检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的特异性引物和探针及试剂盒的制作方法

技术特征：
1.检测h7亚型高低致病性禽流感病毒的特异性引物和探针，其特征在于，所述特异性引物为h7-f和h7-r，h7-f的序列信息：5
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graaatgtccragatatgtta-3’，h7-r的序列信息：5
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attagkccttcccatccatt-3’；探针为h7-m和h7-w，h7-m的序列信息：5
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aaacggattgcga-3
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，h7-w的序列信息：5
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tggtgcyatagcdggtttcattg-3
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。2.如权利要求1所述的检测h7亚型高低致病性禽流感病毒的特异性引物和探针，其特征在于，h7-m的5
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端进行报告荧光染料fam标记，3
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端进行荧光淬灭基团mgb标记，h7-w的5
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端进行报告荧光染料vic标记，3
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端进行荧光淬灭基团bhq1标记。3.检测h7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光rt-pcr试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的特异性引物和探针。4.如权利要求3所述的检测h7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光rt-pcr试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反转录试剂、扩增试剂、ddh2o、模板。5.如权利要求4所述的检测h7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光rt-pcr试剂盒，其特征在于，引物h7-f和h7-r浓度均为50μm，探针h7-m和h7-w浓度均为20μm。6.如权利要求5所述的检测h7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光rt-pcr试剂盒，其特征在于，试剂盒包括反转录试剂0.2-0.4μl、扩增试剂8-10μl、特异性引物：50μm h7-f和h7-r各0.1-0.3μl、探针：20μm h7-m和h7-w各0.3-0.5μl，模板1-3μl，加入ddh2o至20μl，模板为阳性对照、阴性对照中的一种或两种。7.如权利要求6所述的检测h7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光rt-pcr试剂盒，其特征在于，反转录试剂为e-mix，扩增试剂为2
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taqman mulitiplex qpcr master mix。8.如权利要求7所述的检测h7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光rt-pcr试剂盒，其特征在于，试剂盒的荧光rt-pcr反应扩增条件：第一阶段，反转录：42℃，15 min；第二阶段，预变性：95℃，30s；第三阶段，pcr扩增：94℃，10s； 60℃，20s ，40个循环，每次循环第三阶段60℃扩增后采集荧光信号，选择荧光通道fam和vic。

技术总结
本发明公开一种检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的特异性引物和探针，同时提供包括特异性引物和探针的试剂盒。本发明的试剂盒，使用基因特异性引物、探针、逆转录和PCR反应在一管内完成，操作方便，并降低了污染风险，实现禽流感病毒H7亚型高低致病的快速检测，在检测AIV-H7亚型高致病与低致病鉴别检测只需54min，缩短检测时间，提高检测效率，可以用于禽的拭子、血液、血清、血浆、组织中的高低致病性H7亚型禽流感病毒检测。性H7亚型禽流感病毒检测。


技术研发人员：娄亚坤 赵林萍 付燕峰 杨楠 杨丹芳 马彩燕 常伟 李慧英 任宝红
受保护的技术使用者：河南国昌生物科技有限公司
技术研发日：2021.05.26
技术公布日：2022/2/24