新型昆虫抑制蛋白的制作方法

技术特征：
1.一种重组核酸分子，其包含与编码杀虫蛋白的多核苷酸区段可操作地连接的异源启动子，其中所述杀虫蛋白包含与选自下组的序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序：seq id no:4、seq id no:2、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:14、seq id no:16和seq id no:18。2.如权利要求1所述的重组核酸分子，其中：a.所述重组核酸分子包含用于在植物中表达所述杀虫蛋白的序列；或b.所述重组核酸分子在不可再生的植物细胞中表达以产生杀虫有效量的所述杀虫蛋白；或c.所述重组核酸分子与载体可操作地连接，并且所述载体选自质粒、噬菌粒、杆粒、粘粒和细菌或酵母人工染色体。3.如权利要求1所述的重组核酸分子，其限定为存在于宿主细胞内，其中所述宿主细胞选自细菌细胞和植物细胞。4.如权利要求3所述的重组核酸分子，其中所述细菌宿主细胞来自选自以下的细菌属：土壤杆菌属、根瘤菌属、芽孢杆菌属、短芽孢杆菌属、埃希氏菌属、假单胞菌属、克雷伯菌属、泛菌属和欧文氏菌属。5.如权利要求4所述的重组核酸分子，其中所述芽孢杆菌属的种是蜡样芽孢杆菌或苏云金芽孢杆菌，所述短芽孢杆菌属是侧孢短芽孢杆菌，并且所述埃希氏菌属是大肠杆菌。6.如权利要求2所述的重组核酸分子，其中所述植物细胞是双子叶植物细胞或单子叶植物细胞。7.如权利要求6所述的重组核酸分子，其中所述植物宿主细胞选自苜蓿、香蕉、大麦、西兰花、卷心菜、芸苔、胡萝卜、木薯、蓖麻、花椰菜、芹菜、鹰嘴豆、白菜、柑橘、椰子、咖啡、三叶草、棉花、葫芦、黄瓜、花旗松、茄子、桉树、亚麻、蒜、葡萄、啤酒花、韭菜、莴苣、粟、坚果、燕麦、橄榄、洋葱、棕榈、牧草、豌豆、花生、胡椒、木豆、松树、马铃薯、杨树、南瓜、辐射松、萝卜、油菜籽、稻、根茎、黑麦、红花、高粱、南方松、大豆、菠菜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甜玉米、枫香、甘薯、柳枝稷、茶、烟草、番茄、小黑麦、草坪草、西瓜和小麦植物细胞。8.如权利要求1所述的重组核酸分子，其中所述蛋白质表现出针对鳞翅类昆虫的活性。9.如权利要求8所述的重组核酸分子，其中所述鳞翅类昆虫选自：绒毛豆夜蛾、甘蔗螟虫、小玉米茎蛀虫、玉米穗虫、烟芽夜蛾、大豆尺夜蛾、莎草粘虫、草地贪夜蛾、甜菜夜蛾、美国棉铃虫、东方叶虫、棉红铃虫、秋菜夜蛾、西南玉米螟、棉叶波纹夜蛾、菱纹背蛾、斑纹钻夜蛾、烟斜纹夜蛾、西方豆夜蛾和欧洲玉米螟。10.一种昆虫抑制组合物，其包含如权利要求1所述的重组核酸分子。11.如权利要求10所述的昆虫抑制组合物，其还包含编码至少一种不同于所述杀虫蛋白的其他杀虫剂的核苷酸序列。12.如权利要求11所述的昆虫抑制组合物，其中所述至少一种其他杀虫剂选自昆虫抑制蛋白、昆虫抑制dsrna分子和辅助蛋白。13.如权利要求11所述的昆虫抑制组合物，其中所述至少一种其他杀虫剂表现出针对鳞翅目、鞘翅目或半翅目的一种或多种害虫种的活性。14.如权利要求11所述的昆虫抑制组合物，其中所述至少一种其他杀虫蛋白选自cry1a、cry1ab、cry1ac、cry1a.105、cry1ae、cry1b、cry1c、cry1c、cry1d、cry1e、cry1f、
cry1g、cry1h、cry1i、cry1j、cry1k、cry1l、cry2a、cry2ab、cry2ae、cry3、cry3a、cry3b、cry4b、cry6、cry7、cry8、cry9、cry15、cry34、cry35、cry43a、cry43b、cry51aa1、et29、et33、et34、et35、et66、et70、tic400、tic407、tic417、tic431、tic800、tic807、tic834、tic853、tic900、tic901、tic1201、tic1415、tic2160、tic3131、tic836、tic860、tic867、tic869、tic1100、vip3a、vip3b、vip3ab、axmi-axmi-、axmi-88、axmi-97、axmi-102、axmi-112、axmi-117、axmi-100、axmi-115、axmi-113、和axmi-005、axmi134、axmi-150、axmi-171、axmi-184、axmi-196、axmi-204、axmi-207、axmi-209、axmi-205、axmi-218、axmi-220、axmi-221z、axmi-222z、axmi-223z、axmi-224z和axmi-225z、axmi-238、axmi-270、axmi-279、axmi-345、axmi-335、axmi-r1、ip3、dig-3、dig-5、dig-10、dig-657和dig-11蛋白。15.一种生产种子的方法，其包括：a.种植包含权利要求1-9任一项所述的重组核酸分子的第一种子；b.由所述第一种子生长出植物；以及c.从所述植物收获种子，其中所述收获的种子包含所述重组核酸分子。16.一种用于防治鳞翅类害虫或虫害的方法，所述方法包括使所述害虫与杀虫有效量的杀虫蛋白接触，所述杀虫蛋白包含与选自下组的序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序：seq id no:4、seq id no:2、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:14、seq id no:16和seq id no:18。17.一种检测包含蛋白质的样品中杀虫蛋白的存在的方法，其中所述杀虫蛋白包含与选自下组的序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序：seq id no:4、seq id no:2、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12、seq id no:14、seq id no:16和seq id no:18；所述方法包括：a.使所述样品与免疫反应性抗体接触；以及b.检测所述杀虫蛋白的存在。18.如权利要求17所述的方法，其中所述检测步骤包括elisa或western印迹。

技术总结
公开了对鳞翅类害虫的种表现出毒性活性的杀虫蛋白，并且包括但不限于TIC6757、TIC6757PL、TIC7472、TIC7472PL、TIC7473和TIC7473PL。提供了含有编码一种或多种公开的杀虫蛋白的重组核酸序列的DNA构建体。提供了抗鳞翅类侵袭的转基因植物、植物细胞、种子和植物部分，其含有编码本发明的所述杀虫蛋白的重组核酸序列。还提供了用于检测生物样品中本发明的重组核酸序列或蛋白质的存在的方法，以及使用TIC6757、TIC6757PL、TIC7472、TIC7472PL、TIC7473和TIC7473PL杀虫蛋白中的任一种来防治鳞翅类种的害虫的方法。任一种来防治鳞翅类种的害虫的方法。


技术研发人员：D
受保护的技术使用者：孟山都技术公司
技术研发日：2016.08.25
技术公布日：2022/2/18