明所属技术领域中具有通常知识的人通常所理解的相同的含义。通常理解的术语应被理解为与相关技术的文章中所具有的含义相一致的含义，在本公开中未作明确定义时，不应被解释为理想或者过分形式上的含义。
29.数值范围包括本公开中定义的数值。本说明书中定义的所有最大的数值限定如明确记载有低数值限定般包括所有更低的数值限定。本说明书中定义的所有最小的数值限定如明确记载有更高的数值限定般包括所有更高的数值限定。本说明书中定义的所有数值限定如明确记载有更窄的数值限定般包括所有更宽的数值范围内的更佳的所有数值范围。
30.以下，针对本公开参考实施例以及附图进行具体说明。然而，应明确不应由以下实施例以及附图限定本发明。
31.在一方面，本公开提供一种以提取物的总重量为基准，含有超过5重量％的量的茶褐素 (theabrownin)的红茶叶提取物。
32.所述“红茶”是指将山茶科的茶树(camellia sinensis)的芽、叶或者茎发酵70％至85％以上制成的茶，在本公开的一方面中，所述发酵不是酿造工业中由微生物的发酵，而是指由在叶等中含有的氧化酶的氧化。更加具体为，可以通过将芽、叶或者茎反复进行日光萎凋(在阳光下使其萎蔫)、室内静置(放置以蒸发水分)以及摇青(在芽、叶或者茎制造伤口的过程)过程来进行。此时，室内静置时间以及次数、摇青的时间以及次数越多，发酵程度越
高。
33.所述“提取物”与提取方法、提取溶剂或者提取物的形态无关，包括所有的从天然物质获取的成分、物质。所述提取方法可以包括提取从天然物质获得的成分、物质之后，通过其他方法进行加工或者处理的工艺。具体为，所述其他方法的加工或者处理可以为将提取物进一步发酵或者酶处理。因此，本公开中的提取物为包含发酵物、浓缩物、干燥物的广范围的概念，具体为，本公开中的提取物可以为发酵物。
34.所述“红茶叶提取物”是指将通过发酵所述红茶叶获取的红茶进行提取的提取物，与提取方法、提取溶剂或者提取物的形态无关，包括从红茶获取的所有的成分、物质。所述提取方法可以包括通过热、酸(acid)、碱(base)、酶等进行处理的工艺，另外，可以包括提取从红茶获得的成分、物质之后，通过其他方法进行加工或者处理的工艺。具体为，所述其他方法的加工或者处理可以为将红茶叶提取物进一步发酵或者酶处理等。因此，本公开中的红茶叶提取物为包含发酵物、浓缩物、干燥物的广范围的概念，具体为，本公开中的提取物可以为发酵物。另外，所述提取方法可以包括将所述红茶叶提取物进行减压浓缩而获得。所述减压浓缩具体可以在35至50℃下进行，然而不限于此。在所述范围的温度下进行减压浓缩时，本发明的红茶叶提取物中的多种成分的协同效应优秀。所述减压浓缩具体可以在600mmhg以上、 620mmhg以上、640mmhg以上、660mmhg以上、680mmhg以上、700mmhg以上、720mmhg 以上、740mmhg以上；760mmhg以下、740mmhg以下、720mmhg以下、700mmhg以下、 680mmhg以下、660mmhg以下、650mmhg以下、640mmhg以下、620mmhg以下、600mmhg 以下的条件下进行。
35.在由本公开的提取的所述“红茶叶提取物”中，以提取物的总重量为基准，以超过5重量％的高含量含有茶褐素(theabrownin)。所述“茶褐素”为儿茶素(catechin)成分通过多酚氧化酶(polyphenol oxidase或者phenolase)进行氧化聚合生成的多酚，更加具体为，可以以提取物的总重量为基准，含有超过5重量％、5.5重量％以上、6重量％以上、6.5重量％以上、7 重量％以上、7.5重量％以上、8重量％以上、8.5重量％以上、9重量％以上、9.5重量％以上、 10重量％以上；10重量％以下、10.5重量％以下、11重量％以下、11.5重量％以下、不足12 重量％的含量。
36.然而，本公开中的“红茶叶提取物”不仅是所述茶褐素成分，还是含有茶黄素(theaflavin)、茶红素(thearubigin)、儿茶素(catechin)等的多种物质的组合物，因此，本公开的组合物所发挥的效果是由通过所述多种物质的组合产生的协同效应产生的，而不是由单一的茶褐素成分产生的。
37.作为获得所述“红茶叶提取物”的提取方法，可以使用加热提取、冷浸提取、回流冷却提取或者超声波提取等，然而只要是本领域技术人员明确的提取方法就不受限制。针对为了获得“红茶叶提取物”而使用的提取溶剂，本说明书的红茶叶提取物可以为红茶叶的c
1-c6醇提取物、水提取物等，更加具体为，作为所述水可以使用纯净水、净化水、硬水、软水、天然水、海洋深层水、电解碱性离子水、电解酸性离子水、离子水以及分子簇水。然而，只要是本领域技术人员明确的提取溶剂就不受限制而使用。
38.根据本公开的一体现例，所述红茶叶提取物为红茶叶的硬水提取物。“硬度”是将1l水中含有的钙(ca)以及镁(mg)的量相加换算成碳酸钙(caco3)的量，根据其标准区分为软水(softwater)以及硬水(hardwater)。然而，区分所述软水以及硬水的标准是各个机构
不同，更加具体为，以世界卫生组织(world health organization，who)所提出的标准来看的话，如下分类：硬度60mg/l以下为“软水(soft water)”，硬度60-120mg/l为“中硬水(moderatelyhard water)”，硬度120-180mg/l为“硬水(hard water)”，硬度180mg/l以上为“强硬水(veryhard water)”。以韩国水资源公社所提出的标准来看的话，如下分类：硬度75mg/l以下为“软水”，硬度75-150mg/l为“适当的硬水”，硬度150-300mg/l为“硬水”，硬度300mg/l以上为“强硬水”。
39.作为本公开中使用的提取溶剂的所述“硬水”硬度可以为180mg/l以上、190mg/l以上、 200mg/l以上、210mg/l以上、220mg/l以上、230mg/l以上、240mg/l以上、250mg/l以上、 260mg/l以上、270mg/l以上、280mg/l以上、290mg/l以上、291mg/l以上、300mg/l以上； 230mg/l以下、240mg/l以下、250mg/l以下、260mg/l以下、270mg/l以下、280mg/l以下、 290mg/l以下、291mg/l以下、300mg/l以下、310mg/l以下、320mg/l以下、330mg/l以下、 340mg/l以下、350mg/l以下。更加具体为，所述硬水的硬度为218.23mg/l至325.74mg/l。
40.所述硬水包含选自由钙、镁、钾以及钠而成的组中的一种以上的矿物质，所述矿物质以硬水的总体积为基准，含有79.7mg/l至130.3mg/l的量。更加具体地，可以为75mg/l以上、 79.7mg/l以上、80mg/l以上、85mg/l以上、90mg/l以上、95mg/l以上、100mg/l以上、105mg/l 以上、110mg/l以上、115mg/l以上、120mg/l以上、125mg/l以上、130mg/l以上；80mg/l 以下、85mg/l以下、90mg/l以下、95mg/l以下、100mg/l以下、105mg/l以下、110mg/l 以下、115mg/l以下、120mg/l以下、125mg/l以下、130mg/l以下、130.3mg/l以下、135mg/l 以下、140mg/l以下。
41.针对各个矿物质成分，更加具体地，所述钙以硬水的总体积为基准，含有65mg/l至 100mg/l的量。更加具体为65mg/l以上、67.5mg/l以上、70mg/l以上、72.5mg/l以上、75mg/l 以上、77.5mg/l以上、80mg/l以上、82.5mg/l以上；77.5mg/l以下、80mg/l以下、82.5mg/l 以下、85mg/l以下、87.5mg/l以下、90mg/l以下、92.5mg/l以下、95mg/l以下、97.5mg/l 以下、100mg/l以下。
42.所述镁以硬水的总体积为基准，含有10mg/l至50mg/l的量。更加具体为10mg/l以上、 12.5mg/l以上、15mg/l以上、17.5mg/l以上、20mg/l以上、22.5mg/l以上、25mg/l以上、 26mg/l以上、27.5mg/l以上；25mg/l以下、26mg/l以下、27.5mg/l以下、30mg/l以下、 32.5mg/l以下、35mg/l以下、37.5mg/l以下、40mg/l以下、42.5mg/l以下、45mg/l以下、 47.5mg/l以下、50mg/l以下。
43.所述钾以硬水的总体积为基准，含有超过0mg/l至2mg/l的量。更加具体为超过0mg/l、 0.1mg/l以上、0.2mg/l以上、0.3mg/l以上、0.4mg/l以上、0.5mg/l以上、0.6mg/l以上、 0.7mg/l以上、0.8mg/l以上、0.9mg/l以上、1.0mg/l以上；1.0mg/l以下、1.1mg/l以下、 1.2mg/l以下、1.3mg/l以下、1.4mg/l以下、1.5mg/l以下、1.6mg/l以下、1.7mg/l以下、 1.8mg/l以下、1.9mg/l以下、2.0mg/l以下。
44.所述钠以硬水的总体积为基准，含有6mg/l至17mg/l的量。更加具体为6mg/l以上、 6.25mg/l以上、6.5mg/l以上、6.75mg/l以上；6.25mg/l以下、6.5mg/l以下、6.75mg/l以下、7mg/l以下、7.5mg/l以下、8mg/l以下、8.5mg/l以下、9mg/l以下、9.5mg/l以下、10mg/l 以下、10.5mg/l以下、11mg/l以下、11.5mg/l以下、12mg/l以下、12.5mg/l以下、13mg/l 以下、13.5mg/l以下、14mg/l以下、14.5mg/l以下、15mg/l以下、15.5mg/l以下、16mg/l 以下、
16.5mg/l以下、17mg/l以下、不足18mg/l。
45.一方面，作为按照含有的成分区分水的其他标准，有总溶解固体(total dissolved solids， tds)，所述总溶解固体是指含有钙、钠、镁、铁等矿物质成分的固体溶解在水中的量。固体主要以离子状态存在。以总溶解固体为0-250mg/l时为低(low)，250-800mg/l时为一般 (medium)，800mg/l以上为高(high)进行分类。
46.作为本公开中使用的提取溶剂的所述“硬水”其总溶解固体可以为300mg/l以上、325mg/l 以上、350mg/l以上、357mg/l以上、375mg/l以上、400mg/l以上、425mg/l以上、450mg/l 以上、475mg/l以上、500mg/l以上；375mg/l以下、400mg/l以下、425mg/l以下、450mg/l 以下、475mg/l以下、500mg/l以下、512mg/l以下、525mg/l以下、550mg/l以下。更加具体为，所述总溶解固体为357mg/l至512mg/l。
47.根据本公开的一体现例，所述红茶叶提取物为红茶叶的热水提取物。热水提取温度可以为30℃至90℃的温度范围内。更加具体地，可以为30℃以上、35℃以上、40℃以上、45℃以上、50℃以上、55℃以上、60℃以上、65℃以上、70℃以上、75℃以上、80℃以上；80℃以下、85℃以下、90℃以下、95℃以下、100℃以下。
48.根据本公开的一体现例，所述红茶叶提取物是提取超过1小时的时间获得的。所述提取时间的上限值不受特别限制，然而考虑到产量增加率等，可以由本领域技术人员适当设定。
49.在一方面，本公开提供一种作为有效成分含有所述红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素的组合物。根据本公开的一体现例，提供一种具有选自由抗氧化用、抗老化用、抗炎用以及因应激现象受损的皮肤修复用而成的组中的一种以上的用途的组合物。另外，本公开提供一种作为有效成分含有所述红茶提取物的药学组合物、化妆料组合物或者保健食品组合物。
50.根据本公开的一体现例，所述组合物为用于预防、改善或者治疗与氧化以及/或者老化有关的多种疾病的组合物。另外，根据本公开的一体现例，所述组合物为用于修复因应激现象受损的皮肤的组合物。
51.由于细胞内代谢或者紫外线的影响而产生氧化应激，由此通过反应性高的自由基(freeradical)或者活性氧簇(reactive oxygen species,ros)而细胞被氧化，所述“抗氧化”是指抑制细胞的氧化，包括去除自由基或者活性氧簇，降低由此导致的细胞受损。
52.所述“抗老化”是指抑制细胞的老化现象的效果，更加具体为，所述抗老化可以为皮肤抗老化。所述老化可以是随着时间的流逝，在细胞中自然产生的老化，也可以是通过阳光产生的光老化，尤其，可以为通过紫外线产生的光老化。另外，所述老化可以是由可以通过多种原因产生的细胞内氧化应激现象引起的，由此可以抑制细胞生长或者杀灭细胞，可以在皮肤细胞中阻碍构成其的各种纤维蛋白质的合成，增加分解酶的表达。尤其，随着紫外线照射，在皮肤细胞中抑制sirt1、aqp3、col1a1、纤连蛋白、弹性蛋白之类的基因的表达，促进mmp-1、 mmp-2基因的表达，从而可以引起皮肤细胞的光老化以及皱纹的产生。
53.所述“抗炎”是指抑制在身体中产生的炎症的效果。所述“炎症”是指针对在身体局部产生的伤害，生物体组织进行的防御反应，更加具体地，可以为皮肤的炎症。根据本公开，预防、改善乃至治疗的炎症疾病包括过敏性炎症疾病、急性或者慢性炎症疾病、慢性支气管炎以及相关阻塞性气道疾病、皮肤炎、上呼吸道炎症以及鼻炎、关节炎或者溃疡性结肠炎、
痛症、动脉硬化、心脏病、多发性硬化症、帕金森氏病、阿尔茨海默症或者结肠癌等在内的疾病，优选为，包括皮肤炎。
54.所述“受损皮肤”是指因外部的物理损伤、化学物质、细菌、霉菌、病菌等的侵入、对紫外线的暴露、皮肤的水分流失、老化等导致的皱纹、皮肤色素沉着以及应激激素而产生的受损皮肤，包括皮肤组织或者细胞在临床以及美容观点上的损伤。根据本公开的一体现例，所述损伤是应激现象引起的。
55.所述“应激”是指身体/心理上的负担，公知是各种精神、身体疾病的根源。人类因内/外部环境的刺激而受到身体/心理上的压力时，人体内合成糖皮质激素的蛋白质利用胆固醇制造皮质醇(cortisol)等的应激激素。所述应激激素成为老化、干燥、色素沉着、皮肤屏障功能障碍的主要原因。本公开的红茶叶提取物通过含有高含量的茶褐素，改善皮肤屏障功能，修复受损皮肤。
56.所述“预防”是指通过给药所述组合物来抑制或者延缓疾患、疾病的所有行为。所述“改善”是指至少降低与所治疗的状态有关的参数，例如症状的程度的所有行为。所述“治疗”是指通过所述药学组合物的使用而使疾病的症状有所好转或者有益改变的所有行为。所述“修复”是指使皮肤重新维持失去的连续性的行为。
57.根据本公开的一体现例，所述红茶叶提取物的一日使用量为0.2mg/kg至不足100mg/kg。更加具体地，一日使用量可以为0.2mg/kg以上、0.3mg/kg以上、0.4mg/kg以上、0.5mg/kg以上、0.6mg/kg以上、0.7mg/kg以上、0.8mg/kg以上、0.9mg/kg以上、1.0mg/kg以上、1.25mg/kg 以上、2mg/kg以上、2.5mg/kg以上、5mg/kg以上、10mg/kg以上、20mg/kg以上、25mg/kg 以上、30mg/kg以上、35mg/kg以上、40mg/kg以上、45mg/kg以上、50mg/kg以上、55mg/kg 以上、60mg/kg以上、65mg/kg以上、70mg/kg以上、75mg/kg以上、80mg/kg以上、85mg/kg 以上、90mg/kg以上、95mg/kg以上；20mg/kg以下、25mg/kg以下、30mg/kg以下、35mg/kg 以下、40mg/kg以下、45mg/kg以下、50mg/kg以下、55mg/kg以下、60mg/kg以下、65mg/kg 以下、70mg/kg以下、75mg/kg以下、80mg/kg以下、85mg/kg以下、90mg/kg以下、95mg/kg 以下、不足100mg/kg，然而不限于此。所述使用也可以是一日一次至数次分开使用。例如，可以使用为一日2次至24次、三日1次至2次、一周1次至6次、两周1次至10次、三周1 次至15次、四周1次至3次或者1年1次至12次。
58.根据本公开的一体现例，从所述红茶叶提取物分离的茶褐素的一日使用量为0.1mg/kg至不足100mg/kg。更加具体地，一日使用量可以为0.1mg/kg以上、0.3mg/kg以上、0.4mg/kg以上、0.5mg/kg以上、0.6mg/kg以上、0.7mg/kg以上、0.8mg/kg以上、0.9mg/kg以上、1.0mg/kg 以上、1.25mg/kg以上、2mg/kg以上、2.5mg/kg以上、5mg/kg以上、10mg/kg以上、20mg/kg 以上、25mg/kg以上、30mg/kg以上、35mg/kg以上、40mg/kg以上、45mg/kg以上、50mg/kg 以上、55mg/kg以上、60mg/kg以上、65mg/kg以上、70mg/kg以上、75mg/kg以上、80mg/kg 以上、85mg/kg以上、90mg/kg以上、95mg/kg以上；20mg/kg以下、25mg/kg以下、30mg/kg 以下、35mg/kg以下、40mg/kg以下、45mg/kg以下、50mg/kg以下、55mg/kg以下、60mg/kg 以下、65mg/kg以下、70mg/kg以下、75mg/kg以下、80mg/kg以下、85mg/kg以下、90mg/kg 以下、95mg/kg以下、不足100mg/kg，然而不限于此。所述使用也可以是一日一次至数次分开使用。例如，可以使用为一日2次至24次、三日1次至2次、一周1次至6次、两周1次至10次、三周1次至15次、四周1次至3次或者1年1次至12次。
59.所述“使用”是指通过任意的适当方法向适用对象提供所述组合物，是包含给药、涂敷、吸收以及摄取等的含义。此时，适用对象是指可以使用所述组合物的人类、猴子、狗、羊、猪或者老鼠等所有动物。
60.根据本公开的一体现例，所述红茶叶提取物的含量可以根据剂型、用途、使用次数以及使用路径而不同。尤其，在本公开的组合物的剂型中，制成注射剂等非口服剂型时，或者制成食品、片剂以及糖浆等口服剂型时，本公开的所述有效成分的含量可以根据组合物的肠内吸收率、消化率等而不同。然而，当本公开的组合物被制成皮肤外用剂而涂敷在局部上时，考虑到所述一日使用量，对于体重为60kg的适用对象，可以使用120mg至不足6000mg。将一日涂敷量假设为100g，则本公开的所述有效成分的含量相对于组合物总重量，可以含有0.12 重量％至不足6.0重量％的含量。
61.更加具体地，可以为0.12重量％以上、0.15重量％以上、0.3重量％以上、0.6重量％以上、 1.2重量％以上、1.5重量％以上、1.8重量％以上、2.1重量％以上、2.4重量％以上、2.7重量％以上、3.0重量％以上、3.3重量％以上、3.6重量％以上、3.9重量％以上、4.2重量％以上、 4.5重量％以上、4.8重量％以上、5.1重量％以上、5.4重量％以上、5.7重量％以上；1.2重量％以下、1.5重量％以下、1.8重量％以下、2.1重量％以下、2.4重量％以下、2.7重量％以下、 3.0重量％以下、3.3重量％以下、3.6重量％以下、3.9重量％以下、4.2重量％以下、4.5重量％以下、4.8重量％以下、5.1重量％以下、5.4重量％以下、5.7重量％以下、不足6.0重量％，然而不限于此。
62.根据本公开的一体现例，从所述红茶叶提取物分离的茶褐素的含量可以相对于组合物总重量，含有0.06重量％至不足6.0重量％的含量。更加具体地，可以为0.06重量％以上、0.075 重量％以上、0.12重量％以上、0.15重量％以上、0.3重量％以上、0.6重量％以上、1.2重量％以上、1.5重量％以上、1.8重量％以上、2.1重量％以上、2.4重量％以上、2.7重量％以上、3.0 重量％以上、3.3重量％以上、3.6重量％以上、3.9重量％以上、4.2重量％以上、4.5重量％以上、4.8重量％以上、5.1重量％以上、5.4重量％以上、5.7重量％以上；1.2重量％以下、1.5 重量％以下、1.8重量％以下、2.1重量％以下、2.4重量％以下、2.7重量％以下、3.0重量％以下、3.3重量％以下、3.6重量％以下、3.9重量％以下、4.2重量％以下、4.5重量％以下、4.8 重量％以下、5.1重量％以下、5.4重量％以下、5.7重量％以下、不足6.0重量％，然而不限于此。
63.根据本公开的一体现例，所述组合物为药学组合物。该情况下，可以包含药学上可接受的载体。所述载体作为包含赋形剂、吸湿剂或者助剂的含义来使用。所述载体例如可以选自由乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、生理盐水、 pbs之类的缓冲液、甲基羟苯酸酯、丙基羟苯酸酯、滑石粉、硬脂酸镁以及矿物油而成的组中。所述组合物可以包含填充剂、抗凝剂、润滑剂、润湿剂、增味剂、乳化剂、保存剂或者其组合。
64.所述药学组合物是以药学上有效的量给药。所述“药学上有效的量”是指按照可以使用的合理的受益/危险比率，用于预防或者治疗疾病充分的量，有效用量标准可以根据包含患者的疾病种类、疾病的重症度、药物的活性、对药物的敏感度、给药时间、给药路径以及排放比率、治疗时间、同时使用的药物的要素以及其他药学上公知的要素而决定。
65.所述药学组合物可以剂型化为口服剂型(例如，粉末、锭剂、胶囊、糖浆、片剂或者
颗粒)或者非口服剂型(例如，注射剂)。
66.所述药学组合物可以制成全身剂型或者局部剂型，尤其，可以作为皮肤外用剂涂敷在皮肤上。作为所述皮肤外用剂，可以为液体制剂、软膏剂、霜剂、乳液剂、喷雾剂、贴片剂、凝胶剂或者气溶胶剂的剂型。作为皮肤外用剂使用时，可以进一步含有脂肪物质、有机溶剂、溶解剂、浓缩剂以及凝胶化剂、软化剂、悬浊剂、稳定剂、发泡剂(foaming agent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型或非离子型乳化剂、填充剂、金属离子封锁剂以及螯合剂、保存剂、维生素、阻断剂、润湿剂、必需的油、染料、颜料、亲水性或亲油性活化剂、脂质小囊或者皮肤外用剂中通常使用的任意其它成分之类的皮肤科学领域中通常使用的辅助剂。另外，所述成分可以以皮肤科学领域中一般使用的量引入。所述皮肤外用剂组合物还可以包括增加硬皮吸收的制剂，例如二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、表面活性剂、氮酮、乙醇、丙醇、丙二醇或者聚乙二醇。
67.所述药学组合物可以作为单独的治疗剂给药或者可以与其他治疗剂一起给药，可以与现有的治疗剂依次或者同时给药，可以单一或者多重给药。考虑到所述全部的要素，重要的是在没有副作用的情况下以最少的量可以获得最大效果的量给药，其可以由本领域技术人员容易决定。另外，所述药学组合物可以单独或者与使用手术、放射线之类、激素治疗、化学治疗以及生物学反应调节剂的方法一同使用。
68.根据本公开的一体现例，所述组合物为保健食品组合物。所述保健食品组合物还可以包含生理学上可接受的载体，载体的种类不受特别限制，只要是本技术领域中通常使用的载体就可以任意使用。
69.所述保健食品组合物可以包含防腐剂(山梨酸钾、苯甲酸钠、水杨酸、脱氢乙酸钠等)、杀菌剂(漂白粉和高度漂白粉、次氯酸钠等)、抗氧化剂(丁基羟基茴香醚(bha)、丁基羟基甲苯(bht)等)、着色剂(焦油色素等)、发色剂(亚硝酸钠、亚硝酸钠等)、漂白剂(亚硫酸钠)、调味料(msg谷氨酸钠等)、甜味料(甘素、甜蜜素、糖精、钠等)、香料(香草醛、内酯类等)、膨胀剂(明矾、d-酒石酸氢钾等)、强化剂、乳化剂、增稠剂(糊料)、被膜剂、胶基、泡沫抑制剂、溶剂、改良剂等的食品添加物(food additives)。所述添加物可以根据食品的种类进行筛选，使用适当的量。
70.所述食品组合物还可以包含通常可以用在食品组合物中来提升气味、味道、视觉等的成分。例如，可以包含维生素a、c、d、e、b1、b2、b6、b12、烟碱酸(niacin)、生物素(biotin)、叶酸(folate)、泛酸(panthotenic acid)等。另外，可以包含锌(zn)、铁(fe)、钙(ca)、铬(cr)、镁(mg)、锰(mn)、铜(cu)等矿物质；以及赖氨酸、色氨酸、半胱氨酸、缬氨酸等的氨基酸。
71.根据本公开的一体现例，所述组合物为化妆料组合物。所述化妆料组合物可以通过通常的方法进行剂型化。对于皮肤外用剂的剂型化，可以参考remington’s pharmaceutical science, mack publishing company,easton pa中公开的内容，对于化妆料组合物的剂型化，可以参考美国化妆料
·
香料协会(the cosmetic,toiletry and fragrance association)发行的国际化妆品原料集(international cosmetic ingredient dictionary)中公开的内容。
72.具体地，所述化妆料组合物可以制成一般的乳化剂型以及可溶化剂型。例如，可以剂型化为柔性化妆水或者营养性化妆水等的化妆水；面部乳液、身体乳等的乳液；营养霜、
补水霜、眼霜等的霜；精华液；化妆软膏；喷雾；凝胶；面膜；防晒霜；隔离霜；液体类、固体类或者喷雾类等的粉底；粉剂；卸妆膏、洁面乳、卸妆油等的彩妆去除剂；或者洗面奶、皂剂、沐浴露等的清洗剂。另外，所述皮肤外用剂可以剂型化为软膏、贴片、凝胶、霜或者喷雾剂。
73.所述化妆料组合物在各个剂型中，除了所述红茶叶提取物之外，根据剂型的种类或者使用目的等，可以在不妨碍本公开的目的的范围内适当搭配其他成分。
74.所述化妆料组合物可以根据最终产品的质量或者功能而进一步包含本领域中通常使用的脂肪物质、有机溶剂、溶解剂、浓缩剂、凝胶化剂、软化剂、抗氧化剂、悬浊剂、稳定剂、发泡剂(foaming agent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型或非离子型乳化剂、填充剂、金属离子封锁剂、螯合剂、保存剂、阻断剂、润湿剂、必需的油、染料、颜料、亲水性或亲油性活化剂、化妆品中通常使用的任意其它成分之类的化妆品学或者皮肤科学领域中通常使用的辅助剂。
75.在其他方面，本公开提供一种红茶叶提取物的制备方法，其作为所述红茶叶提取物的制备方法，包括在硬水中热水提取红茶叶的步骤，根据本公开的一体现例，所述提取步骤可以进行超过1个小时的时间。所述提取时间的上限值不受特别限制，然而考虑到产量增加率等，可以由本领域技术人员适当设定。
76.作为其他一个形态，本公开提供一种在制备具有选自由抗氧化用、抗老化用、抗炎用以及因应激现象受损的皮肤修复用而成的组中的一种以上的用途的组合物中，红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素的用途。
77.作为其他一个形态，本公开提供一种选自由抗氧化、抗老化、抗炎以及因应激现象受损的皮肤修复而成的组中的一种以上方法，其包括将作为有效成分含有红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素的组合物使用在将其作为需要的个体中的步骤。
78.作为其他一个形态，本公开提供一种用于抗氧化、抗老化、抗炎以及因应激现象受损的皮肤修复中的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素。
79.【实施例】
80.以下，通过实施例详细说明本公开。然而，以下实施例仅是有助于全面理解本公开而示例的，本公开的内容不受以下实施例的限制。
81.《制备例1》实施例1、比较例1以及比较例2的提取物的制备
82.1.实施例1的提取物的制备
83.向发酵80％以上的红茶叶(株式会社osulloc)3g中加入12ml的水(钠：6.5mg/l、钾：1.0mg/l、钙：80mgl、镁：26mg/l；总溶解固体为511.7mg/l的普通(medium)标准，硬度为304mg/l的强硬水(依云矿泉水，法国))，以95℃加热10分钟进行提取之后，去除红茶叶，进行过滤，然后利用旋转减压浓缩机进行蒸发干燥，制备出红茶叶提取物粉末。
84.2.比较例1以及比较例2的提取物的制备
85.除了作为比较例1使用线香产品(发酵10-20％左右的发酵茶)，作为比较例2使用芸香产品(发酵30-40％左右的发酵茶)之外，通过与实施例1相同的方法制备出红茶叶提取物粉末。
86.《试验例1》茶黄素、茶红素以及茶褐素含量的比较1
87.1.测定试料的准备
88.将各自6ml的所述实施例1、比较例1以及比较例2的提取物与6ml的乙酸乙酯进行
混合之后，涡旋(vortexing)5分钟，分离出上部乙酸乙酯层(a层)以及下部水相层(d层)。取出3.2ml的所述a层与3.2ml的2.5％的碳酸氢钠(nahco3)进行混合之后，涡旋30秒，分离上部乙酸乙酯层(c层)。
89.一方面，将各自1.6ml的所述实施例1、比较例1以及比较例2的提取物与1.6ml的丁醇(n-butanol)进行混合之后，涡旋3分钟，分离下部水相层(b层)。
90.在0.8ml的所述a层加入乙醇，制备出5ml的溶液(溶液ea)。
91.在0.4ml的所述b层加入0.4ml的草酸饱和溶液、1.2ml的蒸馏水以及3ml的95％的乙醇，制备出5ml的溶液(溶液eb)。
92.在0.8ml的所述c层加入95％的乙醇，制备出5ml的溶液(溶液ec)。
93.在0.4ml的所述d层加入0.4ml的草酸饱和溶液、1.2ml的蒸馏水以及3ml的95％的乙醇，制备出5ml的溶液(溶液ed)。
94.2.测定方法
95.利用uv-vis分光光度计在380nm波长下，通过以下计算式测定出茶黄素、茶红素以及茶褐素的含量。
96.【式1】
[0097][0098][0099][0100]
在以下表1以及图1中示出该结果(单位：以提取物干重为基准的重量％)。
[0101]
【表1】
[0102]
区分(重量％)茶黄素茶红素茶褐素比较例10.0053.5071.693比较例20.1245.4133.927实施例10.2836.5538.608
[0103]
3.测定结果
[0104]
从表1以及图1中可知，可以确认到茶黄素、茶红素以及茶褐素的含量比起比较例1以及比较例2，在实施例1中皆高，尤其，显示茶褐素的含量在实施例1中显著增加。由此，可以确认到在作为发酵80％以上的茶叶的红茶叶的提取物中，以高含量含有茶黄素、茶红素以及茶褐素，尤其，可以确认到茶褐素的含量非常高。
[0105]
《制备例2》实施例2、比较例3以及比较例4的提取物的制备
[0106]
1.实施例2的提取物的制备
[0107]
向发酵80％以上的红茶叶3g中加入125ml的水(钠：6.5mg/l、钾：1.0mg/l、钙：80m gl、镁：26mg/l；总溶解固体为511.7mg/l的普通(medium)标准，硬度为304mg/l的强硬水(依云矿泉水，法国))，以95℃加热20分钟进行提取之后，去除红茶叶，进行过滤，然后利
用旋转减压浓缩机进行蒸发干燥，制备出红茶叶提取物粉末。
[0108]
2.比较例3以及比较例4的提取物的制备
[0109]
除了作为比较例3使用蒸馏水(硬度以及总溶解固体为0)，作为比较例4使用盐水(钠：约5.6mg/l、钾：约2.45mg/l、钙：约2.9mgl、镁：约1.9mg/l；硬度18.7mgl；总溶解固体 400mg/l；广东制药，韩国)之外，通过与实施例2相同的方法制备出红茶叶提取物粉末。
[0110]
《试验例2》茶黄素、茶红素以及茶褐素含量的比较2
[0111]
1.测定试料的准备
[0112]
针对所述实施例2、比较例3以及比较例4的提取物，通过与所述试验例1相同的方法，准备测定试料。
[0113]
2.测定方法
[0114]
通过与所述试验例1相同的方法，测定出茶黄素、茶红素以及茶褐素的含量。在以下表2 以及图2中示出该结果(单位：以提取物干重为基准的重量％)。
[0115]
【表2】
[0116]
区分(重量％)茶黄素茶红素茶褐素比较例30.0275.2734.614比较例40.0274.3634.231实施例20.0403.4955.648
[0117]
3.测定结果
[0118]
从表2以及图2中可知，可以确认到茶黄素的含量比起较例3以及比较例4，在实施例2 中含量高，尤其，显示茶褐素的含量在实施例2中显著增加。由此，可以确认到可以获得矿物质含量高、硬度高、利用硬度高的水提取红茶叶时以高含量含有茶褐素的提取物。
[0119]
《制备例3》实施例3、比较例5以及比较例6的提取物的制备
[0120]
1.实施例3的提取物的制备
[0121]
除了使用氨基酸和儿茶素含量高的新品种红茶叶(jangweon 2号，osulloc农场)之外，通过与制备例2相同的方法，制备出红茶叶提取物粉末。
[0122]
2.比较例5以及比较例6的提取物的制备
[0123]
除了作为比较例5使用蒸馏水(硬度以及总溶解固体为0)，作为比较例6使用盐水(钠：约5.6mg/l、钾：约2.45mg/l、钙：约2.9mgl、镁：约1.9mg/l；硬度18.7mgl；总溶解固体 400mg/l；广东制药，韩国)之外，通过与制备例2相同的方法，制备出红茶叶提取物粉末。
[0124]
《试验例3》茶黄素、茶红素以及茶褐素含量的比较3
[0125]
1.测定试料的准备
[0126]
针对所述实施例3、比较例5以及比较例6的提取物，通过与所述试验例1相同的方法，准备测定试料。
[0127]
2.测定方法
[0128]
通过与所述试验例1相同的方法，测定出茶黄素、茶红素以及茶褐素的含量。在以下表3 以及图3中示出该结果(单位：以提取物干重为基准的重量％)。
[0129]
【表3】
[0130]
区分(重量％)茶黄素茶红素茶褐素比较例50.1173.0864.746比较例60.1123.1904.953实施例30.0191.1499.336
[0131]
3.测定结果
[0132]
从表3以及图3中可知，显示茶黄素的含量比起比较例5以及比较例6，在实施例3中显著增加。由此，可以确认到可以获得矿物质含量高、硬度高、利用硬度高的水提取红茶叶时以高含量含有茶褐素的提取物。尤其，与所述试验例2进行比较时，可以确认到使用新品种红茶叶(jangweon 2号，osulloc农场)时，可以获得以更加高含量含有茶褐素的提取物。
[0133]
《制备例4》实施例4、比较例7至比较例9的提取物的制备
[0134]
1.实施例4的提取物的制备
[0135]
向发酵80％以上的红茶叶3g中加入125ml的水(钠：6.5mg/l、钾：1.0mg/l、钙：80m gl、镁：26mg/l；总溶解固体为511.7mg/l的普通(medium)标准，硬度为304mg/l的强硬水(依云矿泉水，法国))，以95℃加热60分钟进行提取之后，去除红茶叶，进行过滤，然后利用旋转减压浓缩机进行蒸发干燥，制备出红茶叶提取物粉末。
[0136]
2.比较例7至比较例9的提取物的制备
[0137]
作为比较例7，除了对济州熔岩海水(钠：约18mg/l、钾：约22mg/l、钙：约62mgl、镁：约9mg/l；硬度200mgl；总溶解固体93mg/l；orion，韩国)提取20 分钟之外，通过与实施例4相同的方法制备出红茶叶提取物粉末。
[0138]
除了作为比较例8使用软水(钠：约5.6mg/l、钾：约2.45mg/l、钙：约2.9mgl、镁：约1.9mg/l；硬度18.7mgl；总溶解固体400mg/l；广东制药，韩国)，作为比较例9使用济州熔岩海水(钠：约18mg/l、钾：约22mg/l、钙：约62mgl、镁：约9mg/l；硬度200mgl；总溶解固体93mg/l；orion，韩国)之外，通过与实施例4相同的方法制备出红茶叶提取物粉末。
[0139]
《试验例4》茶黄素、茶红素以及茶褐素含量的比较4
[0140]
1.测定试料的准备
[0141]
针对所述实施例2、实施例4、比较例7至比较例9的提取物，通过与所述试验例1相同的方法，准备测定试料。
[0142]
2.测定方法
[0143]
通过与所述试验例1相同的方法，测定出茶红素以及茶褐素的含量。在以下表4以及图4 中示出该结果(单位：以提取物干重为基准的重量％)。
[0144]
【表4】
[0145]
区分(重量％)茶红素茶褐素比较例45.3666.866比较例74.8784.965实施例22.7458.163比较例85.4847.722比较例95.2235.833
实施例42.77810.349
[0146]
3.测定结果
[0147]
从表4以及图4中可知，显示茶黄素的含量比起实施例2、比较例4、比较例7至比较例 9，在实施例4中显著增加。由此，可以确认到可以获得矿物质含量高、硬度高、利用硬度高的水提取红茶叶时以高含量含有茶褐素的提取物。另外，可以确认到将提取时间从20分钟增加到60分钟时，可以获得以更加高含量含有茶褐素的提取物。
[0148]
《制备例5》实施例5的提取物的制备
[0149]
向发酵80％以上的红茶叶3g中加入125ml的水(钠：6.5mg/l、钾：1.0mg/l、钙：80m gl、镁：26mg/l；总溶解固体为511.7mg/l的普通(medium)标准，硬度为304mg/l的强硬水(依云矿泉水，法国))，以80℃加热15分钟进行提取之后，去除红茶叶，进行过滤，然后利用旋转减压浓缩机进行蒸发干燥，制备出红茶叶提取物粉末。
[0150]
《试验例5》茶黄素、茶红素以及茶褐素含量的比较5
[0151]
1.测定试料的准备
[0152]
针对所述实施例4以及实施例5的提取物，通过与所述试验例1相同的方法，准备测定试料。
[0153]
2.测定方法
[0154]
通过与所述试验例1相同的方法，测定出茶红素以及茶褐素的含量。在以下表5以及图5 中示出该结果(单位：以提取物干重为基准的重量％)。
[0155]
【表5】
[0156]
区分(重量％)茶红素茶褐素实施例40.4755.623实施例50.4017.909
[0157]
3.测定结果
[0158]
从表5以及图5中可知，显示茶褐素的含量比起实施例4，在实施例5中显著增加。由此，可以确认到将提取时间从1小时(60分钟)增加到15小时时，可以获得以更加高含量含有茶褐素的提取物。
[0159]
《试验例6》细胞毒性的评价1
[0160]
1.材料的准备
[0161]
从所述实施例1的红茶叶提取物中分别分离出茶黄素、茶红素以及茶褐素之后，溶解到蒸馏水中，准备储备(stock)溶液(各自为h-tf、h-tr、h-tb)。将来自自然而不是红茶叶提取物的茶褐素溶解到蒸馏水中，准备储备(stock)溶液(n-tb)。
[0162]
2.评价方法
[0163]
将人的成纤维细胞(human skin fibroblast cell，hs68 cell)以1.0
×
104cells/ml接种到 96孔板之后，在细胞培养条件(5％co2，37℃)下培养24小时。然后在细胞培养基中按照各个浓度(0.1、1、10、10ppm)处理所述材料(h-tf、h-tr、h-tb以及n-tb)之后，培养24小时。利用dpbs(杜氏磷酸盐缓冲液；dulbecco’s phosphate-buffered saline)进行清洗，替换成含有10％的ez-cytox的培养基，在细胞培养条件下培养1小时之后，利用elisa 酶标仪(tecan infinite m200 pro)在450nm下测定吸光度。在以下表6以及图6中示出该结果。
species,ros)的产生增加196.24％，而相比uvb照射组，处理0.5mm的抗坏血酸时活性氧的产生有效地减少49.36％，处理1mm的抗坏血酸时活性氧的产生有效地减少133.70％。在 h-tf中处理100ppm时减少82.43％；在h-tr中处理1ppm时减少72.06％，处理10ppm时减少78.14％，处理100ppm时减少103.94％；在h-tb中处理10ppm时减少75.32％，处理100p pm时减少90.22％而显示有效的活性氧减少效果。由此可以确认到，在作为有效成分含有本公开的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素的组合物中，可以发挥抗氧化功效。
[0179]
《试验例8》mmp-1的表达抑制功效的评价1
[0180]
1.材料的准备
[0181]
使用与在所述试验例6中使用的材料相同的材料。
[0182]
2.评价方法
[0183]
将人的成纤维细胞(human skin fibroblast cell，hs68 cell)以2.0
×
104cells/ml接种到 48孔板之后，在细胞培养条件(5％co2，37℃)下培养24小时。然后，去除培养基，利用 dpbs(杜氏磷酸盐缓冲液；dulbecco’s phosphate-buffered saline)进行清洗之后，在不含f bs的dmem培养基中按照各个浓度稀释所述材料(h-tf、h-tr以及h-tb)，进行前处理 6小时。去除培养基，添加100μl的dpbs之后，照射30mj/cm2的uvb。然后，在不含fbs 的dmem培养基中稀释并处理试验物质，培养48小时。收集经培养的细胞的培养基之后，使用el1sa试剂盒(human mmp-1 ellsa kit)测定mmp-1的分泌量，利用el1sa酶标仪(tecan infinite m200 pro)在450nm下测定吸光度。利用dpbs清洗附着在孔板底部的细胞之后，用1n naoh进行溶解(1ysis)，通过bca试验(bca assay)测定蛋白质量，校正一定蛋白质的mmp-1分泌量，并用百分率(％)表示。在以下表9至表12、图8以及图 9中示出该结果(###p《0.001vs.(-)uvb细胞；*p《0.05,**p《0.01,***p《0.001vs.uvb处理细胞,n＝3)。
[0184]
【表9】
[0185][0186]
【表10】
[0187][0188]
【表11】
[0189][0190]
【表12】
[0191][0192]
3.评价结果
[0193]
从表9、表10以及图8中可知，确认到在hs68细胞照射30mj/cm2的uvb时，mmp-1 的分泌增加126.03％，而相比uvb照射组，处理1μm的视黄酸时有效减少32.69％，处理10μm 的视黄酸时有效减少101.58％。在h-tb中处理1ppm时减少35.14％，相比uvb照射组显示有效的差异；然而在h-tf和h-tr中没有确认到减少效果。
[0194]
一方面，从表11、表12以及图9中可知，在5种浓度(1、5、10、25、50ppm)下评价 h-tb时，在经处理的所有浓度组中显示减少效果，然而在5ppm以上的浓度下，相比uvb 照射组，显示蛋白质量减少80％以下的效果，判断为可能具有细胞毒性。
[0195]
由此可以确认到，在作为有效成分含有本公开的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物中分离的茶褐素的组合物中，通过减少促进胶原蛋白分解的mmp-1，从而可以发挥抗老化功效，尤其皮肤抗老化、皮肤抗皱功效。
[0196]
《试验例9》abts自由基清除能力的评价
[0197]
1.材料的制备
[0198]
向发酵80％以上的红茶叶(株式会社osulloc)3g中加入125ml的水(钠：6.5mg/l、钾：1.0mg/l、钙：80mgl、镁：26mg/l；总溶解固体为511.7mg/l的普通(medium)标准，硬度为304mg/l的强硬水(依云矿泉水，法国))，以80℃加热15小时进行提取之后，去除红茶叶，进行过滤，然后利用旋转减压浓缩机进行蒸发干燥，制备出红茶叶提取物粉末。
[0199]
一方面，从所述红茶叶提取物分离出茶黄素之后，溶解到蒸馏水中，准备100,000ppm的储备(stock)溶液(tb)。
[0200]
2.评价方法
[0201]
在7.4mm的abts溶液溶解2.45mm的过硫酸钾之后，在暗室反应24小时。将其用蒸馏水进行调节以在734nm下吸光度为0.7之后，取出180μl，按照各个浓度分别加入20μl的本公开的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素，在暗室常温下反应10分钟，在 734nm下测定吸光度。在图10中示出该结果。
[0202]
3.评价结果
[0203]
利用abts自由基的抗氧化功能的测定是利用如下方法测定的：通过与过硫酸钾 (potassium persulfate)发生反应生成的abts自由基被提取物内的抗氧化物质去除，从而脱去自由基特有的颜色的蓝绿色。从图10中可知，在本公开的红茶叶提取物以及从所述红茶叶提取物分离的茶褐素中，abts自由基清除能力以浓度依赖方式且有效地在增加。更加具体为，作为阳性对照组的抗坏血酸(l-ascorbic acid)的ic50值为4.90ppm，红茶叶提取物的ic50 值为10.60ppm，茶褐素的ic50值为13.21ppm。当处理的红茶叶提取物以及茶褐素全部超过 1.25ppm时，确认到abts自由基被显著清除。
[0204]
由此可以确认到，在作为有效成分含有本公开的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物中分离的茶褐素的组合物中，可以发挥抗老化功效。
[0205]
尤其，与从红茶叶提取物分离的茶褐素相比，在红茶叶提取物中发挥更加优秀的抗氧化功效，由此可以确认到，本公开的组合物所发挥的效果并不是由单一的茶褐素成分
带来的效果，而是由含在红茶叶提取物中的多种物质的组合带来的协同效应。
[0206]
《试验例10》线粒体膜电位恢复能力的评价
[0207]
1.材料准备
[0208]
使用与在所述试验例9中使用的材料相同的材料。
[0209]
2.评价方法
[0210]
将作为人的角质形成细胞株(human keratinocyte)的hacat细胞以2.0
×
104cells/ml接种到96孔板之后，照射18mj/cm2的uvb，给予10μm的皮质醇(cortisol)刺激，然后在不含 fbs的dmem培养基中处理所述试验材料。媒介物(vehicle)是使用0.1％的dmso，作为阳性对照组使用处理2ppm的表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,egcg)的组。处理试验材料24小时之后，通过jc-10染色测定线粒体膜电位，通过mitotracker染色测定线粒体质量。在图11中示出该结果。
[0211]
3.评价结果
[0212]
从图11中可知，可以确认到受损的线粒体膜电位通过本公开的红茶叶提取物以及从所述红茶叶提取物分离的茶褐素而被恢复。处理本公开的红茶叶提取物以及从所述红茶叶提取物分离的茶褐素时，细胞内的线粒体含量没有减少，没有发现有效的变化。因此，可以确认到本公开的红茶叶提取物以及从所述红茶叶提取物分离的茶褐素具有通过对线粒体膜电位的恢复而对uvb以及皮质醇的抗老化功效。
[0213]
尤其，红茶叶提取物相比经分离的茶褐素，即便含量少，也发挥与经分离的茶褐素类似或者更加优秀的抗老化功效，由此可以确认到本公开的组合物所发挥的效果并不是由单一的茶褐素成分带来的效果，而是由含在红茶叶提取物中的多种物质的组合带来的协同效应。
[0214]
《试验例11》mmp-1的表达抑制功效的评价2
[0215]
1.材料的准备
[0216]
使用与在所述试验例9中使用的材料相同的材料。
[0217]
2.评价方法
[0218]
将作为人的正常成纤维细胞(normal human dermal fibroblast)的nhdf细胞以5.0
×
10
5 cells/ml接种到皿(dish)之后，在细胞培养条件(5％co2，)下培养24小时。然后，照射16mj/cm2的uvb，在dmem培养基处理所述试验材料。媒介物(vehicle)是使用0.1％的dmso，作为阳性对照组使用处理2ppm的表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,egcg)的组。作为阴性对照组使用没有照射紫外线的组。收集经培养的细胞的培养基之后，使用el1sa试剂盒(human mmp-1 ellsa kit)测定mmp-1的分泌量，利用el1sa 酶标仪(tecan infinite m200 pro)在450nm下测定吸光度。图12中示出该结果(***p《0.001 vs.(-)uvb细胞或者uvb处理细胞,n＝3)。一方面，图13中示出在更低的浓度下确认从本公开的红茶叶提取物中分离的茶褐素的抗老化功效的结果(***p《0.001vs.(-)uvb细胞； p《0.001vs.uvb处理细胞,n＝3)。
[0219]
3.评价结果
[0220]
从图12中可知，确认到在nhdf细胞照射16mj/cm2的uvb时，mmp-1的分泌增加，处理本公开的红茶叶提取物以及从所述红茶叶提取物分离的茶褐素时，相比uvb照射组， mmp-1的分泌有效地在减少。另外，从图13中可知，确认到在更低浓度(0.1至2ppm)的茶褐素中，
mmp-1的分泌也有效地在减少。由此可以确认到，在作为有效成分含有本公开的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物中分离的茶褐素的组合物中，通过减少促进胶原蛋白分解的mmp-1，从而可以发挥抗老化功效，尤其皮肤抗老化、皮肤抗皱功效。
[0221]
《试验例12》mmp-1表达抑制功效的评价3
[0222]
1.材料准备
[0223]
使用与在所述试验例9中使用的材料相同的材料。
[0224]
2.评价方法
[0225]
将作为人的角质形成细胞株(human keratinocyte)的hacat细胞以1.0
×
106cells/ml接种到皿(dish)之后，在细胞培养条件(5％co2，37℃)下培养24小时。然后，照射18mj/cm2的uvb，在dmem培养基处理所述试验材料。媒介物(vehicle)是使用0.1％的dmso，作为阳性对照组使用处理2ppm的表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,egcg) 的组。作为阴性对照组使用没有照射紫外线的组。收集经培养的细胞的培养基之后，使用 el1sa试剂盒(human mmp-1 ellsa kit)测定mmp-1的分泌量，利用el1sa酶标仪(tecaninfinite m200 pro)在450nm下测定吸光度。图14中示出该结果(***p《0.001vs.(-)uvb细胞； p《0.01, p《0.001vs.uvb处理细胞,n＝3)。
[0226]
3.评价结果
[0227]
从图14中可知，确认到在hacat细胞中，在更低浓度(0.1至2ppm)的茶褐素中，mmp-1 的分泌也有效地在减少。由此可以确认到，在作为有效成分含有本公开的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物中分离的茶褐素的组合物中，通过减少促进胶原蛋白分解的mmp-1，从而可以发挥抗老化功效，尤其皮肤抗老化、皮肤抗皱功效。
[0228]
《试验例13》细胞毒性的评价2
[0229]
1.材料的准备
[0230]
使用与在所述试验例9中使用的材料相同的材料。
[0231]
2.评价方法
[0232]
将作为人的角质形成细胞株(human keratinocyte)的hacat细胞以2.0
×
104cells/ml接种到黑色96孔板之后，照射18mj/cm2的uvb，在dmem培养基处理所述试验材料。媒介物 (vehicle)是使用0.1％的dmso，作为阳性对照组使用处理2ppm的表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,egcg)的组。作为阴性对照组使用没有照射紫外线的组。在各个孔处理cck8(cell counting kit 8)试剂。然后，利用el1sa酶标仪(tecan infinite m200pro)在450nm下测定吸光度。图15中示出该结果(***p《0.001vs.uvb处理细胞,n＝3)。
[0233]
3.评价结果
[0234]
从图15中可知，在作为阳性对照组的egcg中，在2ppm的浓度下显示细胞毒性(未照射uvb，相对于媒介物(vegicle)为71.5％)，在本公开的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物分离的茶褐素中，不显示细胞毒性。
[0235]
《试验例14》人il-8基因表达功效的评价
[0236]
1.材料的准备
[0237]
使用与在所述试验例9中使用的材料相同的材料。
[0238]
2.评价方法
[0239]
将作为人的角质形成细胞株(human keratinocyte)的hacat细胞以2.0
×
104cells/ml接种到黑色96孔板之后，照射18mj/cm2的uvb，在dmem培养基处理所述试验材料。媒介物(vehicle)是使用0.1％的dmso，作为阳性对照组使用处理2ppm的表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,egcg)的组。作为阴性对照组使用没有照射紫外线的组。然后，利用对人il-8特殊的引物，进行用于人il-8基因的表达的rt-pcr。图16中示出该结果 (***p《0.001vs.(-)uvb细胞或者uvb处理细胞,n＝3)。
[0240]
3.评价结果
[0241]
从图16中可知，确认到当处理本公开的红茶叶提取物以及从所述红茶叶提取物分离的茶褐素时，相比uvb照射组，il-8mrna的表达量有效地在减少。由此可以确认到，在作为有效成分含有本公开的红茶叶提取物或者从所述红茶叶提取物中分离的茶褐素的组合物中，通过显著减少il-8的表达，从而可以显示优秀的抗炎症功效。
[0242]
以下，说明根据本发明的组合物的剂型例，然而药学组合物、保健食品组合物以及化妆料组合物可以应用为多种剂型，其并不是用于限定本发明，仅是用于具体说明本发明。
[0243]
【剂型例1】软膏剂的制备
[0244]
按照以下表13中记载的组分，通过通常的方法制备出软膏剂。
[0245]
【表13】
[0246]
成分含量(重量％)实施例4的红茶叶提取物3.0鲸蜡硬脂醇1.0自乳化单硬脂酸2.0硬脂酸1.0蜂蜡4.0角鲨烷7.0单硬脂酸甘油酯3.0山梨醇酐单硬脂酸酯1.0聚山梨酯803.0甘油5.0丙二醇4.0香料适量凡士林剩余量
[0247]
【剂型例2】饮品剂的制备
[0248]
按照以下表14中记载的组分，通过通常的方法制备出饮品剂。
[0249]
【表14】
[0250]
成分含量(g)实施例4的红茶叶提取物0.2葡萄糖10柠檬酸2净化水188
[0251]
【剂型例3】柔性化妆水的制备
[0252]
按照以下表15中记载的组分，通过通常的方法制备出柔性化妆水。
[0253]
【表15】
[0254]
成分含量(重量％)实施例4的红茶叶提取物3.0甘油5.01,3-丁二醇3.0乙醇5.0壬基酚聚氧乙烯醚0.5香料适量防腐剂适量净化水剩余量
[0255]
【剂型例4】收敛性化妆水的制备
[0256]
按照以下表16中记载的组分，通过通常的方法制备出收敛性化妆水。
[0257]
【表16】
[0258]
成分含量(重量％)实施例4的红茶叶提取物3.0甘油3.0柠檬酸0.1乙醇10.0聚氧乙烯油基醚1.0山梨糖醇2.0香料适量防腐剂适量净化水剩余量
[0259]
【剂型例5】霜的制备
[0260]
按照以下表17中记载的组分，通过通常的方法制备出霜。
[0261]
【表17】
[0262]
成分含量(重量％)实施例4的红茶叶提取物3.0甘油5.0硬脂酸8.0角鲨烷5.0自乳化单硬脂酸甘油酯2.5聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯1.5丙二醇4.0硬脂醇甘草亭酸酯0.2凡士林2.0抗氧化剂适量
香料适量防腐剂适量净化水剩余量
[0263]
通过所述提及的优选实施例说明了本发明，然而可以在不脱离发明的要旨和范围的情况下进行多种修改或者变形。因此，只要是属于本发明的要旨，权利要求书中理应包括所述修改或者变形。