含孢子的益生菌液体组合物和其制备方法与流程

含孢子的益生菌液体组合物和其制备方法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术根据35u.s.c.
§
119(e)要求2019年4月23日提交的美国临时申请第62/837,589号的权益，该美国临时申请的全部内容在此以引用方式整体并入。
技术领域
3.提供含孢子的益生菌组合物和方法。


背景技术：

4.当以足够的量摄入时，益生菌微生物可对宿主产生健康影响。如今，益生菌可应用于诸如食品、膳食替代品、膳食补充剂、营养制品、非处方药以及处方药的各种领域。益生菌产品包括乳制品和益生菌强化食品。产品通常需要在低温下储存，以维持益生菌活性。益生菌微生物在这些产品中的生长会给产品带来令人不快的气味。
5.许多益生菌制剂是以固体口服剂型提供。虽然液体制剂可有利于容易地应用在食品和饮料加工应用中，但由于与液体益生菌制剂相关的缺点(例如，达到均一悬浮液以实现剂量的准确性，同时维持制剂的贮存期稳定性)，迄今为止还不存在此类制剂。液体益生菌制剂通常包含可用作基质并可提高不期望的代谢物产生风险的糖。产生气体的益生菌可导致容器膨胀，以及令人不快的气味和味道的产生。此外，代谢物的产生可导致益生菌株死亡并降低益生菌活菌计数。因此，此类液体益生菌制剂需要储存在低温条件(例如，2℃至8℃)下，这会限制其在食品应用中的使用，并增加分配成本。
6.有几种可作为健康补充剂的市售液体益生菌制剂。例如，由sanofi生产并销售的“enterogermina”是以20亿cfu/5ml的浓度存于纯化水中的液体口服悬浮液，其含有4株克劳氏芽孢杆菌(bacillus clausii)(不同于凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)的种)。enterogermina专门推荐给有腹泻的人使用。“bacilliq sc”也由synergia life sciences pvt.有限公司生产并销售，且不需要冷链储存。bacilliq sc含有独特的益生菌菌株(枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)hu58和凝结芽孢杆菌sc208)和糖。
7.此外，nch公司的美国专利申请公布第2015/0118203号(
“‘
203公布”)中公开了常规的益生菌组合物。
‘
203公布公开了一种通过重力进料或非接触泵将益生菌组合物递送至植物或动物消耗点的系统。益生菌组合物包含孢子形式的一种或多种细菌、稠化剂、一种或多种酸或酸的盐和任选的水活性降低剂。
8.在
‘
203公布中没有考虑人对其益生菌组合物的消耗。此外，
‘
203公布对于添加至打算用于人消耗的食品来说，在可重复性、配制和缺乏食品安全加工方面具有缺点。例如，
‘
203公布并未描述关于产品的可重复生产的任何加工信息。这可能导致例如差分散、未溶解或未水合的成分，这进而导致不适于防止微生物生长或污染的制剂。此外，缺乏5-log杀灭步骤，例如，不仅对
‘
203公布的益生菌组合物，而且对添加有该组合物的潜在食品都呈现固有风险。在没有适当限定的5-log杀灭步骤的情况下，一旦添加至呈现最佳生长因子(包括水和食品源)的食品产品中，微生物污染(在本发明的组合物中可能显示潜伏)的风险就
会增长。没有限定的杀灭步骤还由于使用包括玉米糖浆、益生元和稠化剂在内的成分而呈现背景污染机会。
9.鉴于以上概述的技术问题，本公开的目标之一是提供一种营养性益生菌制剂和加工方法，其可由本领域普通技术人员再现，并避免了现有技术以及常规组合物和方法的缺点，并且保证产品对于人的消费是安全且有效的。


技术实现要素：

10.本公开提供了含孢子的益生菌组合物的改进递送，所述组合物可在常温、冷藏和冷冻储存条件下长期保持其细胞活力，因此可将其添加至食品和饮料产品中并在其中保持稳定。
11.因此，在某些实施方案中，用于制备贮存稳定的含孢子的益生菌营养性添加剂的方法包括提供包含来自至少一种形成孢子的益生菌菌株的孢子、糖和湿润剂的液体浆料；以及对液体浆料进行巴氏灭菌以产生营养性添加剂，其中营养性添加剂包含小于约0.7的水活性(aw)；营养性添加剂包含约2.0至9.5的ph；并且多个孢子在巴氏灭菌步骤后保持未萌发状态且保持均一悬浮至少两个月，以产生贮存稳定的含孢子的益生菌营养性添加剂。
12.在某些实施方案中，至少90％、95％或99％的孢子在巴氏灭菌步骤后保持未萌发状态至少两个月。在某些实施方案中，至少90％、95％、99％的孢子保持萌发能力。在某些实施方案中，至少90％、95％、99％的孢子在暴露于萌发允许条件后萌发。
13.在某些实施方案中，至少90％、95％或99％的孢子在被哺乳动物摄入后萌发。在某些实施方案中，萌发允许条件包括至少1aw和37℃。在某些实施方案中，至少90％的孢子在巴氏灭菌后有活力。
14.在某些实施方案中，营养性添加剂包含小于1％(w/v)的营养细菌细胞。
15.在某些实施方案中，至少一种形成孢子的益生菌菌株包括至少一种芽孢杆菌属(bacillus)菌株。在某些实施方案中，至少一种形成孢子的益生菌菌株包括至少一种凝结芽孢杆菌菌株、至少一种枯草芽孢杆菌菌株、至少一种克劳氏芽孢杆菌菌株、至少一种印度芽孢杆菌(bacillus indicus)菌株、至少一种地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)菌株、至少一种短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)菌株、至少一种解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquifaciens)菌株或至少一种巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)菌株。在某些实施方案中，至少一种凝结芽孢杆菌菌株包括凝结芽孢杆菌gbi-30菌株(atcc指定编号pta-6086)。
16.在某些实施方案中，多个孢子以按组合物的重量计约5亿cfu/g至1万亿cfu/g的量存在于营养性添加剂中。
17.在某些实施方案中，至少一种湿润剂是甘油、糖、盐、丙二醇或胶中的至少一种。
18.在某些实施方案中，营养性添加剂还包含不含菊糖的至少一种流变改性剂，其中至少一种流变改性剂以按组合物的重量计约0.01％至0.3％的量存在。在某些实施方案中，至少一种流变改性剂是黄原胶、阿拉伯胶、结冷胶、瓜尔胶或角叉菜胶中的至少一种。
19.本公开还提供含孢子的益生菌组合物。在某些实施方案中，含孢子的益生菌组合物包含液体浆料，所述液体浆料包含益生菌材料，所述益生菌材料包含来自至少一种形成孢子的益生菌菌株的多个孢子，其中至少90％的孢子在巴氏灭菌时间和温度下有活力；糖；
和至少一种湿润剂或其组合，其中所述组合物具有小于约0.7的水活性(aw)和小于约5.0的ph。
20.本公开还提供包含含孢子的益生菌组合物的食品产品。
21.本公开还提供包含含孢子的益生菌组合物的饮料产品。
具体实施方式
22.本文所述的组合物和方法为现有益生菌产品的缺陷和限制提供了解决方案。提供了含孢子(非营养性)的益生菌组合物，其在巴氏灭菌时可在特定时间-温度、ph和水活性环境中存活，以递送一致的微生物活力，并在添加至食品和饮料产品中时递送后续活性。例如，在巴氏灭菌过程后，含孢子的益生菌组合物的益生菌活力可以是按组合物的重量计约5亿(m)菌落形成单位(cfu)/克(g)至1万亿(t)菌落形成单位(cfu)/克(g)。
23.本文所述的含孢子的益生菌组合物可以是均一悬浮和可分散的液体浆料的形式。液体浆料被设计成使得其可至少在被添加至食品或饮料产品(例如，冷藏食品或饮料产品或冷冻食品或饮料产品或常温食品或常温饮料)之前，在常温储存条件下保持稳定。与粉末形式相比，液体浆料形式可更容易地和更经济地添加至食品或饮料产品中，例如，加工时间更少，生产、制造和加工更便宜，以及在整个组合物中均一地浓缩。如本文所用，“食品”是指人食品、宠物食品(例如，设计用于供诸如狗、猫等伴侣动物消耗的食品)或动物饲料(例如，设计用于供诸如家畜等非伴侣动物消耗的食品)。如本文所用，“饮料”是指人饮料、宠物饮料(例如，设计用于供诸如狗、猫等伴侣动物消耗的饮料)或动物饮料(例如，设计用于供诸如牲畜等非伴侣动物消耗的饮料)。此外，液体浆料被设计成耐受巴氏灭菌方法，诸如高温短时(htst)、高压巴氏灭菌(hpp)等。在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物可具有延长的贮存期。例如，延长的贮存期可长达三个月、长达六个月或长达食品或饮料产品的贮存期。此外，液体浆料的组成构成可实现允许使用任何合适的液体递送系统(例如，配料系统)将液体浆料添加至食品或饮料产品中的粘度和流变性质。
24.含孢子的益生菌组合物通常包含益生菌材料。在一些实施方案中，组合物中存在的益生菌材料的量可以是按组合物的重量计约5％至70％、约30％至70％、约40％至60％、约40％至50％、约5％至30％、约5％至25％或约5％至20％。在其他实施方案中，益生菌材料可以在这些列举值中的任意值之间的量存在于组合物中。
25.益生菌材料包含多个孢子和至少一种赋形剂，如下文所述。多个孢子来自至少一种形成孢子的益生菌菌株。在一些实施方案中，组合物中存在的多个孢子的量可以是按组合物的重量计约5亿(m)cfu/g至1万亿(t)cfu/g、约10亿(b)cfu/g至1万亿(t)cfu/g、约5亿(m)cfu/g至50亿(b)cfu/g或约5亿(m)cfu/g至100亿(b)cfu/g。在其他实施方案中，组合物中存在的多个孢子的量可在这些列举值中的任意值之间。
26.至少一种形成孢子的菌株可包括任一种或多种形成孢子的菌株。在一些实施方案中，至少一种形成孢子的益生菌菌株可以是至少一种芽孢杆菌属菌株。合适的形成孢子的菌株的非限制性示例可包括至少一种凝结芽孢杆菌菌株、至少一种枯草芽孢杆菌菌株、至少一种克劳氏芽孢杆菌菌株、至少一种印度芽孢杆菌菌株、至少一种地衣芽孢杆菌菌株、至少一种短小芽孢杆菌菌株、至少一种解淀粉芽孢杆菌菌株、至少一种巨大芽孢杆菌菌株或其任何组合。
27.在一些实施方案中，至少一种形成孢子的益生菌菌株可以是至少一种凝结芽孢杆菌菌株。例如，至少一种凝结芽孢杆菌菌株可包括凝结芽孢杆菌gbi-30菌株(atcc指定编号pta-6086)。凝结芽孢杆菌gbi-30菌株的其他细节可见于美国专利第6,849,256号、第7,713,726号和第8,277,799号中，这些专利的每一个均以引用方式整体并入本文。
28.在整个含孢子的益生菌组合物中孢子分布的均匀性可以是稳定的。例如，组合物不经历显著的沉降(例如，按含孢子的益生菌组合物的体积计大于5％的孢子量)或相分离(例如，按含孢子的益生菌组合物的体积计大于5％的孢子量)。该均匀性，单独或与含孢子的益生菌组合物的比重组合，可有利于含孢子的益生菌组合物可再现地定量给料至食品或饮料产品中。在一些实施方案中，组合物的比重可为约1.0至1.5或约1.25至1.45。在其他实施方案中，组合物的比重可在这些列举值中的任意值之间。
29.在一些实施方案中，益生菌材料还可包括至少一种糖。合适的糖的非限制性示例包括单糖和多糖，诸如菊糖或麦芽糖糊精、低聚半乳糖(galactoosaccharide)、低聚果糖。例如，菊糖可以益生菌材料重量的约75％至95％、约80％至90％或约75％至80％的量存在。在此类实施方案中，菊糖可起到流变改性剂的作用。
30.在其他实施方案中，益生菌材料不包括菊糖。在此类实施方案中，可将菊糖单独添加至含孢子的益生菌组合物中。如本文所用，“添加的菊糖”用于指不包含在益生菌材料中、而是单独添加至含孢子的益生菌组合物中的菊糖。例如，在一些实施方案中，单独添加的菊糖可以按组合物的重量计约0.1％至30％、约0.1％至25％或约0.1％至20％的量存在。在此类情况下，单独添加的菊糖可起到流变改性剂的作用。
31.在一些实施方案中，益生菌材料可包括麦芽糖糊精。在此类实施方案中，可将菊糖单独添加(在本文中称为“添加的菊糖”)至含孢子的益生菌组合物中。例如，在一些实施方案中，添加的菊糖可以按组合物的重量计约0.1％至30％、约0.1％至25％或约0.1％至20％的量存在。
32.在一些实施方案中，益生菌材料可包括脱脂干乳。在此类实施方案中，可将菊糖单独添加(在本文中称为“添加的菊糖”)至含孢子的益生菌组合物中。例如，在一些实施方案中，单独添加的菊糖可以按组合物的重量计约0％至30％、约0％至25％或约0％至20％的量存在。
33.除了益生菌材料之外，含孢子的益生菌组合物还可包含水。在一些实施方案中，水以按组合物的重量计约20％至60％、约20％至50％或约20％至40％的量存在。
34.此外，含孢子的益生菌组合物的孢子的休眠可通过将水活性最小化(例如，至小于约0.95水活性(aw))来维持。也就是说，低水活性可抑制孢子的萌发。低水活性还在一段时间内降低组合物内的沉降或相分离，所述时间例如，约长达三个月、长达六个月或长达含有一种或多种组合物的食品或饮料产品的贮存期。因此，在将组合物添加至产品(例如食品或饮料产品)之前，含孢子的益生菌组合物可保持均一悬浮。也就是说，不同于常规的含孢子的益生菌组合物，例如由sanofi生产并销售的enterogermina，可将本发明的含孢子的益生菌组合物添加至食品或饮料产品中，而不需要在添加至食品或饮料产品中之前充分混合组合物。因此，本文所述的含孢子的益生菌组合物的优势是维持均一悬浮液达延长时段。
35.此外，经由低水活性抑制孢子萌发，可产生其他优势。例如，在期望的使用之前，孢子可保持均一分散于整个组合物中达延长时段，并由此增加贮存期。此外，含孢子的益生菌
组合物的孢子可保持其抗性状态，使得它们不响应于环境因素而萌发或增殖。因此，孢子可在诸如高温短时(htst)、高压巴氏灭菌(hpp)等的巴氏灭菌后存活。
36.在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物的水活性可为约0.001aw至约0.99aw。在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物的水活性小于或等于约0.95aw，或小于或等于约0.90aw，或小于或等于约0.85aw，或小于或等于约0.80aw，或小于或等于约0.75aw，或小于或等于约0.70aw，或小于或等于约0.65aw，或小于或等于约0.60aw，或小于或等于约0.55aw，或小于或等于约0.50aw，或小于或等于约0.45aw，或小于或等于约0.40aw，或小于或等于约0.35aw，或小于或等于约0.30aw，或小于或等于约0.25aw，或小于或等于约0.20aw，或小于或等于约0.15aw，或小于或等于约0.10aw，或小于或等于约0.05aw，或小于或等于约0.01aw，或小于或等于约0.005aw，或小于或等于约0.004aw，或小于或等于约0.003aw，或小于或等于约0.002aw。该参数可通过纳入至少一种湿润剂来实现。例如，在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物可包含至少一种湿润剂。
37.如本文所用，“湿润剂”是吸湿性物质，即吸引并保留水的物质。至少一种湿润剂可为甘油。甘油的量可以是按组合物重量计约30％至75％、约30％至70％、约40％至75％、约50％至75％、约55％至65％、约50％至70％、约40％至60％或约40％至50％。其他合适的湿润剂的非限制性示例可包括糖，例如，山梨糖醇(例如，按组合物的重量计约30％至75％)；盐(例如，按组合物的重量计约30％至75％)；丙二醇(例如，按组合物的重量计约30％至75％)；和胶，例如黄原胶阿拉伯胶(例如，按组合物的重量计约10％至30％)。
38.含孢子的益生菌组合物可包含至少一种不含菊糖和/或添加的菊糖的流变改性剂。不含菊糖和/或添加的菊糖的合适流变改性剂的非限制性示例包括黄原胶、瓜尔胶、阿拉伯胶、角叉菜胶、结冷胶等。在一些实施方案中，不含菊糖和/或添加的菊糖的至少一种流变改性剂以按组合物的重量计约0.01％至0.3％的量存在。例如，在一些实施方案中，不含菊糖和/或添加的菊糖的至少一种流变改性剂是黄原胶，其以按组合物的重量计约0.01％至0.3％的量存在。在其他实施方案中，不含菊糖和/或添加的菊糖的至少一种流变改性剂是阿拉伯胶，其以按组合物的重量计约0.01％至0.3％的量存在。在其他实施方案中，不含菊糖和/或添加的菊糖的至少一种流变改性剂是结冷胶，其以按组合物的重量计约0.01％至0.3％的量存在。
39.在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物不含盐。在其他实施方案中，含孢子的益生菌组合物可含有盐，所述盐以按组合物的重量计小于约10％、小于约5％、小于约1％、小于约0.1％、小于约0.01％、小于约0.001％或小于约0.0001％的量存在。盐的非限制性示例包括食盐，例如nacl、犹太盐(kosher salt)、碘化盐、海盐、喜马拉雅盐(himalayan salt)。其他盐包括例如钾、镁、钙、铵的氯化物盐。
40.在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物可具有在4℃的温度下测量的约25厘泊(cp)至2000厘泊(cp)的粘度。例如，在4℃的温度下测量的含孢子益生菌组合物的粘度可为约5cp至100,000cp、约5cp至10,000cp或约5cp至50,000cp。
41.含孢子的益生菌组合物还可包含额外的要素，诸如一种或多种天然香料、防腐剂、酸化剂等，以及它们的任一组合。例如，在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物可包含至少一种天然香料，所述天然香料以按组合物的重量计约0％至2％的量存在。在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物可包含至少一种防腐剂，所述防腐剂以按组合物的重量计
约0％至2％的量存在。如本文所用，“防腐剂”是指抑制不期望的微生物生长的成分。合适的防腐剂的非限制性示例包括山梨酸钾、苯甲酸钠、山梨酸、苯甲酸和丙酸。
42.在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物可包含至少一种酸化剂，所述酸化剂以按组合物的重量计约0％至2％的量存在。如本文所用，“酸化剂”是指将组合物的ph降低至最终ph(例如，低于约5)的成分。至少一种酸化剂可为有机酸或矿物酸。合适的酸化剂的非限制性示例包括乳酸、乙酸、柠檬酸、盐酸、苹果酸和磷酸。将至少一种酸化剂添加至含孢子的益生菌组合物中可改变组合物的ph，以便例如抑制腐败微生物的生长。在一些实施方案中，包含酸化剂(例如，乳酸)的含孢子的益生菌组合物可具有小于4.6的ph。例如，在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物可具有约2.0至5、约2.5至5或约3.0至5的ph。
43.在一些实施方案中，含孢子的益生菌组合物可具有约2.0至9.5、约3.0至8.0或约2.5至8.5的ph。
44.含孢子的益生菌组合物可使用任何合适的方法产生。例如，在一些实施方案中，该方法可包括将水和甘油混合在一起以形成第一混合物，将至少一种流变改性剂添加至益生菌材料中(例如，以1:10的比率)以形成第二混合物，然后将第一混合物和第二混合物合并且混合(例如，在高剪切下)以形成液体浆料。
45.该方法还可包括添加至少一种酸化剂，例如，乳酸，或防腐剂，例如，山梨酸钾、苯甲酸钠和/或山梨酸。该方法还可包括在添加至少一种酸化剂或防腐剂后，在高剪切下均质化液体浆料。在均质化后，可对液体浆料进行巴氏灭菌(例如，经由hpp或htst)，由此形成含孢子的益生菌组合物，然后包装(例如，在0.1-20l有盖或无盖的袋中)。或者，在添加至少一种酸化剂或防腐剂后，在高剪切下均质化液体浆料的步骤，由此产生含孢子的益生菌组合物，然后可包装该益生菌组合物。在一些实施方案中，然后可对包装的含孢子的益生菌组合物进行巴氏灭菌(例如，经由hpp)。
46.可将包装的含孢子的益生菌组合物添加至例如食品或饮料产品中，例如经由混合，例如低或高搅动，或喷雾。在一些实施方案中，将包装的浆料递送至食品或饮料产品中可在无菌条件下进行。
47.含孢子的益生菌液体浆料组合物可以是食品或饮料产品的添加剂。食品或饮料产品可以冷藏、冷冻或常温保存。
48.通过以下非限制性实施例可进一步理解含孢子的组合物和方法。
49.实施例
50.实施例1：含孢子的益生菌组合物的制备
51.使用下述示例性程序制备16种不同的含孢子的益生菌组合物样品。
52.在带夹套的不锈钢混合器皿中，将水加热或冷却至40
°
f-100
°
f。以20％-80％的高剪切溶解器速度和50％-100％的侧扫搅动对水进行搅动。在搅动期间，将酸化剂添加至水中，直至ph在4.0-4.6之间。任选地，添加防腐剂。将黄原胶和/或阿拉伯胶和/或结冷胶与含孢子的益生菌粉末以大约1:10的比率混合。将干物质添加至水/酸化剂中，并以20％-80％的高剪切溶解器速度和50％-100％的侧扫搅动共混，以形成液体浆料。将其混合5分钟。在搅动期间，将40
°
f-100
°
f的甘油添加至液体浆料中。使用20％-80％的高剪切溶解器速度和50％-100％的侧扫搅动将液体浆料混合5-20分钟。从器皿中转移液体浆料，并使其穿过在线(inline)高剪切设备(例如，ika、greerco、gea、niro soavi均质器)。然后，将液体浆料从
剪切设备转移至热处理设备(例如板式或刮削式表面热交换器)中并穿过热处理设备，以将液体浆料加热至160
°
f-200
°
f之间的温度，持续15-45秒。然后，经由在线冷却热交换器(板式或刮削式表面)，将加热的液体浆料冷却至50
°
f或更低的温度。然后将冷却的液体浆料包装至容器(诸如0.1l-20l的盒中袋)中。
53.样品1-8和9-16的组成构成分别示于表1a和表1b中。
54.表1a.样品1-8的组成构成
[0055][0056]
表1b.样品9-16的组成构成
[0057]
[0058][0059]
实施例2:含孢子组合物的表征
[0060]
对实施例1中制备的样品1-16各自进行表征。表2显示进行的各种分析和使用的方法。表3a显示样品1-8的这些分析的结果，并且表3b显示样品9-16的这些分析的结果。
[0061]
表2.进行的分析
[0062]
[0063]
[0064][0065]
表3a.分析结果列于表2中.
[0066][0067]
表3b.分析结果列于表2中.
[0068][0069]
实施例3:比较测试—沉降
[0070]
将液体组合物在无搅动的情况下储存两周。目视检查液体组合物，且发现液体组合物的组分不沉降。
[0071]
实施例4:比较测试—水活性和粘度
[0072]
测试enterogermina样品(us 2015/0118203)的水活性和粘度，并将其与本文的样品进行比较。enterogermina产品的aw等于1。相比之下，本文的样品1-16的aw在约0.6至约0.7之间。
[0073]
定义
[0074]
本文所用的术语仅仅为了描述特定实施方案的目的，而并不意图限制本公开。除非另有明确定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均应理解为具有与本领域(例如，在细胞培养、细菌学、分子遗传学和生物化学中)普通技术人员通常理解的含义相同的含义。
[0075]
值或范围在本文中可表示为“约”和/或从“约”一个具体值到另一具体值。当表示此类值或范围时，所公开的其他实施方案包括列举的特定值和/或从一个具体值到另一具体值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应当理解，这里有其中所公开的多个值，并且所述具体值形成另一实施方案。还应当理解，其中公开了许多值，并且除了值本身之外，每个值还在本文中被公开为“约”该具体值。在实施方案中，“约”可用于意指例如所述值的10％以内、所述值的5％以内或所述值的2％以内。
[0076]
除非上下文另有明确指示，否则如本文所用的单数形式“一(a、an)”和“所述”旨在也包括复数形式。此外，就在具体实施方式和/或权利要求中使用术语“包括(including)”、“包括(includes)”、“具有(having)”、“具有(has)”、具有(with)或其变体来说，此类术语旨在以类似于术语“包含(comprising)”的方式是包含性的。
[0077]
除非内容另有明确规定，否则如本说明书和所附权利要求中所用的术语“或”通常以其包括“和/或”的意义采用。
[0078]
如本文所用，术语“包含(comprising)”、“包含(comprise)”或“包含(comprised)”和其变化形式关于项目、组合物、装置、方法、过程、系统等的定义或描述的要素，意味着是包含性的或开放式的，允许额外的要素，由此指示所定义或描述的项目、组合物、装置、方
法、过程、系统等包括那些所指定的要素或(在适当时)其等同物，并且其他要素可被包括并且仍然落在所定义的项目、组合物、装置、方法、过程、系统等的范围/定义内。
[0079]
为了描述和定义本教导的目的，应当注意，除非另有指示，否则术语“基本上”在本文中用于表示可归因于任何定量比较、值、测量或其他表示的固有不确定度。术语“基本上”在本文中还用于表示定量表示可在不导致所讨论主题的基本功能改变的情况下，由所述参考变化的程度。
[0080]
如本文所用，术语“萌发允许条件”是允许孢子萌发的环境条件。这些环境条件包括温度、营养素、ph水平等。
[0081]
如本文所用，“贮存稳定”是指在常温、冷藏或冷冻条件下稳定且消耗安全的组合物。
[0082]
如本文所用，“营养性添加剂”是旨在用于人或动物消耗的固体和/或液体营养添加剂。
[0083]
对本文所述的贮存稳定的含孢子的益生菌营养性添加剂的销售、出售、分配、储存等方式没有限制。例如，以上实施例描述了其中以各种形式(诸如在有盖或无盖的袋中和在盒中袋中)包装含孢子的益生菌组合物的实施方案。贮存稳定的含孢子的益生菌食品添加剂可以这些或类似的形式分配，以供用于食品和饮料应用的工业加工。还可包装和分配贮存稳定的含孢子的益生菌食品添加剂，以供个体消费者消耗，诸如用于膳食补充剂。这可能包括任何众所周知的单份和多份包装，包括密封小瓶、液体补充剂等。
[0084]
虽然以上描述可能集中于形成孢子的益生菌菌株的使用以及用于维持休眠的条件，但应当理解，还可使用(与孢子分离或对孢子的补充)包封的(非孢子化的)营养益生菌(诸如例如乳杆菌属(lactobacillus)和双歧杆菌属(bifidobacterium)种的那些)来制备贮存稳定的含孢子益生菌营养性添加剂。
[0085]
基于上述实施方案，本领域技术人员将理解本公开的进一步特征和优点。因此，除了所附权利要求所指出的以外，本发明不受已具体示出和描述的内容的限制。本文引用的所有公布和参考文献均以引入方式整体明确并入本文。称为以引用方式并入本文中的全部或部分的任何专利、出版物或信息仅以所并入的材料不与本文件中所述的现有定义、声明或其他公开材料相抵触的程度并入本文中。因此，如本文明确陈述的公开内容优先于通过引用并入本文中的任何冲突材料。