一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法与流程

1.本发明涉及组培技术领域，特别涉及一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法。


背景技术：

2.冬凤兰(cymbidium dayanum)为兰科兰属附生兰，总状花序，花葶外弯或下垂，其株形优美，花期持久，是一种有较高的开发利用价值的野生兰。由于生境的不断破坏以及人为的乱挖乱采，野生冬凤兰资源损失严重，自然分布急剧减少。因此，采用植物组织培养技术对冬凤兰进行扩繁和保存，对于其种质资源的保护及开发利用都有重要意义。
3.目前冬凤兰人工栽培多采用传统的分株繁殖法，繁殖系数极低，栽培数量受到限制，用常规的无菌播种方法存在操作繁杂、萌发率低、萌发周期比较长(3-5个月)等问题，严重阻碍了冬凤兰的开发利用进程。本发明针对以上缺点，进行了大量技术革新，提供了一种无菌播种培养基及一套简化的组培操作流程，能让冬凤兰种子的萌发周期缩短到80天，并且萌发率高，分化能力强，速度快，质量高。


技术实现要素：

4.针对上述背景中的问题，本发明提供了一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法，以解决冬凤兰繁殖周期长、速度慢的问题，并提高冬凤兰萌发原球茎的质量。
5.一种冬凤兰无菌播种培养基配方，其特征在于，包括播种培养基和增殖分化培养基，所述播种培养基配方包含：
6.kc 6-ba 1.5 naa 0.6 蔗糖20 椰汁100 活性炭1 琼脂4.7，调节ph值为5.6
±
1；
7.成分包含：kc基础培养基，6-ba(6-苄基腺嘌呤)1.5mg/l,naa(萘乙酸)0.6mg/l，蔗糖20g/l，椰汁100ml/l，活性炭1g/l，琼脂4.7g/l；
8.所述增殖分化培养基配方，成分包含：
9.1/2ms基础培养基，naa(萘乙酸)0.1mg/l，6-ba(6-苄基腺嘌呤)2mg/l,蔗糖20g/l，椰汁100ml/l，琼脂4.5g/l。
10.作为优选的，组织培养方法包括以下步骤：
11.s1、挑选授粉足8个月成熟未开裂的冬凤兰蒴果采摘后，用75％酒精擦拭干净；
12.s2、擦拭干净的蒴果置于超净工作台接种盘内，先将蒴果用浓度为75％的酒精浸泡30s，再用0.1％的升汞表面消毒15min，无菌水冲洗4次，干净后用无菌滤纸吸干水分待用；
13.s3、用消毒刀片切掉蒴果两头，纵剖开蒴果，将种子取出置于环保茶袋，再将茶袋整个泡进0.2mol/l naclo中浸泡15min进行预处理；
14.s4、将预处理过的种子用无菌水冲洗两遍，将装种子的茶袋用消毒镊子撕开，用刀片轻轻从茶袋上刮下种子置于播种培养基表面，滴加1-2滴无菌水摇匀，让种子均匀播种在所述播种培养基表面；
15.种子播种后置于暗培养，直至开始萌发；
16.s5、待种子萌出长成原球茎，将原球茎接种到增殖分化培养基进行增殖，待增殖到一定数量，便可进行根芽分化培养。
17.作为优选的，培养室温度26
±
2℃，萌出后光照1500-2000lx，每日光照12小时。
18.作为优选的，步骤s3中环保茶袋的规格为4
×
6厘米。
19.作为优选的，步骤s4中暗培养方法为：将所述播种培养基放培养架上，用遮光率99％的黑色无帆布遮盖，待开始萌发后再揭开黑布。
20.本发明的有益效果为：
21.本发明能使冬凤兰种子的萌发周期由常规播种的3-5个月萌发缩短到80天，并且萌发的根状茎粗壮饱满，分化能力强，速度快，质量高。
附图说明
22.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应该被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
23.图1为冬凤兰无菌播种80天，开始萌发；
24.图2为冬凤兰原球茎增殖同时分化黄绿色叶芽。
具体实施方式
25.下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不视为限定本发明的范围，实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。
26.一种冬凤兰无菌播种培养基配方，其特征在于，包括播种培养基和增殖分化培养基，所述播种培养基配方包含：
27.kc 6-ba 1.5 naa 0.6 蔗糖20 椰汁100 活性炭1 琼脂4.7，调节ph值为5.6
±
1；
28.成分包含：kc基础培养基，6-ba(6-苄基腺嘌呤)1.5mg/l,naa(萘乙酸)0.6mg/l，蔗糖20g/l，椰汁100ml/l，活性炭1g/l，琼脂4.7g/l；
29.所述增殖分化培养基配方，成分包含：
30.1/2ms基础培养基，naa(萘乙酸)0.1mg/l，6-ba(6-苄基腺嘌呤)2mg/l,蔗糖20g/l，椰汁100ml/l，琼脂4.5g/l。
31.一种冬凤兰无菌播种培养基配方的组织培养方法包括以下步骤：
32.s1、挑选授粉足8个月成熟未开裂的冬凤兰蒴果采摘后，用75％酒精擦拭干净；
33.s2、擦拭干净的蒴果置于超净工作台接种盘内，先将蒴果用浓度为75％的酒精浸泡30s，再用0.1％的升汞表面消毒15min，无菌水冲洗4次，干净后用无菌滤纸吸干水分待用；
34.s3、用消毒刀片切掉蒴果两头，纵剖开蒴果，将种子取出置于4
×
6厘米环保茶袋，再将茶袋整个泡进0.2mol/l naclo中浸泡15min进行预处理；
35.s4、将预处理过的种子用无菌水冲洗两遍，将装种子的茶袋用消毒镊子撕开，用刀
片轻轻从茶袋上刮下种子置于播种培养基表面，滴加1-2滴无菌水摇匀，让种子均匀播种在所述播种培养基表面；
36.种子播种后置于暗培养，直至开始萌发；暗培养方法为：将所述播种培养基放培养架上，用遮光率99％的黑色无帆布遮盖，待开始萌发后再揭开黑布。
37.s5、待种子萌出长成茎，将原球茎接种到增殖分化培养基进行增殖，待增殖到一定数量，便可进行根芽分化培养。
38.本实施例中，培养室温度26
±
2℃，萌出后光照1500-2000lx，每日光照12小时。
39.本发明一种冬凤兰无菌播种培养基及组织培养方法，能够解决冬凤兰繁殖系数极低，栽培数量受限等问题，能使冬凤兰种子的萌发周期由常规播种的3-5个月萌发缩短到80天，并且萌发率高，原球茎增殖能力强，速度快，质量高。
40.以上所述仅为本发明专利的较佳实施例而已，并不用以限制本发明专利，凡在本发明专利的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明专利的保护范围之内。


技术特征：
1.一种冬凤兰无菌播种培养基配方，其特征在于，包括播种培养基和增殖分化培养基，所述播种培养基配方包含：kc 6-ba 1.5 naa 0.6 蔗糖20 椰汁100 活性炭1 琼脂4.7，调节ph值为5.6
±
1；成分包含：kc基础培养基，6-ba(6-苄基腺嘌呤)1.5mg/l,naa(萘乙酸)0.6mg/l，蔗糖20g/l，椰汁100ml/l，活性炭1g/l，琼脂4.7g/l；所述增殖分化培养基配方，成分包含：1/2ms基础培养基，naa(萘乙酸)0.1mg/l，6-ba(6-苄基腺嘌呤)2mg/l,蔗糖20g/l，椰汁100ml/l，琼脂4.5g/l。2.根据权利要求1所述的一种冬凤兰无菌播种培养基配方，其特征在于，组织培养方法包括以下步骤：s1、挑选授粉足8个月成熟未开裂的冬凤兰蒴果采摘后，用75％酒精擦拭干净；s2、擦拭干净的蒴果置于超净工作台接种盘内，先将蒴果用浓度为75％的酒精浸泡30s，再用0.1％的升汞表面消毒15min，无菌水冲洗4次，干净后用无菌滤纸吸干水分待用；s3、用消毒刀片切掉蒴果两头，纵剖开蒴果，将种子取出置于环保茶袋，再将茶袋整个泡进0.2mol/l naclo中浸泡15min进行预处理；s4、将预处理过的种子用无菌水冲洗两遍，将装种子的茶袋用消毒镊子撕开，用刀片轻轻从茶袋上刮下种子置于播种培养基表面，滴加1-2滴无菌水摇匀，让种子均匀播种在所述播种培养基表面；种子播种后置于暗培养，直至开始萌发；s5、待种子萌出原球茎，将原球茎接种到增殖分化培养基进行增殖，待增殖到一定数量，便可进行根芽分化培养。3.根据权利要求2所述的一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法，其特征在于，培养室温度26
±
2℃，萌出后光照1500-2000lx，每日光照12小时。4.根据权利要求2所述的一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法，其特征在于，步骤s3中环保茶袋的规格为4
×
6厘米。5.根据权利要求2所述的一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法，其特征在于，步骤s4中暗培养方法为：将所述播种培养基放培养架上，用遮光率99％的黑色无帆布遮盖，待开始萌发后再揭开黑布。

技术总结
本发明一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法，其特征在于，包括播种培养基和增殖分化培养基，所述播种培养基配方包含：KC 6-BA 1.5 NAA 0.6 蔗糖20 椰汁100 活性炭1 琼脂4.7，调节PH值为5.6


技术研发人员：曾艳华 卜朝阳 何荆洲 龙蔷宇 范继征 李季玲
受保护的技术使用者：广西壮族自治区农业科学院
技术研发日：2021.11.01
技术公布日：2022/2/8