一种MLO基因突变体及其制备方法与应用与流程

技术特征：
1.一种突变mlo6基因，其特征在于，野生型mlo6基因包括6个同源拷贝，在油菜darmor基因组的命名分别为bnaa03g60240d(mlo6-a03)、bnacnng04240d(mlo6-c03)、bnaa01g22680d(mlo6-a01)、bnac01g29530d(mlo6-c01)、bnaa09g13700d(mlo6-a09)和bnacnng31840d(mlo6-c09)，所述突变mlo6基因与野生型mlo6基因相比，mlo6-a03拷贝为纯合突变，缺失了15个碱基，使得编码的氨基酸序列356号位点后缺失-l-v-q-p-g；mlo6-c03拷贝为缺失13个碱基和缺失2个碱基的杂合突变，分别在氨基酸357号和356号位点后造成了移码突变；mlo6-a01拷贝为缺失2个碱基和单碱基插入g的杂合突变，都在365号氨基酸位点后造成了移码突变；mlo6-c01拷贝的一条链缺失12个碱基，在氨基酸357号位点将l替换成了r，随后丢失-v-q-p-g四个氨基酸；mlo6-a09拷贝的一条链缺失3个碱基，在氨基酸356号缺失了v；mlo6-c09拷贝一条链缺失2个碱基，在氨基酸355号位点后面造成了移码突变。2.一种如权利要求1所述的突变mlo6基因编码的多肽。3.一种构建体，其特征在于，包含权利要求1所述的突变mlo6基因。4.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过权利要求3所述的构建体转化受体细胞获得的。5.一种获得权利要求1所述的突变mlo6基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计bnmlo6-sgrna2，序列如seq id no.30所示；(2)将步骤(1)中的sgrna2构建至载体质粒骨架中；(3)将构建的基因编辑载体导入油菜受体材料中，并获得再生苗；(4)转基因植株的鉴定和突变检测。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的载体质粒骨架为pkse401。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中将构建的基因编辑载体导入油菜受体材料中是采用农杆菌介导的油菜胚轴遗传转化方法。8.权利要求1所述的突变mlo6基因在植物抗菌核病中的应用。

技术总结
本发明公开了一种MLO基因突变体及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明公开了一种利用基因编辑技术提高油菜菌核病抗性的方法，具体利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对BnMLO6基因6个同源拷贝同时突变，获得稳定遗传的BnMLO6基因6个同源拷贝同时突变的材料(简称为bnmlo6)。田间和室内观察结果表明，油菜bnmlo6材料不仅表现出较强的白粉病抗性，而且也能提高油菜对菌核病的抗性。本发明首次报道了BnMLO6基因可以同时提高油菜对菌核病和白粉病的抗性，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。


技术研发人员：李超 梅德圣 石育钦 胡琼 孙梦丹 陈帆 成洪涛 胡学志 付丽
受保护的技术使用者：武汉中油大地希望种业有限公司
技术研发日：2021.10.15
技术公布日：2022/3/4