一种应用膜过滤技术制备凌霄花提取物的生产及检测方法与流程

1.本发明涉及中药有效成分的提取纯化技术领域，特别是涉及一种 应用膜过滤技术制备凌霄花提取物的生产及检测方法。


背景技术：

2.凌霄花本品为紫葳科植物凌霄campsis grandiflora(thunb.) k.schum.或美洲凌霄campsis radicans(l.)seem.的干燥花。凌霄花 在夏、秋二季花盛开时釆摘和干燥，本品甘、酸、寒、归肝以及心包 经，主要功能为活血通经以及凉血祛风，用于月经不调、经闭癥瘕、 产后乳肿、风疹发红、皮肤瘙痒和痤疮等症状。
3.凌霄花所含以毛蕊花糖苷代表的麦角甾苷类成分是其主要有效 成分，目前提取方法通常采用温浸法、水煮法、稀醇提取和酸醇提取 等，纯化方法多采用醇沉法、水醇法、萃取法、大孔树脂吸附法等， 其中：
4.醇沉法和水沉法只能达到初步纯化的目的，其收膏量大，有效成 份含量低；萃取法及大孔树脂吸附法分别单独应用对一些要求较高的 制剂也还存在着一些不足，比如，萃取法色素较多，提取物粘度大， 使制剂颜色较深，大孔树脂吸附法需要反复处理，操作麻烦，重现性 较差，并且还存在有机残留问题，这些问题直接影响了制剂的安全性 和稳定性，需要进行改进。


技术实现要素：

5.本发明主要解决的技术问题是提供一种应用膜过滤技术制备凌 霄花提取物的生产及检测方法，解决目前凌霄花提取工艺中麦角甾苷 类成份转移率低、工艺成本高以及制剂工艺稳定性差等技术问题。
6.为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种 应用膜过滤技术制备凌霄花提取物的生产方法，包括以下步骤：
7.(1)煎煮提取：取凌霄花药材，加水进行第一次煎煮，第一次 煎煮1～2小时，滤取药液，得到第一次煎煮滤液和药渣，药渣再加水 进行第二次煎煮，第二次煎煮用时0.5～1小时，滤取药液，得到第二 次煎煮滤液和药渣，弃去药渣，合并第一次煎煮滤液和第二次煎煮滤 液，并浓缩至相对密度1.0～1.1(60℃测)，冷却至室温得煎煮液，第 一次煎煮和第二次煎煮时微沸即可，这样即能保证有效成分的提取， 又能减少杂质的溶出，并降低能耗；
8.(2)粗分离：煎煮液离心分离，离心机转速4000～5000转/分钟， 离心12～16分钟，取上清液，进行微滤膜分离，控制流速，并用蒸馏 水进行洗滤，合并滤液，得粗提物；
9.(3)精制：将粗提物进行超滤膜分离，控制流速，并用蒸馏水 进行洗滤，合并滤液，减压浓缩，再进行真空干燥，即得凌霄花提取 物，采用微滤和超滤相结合的方法，可有效去除树脂、鞣质、粘液质、 色素等无效成分，同时避免使用有机试剂，减少工业生产中的污染， 更重要的是避免了麦角甾苷类活性成分在其它复杂制备工艺中的损 失；
10.在本发明一个较佳实施例中，在煎煮提取步骤中，第一次煎煮的加 水量为煎煮药
材重量的8wt～18wt倍，第二次煎煮的加水量为煎煮药 材重量的6wt～12wt倍。
11.在本发明一个较佳实施例中，在粗分离步骤中，控制其流速为5～ 10ml/min，所使用的微滤膜规格为0.42～0.65micron或 50000～300000nmwc。
12.在本发明一个较佳实施例中，在精制步骤中，控制其流速为1～ 5ml/min，所使用的超滤膜规格为1000～30000nmwc。
13.在本发明一个较佳实施例中，在粗分离步骤中，离心机转速4500 转/分钟，离心15分钟，微滤膜分离后蒸馏水洗滤次数为2～5次。
14.在本发明一个较佳实施例中，在精制步骤中，超滤膜分离后蒸馏 水洗滤次数为2～5次。
15.为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是：提供一 种对应用膜过滤技术制备的凌霄花提取物进行检测的方法，包括以下 步骤：。
16.(1)、特征图谱测定：
17.照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)进行测定， 进行色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm；以乙腈为流动相a， 0.1％磷酸溶液为流动相b，按下表中时间程序梯度洗脱；流速为每分 钟0.3ml；柱温为25℃，检测波长270nm；
18.表1时间程序表
[0019][0020][0021]
参照物溶液的制备取凌霄花对照药材，置具塞锥形瓶中，加80％ 甲醇，进行超声处理，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液；
[0022]
对照品参照物溶液的制备：取cornoside对照品适量，制成 cornoside对照品参照物溶液，取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定， 制成毛蕊花糖苷对照品参照物溶液；
[0023]
供试品溶液的制备：取应用膜过滤技术制备的凌霄花提取物适量， 研细，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇，密塞，称定重量，超声 处理后放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过， 取续滤液，即得供试品溶液；
[0024]
测定：分别精密吸取对照药材参照物溶液、cornoside对照品参 照物溶液、毛蕊花糖苷对照品参照物溶液与供试品溶液各1μl，注入 液相色谱仪，测定，即得；
[0025]
如图1所示，供试品色谱中应呈现5个特征峰，并应与对照药 材参照物色谱中的5个特征峰保留时间相对应，其中cornoside峰、 毛蕊花糖苷峰应与相应对照品参照物色谱峰的保留时间相对应；
[0026]
与毛蕊花糖苷对照品参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与 s峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的
±
10％范围之内， 规定值为：0.18(峰1)、0.89(峰3)、
1.07(峰5)。
[0027]
(2)、含量测定：
[0028]
毛蕊花糖苷照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512) 进行测定，
[0029]
进行色谱条件与系统适用性试验，检测波长为330nm，其余同特 征图谱测定中的色谱条件与系统适用性试验；
[0030]
对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加80％ 甲醇溶液制成每1ml含毛蕊花糖苷100μg的溶液，即得；
[0031]
供试品溶液的制备，同上述特征图谱测定中供试品溶液的制备步 骤；
[0032]
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相 色谱仪，测定，即得。
[0033]
在本发明一个较佳实施例中，参照物溶液的制备步骤中，取凌霄花 对照药材1.0g，置具塞锥形瓶中，加80％甲醇50ml，超声处理20min； 供试品溶液的制备步骤中，取应用膜过滤技术制备的凌霄花提取物 1.0g，精密称定后置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞， 称定重量，进行超声处理20分钟，超声处理的功率300w，频率40 khz，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过， 取续滤液，即得供试品溶液。
[0034]
在本发明一个较佳实施例中，对照品参照物溶液的制备步骤中，每 1ml的毛蕊花糖苷对照品参照物溶液中含毛蕊花糖苷约100μg，每1 ml的cornoside对照品参照物溶液cornoside约100μg的溶液。
[0035]
膜分离技术是一项新兴的高效分离技术，已被国际公认为20世 纪末到2l世纪中期最有发展前途的一项重大高新生产技术。超滤技 术是20世纪60～70年代发展起来的一种膜分离技术，它是用多孔性 半透膜为介质，以错流方式进行过滤。超滤膜的孔径极小，能阻拦溶 液中的各种微粒、胶体以及大分子溶质，以达到浓缩或净化除杂的目 的。与通常的分离方法相比，超滤具有不必经过相的转换、不需要添 加化学试剂、滤膜不易堵塞和耐用等优点。
[0036]
根据化学性质和结构，膜材料可以分为两大类：有机膜和无机膜。 实践证明有机膜始终存在着不能解决膜污染、不能抗高压和高温等问 题，所以人们开始制造无机分离膜及其材料来弥补有机膜的诸多缺点， 因此无机膜分离设备在中药提取分离中前景广阔。
[0037]
本发明的有益效果是：本发明指出的一种应用膜过滤技术制备凌 霄花提取物的生产及检测方法，采用了膜过滤技术，可显著提高凌霄 花提取物中有效成分的含量，提高麦角甾苷类成份的转移率，不仅可 以节约药材成本，更能简化工业生产步骤，并确保工艺的稳定性和安 全性，使这一传统中药尽可能发挥其功效。
附图说明
[0038]
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例 描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的 附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在 不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图， 其中：
[0039]
图1是本发明一种应用膜过滤技术制备凌霄花提取物的对照特 征图谱；
[0040]
图2是本发明一种应用膜过滤技术制备凌霄花提取物10批次凌 霄花提取物检测
图谱。
具体实施方式
[0041]
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显 然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施 例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性 劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0042]
请参阅图1～图2，本发明实施例包括：
[0043]
一种应用膜过滤技术制备凌霄花提取物的生产方法，包括以下步 骤：
[0044]
(1)煎煮提取：取凌霄花药材，加8wt～18wt倍重量的水进行第 一次煎煮，第一次煎煮1～2小时，滤取药液，得到第一次煎煮滤液和 药渣，药渣再加6wt～12wt倍重量的水进行第二次煎煮，第二次煎煮 用时0.5～1小时，滤取药液，得到第二次煎煮滤液和药渣，弃去药渣， 合并第一次煎煮滤液和第二次煎煮滤液，并浓缩至相对密度 1.0～1.1(60℃测)，冷却至室温得煎煮液，第一次煎煮和第二次煎煮 时微沸即可，温度一般控制在95℃，这样即能保证有效成分的提取， 又能减少杂质的溶出，并降低能耗；
[0045]
(2)粗分离：煎煮液离心分离，离心机转速4500转/分钟，离 心15分钟，取上清液，进行微滤膜分离，控制流速为5～10ml/min，， 所使用的微滤膜规格为0.42～0.65micron或50000～300000nmwc，并 用蒸馏水进行2～5次洗滤，合并滤液，得粗提物；
[0046]
(3)精制：将粗提物进行超滤膜分离，所使用的超滤膜规格为 1000～30000nmwc，控制流速为1～5ml/min，并用蒸馏水进行2～5 次洗滤，保证绿原酸等有效成分尽可能透过膜层，合并滤液，减压浓 缩，再进行真空干燥，温度均控制在50～70℃，以保证绿原酸等有效 成分的受热分解，即得凌霄花提取物。
[0047]
实施例：
[0048]
称取凌霄花200g，加12倍水2400ml微沸煎煮(95℃)1.5小时， 过滤，药渣加10倍水2000ml微沸煎煮(95℃)1.0小时，过滤，合 并滤液，分成两份，一份进行膜过滤分离，一份进行醇沉分离。
[0049]
1、膜过滤分离：取提取液，60℃减压浓缩至比重为1.05(60℃)， 4500转/分钟的速度离心15分钟，取上清液，过微滤膜(0.65micron)， 控制流速10ml/min，用蒸馏水洗滤3次，每次100ml；微滤液过超滤 膜(10000nmwc),控制流速为5ml/min，用蒸馏水洗滤3次，每次50ml， 将超滤液60℃减压浓缩至比重为1.2(60℃)，真空干燥，得到凌霄 花提取物干粉；
[0050]
2、醇沉分离：取提取液，60℃减压浓缩至比重为1.15(60℃)， 加95％乙醇至含醇量为80％，搅拌均匀，静置过夜，离心得到上清 液，回收乙醇，真空干燥，得醇沉工艺得凌霄花提取物。
[0051]
3、检测结果
[0052]
3.1毛蕊花糖苷含量和转移率：
[0053][0054]
[0055]
3.2膜过滤成本分析
[0056][0057]
对于凌霄花来说，膜过滤工艺转移率高，工艺过程简单，基本可 以除去大分子的淀粉、糖类、鞣质、叶绿素等，而且膜过滤生产成本 较醇沉工艺低，生产环境更优，并能缩短生产周期。
[0058]
4、凌霄花提取物的检测
[0059]
取10批凌霄花提取物适量，研细，取约1.0g，精密称定，进行 分析，10批样品特征图谱叠加图见图2，以毛蕊花糖苷峰为参照峰s， 计算各峰的相对保留时间和相对峰面积。
[0060]
10批凌霄花提取物的特征图谱具有较好的一致性，以毛蕊花糖 苷对照品参照峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时 间，其相对保留时间均在规定值的
±
10％范围之内。10批次毛蕊花糖 苷的含量测定结果显示有很好的一致性。
[0061]
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征，以及和传统工 艺醇沉工艺得比较，体现本发明的高效率、低成本、低污染、高转移 率、高纯度的优势。
[0062]
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围， 凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接 或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护 范围内。