一种稠合多环吡啶酮衍生物及其用途的制作方法

一种稠合多环吡啶酮衍生物及其用途
发明领域
1.本发明属于药物领域，具体涉及一种稠合多环吡啶酮衍生物及其用途。更具体地说，本发明所述的化合物可以作为具有cen抑制作用的抗流感药物。


背景技术：

2.流行性感冒是流感病毒引起的具有高度传染性的呼吸道疾病，其中甲型流感病毒宿主范围最广，既可以感染禽类也可以感染哺乳类，极易造成世界范围内大流行。流感病毒仅在近百年内就发生了4次流感大爆发(1918年，1957年，1968年，2009年)。其中，1918年爆发的“西班牙流感”(h1n1)直接导致约5000万人死亡，是人类历史上死亡人数最多的流感大爆发。而最近一次在2009年爆发的“墨西哥流感”(a/2009/h1n1)迅速蔓延至全球214个国家，仅在爆发的12个月间就导致约20万人死亡。因此，对于流感病毒感染的预防和早期治疗，研制新型广谱抗流感病毒药物显得非常重要。通常，这些新菌株由现有流感病毒从其他动物物种向人类传播引起。
3.流感病毒是正黏液病毒科(orthomyxoviridae)的rna病毒，属于流感病毒属。根据病毒粒子核蛋白(np)和基质蛋白(m)的抗原特性及基因特性的不同，流感病毒主要分为a、b、c三型，也称甲、乙、丙三型。三型病毒具有相似的生化和生物学特征。病毒颗粒直径为80-120nm，并且通常近似球体，但可能出现丝状形式。病毒由三层构成，内层为病毒核衣壳，含核蛋白(np)、p蛋白和rna。np是可溶性抗原(s抗原)，具有型特异性，抗原性稳定。p蛋白(p1、p2、p3)可能是rna转录和复制所需的多聚酶。中层为病毒囊膜，由一层类脂体和一层膜蛋白(mp)构成，mp抗原性稳定，也具有型特异性。外层为两种不同糖蛋白构成的辐射状突起，即血凝素(hemagglutinin，h)和神经氨酸酶(neuraminidase，n)。h能引起红细胞凝集，是病毒吸咐于敏感细胞表面的工具，n则能水解粘液蛋白，水解细胞表面受体特异性糖蛋白末端的n-乙酰神经氨酸，是病毒复制完成后脱离细胞表面的工具。h和n均有变异特性，故只有株特异的抗原性，其抗体具有保护作用。
4.对于病毒而言不同寻常的是，其基因组并非单一片段的核酸；相反，基因组含有7个或8个片段的负义rna。a型流感基因组编码11种蛋白质：血凝素(h)、神经氨酸酶(n)、核蛋白(np)、m1、m2、ns1、ns2(nep)、pa、pb1、pb1-f2和pb2。h和n是病毒颗粒外部的大分子糖蛋白。ha是介导病毒结合靶细胞和病毒基因组进入靶细胞的凝集素，而na涉及通过裂解与成熟病毒颗粒结合的糖而从感染细胞释放子代病毒。因此，这些蛋白质已成为抗病毒药物的目标。而且，这些蛋白质是可产生的抗体的抗原。根据对h和n的抗体反应将a型流感病毒分为亚型，形成例如h5n1中h和n区别的基础。
5.由于流感病毒基因组很小，其所需蛋白质的合成依赖宿主细胞的翻译系统。因此，流感病毒的信使rna(mrna)需要同时具备可供宿主细胞翻译体系识别的5
′
帽状(cap)结构和3
′‑
poly(a)尾结构。其中，5
′
帽状结构是通过流感病毒rna聚合酶复合体中pa亚基的内切酶活性从宿主细胞前体mrna的5
′
端剪切“抢来的”。这种被称为帽依赖型的方式，夺取宿主mrna的cap帽状结构用于病毒自身mrna转录，是流感病毒转录起始所必须的。
6.正因为帽依赖型内切酶是流感病毒复制周期中的关键环节，又由于宿主细胞中不存在类似的机制和相应的蛋白酶，因此针对帽依赖型内切酶的抑制剂可以选择性阻断流感病毒的转录过程，同时对宿主细胞不造成影响，即具有帽依赖性核酸内切酶(cen)抑制作用。于是，这一机理成为潜在的抗流感药物靶点。
7.目前现有的预防和治疗流感病毒感染的手段主要为接种流感疫苗和使用抗流感病毒药物。接种流感疫苗是主要的预防性方法，具有高效性，但是它具有较大的不足之处是必须每年注射一次，且对免疫力低下和具有高危病情的成人以及幼儿的效力较低。此外，如果预测的流感疫苗种类不正确，将使疫苗的效力降低至25％。因此，抗流感病毒药物是治疗流感的一线方案。
8.至今为止，fda批准用于临床使用的抗流感病毒药物大体分为两类：1)m2离子通道阻断剂，包括金刚烷胺和金刚乙胺；2)神经氨酸酶抑制剂，主要有奥司他韦和扎那米韦以及有数个国家已经批准的帕拉米韦和拉尼米韦。此外，目前仅在日本批准上市的抗流感药物有rna抑制剂法匹拉韦及xofluza。由于目前流行的流感病毒均对金刚烷胺类药物耐药(病毒ns基因出现s31n突变)，金刚烷胺类药物已不再是who推荐的预防和治疗流感的首选药物。神经氨酸酶抑制剂类药物是流感患者抗病毒治疗的主要选择，然而，研究人员已陆续发现了对奥司他韦产生抗性的h1n1、h5n1、h3n2和b型耐药株，表明其耐药情况仍值得我们重点关注。最近，核酸酶内切酶抑制剂baloxavirmarboxil(xofluza)在日本获批(hayden fg，et al“baloxavir marboxil for uncomplicated influenza in adults and adolescents.”n engl j med.2018；379(10):913-923)。但流感病毒抗药性不可避免的会出现，针对同一靶点不同化学结构的小分子有可能会有不同的抗药性，因此发展新的流感病毒核酸酶内切酶抑制剂依然很有必要。
9.帽依赖型内切酶是流感病毒复制周期中的关键环节，又由于宿主细胞中不存在类似的机制和相应的蛋白酶，因此针对帽依赖型内切酶的抑制剂可以选择性阻断流感病毒的转录过程，同时对宿主细胞不造成影响。这一机理成为潜在的抗流感药物靶点。本发明满足了这些需要，并提供了其它相关的优点。


技术实现要素：

10.本发明的目的之一在于提供可作为帽依赖型内切酶抑制剂的新型吡啶酮衍生物，其在活性、药代动力学特性如生物利用度以及细胞毒性等中的至少一个方面优于现有的吡啶酮衍生物。
11.本发明的目的之二是提供一类吡啶酮衍生物，其不仅具有优异的帽依赖性内切核酸酶抑制活性和低的细胞毒性，而且同时还具有显著改善的药代动力学特性尤其是生物利用度。
12.本发明提供了一类作为流感病毒rna聚合酶抑制剂的新化合物，更具体地说，本发明提供了一类具有cen抑制作用的如式i通式所示的稠合多环吡啶酮衍生物，及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、n-氧化物、多晶体、共晶体、互变异构物、立体异构体或它们的混合物或前药。
[0013][0014]
其中，
[0015]
r1、r2和r3各自独立地选自氢、氟或氯；
[0016]
r4自独立地选自，氢原子，c
1-c8的烷基，取代烷基，c
3-c8的环烷基或含氮或氧原子的杂环烷基；
[0017]
r5为氢、任取代的磷酸酯基、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
3-6
碳环基、(c
3-6
碳环基)-c
1-2
亚烷基、3-6个原子组成的杂环基、(3-6个原子组成的杂环基)-c
1-2
亚烷基、c
6-10
芳基、c
6-10
芳基-c
1-2
亚烷基、5-10个原子组成的杂芳基、(5-10个原子组成的杂芳基)-c
1-2
亚烷基、其中所述c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
3-6
碳环基、c
3-6
碳环基-c
1-2
亚烷基、3-6个原子组成的杂环基、(3-6个原子组成的杂环基)-c
1-2
亚烷基、c
6-10
芳基、c
6-10
芳基-c
1-2
亚烷基、5-10个原子组成的杂芳基和(5-10个原子组成的杂芳基)-c
1-2
亚烷基各自独立地未被取代或被l、2、3或4个取代基所取代，或-c(＝o)-y1、-c(＝o)-o-y2、-(ch2)-o-(c＝o)-y1、-(ch2)-o-(c＝o)-o-y2、-(chch3)-o-(c＝o)-y1以及-(chch3)-o-(c＝o)-o-y2；
[0018]
y1为任选取代的c
1-10
烷基、任选取代的c
3-8
环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、单取代的氨基基团、二取代的氨基以及-c(r
*
)2nhr
**
；并且每个r
*
和r
**
独立地为氢或任选取代的c
1-6
烷基；
[0019]
y2为任选取代的c
1-10
烷基、任选取代的c
3-8
环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、单取代的氨基基团。
[0020]
在本发明的一些实施方案中，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体、辅剂、媒介物或它们的组合。
[0021]
在一些实施方案中，本发明提供的药物组合物进一步包含一种或多种其他治疗剂。
[0022]
在另外一些实施方案中，所述其他治疗剂选自抗流感病毒剂或疫苗。
[0023]
在另外一些实施方案中，药物组合物可以是液体，固体，半固体，凝胶或喷雾剂型。
[0024]
在另外一些实施方案中，本发明所述的药物组合物可以包括一种或多种抑制流感病毒感染复制的药物，选自神经氨酸酶抑制剂、m2蛋白抑制剂、聚合酶抑制剂、pb2抑制剂、免疫调节剂。
[0025]
在另外一些实施方案，本发明所述的药物组合物，其中所涉及的其他治疗剂是金刚胺(amantadine)、金刚乙胺(rimantadine)、奥司他韦(oseltamivir)、扎那米韦(zanamivir)、帕拉米韦(peramivir)、拉尼米韦(laninamivir)、拉尼米韦辛酸酯(laninamivir octanoate)、法匹拉韦(favipiravir)、阿比多尔(arbidol)、利巴韦林(ribavirin)、贝前列素(beraprost)、司他弗林、英加韦林(ingavirin)、流感酶(fludase)、cas号1422050-75-6的药物、jnj-872、s-033188、流感疫苗(例如flumist、quadrivalent、
quadrivalent)或它们的组合。另一方面，本发明提供了所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防、缓解或治疗患者病毒感染性疾病。
[0026]
在一些实施方案中，所述病毒感染为流感病毒感染。所述流感病毒选自甲型、乙型、丙型或禽流感(h5n1，h7n9)；症状选自伴有发热、发冷、头痛、肌肉痛、全身感到倦怠等的类感冒症状、或咽痛、流鼻涕、鼻塞、咳嗽、痰的呼吸道炎症、腹痛、呕吐、腹泻的胃肠症状、进而伴有急性脑病、肺炎二次感染的并发症。
[0027]
在另外一些实施方案中，本发明提供了所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于抑制流感病毒的rna聚合酶。
[0028]
在另外一些实施方案中，本发明提供了所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于抑制帽依赖性核酸内切酶(cen)。
[0029]
除非另作说明，本发明包含所有上述化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、多晶体、前药、共晶体、互变异构物、立体异构体。
[0030]
在一些实施方案中，所述盐是指药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。
[0031]
本发明的化合物还包括其盐的形式，该盐不一定是药学上可接受的盐，但是可以用于制备和/或提纯本发明的化合物和/或用于分离本发明化合物的异构体的中间体。
[0032]
本发明化合物、包括其盐也可以以其水合物形式获得，或者包括其他用于其结晶的溶剂。本发明化合物可以固有地或通过设计形成具有可药用溶剂(包括水)的溶剂化物；因此，本发明还包括其溶剂化的和未溶剂化的形式。
[0033]
另一方面，本发明化合物可能会包含几个不对称中心或其通常所描述的外消旋体混合物的形式。本发明还进一步包含外消旋混合物，部分外消旋混合物以及分离得到的对映体和非对映体。
[0034]
本发明化合物可以以可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体中的一种形式或其混合物的形式存在，本发明可以进一步包含本发明化合物的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体的混合物，或者异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体的部分混合物或者已分离开的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体。
[0035]
另一方面，本发明涉及式i所包含的化合物的制备、分离和纯化的方法。
[0036]
前面所述内容只概述了本发明的某些方面，但并不限于这些方面。这些方面及其他的方面的内容将在下面作更加具体完整的描述。
具体实施方式
[0037]
定义和一般术语
[0038]
除非另外指出，本发明所使用的技术和科学术语与本发明所属技术领域技术人员的常规理解具有相同的含义，除非另外指出，在本发明公开全部内容所引用的所有专利公开出版物通过引用方式将其整体并入本发明。
[0039]
除非另有说明或者上下文中有明显的冲突，本文所使用的冠词“一”、“一个(种)”和“所述”旨在包括“至少一个”或“一个或多个”。因此，本文所使用的这些冠词是指一个或多于一个(即至少一个)宾语的冠词。例如，“一组分”指一个或多个组分，即可能有多于一个
的组分被考虑在所述实施方案的实施方式中采用或使用。
[0040]
本发明所使用的术语“受试对象”是指动物。典型地所述动物是哺乳动物。受试对象也是指灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述受试对象是灵长类动物。在另外其他实施方案中，所述受试对象是人。
[0041]
本发明所使用的术语“受治疗者”和“患者”可交换地使用。术语“受治疗者”和“患者”指动物(例如，鸡、鹌鹑或火鸡等鸟类或哺乳动物)，特别是包括非灵长类动物在内的“哺乳动物”(例如，牛、猪、马、羊、兔、豚鼠、大鼠、猫、狗和小鼠)和灵长类动物(例如，猴子、黑猩猩和人类)，更特别的是人类。在一个实施方案中，受治疗者为非人类动物，例如家畜(例如，马、牛、猪或羊)或宠物(例如，狗、猫、豚鼠或兔)。在另一些实施方案中，“患者”是指人类。
[0042]
本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体(atropisomer)及它们的混合物如外消旋混合物，也包含在本发明范围之内。许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀d和l或r和s来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀d和l或( )和(
–
)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(
–
)或l表示化合物是左旋的。前缀为( )或d的化合物是右旋的。就给定的化学结构而言，除了这些立体异构体互为镜像外，这些立体异构体是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体，并且所述异构体的混合物通常称作对映异构体的混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或方法中没有立体选择性或立体特异性时，可出现所述外消旋混合物或外消旋体。
[0043]
依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对应异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。旋光性的(r)-或(s)-异构体可使用手性合成子或手性制剂制备，或使用常规技术拆分。如果此化合物含有一个双键，取代基可能为e或z构型；如果此化合物中含有二取代的环烷基，环烷基的取代基可能为顺式或反式(cis-或trans-)构型。
[0044]
术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体，等等。
[0045]
本发明的“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸，氨基乙醇。术语“水合物”是指溶剂分子是水所形成的缔合物。
[0046]
本发明所使用的“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，与氨基基团反应形成的无机酸盐有盐酸盐，氢溴酸盐，磷酸盐，硫酸盐，高氯酸盐，和有机酸盐如乙酸盐，草酸盐，富马酸盐，马来酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，丙二酸盐，或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐，藻酸盐，抗坏血酸盐，天冬氨酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，重硫酸盐，硼酸盐，丁酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊基丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，反丁烯二酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，葡萄糖酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢碘酸盐，2-羟基-乙磺酸盐，乳糖醛酸盐，
乳酸盐，月桂酸盐，月桂基硫酸盐，苹果酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，扑酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，特戊酸盐，丙酸盐，硬脂酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一酸盐，戊酸盐，等等。通过适当的碱得到的盐包括碱金属，碱土金属，铵和n

(c
1-4
烷基)4的盐。本发明也拟构思了任何所包含n的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐包括钠，锂，钾，钙，镁，等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，c
1-8
磺酸化物和芳香磺酸化物。
[0047]
在一些实施方案中，所述盐是指药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。
[0048]
本发明的化合物还包括这样的化合物的其他盐，该其他盐不一定是药学上可接受的盐，并且可以用作用于制备和/或提纯本发明的化合物和/或用于分离本发明的化合物的对映体的中间体。
[0049]
可药用的酸加成盐可与无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
[0050]
可以由其衍生得到盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
[0051]
可以由其衍生得到盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
[0052]
可药用碱加成盐可与无机碱和有机碱形成。
[0053]
可以由其衍生得到盐的无机碱包括，例如铵盐和周期表的i族至xii族的金属。在某些实施方案中，该盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。
[0054]
可以由其衍生得到盐的有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环状胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括，例如，异丙胺、苄星青霉素、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
[0055]
本发明的可药用盐可以用常规化学方法由母体化合物、碱性或酸性部分来合成。一般而言，该类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如na、ca、mg或k氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应通常在水或有机溶剂或二者的混合物中进行。一般地，在适当的情况中，需要使用非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。
[0056]
而且，本发明化合物、包括其盐也可以以其水合物形式获得，或者包括其他用于其
结晶的溶剂。本发明化合物可以固有地或通过设计形成具有可药用溶剂(包括水)的溶剂化物；因此，本发明意在包括溶剂化的和未溶剂化的形式。
[0057]
本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(i)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(c
1-24
)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。
[0058]
本发明化合物的任何不对称原子(例如，碳等)都可以以外消旋或对映体富集的形式存在，例如(r)-、(s)-、(r,r)-、(s,s)-、(s,r)-或(r,s)-构型形式存在。在某些实施方案中，各不对称原子在(r)-或(s)-构型方面具有至少50％对映体过量，至少60％对映体过量，至少70％对映体过量，至少80％对映体过量，至少90％对映体过量，至少95％对映体过量，或至少99％对映体过量。如果可能的话，具有不饱和双键的原子上的取代基可以以-(z)-或-(e)-形式存在。
[0059]
如本发明所描述的，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基所取代，如上面的通式化合物，或者像实施例里面特殊的例子，子类，和本发明所包含的一类化合物。应了解术语“任选取代的”和“未被取代或被
……
个取代基所取代”与“取代或非取代的”这个术语可以交换使用。术语“任选地”，“任选的”或“任选”是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。一般而言，术语“任选地”不论是否位于术语“取代的”之前，都表示所给结构中的一个或多个氢原子未被取代或被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。其中所述的取代基可以是，但并不限于f、cl、br、i、cn、n3、oh、nh2、no2、氧代(＝o)、c
1-12
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
烷基氨基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-12
环烷基、c
3-12
环烷基-c
1-4
亚烷基、c
3-12
碳环基、c
3-12
碳环基-c
1-4
亚烷基、3-12个原子组成的杂环基、(3-12个原子组成的杂环基)-c
1-4
亚烷基、c
6-10
芳基、c
6-10
芳基-c
1-4
亚烷基、5-16个原子组成的杂芳基或(5-16个原子组成的杂芳基)-c
1-4
亚烷基。
[0060]
在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“c
1-6
烷基”特别指独立公开的甲基，乙基，c3烷基，c4烷基，c5烷基和c6烷基；术语“5-10个原子组成的杂芳基”特别指独立公开的5个原子组成的杂芳基、6个原子组成的杂芳基、7个原子组成的杂芳基、8个原子组成的杂芳基、9个原子组成的杂芳基和10个原子组成的杂芳基。
[0061]
本发明使用的术语“烷基”，表示含1-20个碳原子的饱和直链或支链的一价碳氢化合物原子团。烷基基团的实例包含，但并不限于，甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基，2-戊基，3-戊基，2-甲基-2-丁基，3-甲基-2-丁基，3-甲基-1-丁基，2-甲基-1-丁基，正己基，2-己基，3-己基，2-甲基-2-戊基，3-甲基-2-戊基，4-甲基-2-戊基，3-甲基-3-戊基，2-甲基-3-戊基，2,3-二甲基-2-丁基，3,3-二甲基-2-丁基，正庚基，正辛基等等，其中所述烷基基团可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基
所取代。
[0062]
本发明所使用的术语“烷基”和其前缀“烷”，都包含直链和支链的饱和碳链。
[0063]
术语“环烷基”是指有一个或多个连接点连接到分子的其余部分，饱和的，含有3-6个环碳原子的单环、双环或三环体系。在一些实施方案中，环烷基是含3-6个环碳原子的环体系，例如c
3-6
环烷基；在一些实施方案中，环烷基是含5-6个环碳原子的环体系，例如c
5-6
环烷基；环烷基基团的实例包含，但并不限于，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，等等，且所述环烷基基团可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
[0064]
术语“杂环基”可以单独使用或作为“杂环基烷基”或“杂环基烷氧基”的一大部分，是指包含3-12个环原子的饱和或部分不饱和的，非芳香性的单环、双环或三环体系，其中至少一个环原子选自氮，硫和氧原子，其中，所述杂环基是非芳香性的，且不含任何的芳香环，且此环体系有一个或多个连接点与分子的其余部分相连。术语“杂环基”和“杂环”在此处可交换使用。术语“杂环基”包括单环、双环或多环稠合、螺式或桥连杂环环系。双环杂环基包括桥连双环杂环基、稠合双环杂环基和螺双环杂环基。在一些实施方案中，杂环基为3-8个环原子组成的环体系；在另一些实施方案中，杂环基为3-6个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为5-7个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为5-8个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为6-8个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为5-6个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为4个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为5个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为6个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为7个环原子组成的环体系；在其他一些实施方案中，杂环基为8个环原子组成的环体系。
[0065]
杂环基的实例包括，但不限于：环氧乙烷基，氮杂环丁基，氧杂环丁基，硫杂环丁基，吡咯烷基，2-吡咯啉基，3-吡咯啉基，吡唑啉基，吡唑烷基，咪唑啉基，咪唑烷基，四氢呋喃基，二氢呋喃基，四氢噻吩基，二氢噻吩基，1,3-二氧环戊基，二硫环戊基，四氢吡喃基，二氢吡喃基，2h-吡喃基，4h-吡喃基，四氢噻喃基，哌啶基，吗啉基，硫代吗啉基，哌嗪基，二噁烷基，二噻烷基，噻噁烷基，高哌嗪基，高哌啶基，氧杂环庚烷基，硫杂环庚烷基。杂环基中-ch
2-基团被-c(＝o)-取代的实例包括，但不限于，2-氧代吡咯烷基，氧代-1,3-噻唑烷基，2-哌啶酮基，3,5-二氧代哌啶基，嘧啶二酮基。杂环基中硫原子被氧化的实例包括，但不限于，环丁砜基和1,1-二氧代硫代吗啉基。桥连杂环基基团包括，但不限于，2-氧杂二环[2.2.2]辛基、1-氮杂二环[2.2.2]辛基、3-氮杂二环[3.2.1]辛基，等等。所述的杂环基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
[0066]
如本发明所述，术语“药学上可接受的载体”包括任何溶剂，分散介质，包衣衣料，表面活性剂，抗氧化剂，防腐剂(例如抗细菌剂、抗真菌剂)，等渗剂，盐，药物稳定剂，粘合剂，赋形剂，分散剂，润滑剂，甜味剂，调味剂，着色剂，或其组合物，这些载体都是所属技术领域技术人员的已知的。除了任意常规载体与活性成分不相容的情况外，涵盖其在治疗或药物组合物中的用途。
[0067]
术语本发明化合物的“有效量”指引起预期生物反应的量。在本发明中，预期生物反应是抑制流感病毒复制，减少流感病毒的量或减轻或改善流感病毒感染的严重程度、持续时间、进展或发作，防止流感病毒感染蔓延，防止流感病毒感染相关症状的复发、演变、发
作或进展，或增强或提高使用的另一种抗流感感染疗法的预防或治疗作用。向受治疗者施用的化合物的确切量将取决于施用模式、感染的类型和严重程度和受治疗者的特征，例如健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。技术人员将能够根据这些和其它因素确定适当剂量。当与其它抗病毒剂联合施用时，例如与抗流感药物联合施用时，第二种试剂的“有效量”将取决于所用药物的类型。已知经核准试剂的适合剂量并且技术人员可根据受治疗者的病状、治疗病状的类型和使用的本发明所述化合物的量进行调节。在未明确指出量的情况下，应采取有效量。例如，可按约0.01-100mg/体重/天的剂量范围向受治疗者施用本发明所述化合物做治疗性或预防性治疗。
[0068]
本发明所使用的术语“治疗”指治疗性和预防性治疗。例如，治疗性治疗包括由于施用一种或多种疗法(例如，一种或多种治疗剂(例如本发明的化合物和组合物)减轻或改善流感病毒介导的病状的进展、严重程度和/或持续时间，或改善流感病毒介导的病状的一种或多种症状(特别地，一种或多种可辨症状)。在特定实施方案中，治疗性治疗包括改善流感病毒介导的病状的至少一个可测量物理参数。在其它实施方案中，治疗性治疗包括通过(例如)稳定可辨症状在物理上或通过(例如)稳定物理参数在生理上或二者抑制流感病毒介导的病状的进展。在其它实施方案中，治疗性治疗包括减轻或稳定流感病毒介导的感染。可在社区中使用抗病毒药物以治疗已经患流感的人以减少症状的严重程度并减少他们生病的天数。
[0069]
在另外一些实施方案，本发明涉及到以下其中之一的化合物或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或它的前药，但绝不限于该化合物(具体化合物)。
[0070]
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含有效量的本发明所述化合物。
[0071]
在本发明的一些实施方案中，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体、辅剂、媒介物或它们的组合。
[0072]
在一些实施方案中，本发明提供的药物组合物进一步包含第二种药物。
[0073]
在另外一些实施方案中，所述第二种药物一种或多种抑制流感病毒感染复制的药物，选自神经氨酸酶抑制剂、m2蛋白抑制剂、聚合酶抑制剂、pb2抑制剂、扎那米韦、奥司他韦、帕拉米韦、拉尼米韦、拉尼米韦辛酸酯、法匹拉韦、免疫调节剂、贝前列素、利巴韦林。
[0074]
另一方面，本发明提供了所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防、处理、治疗或减轻患者病毒感染性疾病。
[0075]
在一些实施方案中，所述病毒感染为流感病毒感染。
[0076]
在另外一些实施方案中，本发明提供了所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于抑制流感病毒的rna聚合酶。
[0077]
在另外一些实施方案中，本发明提供了所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于抑制帽依赖性核酸内切酶(cen)。
[0078]
本发明的化合物的组合物、制剂和给药
[0079]
本发明提供了一种药物组合物，其包括式(i)、式(i-a)或(i-b)所示的化合物或其立体异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。所述药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物，以及任选
地、其它的治疗和/或预防成分。在一些实施方案，所述药物组合物包含有效量的至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或媒介物。
[0080]
药学上可接受的载体可能含有不会过度抑制化合物的生物活性的惰性成分。药学上可接受的载体应生物相容，例如无毒、非炎性、非免疫原性或一旦施用给患者无其它不良反应或副作用。可采用标准制药技术。
[0081]
像本发明所描述的，本发明所述的药物组合物或药学上可接受的组合物进一步包含药学上可接受的载体、佐剂或赋形剂，像本发明所应用的，包括适合于特有的目标剂型的，任何溶剂、稀释剂、液体赋形剂、分散剂、悬浮剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、固体粘合剂或润滑剂，等等。除了与本发明的化合物不相容的常规载体媒介，例如会产生不良生物效应或与药学上可接受的组合物中的任何其他组分发生有害的相互作用，其他任何常规的载体媒介及它们的用途也是本发明所考虑的范围。
[0082]
可用作药学上可接受的载体的物质的一些实例包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如吐温80、磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾)、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如硫酸精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠或锌盐)、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段共聚物、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羊毛脂、糖类(例如乳糖、葡萄糖和蔗糖)、淀粉(例如玉米淀粉和马铃薯淀粉)、纤维素及其衍生物(例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素)、粉状黄蓍胶、麦芽、凝胶、滑石、赋形剂(例如可可油和栓剂蜡)、油(例如花生油、棉花子油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、乙二醇(例如丙二醇或聚乙二醇)、酯(例如油酸乙酯和十二酸乙酯)、琼脂、缓冲剂(例如氢氧化镁和氢氧化铝)、褐藻酸、无热原水、等渗盐水、林格氏溶液(ringer'ssolution)、乙醇和磷酸盐缓冲液以及其它无毒相容性滑润剂(例如硫酸月桂酯钠和硬脂酸镁)以及根据配制人的判断着色剂、防粘剂、涂层剂、甜味剂和增香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于组合物中。
[0083]
本发明的化合物或组合物可以通过任何合适方式给药，可根据受治感染的严重程度经口、直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如同通过粉剂、药膏或滴剂)、口腔作为口或喷鼻剂等向人或其它动物施用以上所述化合物和药学上可接受的组合物。
[0084]
供口服的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂、微型乳剂、溶液、悬浮剂、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型可能含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉花子油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物也可包括佐剂，例如湿润剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、调味剂和增香剂。
[0085]
可根据已知技术使用适合的分散或湿润剂和悬浮剂配制可注射制剂，例如无菌可注射水或油悬浮剂。无菌可注射制剂也可能是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮剂或乳剂，例如1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物和溶剂中，可采用的是水、林格氏溶液、u.s.p.和等渗氯化钠溶液。另外，按照惯例采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此，可采用任何无味的不挥发性油，包括合成的单酸甘油脂或甘油二酯。另外，脂肪酸，例如十八烯酸，用于制备注射剂。
[0086]
例如，可通过细菌保留过滤器过滤或通过加入呈无菌固体组合物形式，使用之前
可溶于或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中的杀菌剂为可注射制剂灭菌。
[0087]
为延长本发明所述化合物或组合物的作用，常常希望减缓化合物由皮下或肌肉注射的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体悬浮液实现。然后，化合物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体大小和晶形。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油媒介物中实现延迟吸收经肠胃外施用的化合物。通过在生物可降解的聚合物例如聚交酯-聚羟基乙酸中形成化合物的微胶囊矩阵制成可注射的储存形式。根据化合物与聚合物之比和采用的特殊聚合物的性质，可控制化合物释放速率。其它生物可降解的聚合物的实例包括聚原酸酯和聚酸酐。也可通过将化合物截留在与身体组织相容的脂质体或微型乳剂中制备可注射的储存制剂。
[0088]
口服固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在这种固体剂型中，活性化合物混有至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填料或膨胀剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧基甲基纤维素、藻酸盐、凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如琼脂
‑‑
琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂，例如石蜡，f)吸收加速剂，例如季铵化合物，g)湿润剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、硫酸月桂酯钠及其混合物。在为胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含缓冲剂。
[0089]
也可使用如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等赋形剂将相似类型的固体组合物用作软和硬凝胶胶囊中的填料。可用包衣和壳，例如肠溶衣和制药领域众所周知的其它包衣制备片剂、糖锭、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型。它们可任选含有乳浊剂并且还可具有组合物的性质，以致任选地以延迟方式仅释放活性成分，或优选地，在肠道的某一部分释放。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。也可使用乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等赋形剂将相似类型的固体组合物用作软和硬凝胶胶囊中的填料。
[0090]
活性化合物也可呈现具有一种或多种上述赋形剂的微密封形式。可用包衣和壳，例如肠溶衣、控释包衣和制药领域中众所周知的其它包衣制备片剂、糖锭、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型。在这种固体剂型中，活性化合物可能混有至少一种惰性稀释剂，例如蔗糖、乳糖或淀粉。一般地，这种剂型也可能包含除惰性稀释剂外的另外的物质，例如压片润滑剂和其它压片辅助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在为胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可包含缓冲剂。它们可任选含有乳浊剂并且还可具有组合物的性质，以致任选地以延迟方式仅释放活性成分，或优选地，在肠道的某一部分释放。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。
[0091]
本发明所述化合物的局部或经皮施用剂型包括药膏、软膏、乳膏、洗剂、凝胶、粉剂、溶液、喷剂、吸入剂或贴片。在无菌条件下，活性化合物与药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂或可能需要的缓冲剂。眼科制剂、耳滴剂和眼药水也被考虑到本发明的范围之内。另外，本发明考虑到具有提供控制化合物向身体递送的附加优点的皮肤贴片的用途。可通过将化合物溶解或分散于恰当介质中制成这种剂型。吸收促进剂也可用于提高化合物通过皮肤的流量。可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中控制速率。
[0092]
也可经口、肠胃外，通过吸入喷剂经局部、直肠、鼻、口腔、阴道或通过植入药盒施
用本发明所述的组合物。如本发明使用的术语“肠胃外”包括但不限于皮下、静脉内、肌肉、关节内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。特别地，经口、腹膜内或静脉内施用组合物。
[0093]
本发明所述组合物的无菌可注射形式可为水或油悬浮液。这些悬浮液可跟进本领域已知的技术使用适合的分散或湿润剂和悬浮剂制备。无菌可注射制剂也可能是于无毒的可经肠胃外接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如于1，3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介物和溶剂中，可采用的是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，按照惯例采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此，可采用任何无味的不挥发性油，包括合成的单酸甘油脂或甘油二酯。另外，正如尤其呈聚氧乙烯化形式的天然药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，脂肪酸例如十八烯酸及其甘油酯衍生物用于制备注射剂。这些油溶液或悬浮液也可能含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或在配制药学上可接受的剂型(包括乳剂和悬浮液)中常用的类似分散剂。其它常用表面活性剂，例如tweens、spans和在生产药学上可接受的固体、液体或其它剂型中常用的其它乳化剂或生物利用率增强剂也可用于配制的目的。
[0094]
可以任何口服可接受的剂型，包括但不限于胶囊、片剂、水悬浮液或溶液，口服本发明所述药物组合物。在为供口服片剂的情况下，常用载体包括但不限于乳糖和淀粉。通常还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。为了以胶囊形式口服，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服需要水悬浮液时，活性成分与乳化剂和悬浮剂结合。若需要，还可加入某些甜味剂、增味剂或着色剂。
[0095]
对于局部滴施而言，可将药物组合物配制为含有悬浮或溶于一种或多种载体中的活性组分的适合药膏。适于局部滴施本发明的化合物的载体包括但不限于矿物油、凡士林油、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将药物组合物配制为含有悬浮或溶于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的适合洗剂或乳膏。适合的载体包括但不限于矿物油、山梨醇酐单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
[0096]
为了眼科使用，可用或不用防腐剂例如苯扎氯铵，将药物组合物配制为在等渗ph调节无菌盐水中的微粉化悬浮液，或特别是等渗ph调节无菌盐水中的溶液。或者，为了眼科使用，可将药物组合物配制为药膏，例如凡士林。
[0097]
也可通过鼻用气化喷雾剂或吸入施用药物组合物。根据制药领域中众所周知的技术制备这种组合物并且采用苯甲醇和其它适合的防腐剂、提高生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂制备成盐水中的溶液。
[0098]
可将用于本发明的方法的化合物配制成单位剂型。术语“单位剂型”指适合作为受治疗者的单位剂量的物理分立单位，每单位含有经计算产生预期疗效的预定量的活性物质，任选地与适合的药物载体结合。单位剂型可作单次日剂量或多次日剂量(例如，每日约1-4次或更多次)的其中一次。当使用多次日剂量时，对于每次剂量的单位剂型可相同或不同。
[0099]
综上所述，本发明提供了所述化合物或所述药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于抑制帽依赖性核酸内切酶(cen)。本发明的化合物适合制成多种剂型的药物，可以广泛用于治疗季节性流感、禽流感、猪流感以及对达菲有耐药性的流感病毒突变
株。
[0100]
本发明的化合物及药物组合物除了对人类治疗有益以外，还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物中的哺乳动物。另外一些动物的实例包括马、狗和猫。在此，本发明的化合物包括其药学上可接受的衍生物。
[0101]
本发明所述化合物的优点：与已有的同类化合物相比，本发明的化合物结构上有较大差异，不仅能很好的抑制流感病毒，还具有更低的细胞毒性，以及更优良的体内代理动力学性质和体内药效学性质。并且，本发明提供的化合物相对于已有的同类化合物而言，还具有更优良的成药性。
[0102]
具体实施方式
[0103]
为描述本发明，以下列出了实施例。但需要理解，本发明不限于这些实施例，只是提供实践本发明的方法。在本发明保护范围内所做的修改、改变、变型等都在本发明的保护范围内。
[0104]
在本说明书中，如果在化学名称和化学结构间存在任何差异，结构是占优的。
[0105]
一般地，本发明的化合物可以通过本发明所描述的方法制备得到，除非有进一步的说明，其中取代基的定义如式i所示。下面的反应方案和实施例用于进一步举例说明本发明的内容。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0106]
制备实施例
[0107]
本文所提供的化合物可以使用下文所阐述的特定合成方案的将为本领域技术人员公知的操作方案，由容易获得的起始物质来制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，可以由本领域技术人员通过常规的优化程序来确定。在以下制备实施例中，发明人以本发明的部分化合物为例，详细描述了本发明化合物的制备过程。
[0108]
下述实施例中，缩写解释：
[0109]
boc2o：二叔丁基二碳酸酯；
[0110]
diea：n，n-二异丙基乙胺
[0111]
nmm：n-甲基吗啉
[0112]
hatu：2-(7-氧化苯并三氮唑)-n，n，n’，n
’‑
四甲基脲六氟磷酸盐
[0113]
pd(pd(pph3)2cl2：双苯基磷二氯钯
[0114]
pd/c：钯碳催化剂
[0115]
kotbu：叔丁醇钾
[0116]
naotbu：叔丁醇钠
[0117]
semcl：2-(三甲硅烷基)乙氧甲基氯
[0118]
ncs：n-氯代琥珀酰胺
[0119]
nbs：n-溴代琥珀酰胺
[0120]
aibn：偶氮二异丁腈
[0121]
ppts：吡啶对甲苯磺酸盐tfa：三氟乙酸
[0122]
nmp：n-甲基吡咯烷酮
[0123]
socl2：二氯亚砜
[0124]
licl：氯化锂
[0125]
pe：石油醚；
[0126]
etoac：乙酸乙酯；
[0127]
dmf：n,n-二甲基甲酰胺；
[0128]
mecn：乙腈
[0129]
dcm：二氯甲烷；
[0130]
thf：四氢呋喃
[0131]
meoh：甲醇
[0132]
na2co3：碳酸钠
[0133]
prep-hplc:高压制备液相色谱
[0134]
sfc：超临界流动色谱
[0135]
rf：比移值；
[0136]
g：克
[0137]
mg：毫克
[0138]
h：小时
[0139]
rt：室温
[0140]
mol：摩尔
[0141]
mmol：毫摩尔
[0142]
ml：毫升
[0143]
m：摩尔/升
[0144]
实施例1
[0145]
化合物1的合成路线如下：
[0146]
[0147][0148]
步骤1：用甲醇(50ml)，将化合物1-1(10g,48.5mmol)溶到反应瓶中，然后降温到0～5度，分批加nabh4(2.21g,58.2mmol)，加料完后反应在20～30度搅拌1小时。tlc(pe:ea＝10:1,rf(r1)＝0.80,rf(p1)＝0.70)。反应液浓缩后用100ml饱和氯化铵水溶液淬灭，然后用dcm(100ml*2)萃取，有机相用饱和食盐水(100ml)洗涤后再浓缩。得到化合物1-2(9.8g,47.1mmol,97％yield)白色固体。lcms(esi)m/z 209.26[m 1] 。
[0149]
步骤2：将化合物1-2(14.3g,48.5mmol)和化合物1-3(6.45g,48.5mmol)的混合物，氮气保护下100℃反应8小时。lcms显示有目标产物生成。得到的粗品通过柱层析纯化后得到黄色固体化合物1-4(11.78g,75％yield)。lcms(esi)m/z 324.37[m 1] 。
[0150]
步骤3：将化合物1-4(11.75g,36.3mmol)溶于甲醇(100ml)，加入钯碳(10％，2.5g)在氢气环境下搅拌5小时。lcms显示有目标产物生成。将反应液混合物过滤，得到机相减压浓缩得到化合物1-5(9.93g,92％)，黄色油状物，粗品直接用于下一步。lcms(esi)m/z 295.37[m 1] 。
[0151]
步骤4：在化合物1-5(9.9g,33.5mmol)和ppts(25.2g,100.6mmol)的混合液中加入化合物1-6(16.1g,50.25mmol)与nmp(150ml)中，混合物在95度下搅拌36小时。tlc点板(乙酸乙酯:甲醇＝20:1,rf＝0.40)显示有新点生成。将5批反应液合并后倒入水(1500ml)中，然后用乙酸乙酯(400mlx3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(1000ml)洗涤后旋干。将浓缩后的粗品通过柱层析纯化后得到化合物1-7(7.05g，12.54mmol，68％收率)，棕色油状物。lcms(esi)m/z 550.68[m 1] 。
[0152]
步骤5：在化合物1-7(6.5g,11.8mmol)与甲醇(80.0ml)的混合液中加入氢氧化钠(0.71g,17.7mmol,1.50eq)与水(14.0ml)的溶液，然后混合物在20-30度反应2小时。lcms显示有目标产物生成。将反应液浓缩干后，用甲基叔丁基醚(20.0ml*3)萃取。分液后水相溶于水(50.0ml)中，用1n盐酸调节ph至1-2，有大量固体产生，过滤，滤饼蒸干得到1-8(4.38g,8.4mmol,71％yield)，棕色固体，直接用于下一步。lcms(esi)m/z522.57[m 1] 。
[0153]
步骤6：在化合物1-8(1.00g,1.82mmol,)与dmf(10.0ml)的混合液中加入乙胺的盐酸盐(234mg,2.88mmol)，nmm(770mg,7.64mmol)和hatu(944mg,2.47mmol)，然后反应液在10-20度反应1小时。lcms(ew26613-76-p1a)显示有目标产物生成。将反应液倒入80.0ml水中，有固体析出，过滤，将滤饼减压浓缩得到粗品。将粗品通过柱层析纯化得到化合物1-9
(1.60g,2.65mmol,76.4％yield)，棕色固体。lcms(esi)m/z549.64[m 1] 。
[0154]
步骤7：在化合物1-9(0.60g，109μmol)与乙腈(2.00ml)的混合液中加入乙醇钠乙醇溶液(29.9mg,44μmol)，然后反应液在20-30度下搅拌1小时。lcms显示有目标产物生成。反应液加0.5n盐酸(2.00ml)，然后用乙酸乙酯(5.00ml*2)萃取。分液后有机相用10.0ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，分液后有机相减压浓缩得到粗品。将粗品用石油醚(5.00ml)在10-20度打浆1小时。过滤后滤饼蒸干得到化合物1-10(0.44g,88μmol，80％)，黄色固体。lcms(esi)m/z 503.64[m 1] 。
[0155]
步骤8：在化合物1-10(0.40g，796μmol)与nmp(4.00ml)的混合液中加入氯化锂(216mg,3.58mmol)，然后反应液在80-90度下反应3小时。lcms显示有目标产物生成。将反应液直接送去制备纯化。取回后冻干得化合物1(0.18g，436μmol,54％yield)，类白色固体。lcms(esi)m/z 413.45[m 1] 。
[0156]
步骤9：化合物1通过sfc拆分纯化。sfc显示有两个峰产生。峰1为(s)-化合物1(65mg,37.8μmol,99.7％purity)是一个黄色固体，lcms，hnmr证明结构。hplc显示纯度为99.7％。sfc显示ee值为100％。
[0157]1h nmr:(400mhz,dmso-d6)δ7.16-7.58(m,8h),6.73-6.90(m,5h),6.10-6.20(m,1h),5.83-5.85(m,1h),4.92-5.00(m,1h),4.53-4.77(m,1h),4.20-4.24(m,1h),3.49-3.54(m,2h)，0.92-1.05(m,3h)
[0158]
峰2为(r)-化合物1(58.8mg,59.1μmol,96.2％purity)是一个黄色固体，lcms，hnmr证明结构。hplc显示纯度为96.2％。sfc显示ee值为100％。
[0159]1h nmr:(400mhz,dmso-d6)δ7.15-7.58(m,8h),6.70-6.90(m,5h),6.10-6.13(m,1h),5.62-5.64(m,1h),4.19-5.00(m,3h),3.46-3.53(m,2h),0.90-1.03(m,3h)
[0160]
实施例2
[0161]
化合物3合成路线如下：
[0162][0163]
步骤1：用二氯甲烷(200ml)将化合物3-1(15.3g,100.7mmol)溶解到反应瓶中，加入nbs(23g，129mmol)，过氧化二苯甲酰(bpo,7.81g,30mol)，在50℃下搅拌约36h。在原料完全转化后不溶性物质通过过滤去除，有机物用10％na2so3水溶液(100ml)洗涤层再加100ml水，对有机层进行浓缩在真空(40℃)下得到产物3-2(21.76g，95％)作为黄色油。lcms(esi)m/z 228.98[m 1] 。
[0164]
步骤2：在3-2(21.76g，95.4mmol)的丙酮(150ml)溶液中加入三苯基膦(25g,,95.4mmol)得到的混合物在45度下搅拌12小时，冷却至室温浓缩真空干燥得到的固体溶于甲醇(200ml)，加入甲醇钠(6.18g，114.48mmol)和化合物3-3(13.55g，95.4mmol)，得到的混合物在70度下回流搅拌12小时，冷却至室温倒入300ml的nh4cl饱和溶液中，然后用乙酸乙酯(150ml*2)萃取，有机相用饱和食盐水(100ml)洗涤后再浓缩。将粗品通过柱层析纯化得到化合物3-4(23.5g，85.86mmol,90％yield)白色固体。lcms(esi)m/z 275.08[m 1] 。
[0165]
步骤3：用甲醇(200ml)将化合物3-4(23.5g,85.86mmol)溶解到反应瓶中，加入koh(4m，21.5mmol)，在70℃下搅拌约5h。冷却至室温滴加hcl(1n)调整ph至3，然后用乙酸乙酯(150ml*2)萃取，有机相用饱和食盐水(100ml)洗涤后再浓缩。将粗品通过柱层析纯化得到化合物3-5(20.3g，78.1mmol,91％yield)白色固体。lcms(esi)m/z261.08[m 1] 。
[0166]
步骤4：用二氯甲烷(200ml)将化合物3-5(203g,78.1mmol)溶解到反应瓶中，加入二氯亚砜(18.4g，156.2mmol)，在70℃下搅拌约12h。冷却至室温加压浓缩得溶于粗品氯化物二氯甲烷(200ml)，再加入三氯化铝(15.58g，117.15mmol)室温搅拌约12h。然后倒入冰水(200ml)中，用naoh(1n)调整ph至7，然后用乙酸乙酯(150ml*2)萃取，有机相用饱和食盐水(100ml)洗涤后再浓缩。将粗品通过柱层析纯化得到化合物3-6(13.9g,57.79mmol,74％yield)白色固体。lcms(esi)m/z 243.05[m 1] 。
[0167]
步骤5：用甲醇(50ml)，将化合物3-6(13.5g,55.79mmol)溶到反应瓶中，然后降温到0～5度，分批加nabh4(2.53g,66.94mmol)，加料完后反应在20～30度搅拌1小时。tlc(pe:ea＝10:1,rf(r1)＝0.80,rf(p1)＝0.70)。反应液浓缩后用100ml饱和氯化铵水溶液淬灭，然后用dcm(100ml*2)萃取，有机相用饱和食盐水(100ml)洗涤后再浓缩。得到化合物3-7(12.9g,53mmol,95％yield)白色固体。lcms(esi)m/z245.07[m 1] 。
[0168]
步骤6：将化合物3-7(12.9g,53mmol)和化合物3-8(7.05g,53mmol)的混合物，氮气保护下100℃反应8小时。lcms显示有目标产物生成。得到的粗品通过柱层析纯化后得到黄色固体化合物3-9(13.37g,70％yield)。
[0169]
lcms(esi)m/z 360.33[m 1] 。
[0170]
步骤7：将化合物3-9(13.3g,36.9mmol)溶于甲醇(150ml)，加入钯碳(10％，3g)在氢气环境下搅拌6小时。lcms显示有目标产物生成。将反应液混合物过滤，得到机相减压浓缩得到化合物3-10(11.2g,92％)，黄色油状物，粗品直接用于下一步。
[0171]
lcms(esi)m/z 330.35[m 1] 。
[0172]
步骤8：在化合物3-10(6.35g，20.9mmol和ppts(15.7g,62.87mmol)的混合液中加入化合物3-11(11.2g,31.3mmol)与nmp(100ml)中，混合物在95度下搅拌36小时。tlc点板(乙酸乙酯:甲醇＝20:1,rf＝0.40)显示有新点生成。将反应液合并后倒入水(1500ml)中，然后用乙酸乙酯(400mlx3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(1000ml)洗涤后旋干。将浓缩后的粗品通过柱层析纯化后得到化合物3-12(8.25g,68％收率)，棕色油状物。lcms(esi)m/z 586.60[m 1] 。
[0173]
步骤9：在化合物3-12(8.2g,19.9mmol)与甲醇(80.0ml)的混合液中加入氢氧化钠(1.19g,29.86mmol,)与水(16.0ml)的溶液，然后混合物在20-30度反应2小时。lcms显示有目标产物生成。将反应液浓缩干后，用甲基叔丁基醚(30.0ml*3)萃取。分液后水相溶于水(80.0ml)中，用1n盐酸调节ph至1-2，有大量固体产生，过滤，滤饼蒸干得到3-13(4.38g,8.4mmol，71％yield)，棕色固体，直接用于下一步。lcms(esi)m/z558.16[m 1] 。
[0174]
步骤10：在化合物3-13(1.5g，2.69mmol,)与dmf(15.0ml)的混合液中加入乙胺的盐酸盐(333mg,2.06mmol)，nmm(1.08mg,10.77mmol)和hatu(1.33g,3.52mmol)，然后反应液在10-20度反应2小时。lcms显示有目标产物生成。将反应液倒入100ml水中，有固体析出，过滤，将滤饼减压浓缩得到粗品。将粗品通过柱层析纯化得到化合物3-14(1.29g,82％收率)，棕色固体。lcms(esi)m/z 585.21[m 1] 。
[0175]
步骤11：在化合物3-14(1.29g,2.2mmol)与乙腈(2.00ml)的混合液中加入乙醇钠乙醇溶液(154mg,226umol)，然后反应液在20-30度下搅拌1小时。lcms显示有目标产物生成。反应液加0.5n盐酸(2.00ml)，然后用乙酸乙酯(5.00ml*2)萃取。分液后有机相用10.0ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，分液后有机相减压浓缩得到粗品。将粗品用石油醚(5.00ml)在
10-20度打浆1小时。过滤后滤饼蒸干得到化合物3-15(1.08g,91％)，黄色固体。lcms(esi)m/z 539.17[m 1] 。
[0176]
步骤12：在化合物3-15(0.62g,1.15mmol)与nmp(5.00ml)的混合液中加入氯化锂(330mg,5.62mmol)，然后反应液在80-90度下反应3小时。lcms显示有目标产物生成。将反应液直接送去制备纯化。取回后冻干得化合物3(0.32g,62％收率)，类白色固体。lcms(esi)m/z 449.12[m 1] 。
[0177]
步骤13：化合物3通过sfc拆分纯化。sfc显示有4个峰产生。峰1为(s，r)-化合物3(35mg,)是一个黄色固体，lcms，hnmr证明结构。hplc显示纯度为98.7％。sfc显示ee值为100％。
[0178]1h nmr:(400mhz,dmso-d6)δ8.58-8.61(m,1h),7.05-7.58(m,4h),6.92-7.05(m,2h),6.18-6.28(m,1h),5.80-5.85(m,1h),4.55-4.78(m,1h),3.45-3.55(m,2h),0.90-1.05(m,3h)
[0179]
峰2为(r，r)-化合物3(48.2mg)是一个黄色固体，lcms，hnmr证明结构。hplc显示纯度为96.2％。sfc显示ee值为100％。
[0180]1h nmr:(400mhz,dmso-d6)δ8.56-8.61(m,1h),7.05-7.60(m,4h),6.95-7.06(m,2h),6.18-6.28(m,1h),5.82-5.85(m,1h),4.52-4.79(m,1h),3.45-3.55(m,2h),0.92-1.06(m，3h)。
[0181]
峰3为(s，s)-化合物3(32mg)是一个黄色固体，lcms，hnmr证明结构。hplc显示纯度为98.7％。sfc显示ee值为100％。
[0182]1h nmr:(400mhz,dmso-d6)δ8.58-8.62(m,1h),7.05-7.65(m,4h),6.90-7.08(m,2h),6.18-6.28(m,1h),5.80-5.85(m,1h),4.55-4.78(m,1h),3.45-3.55(m,2h),0.90-1.05(m,3h)
[0183]
峰4为(r，s)-化合物3(28.2mg)是一个黄色固体，lcms，hnmr证明结构。hplc显示纯度为96.2％。sfc显示ee值为100％。
[0184]1h nmr:(400mhz,dmso-d6)δ8.59-8.63(m,1h),7.06-7.55(m,4h),6.90-7.08(m,2h),6.18-6.28(m,1h),5.82-5.85(m,1h),4.52-4.79(m,1h),3.45-3.55(m,2h),0.92-1.06(m,3h)。
[0185]
参考实施例1-2的合成方法用来合成了以下化合物：
[0186]
[0187]
[0188]
[0189]
[0190][0191]
实施例3：
[0192]
化合物31的合成路线如下：
[0193][0194]
圆底烧瓶中加入(s)-化合物1(15mg,0.036mmol)、ag
2 co3(42mg,0.118mmol)和ki(19mg,0.118mmol)在dma(0.1ml)中的搅拌混合物一次性加入氯甲基甲基碳酸酯(14mg,0.118mmol)，于45℃，将得到的混合物搅拌12小时。过滤后，滤液通过制备纯化反应溶液，得到白色固体状的标题化合物36(11mg)。lcms(esi)m/z 501.16[m 1] 。
[0195]
参考实施例4、5的合成方法用来合成了以下实验例：
[0196]
[0197]
[0198]
[0199]
[0200]
[0201][0202]
药理实验实施例
[0203]
实施例6：体外细胞病变效应(cpe)试验评估化合物对流感病毒的活性实验
[0204]
通过以下细胞病变效应(cpe)的实验，检测化合物对流感病毒a/wsn/33(h1n1)的抗病毒活性和对mdck细胞的毒性。
[0205]
下面简写词的使用贯穿本实施例
[0206][0207]
试验材料
[0208]
(1)化合物用100％dmso溶液配制成20mm母液。化合物测试8个浓度点，4倍梯度稀释，双复孔。
[0209]
(2)mdck犬肾细胞购自atcc。细胞在添加10％胎牛血清(hyclone)，2mm l-谷氨酰胺(gibco)，1％非必需氨基酸(gibco)，100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素(hyclone)的emem培养液(sigma)中培养。添加2mm l-谷氨酰胺，1％非必需氨基酸，100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的optipro sfm培养液(gibco)用做试验培养液。
[0210]
(3)流感病毒a/wsn/33(h1n1)株购自virapur。
[0211]
(4)本项目所用主要试剂为细胞活力检测试剂盒cck8(上海李记生物)
[0212]
(5)本项目所用主要仪器为酶标仪spectramax340pc384(molecular device)。
[0213]
试验方法
[0214]
cpe指病毒在宿主细胞内大量增殖，导致细胞病变甚至死亡的现象。通过检测细胞活力，cpe实验被广泛用于化合物对可引起细胞病变的病毒的抑制活性测定。本研究应用cpe实验检测化合物对流感病毒a/wsn/33(h1n1)的体外抑制活性。
[0215]
将mdck细胞以每孔2,000个细胞的密度接入384孔细胞培养板中并于5％co2、37℃培养箱中培养过夜。第二天分别加入化合物(8个浓度点，4倍梯度稀释，双复孔)和病毒(moi＝0.04)。细胞培养液中的dmso和胰酶的终浓度分别为0.5％和2.5μg/ml。细胞在37℃、5％co2条件下继续培养5天至病毒对照孔(细胞感染病毒，无化合物处理)内细胞病变率达到80-95％。细胞毒性实验与抗病毒实验同时进行测试，实验条件一致，但无病毒感染。
[0216]
使用细胞活力检测试剂cck8检测细胞活力。化合物的抗病毒活性和细胞毒性分别由化合物对病毒引起的细胞病变效应的抑制率(％)和细胞活率(％)表示。计算公式如下：
[0217][0218][0219]
注：样品孔：化合物处理孔；
[0220]
病毒对照孔：细胞感染病毒，无化合物处理；
[0221]
细胞对照孔：细胞，无化合物处理或病毒感染；
[0222]
培养液对照孔：只有培养液，不含细胞、病毒或化合物。
[0223]
使用graphpad prism(version 5)软件对化合物的抑制率和细胞活率进行非线性拟合分析，得到化合物的ec
50
和cc
50
值。
[0224]
测试结果
[0225]
化合物抗流感病毒a/wsn/33(h1n1)活性和对mdck细胞毒性总结于表1。
[0226]
表1.抗流感病毒活性测试结果
[0227]
[0228][0229]
#0.1nm《a≤1nm；1nm《b≤10nm；10nm《c≤100nm；d》100nm
[0230]
*1μm《a≤10μm；10μm《b≤50μm；c》50μm
[0231]
由表1可知，实验结果显示实施例化合物对流感病毒a/wsn/33(h1n1)具有较好的抑制活性和较低的细胞毒性。
[0232]
实施例4 herg试验
[0233]
为了评价心电图qt间期延长的风险，使用表达human ether-a-go-go相关基因(herg)通道的hek293细胞，研究对千在心室复极过程中起重要作用的延迟整流k
十
电流(i
kr
)的作用。使用全自动膜片钳系统，通过全细胞膜片钳法记录将细胞保持在-80mv的膜电位后，给予2秒钟 50mv的除极化剌激、进一步给予2秒钟-50mv的复极化剌激时引发的i
kr
在产生的电流稳定后，使以目的浓度溶解了受试物质的细胞外液(nacl:137mmol/l、kcl 4mmol/l、cacl2:l.8mmol/l,mgcl
2-6h2o:lmmol/l、葡萄糖10mmol/l、hepes 10mmol/l、ph 7.4)在室温条件下适用千细胞10分钟。由所得的i
kr
使用分析软件以静止膜电位的电流值为基准测量最大尾电流的绝对值。进一步地，算出相对于受试物质适用前的最大尾电流的抑制率，与介质适用组(0.1％dmso溶液)比较，评价受试物质对i
kr
的影响。
[0234]
通过patchmaster或clampex 10.6软件进行刺激发放及信号采集；膜片钳放大器放大信号。
[0235]
使用fitmaster或clampfit 10.6，excel，graphpad prism和spss 21.0等进行进一步数据分析和曲线拟合。数据均以均值、标准差表示。
[0236]
在数据处理中，判断对herg的阻断效应时，将尾电流的峰值和其基线进行校正。用尾流的抑制率(inhibition rate，ir)表示不同浓度下各化合物的作用。所有细胞各个浓度的％ir的sd≤15，作为可接受标准(除异常数据外)。
[0237]
ir＝100％
×
(给药前尾电流峰值-给药后尾电流峰值)/给药前尾电流峰值。
[0238]
ic
50
数值由hill方程进行拟合所得(如果适用)，若受试物所有浓度的最大抑制率小于50％，则不计算ic
50
数值。
[0239][0240]
y：i/i
control
；max：为100％；min：为0％；[drug]：供试品浓度；nh：hill斜率；ic
50
：测试物的最大半数抑制浓度
[0241]
表2.实施例化合物在0.3-30μmol/l条件下的抑制率
[0242][0243]
由表2可知，实验结果显示实施例化合物有较低的herg抑制活性。
[0244]
实施例5大鼠药代动力学试验
[0245]
实验材料和方法
[0246]
(1)使用动物使用sd大鼠。
[0247]
(2)在给药前将动物禁食至少12小时，并在给药后2小时喂食。在研究期间随意提供水。
[0248]
(3)在每项研究中，包括三只动物，大鼠给药5mg/kg，狗给药2mg/kg化合物13或巴洛沙韦酯各自悬浮在水中的0.5％hpmc中。po给药后0.25、0.5、1、2、4、8和24小时采集血样。然后将收集的血样在4℃以3500rpm离心10分钟以获得血浆。将血浆样品转移至聚乙烯管中，并立即在约-80℃保存直至分析。
[0249]
(4)评价项目经时地采血，使用lc/ms/ms测定血浆中药物浓度。
[0250]
(5)统计分析对千血浆中浓度变化，使用非线性最小二乘法程序算出血浆中浓度时间曲线下面积(auc)，由口服给药组和静脉给药组的auc算出生物利用度(ba)，和并统计静脉给药血药浓度消除半衰期t
1/2
。前药化合物在动物用药后测试母体化合物的血药浓度来计算生物利用度。
[0251]
测试结果如下：
[0252]
表3.前药和母体化合物的生物利用度
[0253][0254]
大鼠用药后专利化合物的生物利用度普遍高于巴洛沙韦酸高。
[0255]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0256]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。