一种分离纯化蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA的方法与流程

技术特征：
1.一种分离纯化蝉拟青霉5704s菌丝体中hea的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）取烘干的蝉拟青霉5704s菌丝体为原料，放入超微粉碎机中进行超微粉碎，过筛得到超微粉；所述蝉拟青霉5704s采自四川省峨眉山的蝉花分离纯化得到，分离鉴定纯化后由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号：cgmcc no.22418，保藏日期：2021年5月10日；（2）按照液料比为50:1往超微粉中加70%甲醇、超声提取后过滤，再次超声提取后过滤，合并提取液；（3）提取液浓缩去醇，冷沉过夜，取上清过滤清亮，上100 ml dm130大孔树脂柱，3倍柱体积水洗去杂，5倍柱体积 20%乙醇洗脱；收集洗脱液，浓缩成浸膏，加入甲醇50 ml，超声溶解，过滤，取滤液过10 ml酸性氧化铝柱脱色，并用50 ml甲醇洗脱，收集脱色后药液，浓缩蒸干得粗品；（4）取粗品用10 ml甲醇超声溶解，过0.45 μm微滤膜后通过半制备液相色谱进行分离，有机相为甲醇，水相为水，梯度洗脱，检测波长为260 nm，进样量为100 μl，收集目的色谱峰，浓缩后真空干燥，得hea，所述hea为n
6-（2-羟乙基）腺苷。2.如权利要求1所述的一种分离纯化蝉拟青霉5704s菌丝体中hea的方法，其特征在于：所述步骤(1)中粉碎时间为每次3 s，一共3次；过筛目数为80目。3.如权利要求1所述的一种分离纯化蝉拟青霉5704s菌丝体中hea的方法，其特征在于：所述步骤(2)中超声时间为30 min；提取次数为2次。4.如权利要求1所述的一种分离纯化蝉拟青霉5704s菌丝体中hea的方法，其特征在于：所述步骤（3）酸性氧化铝柱脱色的径高比1：13。5.如权利要求1所述的一种分离纯化蝉拟青霉5704s菌丝体中hea的方法，其特征在于：所述步骤（4）中采用的半制备液相色谱型号为日本津岛lc-20ar半制备高效液相色谱仪；采用半制备液相色谱柱为日本津岛shin-pack g2s c18，规格20
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250mm，5μm。

技术总结
本发明公开了一种分离纯化蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA的方法，步骤：以蝉拟青霉5704s菌丝体为原料超微粉碎；按照液料比为50:1往超微粉中加70%甲醇、超声提取两次合并提取液；提取液浓缩去醇，冷沉过夜，取上清过滤清亮，上大孔树脂柱，水洗去杂，乙醇洗脱后浓缩成浸膏，超声溶解，过滤，过酸性氧化铝柱脱色并用甲醇洗脱，浓缩蒸干，加甲醇超声溶解，过微滤膜后过半制备液相色谱，有机相为甲醇，水相为水，梯度洗脱，收集目的色谱峰，浓缩后真空干燥，得N


技术研发人员：谭艾娟 艾仁丽 吕世明
受保护的技术使用者：贵州大学
技术研发日：2021.11.12
技术公布日：2022/2/18