畜禽用抗球虫药物、发酵中草药组合物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于生物饲料添加剂技术领域，具体涉及一种畜禽用抗球虫药物、发酵中草药组合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.球虫病是由一种叫做球虫的寄生在肠道细胞内的单细胞生物引起的肠道感染。由于球虫生活在肠道内，当虫卵达到一定数量时可引起腹泻。球虫病对幼龄家禽、猪、兔尤其危险，因为它们的小肠防御系统发育不全。球虫病是近年来造成易感动物生长发育滞缓、肠道发病和甚至死亡的主要原因，对畜禽养殖造成极大的经济损失。尤其在禁抗的情况下，细菌性疾病的频发进一步加剧了球虫病的发生。因球虫病导致的亚健康或发病生理状态，极大地降低了饲料的消化利用效率，增加了废弃物的排放量，对环境碳中和也极其不利。
3.畜牧生产中，防治球虫病常用的药物是磺胺类等化学合成药物、聚醚类抗生素以及抗球虫疫苗，但是化学合成药物存在耐药性的问题，抗生素类遭遇禁用问题，而球虫疫苗对鸡兔的生长发育存在明显的抑制作用。


技术实现要素：

4.针对目前畜禽球虫病防治存在化学合成类药物具有耐药性、聚醚类抗生素禁用和抗球虫疫苗抑制动物生长的技术缺陷，本发明的目的一在于提供一种畜禽用抗球虫药物，所述药物的有效成分为2-十五烯基-6-羟基苯甲酸；目的二在于提供一种发酵中草药组合物，目的三在于提供所述发酵中草药组合物的制备方法，目的四在于提供所述抗球虫药物或发酵中草药组合物在制备畜禽用抗球虫饲料或饲料添加剂中的应用。本发明克服了化学合成类抗球虫药物抗药性和抗球虫疫苗抑制畜禽生长的技术缺陷，应用生物技术和发酵技术提高植物活性成分含量的饲料添加剂生产技术，填补了中草药联合益生菌发酵防治畜禽球虫病这一领域的空白。
5.为了实现上述目的，本发明采用的具体方案如下：一种畜禽用抗球虫药物，所述药物的有效成分为2-十五烯基-6-羟基苯甲酸。
6.一种发酵中草药组合物，所述发酵中草药组合物是由复方中草药经复合益生菌发酵制得；所述复方中草药源自银杏树、腰果树、漆树、马齿苋和葎草；所述复合益生菌包括短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母。
7.进一步地，按照质量百分比，所述复方中草药的组成为银杏树叶10%-50%、腰果树叶10%-50%、漆树叶10%-50%、马齿苋10%-20%、葎草10%-20%。
8.进一步地，按照质量百分比，所述复合益生菌的组成为短小芽孢杆菌10%-20%、植物乳杆菌20%-30%、酿酒酵母50%-70%。优选地，短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母均为特异性菌株，即短小芽孢杆菌bfec180101-16061、植物乳杆菌cctcc m2016136和酿酒酵母bfec180301-16063。
9.本发明还请求保护所述发酵中草药组合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、复方中草药由银杏树叶、腰果树叶、漆树树叶、葎草和马齿苋制备；步骤二、按照配方量称取制得复方中草药，粉碎至60-80目；步骤三、复合益生菌包括短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母；步骤四、将短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母分别进行菌种活化、一级液体扩大培养、二级液体扩大培养，将上述三种菌种按比例混合均匀，制得复合益生菌种子液；步骤五、将复方中草药和水按照1：100-200比例投入到容器中，加入5%-8%玉米浆，3%-5%豆粕，121℃灭菌30min；步骤六、以10%-20%接种量接种步骤四的复合益生菌种子液，在30-37℃下发酵3-5d；步骤七、60-65℃干燥，即得发酵中草药组合物。
10.作为对上述制备方法的进一步优化，所述复方中草药的质量百分比组成为银杏树叶10%-50%、腰果树叶10%-50%、漆树叶10%-50%、马齿苋10%-20%和葎草10%-20%；所述复合益生菌的质量百分比组成为短小芽孢杆菌10%-20%、植物乳杆菌20%-30%和酿酒酵母50%-70%。
11.本发明另外请求保护所述的抗球虫药物或发酵中草药组合物在制备畜禽用抗球虫饲料或饲料添加剂中的应用。进一步地，所述发酵中草药组合物作为饲料添加剂，在畜禽饲料中的添加量分别为：兔、鹅5%-10%，鸡、鸭、猪3%-5%。
12.有益效果：（1）本发明中植物活性成分2-十五烯基-6-羟基苯甲酸能干扰球虫生活史，抑制球虫发育。银杏树、腰果树和漆树茎叶花果中含有2-十五烯基-6-羟基苯甲酸。因作为饲料添加剂使用于畜禽，采集兼具适口性好、营养性好的茎叶经过复合益生菌发酵后，中草药的物理结构发生改变，化学成分被释放出来，有效成分含量提高10-15倍，极大地增强了预防球虫病的效果。
13.（2）复合益生菌短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母活菌及其代谢产物能够调节肠道微生态，保持肠道健康。短小芽孢杆菌具有生长迅速的特点，芽孢进入肠道后能够快速萌发，产生营养体并发生益生作用，其发酵优势在于能分泌多种代谢产物，包括多种消化酶类、挥发性脂肪酸类、维生素类、抑菌物质类等代谢产物，在提升原料营养价值的同时还能增加原料中功能性物质。动物饲料中添加该芽孢杆菌制剂，在其肠道中将产生以上消化酶，促进动物对营养物质的消化吸收，提高饲料转化率。短小芽孢杆菌和植物乳杆菌利用与小肠更高的亲和性可以阻止球虫子孢子进入小肠细胞。酿酒酵母中超氧化物歧化酶可催化超氧阴离子的歧化反应，消除超氧阴离子的毒性，对机体具有保护作用。本发明复合益生菌的这些特异性和普通性功能对畜禽球虫病具有良好的预防效果。
14.（3）幼龄动物食入球虫孢子后，会导致腹泻。马齿苋和葎草的主要功能为防治腹泻。葎草含有木犀草素、胆碱、丁香烯、β-葎草烯、大波斯菊苷、木犀草素-7-葡萄糖苷、牡荆素等成分，具有预防腹泻、清热解毒、抗菌消炎等作用。马齿苋含有有机酸、黄酮、甾体、萜烯、生物碱、花色苷等，具有抗炎，减轻小肠上皮刺痛，促进修复的功效，是天然的抗腹泻药物。
15.（4）本发明在畜禽饲料中的添加量为：非草食动物鸡、鸭、猪3%-5%，草食动物兔、鹅5%-10%。本发明适用于地面和离地等各种饲养方式养殖的畜禽，尤其对于放养幼龄畜禽抗球虫促生长效果更为显著。体现在：天然的抗球虫药物成分2-十五烯基-6-羟基苯甲酸，无
抗药性，无残留，无污染，符合饲料安全和食品安全要求，且价廉易得，既可简易作坊生产亦可规模化量产，适合各种规模饲料和养殖企业。
具体实施方式
16.畜牧生产中，防治球虫病常用的药物是磺胺类等化学合成药物、聚醚类抗生素以及抗球虫疫苗，但是化学合成药物存在耐药性的问题，抗生素类遭遇禁用问题，而球虫疫苗对鸡兔的生长发育存在明显的抑制作用。针对这三方面的缺陷，考虑到植物活性成分的发酵产品是解决这些缺陷的最理想产品，其机理体现在一方面筛选对球虫有显著的抑制作用的中草药活性成分，另一方面这些中草药经益生菌发酵后，释放出更多的游离性成分，有效成分含量增加，再者是益生菌及其代谢物对动物肠道健康也有显著的促进作用。
17.基于目前的技术缺陷，本发明发现2-十五烯基-6-羟基苯甲酸具有抑制艾美耳球虫发育的作用。为避开提取纯化成本，本发明筛选出银杏树、腰果树、漆树中含有2-十五烯基-6-羟基苯甲酸。因作为饲料添加剂使用于畜禽，从经济实用的原则出发，采集银杏树、腰果树、漆树的树叶作为原料，考虑了叶子的营养丰富性、适口性，同时也考虑了药食兼用。这些树叶经过发酵后，游离性的2-十五烯基-6-羟基苯甲酸含量提高10-15倍。
18.本发明发现抗球虫药物成分，克服了化学合成类抗球虫药物抗药性和抗球虫疫苗抑制畜禽生长的技术缺陷，应用生物技术和发酵技术提高植物活性成分含量的饲料添加剂生产技术，填补了中草药联合益生菌发酵防治畜禽球虫病这一领域的空白。
19.本发明中抗球虫药物成分为2-十五烯基-6-羟基苯甲酸。本发明筛选出银杏树、腰果树和漆树的植株包括茎叶、花果（壳）含有2-十五烯基-6-羟基苯甲酸。根据本发明的目的，优选树叶和草本茎叶，作为制作复方中草药添加剂原料。2-十五烯基-6-羟基苯甲酸具有抗球虫，无耐药性，无残留，药食同源，符合饲料安全和食品安全要求。
20.本发明复方中草药包括银杏树、腰果树、漆树、马齿苋和葎草，质量百分比组成为银杏树叶10%-50%、腰果树叶10%-50%、漆树叶10%-50%、马齿苋10%-20%、葎草10%-20%。马齿苋和葎草为辅助抗腹泻，修复肠上皮作用。
21.本发明复合益生菌菌种类别（编号）和质量百分比为短小芽孢杆菌（bfec180101-16061）10%-20%、植物乳杆菌（cctcc m2016136）20%-30%和酿酒酵母（bfec180301-16063）50%-70%。
22.所用短小芽孢杆菌（bacillus pumilus）为bfec180101，保藏编号为cgmcc no.16061，为博益德（北京）生物科技有限公司提供；所用植物乳杆菌为植物乳酸杆菌（lactobacillus plantarum）dpp8，保藏编号为cctcc no：m2016136，为河南科技大学动物科技学院提供；所用酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）为bfec180301，保藏编号为cgmcc no.16063，为博益德（北京）生物科技有限公司提供。
23.本发明解决该技术问题所采用的技术方案是：选择含有抗球虫药物成分的植物，采集兼具药理性、适口性、营养性的茎叶部分，以抗腹泻中草药辅助作用，中草药茎叶粉碎以利发酵效果，发酵益生菌为特异性菌株以定向控制发酵过程和代谢产物。
24.具体制备步骤是：（1）复方中草药由银杏树叶、腰果树叶、漆树树叶、葎草和马齿苋制备；（2）按照配方量称取制得复方中草药，粉碎至60-80目；（3）复合益生菌包括短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母；（4）将短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母分别进行菌种
活化、一级液体扩大培养、二级液体扩大培养，将上述三种菌种按比例混合均匀，制得复合益生菌种子液；（5）将复方中草药和水按照1：100-200比例投入到容器中，加入5%-8%玉米浆，3%-5%豆粕，121℃灭菌30min；（6）以10%-20%接种量接种步骤（4）的复合益生菌种子液，在30-37℃下发酵2-5d；（7）60-65℃干燥，即得发酵中草药饲料添加剂。
25.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
26.实施例11. 复方中草药的制备（1）优选的，将干制银杏树叶、腰果树叶、漆树叶、马齿苋和葎草，粉碎至60目；（2）将中草药按照质量百分比混匀，即银杏叶50%、腰果树叶10%、漆树叶10%、葎草20%、马齿苋10%，混合得复方中草药。
27.2. 复合益生菌种子液的制备（1）各菌种分别摇瓶培养，短小芽孢杆菌使用产孢培养液，其组成为葡萄糖1%，糖蜜1%，蛋白粉1%，氯化钾0.3%，硫酸锰0.5%，121℃高压灭菌30min，ph7.0，37℃培养24h。植物乳杆菌使用mrs培养液进行培养，ph6.5，121℃高压灭菌30min，37℃培养24h。酿酒酵母使用ypd培养液培养，ph5.0，121℃高压灭菌30min，30℃培养15h。。
28.（2）植物乳杆菌、短小芽孢杆菌和酿酒酵母分别逐步进行一级（50l罐）、二级（500l罐）液体扩大培养，接种量为15%；（3）将各菌种二级扩大培养液按照以下质量百分比混合，短小芽孢杆菌20%、植物乳杆菌30%和酿酒酵母50%混合。
29.3. 发酵中草药饲料添加剂的制备（1）准确称取复方中草药，以与水质量百分比为1：100比例投入到容器中，加入5%玉米浆，3%豆粕粉，121℃灭菌30min；（2）以10%接种量接种益生菌种子液，在37℃下发酵3d；（3）60℃烘干，即制得发酵中草药饲料添加剂。
30.（4）制得的发酵中草药饲料添加剂中抗球虫药物成分2-十五烯基-6-羟基苯甲酸含量为1170mg/kg。
31.实施例21. 复方中草药的制备（1）优选的，将干制银杏树叶、腰果树叶、漆树叶、马齿苋和葎草粉碎至70目；（2）将中草药按照质量百分比混匀，即银杏叶10%、腰果树叶50%、漆树叶10%、葎草10%、马齿苋20%，混合得复方中草药。
32.2. 复合益生菌种子液的制备（1）各菌种分别摇瓶培养，短小芽孢杆菌使用产孢培养液，其组成为葡萄糖1%，糖蜜1%，蛋白粉1%，氯化钾0.3%，硫酸锰0.5%，121℃高压灭菌30min，ph7.0，37℃培养24h。植物乳杆菌使用mrs培养液进行培养，ph6.5，121℃高压灭菌30min，37℃培养24h。酿酒酵母使用ypd培养液培养，ph5.0，121℃高压灭菌30min，30℃培养15h。
33.（2）短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母分别逐步进行一级（50l罐）、二级（500l罐）液体扩大培养，接种量为15%；（3）将各菌种二级扩大培养液按照以下质量百分比混合，短小芽孢杆菌20%、植物
乳杆菌20%和酿酒酵母60%混合。
34.3. 发酵中草药饲料添加剂的制备（1）准确称取复方中草药，以与水质量百分比为1：100比例投入到容器中，加入5%玉米浆，4%豆粕粉，121℃灭菌30min；（2）以10%接种量接种益生菌种子液，在35℃下发酵3d；（3）65℃烘干，即制得发酵中草药饲料添加剂。
35.（4）制得的发酵中草药饲料添加剂中抗球虫药物成分2-十五烯基-6-羟基苯甲酸含量为1005mg/kg。
36.实施例31. 复方中草药的制备（1）优选的，将干制银杏树叶、腰果树叶、漆树叶、马齿苋和葎草粉碎至80目；（2）将中草药按照质量百分比混匀，即银杏叶10%、腰果树叶10%、漆树叶50%、葎草10%、马齿苋20%，混合得复方中草药。
37.2. 复合益生菌种子液的制备（1）各菌种分别摇瓶培养，短小芽孢杆菌使用产孢培养液，其组成为葡萄糖1%，糖蜜1%，蛋白粉1%，氯化钾0.3%，硫酸锰0.5%，121℃高压灭菌30min，ph7.0，37℃培养24h。植物乳杆菌使用mrs培养液进行培养，ph6.5，121℃高压灭菌30min，37℃培养24h。酿酒酵母使用ypd培养液培养，ph5.0，121℃高压灭菌30min，30℃培养15h。
38.（2）短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母分别逐步进行一级（50l罐）、二级（500l罐）液体扩大培养，接种量为15%；（3）将各菌种二级扩大培养液按照以下质量百分比混合，短小芽孢杆菌10%、植物乳杆菌20%和酿酒酵母70%混合；3. 发酵中草药饲料添加剂的制备（1）准确称取复方中草药，以与水质量百分比为1：100比例投入到容器中，加入5%玉米浆，5%豆粕粉，121℃灭菌30min；（2）以10%接种量接种益生菌种子液，在30℃下发酵5d；（3）65℃烘干，即制得发酵中草药饲料添加剂。
39.（4）制得的发酵中草药饲料添加剂中抗球虫药物成分2-十五烯基-6-羟基苯甲酸含量为1200mg/kg。
40.对照例1 ：分别重复实施例中1-3步骤，但是，发酵时间均设置为0，制得未发酵中草药饲料添加剂1-3，药物成分2-十五烯基-6-羟基苯甲酸含量分别为87、110和118mg/kg。
41.对照例2 ：分别重复实施例中1-3步骤，但是，发酵用菌种选用本发明菌株以外的其他菌株，制得发酵中草药饲料添加剂4-6，药物成分2-十五烯基-6-羟基苯甲酸含量分别为208、235和257mg/kg。
42.对照例3： 设置本对照例3，以对比本发明有效药物成分2-十五烯基-6-羟基苯甲酸的抗球虫效果。将180只21日龄肉仔鸡随机等分为对照组、感染组和药物组，基础饲料为市售任一品牌肉仔鸡饲料，2-十五烯基-6-羟基苯甲酸，纯度≥98%。对照组饲喂基础饲料，感染组饲喂基础饲料并实施球虫孢子感染，药物组实施球虫孢子感染并饲喂基础饲料和2-十五烯基-6-羟基苯甲酸，添加量为每公斤饲料35mg。试验第7-8天，计算鸡成活率和粪中球
虫孢子数量，计算两天平均值。试验结果见表1。
43.表1. 2-十五烯基-6-羟基苯甲酸抗球虫效果对比试验。
44.从表1可知，药物组较感染组显著提高鸡成活率，降低粪中球虫孢子数，表明2-十五烯基-6-羟基苯甲酸防治鸡球虫感染效果显著。
45.试验例1将480只21日龄健康肉用雏鸡随机等分为8组，即对照组1为无感染无添加剂，对照组2为感染无添加剂，试验组1-3为无感染有添加剂，试验组4-6为感染有添加剂。试验组1和4添加本发明实施例1添加剂，添加量为3%。试验组2和5添加实施例2添加剂，添加量为4%。试验组3和6添加实施例3添加剂，添加量为5%。艾美耳球虫感染发生于试验第一天，试验期为7d，即28日龄结束。对照组和试验组基础饲料来自市售全价肉鸡前期饲料。本发明的抗球虫、促生长试验结果见表2。
46.表2. 实施例1-3在肉鸡养殖生产中抗球虫促生长的应用效果比较。
47.从表2可以看出，在无球虫感染的情况下，使用本发明添加剂的试验组1-3与对照组1相比，肉鸡体重略有提高，提高幅度为5.8%-6.8%。在球虫感染的情况下，使用本发明添加剂的试验组4-6与对照组2相比，肉鸡体重显著提高，提高幅度为32.9%-34.6%。同时，死亡率降低12.2%-16.3%；粪中球虫孢子数量减少70.9%-72.8%。结果表明，在有球虫传染源的情况下，本发明抗球虫发酵中草药饲料添加剂能有效抑制球虫感染，显著提高肉雏鸡体重和成活率。
48.试验例2选择480只体重一致、健康断奶仔兔随机等分为8组，即对照组1为无感染无添加剂，对照组2为感染无添加剂，试验组1-3为无感染有添加剂，试验组4-6为感染有添加剂。试验组1和4添加本发明实施例1添加剂，添加量为5%。试验组2和5添加实施例2添加剂，添加量为7.5%。试验组3和6添加实施例3添加剂，添加量为10%。艾美耳球虫感染发生于试验第一天，试验期为7d。对照组和试验组基础饲料来自市售全价肉兔饲料。本发明的抗球虫、促生长试验结果见表3。
49.表3. 实施例1-3在肉兔养殖生产中抗球虫促生长的应用效果比较。
50.从表3可以看出，在无球虫感染的情况下，使用本发明添加剂的试验组1-3与对照组1相比，仔兔体重略有提高，提高幅度为12.1%-14.4%。在球虫感染的情况下，使用本发明添加剂的试验组4-6与对照组2相比，仔兔体重显著提高，提高幅度为16.5%-22.3%。同时，死亡率降低15.9%-18.8%；粪中球虫孢子数量减少71.9%-81.3%。结果表明，本发明添加剂对仔兔有显著的促生长作用，尤其在有球虫传染源的情况下，本发明抗球虫发酵中草药饲料添加剂能有效抑制球虫感染，显著提高仔兔体重和成活率。
51.需要说明的是，以上所述的实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对本发明作出的一些非本质的改进和调整仍属于本发明的保护范围。