作为D1正变构调节剂的取代的四氢异喹啉衍生物的制作方法

作为d1正变构调节剂的取代的四氢异喹啉衍生物
1.本发明涉及四氢异喹啉衍生物及其在疗法中的用途。特别地，本发明涉及药理学上活性的取代的四氢异喹啉衍生物。
2.该化合物起d1正变构调节剂的作用，因此作为治疗其中d1受体起作用的疾病的药剂是有益的。
3.单胺多巴胺经由两个gpcr家族起作用而调节运动功能、奖励机制、认知过程和其他生理功能。具体而言，多巴胺经由d1样(包含多巴胺d1和d5)受体(该受体主要与gs g-蛋白偶联并从而刺激camp产生)以及d2样(包含d2、d3和d4)受体(该受体与gi/q g-蛋白偶联，并减弱camp的产生)而作用于神经元。这些受体在不同的脑区域广泛表达。特别地，d1受体参与许多生理功能和行为过程。d1受体例如参与突触可塑性、认知功能和目标导向的运动功能，还参与奖励过程。由于它们在几种生理/神经学过程中的作用，d1受体已经与多种障碍有关，包括精神分裂症中的认知和负面症状、与经典的神经抑制药疗法有关的认知损害、冲动性、注意缺陷多动障碍(adhd)、帕金森病和相关运动障碍、张力失常、亨廷顿病、路易体痴呆、阿尔茨海默病、年龄相关的认知衰退、轻度认知损害(mci)、药物成瘾睡眠障碍、情感淡漠。
4.已经证明很难开发靶向d1受体的口服生物可利用的小分子。迄今为止开发的d1激动剂的特征通常在于儿茶酚部分，因此其临床使用仅限于侵入性疗法。由于多巴胺受体亚型(例如多巴胺d1和d5)之间的配体结合位点的高度同源性，获得足够的选择性也是一个挑战。此外，d1激动剂与潜在的限制性副作用(包括但不限于运动障碍和低血压)有关。
5.因此，需要设计可以调节d1受体的新药剂。
6.鉴定gpcr的变构调节剂已经引起了人们非常多的兴趣，其既可以作为了解受体机制的工具，也可以作为潜在的治疗剂。gpcr代表最大的细胞表面受体家族，大量的市售药物直接激活或阻断这些受体介导的信号通路。然而，对于一些gpcr(例如，肽受体)，由于亚型(例如多巴胺d1和d5或d2和d3)之间的配体结合位点的高度同源性，开发小分子或实现足够的选择性已被证明是有挑战性的。因此，许多药物研究已经转移到鉴定靶向与正构(orthosteric)天然激动剂不同位点的小分子。与这些位点结合的配体诱导gpcr中的构象变化，从而变构调节受体功能。变构配体具有不同的活性范围，包括通过影响亲和力和/或功效来增强(正变构调节剂，pam)或减弱(负变构调节剂，nam)内源性配体的作用的能力。除了亚型选择性之外，变构调节剂可以从药物发现的角度呈现其他潜在的优势，诸如缺乏直接作用或内在功效；只能在释放部位和释放时增强天然递质的作用；减少由于持续暴露于激动剂引起诱发脱敏的倾向，以及减少诱发靶相关副作用的倾向。
7.根据本发明的化合物通过变构机制增强d1激动剂或内源性配体对d1受体的作用，因此是d1正变构调节剂(d1 pam)。
8.因此，根据本发明的为d1 pam的化合物有益于治疗和/或预防其中d1受体起作用的疾病和障碍。这样的疾病包括精神分裂症中的认知和负面症状、与神经抑制药疗法有关的认知损害、轻度认知损害(mci)、冲动性、注意缺陷多动障碍(adhd)、帕金森病和其它运动障碍、张力失常、帕金森痴呆、亨廷顿病、路易体痴呆、阿尔茨海默病、药物成瘾、睡眠障碍、
情感淡漠、创伤性脊髓损伤或神经性疼痛。
9.国际专利申请wo 2013/051869 a1公开了某些3,4-二氢-1h-异喹啉-2-基衍生物，其为nk2拮抗剂。
10.国际专利申请wo2008/109336 a1公开了某些四氢异喹啉化合物，其为组胺h3受体调节剂。
11.国际专利申请wo 2014/193781 a1公开了某些3,4-二氢异喹啉-2(1h)-基衍生物，用于治疗与帕金森病或精神分裂症相关的认知损害。
12.国际专利申请wo2016/055479公开了取代的3，4-二氢异喹啉-2(1h)-基衍生物及其类似物，其可用于治疗其中d1受体起作用的疾病。
13.国际专利申请wo2019/204418公开了某些吡唑-四氢异喹啉衍生物，其是d1正变构调节剂，并且可用于治疗帕金森病和其它运动障碍、阿尔茨海默病、精神分裂症和注意缺陷多动障碍(adhd)。
14.然而，仍然需要开发组合有利的药物动力学和药效学性质同时减少传统上与涉及选择性d1激动剂的治疗相关的副作用(诸如例如运动或认知障碍)的有效的d1正变构调节剂。
15.本发明提供式(i)的2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]-1-[5-[2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-基]乙烯酮，
[0016][0017]
或其药学上可接受的盐。
[0018]
根据本发明的化合物被涵盖在共同未决的国际专利申请wo2016/055479的一般范围内。然而，其中没有具体公开如上描述的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
[0019]
本发明还提供如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，用于疗法。
[0020]
在另一个方面，本发明还提供了如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗和/或预防其中d1受体起作用的疾病和/或障碍。
[0021]
在另一个方面，本发明提供如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗和/或预防精神分裂症中的认知和负面症状、与神经抑制药疗法有关的认知损害、轻度认知损害(mci)、冲动性、注意缺陷多动障碍(adhd)、帕金森病和其它运动障碍、张力失常、帕金森痴呆、亨廷顿病、路易体痴呆、阿尔茨海默病药物成瘾、睡眠障碍、情感淡漠、创伤性脊髓损伤或神经性疼痛。
[0022]
在该方面的一个特定的实施方案中，本发明提供如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗帕金森病和其它运动障碍、阿尔茨海默病或精神分裂症中的认知和负面症状。
[0023]
因此，在一个特定的方面，本发明提供如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗帕金森病和其它运动障碍。
[0024]
在一个进一步的方面，本发明提供如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗和/或预防其中d1受体起作用的疾病和/或障碍的药物的用途。
[0025]
在另一个进一步的方面，本发明提供如上文定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗和/或预防精神分裂症中的认知和负面症状、与神经抑制药疗法有关的认知损害、轻度认知损害(mci)、冲动性、注意缺陷多动障碍(adhd)、帕金森病和其它运动障碍、张力失常、帕金森痴呆、亨廷顿病、路易体痴呆、阿尔茨海默病、药物成瘾、睡眠障碍、情感淡漠、创伤性脊髓损伤或神经性疼痛的药物的用途。
[0026]
在该方面的一个特定的实施方案中，本发明提供如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗帕金森病和其它运动障碍、阿尔茨海默病或精神分裂症中的认知和负面症状的药物的用途。
[0027]
在一个特定的方面，本发明提供如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗帕金森病和其它运动障碍的药物的用途。
[0028]
本发明还提供一种治疗和/或预防其中指示施用d1正变构调节剂的障碍的方法，其包括向需要这种治疗的患者施用有效量的如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
[0029]
在另一个方面，本发明提供用于治疗和/或预防精神分裂症中的认知和负面症状、与神经抑制药疗法有关的认知损害、轻度认知损害(mci)、冲动性、注意缺陷多动障碍(adhd)、帕金森病和其它运动障碍、张力失常、帕金森痴呆、亨廷顿病、路易体痴呆、阿尔茨海默病、药物成瘾、睡眠障碍、情感淡漠、创伤性脊髓损伤或神经性疼痛的方法，其包括向需要这种治疗的患者施用有效量的如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
[0030]
在该方面的一个特定的实施方案中，本发明提供用于治疗帕金森病和其它运动障碍、阿尔茨海默病或精神分裂症中的认知和负面症状的方法，其包括向需要这种治疗的患者施用有效量的如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
[0031]
在一个特定的方面，本发明提供用于治疗帕金森病及其它运动障碍的方法，其包括向需要这种治疗的患者施用有效量的如上定义的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
[0032]
对于在药物中的用途，式(i)的化合物的盐将是药学上可接受的盐。然而，其它盐也可用于制备式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的选择和制备依据的标准原理被描述在例如handbook of pharmaceutical salts:properties,selection and use,ed.p.h.stahl&c.g.wermuth,wiley-vch,2002中。式(i)的化合物的合适的药学上可接受的盐包括酸加成盐，其可以例如通过将式(i)的化合物的溶液与药学上可接受的酸溶液混合而形成。
[0033]
应当理解，式(i)或下文所述的式中存在的每个单独的原子实际上可以以其天然存在的同位素中的任一种的形式存在，优选丰度最高的同位素。因此，作为实例，式(i)或下文描述的式中存在的每个单独的氢原子可以作为1h、2h(氘)或3h(氚)原子存在，优选1h。类似地，例如，式(i)或下文所述的式中存在的每个单独的碳原子可以作为
12
c、
13
c或
14
c原子，优选
12
c存在。
[0034]
本发明在其范围内包括上述式(i)的化合物的溶剂化物。这样的溶剂化物可以用普通的有机溶剂或水形成。
[0035]
本发明在其范围内还包括上述式(i)的化合物的共晶体。技术术语“共晶体”用于描述中性分子组分以确定的化学计量比存在于结晶化合物内的情况。药物共晶体的制备使得能够对活性药物成分的晶型进行修饰，这进而可以改变其物理化学性质而不损害其预期的生物活性(参见pharmaceutical salts and co-crystals,ed.j.wouters&l.quere,rsc publishing,2012)。
[0036]
根据本发明的化合物可以以不同的多晶型形式存在。尽管在上式中没有明确指出，但这样的形式也旨在被包括在本发明的范围内。
[0037]
本发明还包括在其范围内的式(i)的化合物的前药形式及其各种子范围和亚组。
[0038]
式(i)的化合物含有2个不对称中心，因此可以相应地以非对映异构体存在。本发明应当理解为扩展到所有这些非对映异构体的用途，以及它们以任何比例的混合物。因此，除非另有说明或显示，否则式(i)旨在表示所有单独的立体异构体及其所有可能的混合物。
[0039]
本发明的一个特定方面提供式(ia)的2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]-1-[(1s)-5-[(1s)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-基]乙烯酮，
[0040][0041]
或其药学上可接受的盐。
[0042]
在任何上述治疗适应症或障碍中的活性当然可以通过以相关领域技术人员已知的方式对于特定适应症进行合适的临床试验和/或在通常的临床试验设计中确定。
[0043]
为了治疗疾病，式(i)的化合物或其药学上可接受的盐可以以有效的日剂量使用，并以药物组合物的形式施用。
[0044]
因此，本发明还提供药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的载体组合的如上所述的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。
[0045]
为了制备根据本发明的药物组合物，根据本领域技术人员已知的常规药物配制技术，将一种或多种式(i)的化合物或其药学上可接受的盐与药物稀释剂或载体紧密混合。
[0046]
合适的稀释剂和载体可采取多种形式，取决于期望的施用途径，例如口服、直肠、肠胃外或鼻内。
[0047]
根据本发明的药物组合物可以例如口服、肠胃外，即静脉内、肌内或皮下、鞘内、通过吸入或鼻内施用。
[0048]
适于口服施用的药物组合物可以是固体或液体，并且可以是例如片剂、丸剂、糖衣丸剂(dragee)、明胶胶囊、溶液、糖浆、咀嚼胶等形式。
[0049]
为此，活性成分可以与惰性稀释剂或无毒药学上可接受的载体诸如淀粉或乳糖混
合。任选地，这些药物组合物也可以含有粘合剂(诸如微晶纤维素、黄芪树胶或明胶)、崩解剂(诸如海藻酸)、润滑剂(诸如硬脂酸镁)、助流剂(诸如胶体二氧化硅)、甜味剂(诸如蔗糖或糖精)、或着色剂或矫味剂(诸如薄荷或水杨酸甲酯)。
[0050]
本发明还涉及可以以受控方式释放活性物质的组合物。可用于肠胃外施用的药物组合物是常规形式，诸如通常包含在安瓿、一次性注射器、玻璃或塑料小瓶或输液容器中的水性或油性溶液或悬浮液。
[0051]
除了活性成分之外，这些溶液或悬浮液还可以任选地含有无菌稀释剂，诸如注射用水、生理盐水溶液、油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂，抗菌剂诸如苯甲醇，抗氧化剂诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠，螯合剂诸如乙二胺-四乙酸，缓冲剂诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐和调节同渗浓度的试剂诸如氯化钠或右旋糖。
[0052]
这些药物形式是使用药剂师常规使用的方法制备的。
[0053]
预防或治疗特定病症所需的本发明中使用的化合物的量将根据选择的化合物和待治疗患者的病症而变化。然而，通常，对于肠胃外组合物，日剂量可以在0.05至3000mg的范围内，通常在0.5mg至1000mg的范围内。
[0054]
根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以单独施用(单一疗法)或与l-多巴组合施用(组合疗法)。单独或与改善患者运动残障(motor disability)所需的l-多巴剂量的部分组合，根据本发明的式(i)的化合物或药学上可接受的盐可用于治疗与施用l-多巴相关的运动障碍。例如，如果根据本发明的式(i)的化合物与给予患者的l-多巴剂量的部分一起使用或单独使用以代替l-多巴，据信根据本发明的式(i)的化合物将有效对抗运动残障，而不会诱导麻烦的运动障碍。因此，据信根据本发明的化合物可以用于治疗运动缺陷和左旋多巴诱导的运动障碍(lid)。
[0055]
因此，在一个特定的方面，本发明还提供式(i)的化合物，其用于治疗左旋多巴诱导的运动障碍(lid)。
[0056]
根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以单独施用或与另一种药学活性成分组合施用。
[0057]
式(i)的化合物可以通过涉及使式(ii)的中间体与式(iii)的中间体反应的方法制备，
[0058][0059]
然后，在含有过量的碱(例如n,n-二异丙基乙胺)的合适的溶剂(例如二甲基甲酰胺)中，在(2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(hbtu)或本领域技术人员已知的另一种偶联剂的存在下，中间体(iii)的盐酸盐与式(ii)的中间体反应。
[0060]
式(iii)的中间体可以通过涉及式(iv)的中间体与市售可获得的氟代丙酮的反应的方法制备，其中y代表卤素，例如溴。
[0061][0062]
该反应方便地通过金属-卤素交换进行，例如在低温下，在合适的溶剂例如四氢呋喃中，在n-buli存在下，根据本领域技术人员已知的方法进行。
[0063]
在上述反应中，通常首先，根据本领域技术人员已知的方法用合适的保护基例如叔丁氧基羰基保护式(iii)和(iv)的中间体的氨基，然后与其它试剂反应。
[0064]
式(iiia)的中间体可以通过涉及式(v)的中间体的反应的方法制备，
[0065][0066]
其中y为如上文定义的。
[0067]
该反应通过在低温下，在合适的溶剂例如乙醇中，在合适的还原剂例如硼氢化钠的存在下，根据本领域技术人员已知的方法进行。
[0068]
式(v)的中间体可以通过涉及式(vi)的中间体的反应的方法制备，
[0069][0070]
其中y为如上文定义的。
[0071]
该反应在室温下，在合适的溶剂例如甲醇中，在硫酸存在下方便地进行。
[0072]
式(vi)的中间体可以通过涉及市售可获得的中间体(vii)的反应的方法制备，
[0073][0074]
其中y为如上文定义的。
[0075]
该反应方便地在低温下，在合适的溶剂例如二氯甲烷中，在草酰氯存在下进行，随后在室温下加入氯化铁。
[0076]
式(ii)的中间体可以通过涉及式(viii)表示的中间体的反应的多个步骤方法制备，
[0077][0078]
其中
[0079]
r1代表氢、-ch2oh、-coora或如上定义的y；
[0080]
r2代表-coora；和
[0081]
ra代表氢或c
1-6
烷基。
[0082]
在第一步中，使式(viii)的中间体(其中r1代表氢且ra代表甲基)与氧化剂(例如间-氯过苯甲酸(m-cpba))在低温下在合适的溶剂(例如二氯甲烷)中反应，得到相应的n-氧化物。
[0083]
在第二步中，将第一步得到的n-氧化物与三溴氧化磷反应，得到相应的式(viii)中间体，其中r1代表如上定义的y，ra代表甲基。
[0084]
在第三步中，在碱(例如n,n-二异丙基乙胺)的存在下，在过渡金属催化剂(例如1,4-双(二苯基膦基)丁烷-氯化钯(ii))的存在下，使其中r1代表如上定义的y的式(viii)的中间体与一氧化碳反应，得到其中r1代表-coora且ra代表甲基的相应式(viii)的中间体。该反应可方便地在高压和高温下进行。
[0085]
随后，将后一中间体的r1中的酯基还原成相应的醇，接着将r2中的酯基水解成相应的羧酸，得到式(ii)的中间体。根据本领域技术人员公知的方法，并如所附实施例中进一步详细说明的进行该反应。
[0086]
其中r1代表氢且ra代表甲基的式(viii)的中间体可以按照类似于所附实施例描述的方法或本领域技术人员已知的标准方法制备。
[0087]
当由上述用于制备根据本发明的化合物的任何方法获得产物混合物时，可以在适当的阶段通过常规方法诸如制备型hplc；或使用例如二氧化硅和/或氧化铝结合合适的溶剂系统的柱色谱法，从其中分离期望的产物。
[0088]
当用于制备根据本发明的化合物的上述方法得到立体异构体的混合物时，可以通过常规技术分离这些异构体。特别是，当需要获得式(i)的化合物的特定对映异构体时，可以使用任何合适的拆分对映异构体的常规方法从相应的对映异构体的混合物产生。因此，例如，非对映异构体衍生物(例如盐)可以通过使式(i)的对映异构体的混合物(例如外消旋体)与合适的手性化合物(例如手性碱)反应来产生。然后，可以通过任何方便的方法，例如通过结晶分离非对映异构体，并回收期望的对映异构体，例如在非对映异构体是盐的情况下通过用酸处理。在另一种拆分方法中，式(i)的外消旋体可以使用手性hplc分离。此外，如果期望，特定的对映异构体可以通过在上述方法之一中使用合适的手性中间体来获得。可替换地，可以通过进行对映异构体特异性的酶促生物转化，例如使用酯酶的酯水解，然后仅从未反应的酯对映体中纯化对映异构体纯的水解酸，来获得特定的对映异构体。当需要获得本发明的特定几何异构体时，也可以使用中间体或终产物进行色谱法、重结晶和其它常规分离方法。可替换地，可以在酸或碱的存在下，根据本领域技术人员已知的方法或根据所
附实施例中描述的方法，将不期望的对映异构体外消旋化成期望的对映异构体。
[0089]
在任何上述合成顺序期间，可能需要和/或期望保护任何相关的分子上的敏感或反应性基团。这可以通过常规的保护基，诸如protective groups in organic chemistry,j.f.w.mcomie编著，plenum press,1973；和t.w.greene&p.g.m.wuts,protective groups in organic synthesis,john wiley&sons，第3版，1999中描述的那些来实现。可以利用本领域已知的方法，在任何方便的后续阶段除去保护基。
[0090]
根据本发明的式(i)的化合物不会直接活化多巴胺d1受体，但是通过变构机制增强d1激动剂或内源性配体多巴胺对d1受体的作用，因此是d1正变构调节剂(d1 pam)。
[0091]
多巴胺和其它d1激动剂直接活化多巴胺d1受体本身。
[0092]
已经设计了测定来测量根据本发明的化合物在不存在多巴胺时(“活化测定”)和在存在多巴胺时(“增强测定”)的作用。
[0093]
在均相时间分辨荧光(htrf)测定中，活化测定测量对环一磷酸腺苷(camp)产生的刺激，其中通过增加内源性激动剂多巴胺的浓度达到的camp的最大增加定义为100％活化。
[0094]
当测试时，根据实施例的式(i)化合物缺乏显著的直接激动剂样作用，因为当以10μm的浓度存在时，其产生小于约20％的活化(与多巴胺最大响应相比)。
[0095]
增强测定测量化合物增加由低阈值浓度的多巴胺产生的camp水平的能力。使用的多巴胺的浓度([ec20])被设计成与随着多巴胺浓度的增加可见的最大响应(100％)相比产生20％的刺激。为了测量这种增强，将增加浓度的化合物与[ec20]的多巴胺一起培养，随着camp产生增加测量该增强，并测量产生50％camp水平增强的化合物浓度。
[0096]
当在camp htrf测定中测试时，根据实施例的式(i)的化合物已经显示出大于约6.5的pec50值，其显示出它们是d1正变构调节剂。
[0097]
已知gabaa受体抑制与癫痫发作和癫痫密切相关。因此，期望开发为d1正变构调节剂并且同时使这样的作用最小化的化合物。
[0098]
当在如本文所述的gaba-a受体抑制测定中测试时，在10μm的式(i)的化合物浓度测量时，式(i)的化合物已经显示对gabaa受体的抑制百分比小于或等于约20％。
[0099]
当开发用于疗法的化合物时可能面临的问题是某些化合物抑制cyp450酶的能力。这些酶的抑制可能影响这些化合物或其它可与其共同施用于患者的化合物的暴露，从而潜在地改变它们各自的安全性或功效。因此，期望开发使这种抑制潜力最小化的化合物。
[0100]
通过测量用增加浓度的根据本发明的化合物培养的人肝细胞中cyp450活性的潜在降低，已经测试了根据本发明的式(i)的化合物的cyp450抑制潜力。
[0101]
当根据本专利申请中描述的方案在cyp3a4抑制测定中以1和20μm的浓度测试时，根据本发明的式(i)的化合物显示出小于约40％，理想地小于约30％的抑制。
[0102]
当开发用于疗法的化合物时，重要的是具有一旦其被施用到体内就清除它的想法。
[0103]
清除率是给出该信息的参数，因为其代表按时间单位完全清除感兴趣的化合物的血浆(或血液)的体积。其通常表示为ml/min/kg或l/h。然后，可以将其与任何生理血流(例如，肝脏血流)比较，以评价清除率是低、中等还是高。
[0104]
当清除率低时，根据分布容积，人们可能期望需要低剂量并获得相对长的作用持续时间。当清除率高时，再次取决于分布容积，人们可能期望需要高剂量并获得相对短的作
用持续时间。
[0105]
根据本文描述的方案，假定主要消除途径是代谢，则通常通过使用肝细胞培养和按比例计算来评估清除率。从肝细胞评估的内在清除率以μl/分钟/106细胞表示。
[0106]
当在如本文所述的清除率测定中测试时，根据本发明的式(i)的化合物有利地显示出小于约10μl/min/106细胞的清除率。
[0107]
camp htrf测定
[0108]
测试化合物的具体条件如下所述。
[0109]
a.methods d1细胞培养
[0110]
在37℃下，在5％co2的潮湿气氛中培养细胞。使细胞在含有10％胎牛血清(lonza，verviers，belgium)、400μg/ml遗传霉素100iu/ml青霉素和100iu/ml链霉素(pen-strep溶液，)的dmem-f12 glutamax
tm-i培养基(invitrogen，merelbeke，belgium)中生长。使用表达多巴胺d1受体的lmtk(ltk-)小鼠成纤维细胞(biosignal inc,montreal,canada，现在的perkin elmer)，因为它们已显示有效偶联并产生强大的功能响应(watts等人，1995)。
[0111]
b.camp测定
[0112]
使用来自cisbio(codolet，france)的htrf camp动态测定试剂盒确定测量细胞内环一磷酸腺苷(camp)中的变化。使用均相时间分辨荧光技术，该测定是基于细胞产生的天然camp和用染料d2标记的camp之间的竞争。示踪剂结合通过用穴状化合物(cryptate)标记的抗camp抗体来确定。通过在不存在多巴胺的情况下进行测定来确定化合物单独的作用(激动)，而在存在ec
20
浓度的多巴胺的情况下确定化合物作为正变构调节剂(pam)的作用。在室温下，在存在和不存在多巴胺(最终1.1nm)下，将细胞(20,000/孔)在384孔板中培养1小时，最终体积为20μl hbss(lonza，含钙、镁和hepes缓冲液20mm，ph 7.4)，其含有：异丁基甲基黄嘌呤(sigma，最终0.1mm)，不同浓度的测试化合物(通常为10-9.5
m至10-4.5
m)。然后，终止反应，并且根据制造商的说明书，通过加入在裂解缓冲液(10微升)中的d2检测试剂和在裂解缓冲液(10微升)中的穴状化合物试剂将细胞裂解。然后，将其在室温下再培养60分钟，并且根据制造商的说明书使用envision平板读数器(perkinelmer,zaventem,belgium)用激光激发确定htrf荧光发射比的变化。所有培养一式两份进行，并将结果与浓度-对多巴胺的效应曲线进行比较。(10-11
m至10-6
m)。
[0113]
c.数据分析
[0114]
使用excel和prism(graphpad软件)分析数据，以获得使用4参数对数方程的pec50和erel(delean等，1978)，其中erel是测试化合物的拟合最大响应减去基数，表示为相对于用定义为100％的多巴胺得到的百分比。
[0115]
化合物的pec
50
是产生50％的camp水平增强的化合物浓度的-log10。
[0116]
erel是相对功效，定义为与由增加浓度的多巴胺产生的最大响应相比化合物产生的最大增强％(erel为1＝多巴胺最大响应)。
[0117]
当在本测定中测试时，式(ia)的化合物显示pec50值为约6.9，且式(ib)的化合物显示pec
50
值为约6.7。
[0118]
式(ia)的化合物显示的相应的erel为约64％，且式(ib)的化合物显示的相应的
erel为约61％。
[0119]
对gabaa受体细胞的自动膜片钳研究
[0120]
使用稳定表达人gabaa受体α1、β2和γ2亚基的cho-k1细胞。使用胰蛋白酶收获细胞，并保持在室温下无血清培养基中。在测试之前，将细胞洗涤并重悬浮于细胞外溶液中。
[0121]
膜片钳研究
[0122]
使用自动膜片钳测定(ionflux
tm ht)进行人gabaa(α1β2γ2)通道的实验。在3至4个细胞中，测试3个浓度(0.1、1和10μm)的化合物。用于记录gabaa电流的外部溶液由氯化钠137mm、氯化钾4mm、氯化钙1.8mm、氯化镁1mm、hepes 10mm和葡萄糖10mm组成。用naoh或koh滴定外部和内部溶液，以分别得到7.35或7.3的ph。内部移液管(pipette)溶液含有氟化钾70mm、氯化钾60mm、氯化钠70mm、hepes 5mm、egta 5mm和atp镁4mm。用于稀释化合物的媒介物的最终浓度为每孔中0.33％dmso。使用荷苞牡丹碱(0.032至100μm)作为阳性对照抑制剂。使用gaba(15μm)作为激动剂。所有记录都是从-60mv的钳制电位获得的。
[0123]
化合物的加入顺序如下：一次加入ec
80
浓度的gaba以建立基线响应。每种浓度的化合物应用30秒，然后在所述化合物存在下加入15μm的gaba 2秒。用下一个递增浓度的化合物重复该过程。测量在单一浓度的化合物存在下响应于gaba加入的峰内向电流。所有化合物的数据都已经被标准化为通过加入15μm的gaba 2秒而诱导的基线峰电流。
[0124]
当在上述测定中测试时，在10μm浓度下，式(ia)的化合物显示gabaa受体的抑制百分比为约13％。
[0125]
当在上述测定中测试时，在10μm浓度下，式(ib)的化合物显示gabaa受体的抑制百分比为约20％。
[0126]
使用冷冻保存的人微粒体体外评估cyp3a4抑制潜力
[0127]
人微粒体测定的目的是通过在式(i)的化合物与咪达唑仑(一种特异性cyp3a4底物)共培养之后测量cyp3a4活性来表征式(i)的化合物的抑制潜力。
[0128]
为此目的，将冷冻保存的人微粒体(合并的供体)在48孔胶原涂布的平板上分开，使得最终浓度为0.25mg/ml。然后，将ucb化合物以1μm和20μm浓度加入孔中，一式两份。在培养30分钟之后，加入浓度为2.5μm的咪达唑仑。在15分钟之后，取出等分试样，并放入等体积的含内标的甲醇中。将样品在4℃下以2500rpm离心20分钟。用去离子水稀释等份的上清液，并使用一般lc-ms/ms方法定量1-羟基咪达唑仑的水平。
[0129]
将浓度与在相同浓度的咪达唑仑培养但没有ucb化合物预培养之后获得的那些浓度进行比较。结果表示为抑制％。
[0130]
根据本发明的式(ia)化合物在20μm浓度下显示约28％的cyp3a4抑制百分比，在1μm浓度下显示约20％的cyp3a4抑制百分比。
[0131]
阿扎莫林(azamulin)测定
[0132]
根据供应商的信息，将冷冻保存的人肝细胞(20个供体的库，来自celsis/ivt/bioreclamation的bsu批次)解冻。生存力(锥虫蓝排除)高于75％。在培养箱(5％co2)中，在 37℃下，在温和搅拌(振动搅拌器，titramax 100，ca 300rpm)下，用含有2mm谷氨酰胺和15mm hepes的william's培养基在48孔板中进行预培养(250μl的肝细胞悬浮液，2
×
106肝细胞/ml)30分钟。在预培养之后，通过向肝细胞中加入250μl含有ucb化合物(1μm)或咪达唑仑(阳性对照)，含有或不含阿扎莫林(6μm-特异性cyp3a4/5抑制剂)的培养基(见上文的组
成)，开始培养。在培养物中ucb化合物的最终浓度为0.5μm。通过2次进-出移液(in-out pipetting)将细胞悬浮液快速再均质化。在培养0、30、60、120、180和240分钟之后，通过将50μl的培养物转移至来自含有50μl冰冷乙腈与酮康唑1μm(作为内标)的96孔板的合适的孔中停止反应。在每次取样之前，通过2次进-出移液将细胞培养物再均质化。
[0133]
通过lc-ms-ms生物分析方法分析样品，以测量ucb化合物的浓度。拟合浓度对时间的曲线以确定以μl/min/106细胞表示的内在清除率(clint)。
[0134]
当与不同浓度的人肝细胞悬浮液一起培养时，根据本发明的式(ia)化合物的内在清除率(clint)等于约8.8μl/min/106细胞，式(ib)的化合物的内在清除率(clint)为约9.2μl/min/106细胞。
[0135]
以下实施例说明根据本发明的式(i)的化合物的制备。
实施例
[0136]
缩写/反复出现的试剂
[0137]
acn:乙腈
[0138]
camp:环一磷酸腺苷
[0139]
brine:饱和的氯化钠水溶液
[0140]
nbu:正丁基
[0141]
tbu:叔丁基
[0142]
cho:中国仓鼠卵巢
[0143]
m-cpba:3-氯过苯甲酸
[0144]
cyp450:细胞色素p450
[0145]
dcm:二氯甲烷
[0146]
dmf:n,n-二甲基甲酰胺
[0147]
dmso:二甲亚砜
[0148]
ec
20/50
:产生最大响应的20％/50％的浓度
[0149]
egta:依他酸
[0150]
erel:相对功效
[0151]
es

:电喷雾正电离
[0152]
et:乙基
[0153]
etoh:乙醇
[0154]
et2o:乙醚
[0155]
etoac:乙酸乙酯
[0156]
gaba:γ-氨基丁酸
[0157]
h:小时
[0158]
hepes:4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸
[0159]
hplc:高压液相色谱法
[0160]
htrf:均相时间分辨荧光
[0161]
lcms:液相色谱-质谱法
[0162]
lda:二异丙基氨基锂
[0181][0182]
碱性程序“10min”[0183][0184]-对于酸性洗脱，使用以下进行分析：
[0185]
使用qda waters简单四极质谱仪进行lcms分析。该光谱仪装配有esi源和具有二极管阵列检测器(200至400nm)的uplc acquity hclass。在采用酸性洗脱的正模式中，在从m/z 70至800的全ms扫描中获得数据。对于酸性洗脱，在45℃下，在waters acquity uplc hss t3 1.8μm(2.1
×
50mm)柱上进行反相分离。用水/acn/tfa(95/5/0.5ml/l)(溶剂a)和acn(溶剂b)进行梯度洗脱。进样体积：1μl。ms中的全流量。
[0186]
酸性程序“4min”[0187][0188]
[0189]
酸性程序“10min”[0190][0191]
粗材料可以通过正相色谱法、(酸性或碱性)反相色谱法、手性分离或重结晶纯化。
[0192]
使用硅胶柱(100:200目硅胶或来自interchim的-50 sihc-jp柱)进行正反相色谱法。
[0193]
如下进行制备型反相色谱法：
[0194]-lcms纯化(碱性模式，lcms制备型)：使用sqd或qm waters三重四极质谱仪用于lcms纯化。该光谱仪装配有esi源和具有二极管阵列检测器(210至400nm)的prep lc控制器waters四元泵。
[0195]
ms参数：esi毛细管电压3kv。锥(cone)和提取器(extractor)电压10。源块温度120℃。去溶剂化温度300℃。锥气流30l/h(氮气)，去溶剂化气流650l/h。在全ms扫描中以用酸性或碱性洗脱的正模式从m/z 100至700获得数据。
[0196]
lc参数：在室温，在xbridge prep obd c18柱(5μm，30
×
50mm)上进行反相分离(碱性洗脱)。用水(溶剂a)、acn(溶剂b)、碳酸氢铵在水中的溶液8g/l 500μl/l的nh4oh 30％(溶剂c)(ph～8.5)进行梯度洗脱。hplc流速：35ml/min至60ml/min，进样体积：1ml。到ms的分流比设定为
±
1/6000。
[0197][0198]
粗材料可以通过正相色谱法、(酸性或碱性)反相色谱法、手性分离或重结晶纯化。
[0199]
在最终分析和进行生物测试之前，通常将产物在真空下干燥。
[0200]
所有nmr光谱都是在250mhz、300mhz、400mhz或500mhz下获得的。
[0201]
1.中间体(ii)-2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]乙酸的制备
[0202][0203]
1.1. 3,5-二氯-4-甲基-吡啶a2的制备
[0204]
在氮气下，将lda(1.86l，2m的thf溶液，3.72mol)和thf(5.0l)装入反应器中。在-20℃下，加入3,5-二氯-4-甲基-吡啶a1(500g，3.38mol)，并在-10℃下搅拌该混合物30分钟。将反应冷却至-70℃，加入碘代甲烷(815g，5.74mol)。使混合物升温至室温，并搅拌4小时。这整个过程在一起后处理(work up)的4批相同大小的样品上平行进行。将该混合物冷却至0℃，用水(5l)淬灭，并搅拌10分钟。用乙酸乙酯(2
×
3l)萃取水相，并将合并的有机相用盐水(10l)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。通过在-70℃下从乙醇(4l)中重结晶纯化粗产物，得到呈黄色固体的3,5-二氯-4-甲基-吡啶a2(1.5kg，产率68.5％)。
[0205]
1.2. 2-(3,5-二氯-4-吡啶基)乙酸甲酯-中间体a3的制备
[0206]
将3,5-二氯-4-甲基-吡啶a2(375g,2.31mol)和dmf(1.87l)装入反应器中，并将混合物冷却至15℃。在氮气下，在10-15℃加入叔丁醇钾(779g，6.94mol)，并在15℃下搅拌该混合物30分钟。在10-15℃下，加入碳酸二甲酯(730g，8.10mol)，并在30℃下搅拌该混合物4小时。这整个过程在一起后处理的4批相同大小的样品上平行进行。将该混合物冷却至0℃，用水(10l)淬灭反应，并搅拌10分钟。过滤反应混合物，并用乙酸乙酯(2l)洗涤滤饼两次。用乙酸乙酯(3l)萃取水相两次，并将合并的有机相用盐水(5l)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，得到呈黑褐色液体的2-(3,5-二氯-4-吡啶基)乙酸甲酯a3(1.3kg，产率63.8％)，其用于下一步而无需进一步纯化。
[0207]
1.3. 2-(3,5-二氯-1-氧化(oxido)-吡啶-1-鎓-4-基)乙酸甲酯-中间体a4的制备
[0208]
将2-(3,5-二氯-4-吡啶基)乙酸甲酯a3(650g，2.95mol)和二氯甲烷(3.25l)装入反应器中。在0℃下，在氮气下加入m-cpba(1.27kg，5.91mol，纯度80％)，并在25℃搅拌该混合物5小时。这整个过程在一起后处理的两批相同大小的样品上平行进行。将该混合物冷却
至0℃，用水(4l)淬灭反应，并搅拌10分钟。过滤反应混合物，并用二氯甲烷(3l)洗涤滤饼两次。用二氯甲烷(2l)萃取水相两次，将合并的有机相用na2s2o3饱和溶液(15l)洗涤三次，并用盐水(10l)洗涤两次，然后经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物经硅胶色谱法纯化(石油醚：乙酸乙酯20:1至1:1)，得到呈黄色固体的2-(3,5-二氯-1-氧化-吡啶-1-鎓-4-基)乙酸甲酯a4(900g，产率64.2％)。
[0209]
1.4. 2-(2-溴-3,5-二氯-4-吡啶基)乙酸甲酯-中间体a5的制备
[0210]
在20℃下，将2-(3,5-二氯-1-氧化-吡啶-1-鎓-4-基)乙酸甲酯a4(900g，3.81mol)和乙腈(8l)装入反应器中。在0℃下，在氮气下，加入三溴氧化磷(pobr3，1.09kg，3.81mol)，并在25℃搅拌该混合物12小时。这整个过程在另一批(1.64摩尔规模)上平行进行，并将二者一起后处理。将混合物冷却至0℃，用水(3l)淬灭反应，并搅拌10分钟。用乙酸乙酯(2l)萃取水相两次。将合并的有机相用盐水(5l)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物用硅胶色谱法(石油醚：乙酸乙酯50:1至1:1)纯化，得到呈灰白色固体的2-(2-溴-3,5-二氯-4-吡啶基)乙酸甲酯a5(503g，产率43％)。
[0211]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.32(s,1h),4.07(s,2h),3.75(s,3h)
[0212]
1.5. 3,5-二氯-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)吡啶-2-甲酸甲酯-中间体a6的制备
[0213]
向2-(2-溴-3,5-二氯-4-吡啶基)乙酸甲酯a5(3g，10.03mmol)的甲醇(60ml)溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(2.42ml，14.6mmol)和1,4-双(二苯膦基)丁烷-氯化钯(ii)(91mg，0.15mmol)。用氮气冲洗反应器三次，然后用5巴的一氧化碳加压(吹扫3次)，并在80℃下加热该混合物3小时。在室温下，经硅藻土过滤反应混合物，并在减压下除去溶剂。通过柱色谱法(biotage snap ultra 25g，洗脱液：乙酸乙酯:己烷1:1)纯化粗产物。在真空下除去溶剂，得到呈黄色液体的3,5-二氯-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)吡啶-2-甲酸酯a6(1.84g，产率66％)。
[0214]
lcms(mh

):278
[0215]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.75(s,1h),4.12(s,2h),3.93(s,3h),3.68(s,3h)。
[0216]
1.6. 2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]乙酸甲酯-中间体a7的制备
[0217]
在室温下，向3,5-二氯-4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)吡啶-2-甲酸甲酯a6(305mg，1.09mmol)在thf(10ml)中的溶液中加入硼氢化钠(124mg，3.29mmol)，并在室温下搅拌反应混合物18小时。过滤反应混合物，并在真空下除去溶剂。通过柱色谱法(biotage snap ultra 25g，洗脱液：二氯甲烷:甲醇100:0至90:10)纯化粗产物。在真空下除去溶剂，得到呈固体的2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]乙酸甲酯a7(139mg，产率50％)。
[0218]
lcms(mh

):250
[0219]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),4.78(s,2h),4.04(s,2h),3.74(s,3h)。未观察到oh质子。
[0220]
1.7.中间体(ii)-2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]乙酸的制备
[0221]
向2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]乙酸甲酯a7(98.1g,392mmol)在thf(1.1l)和水(110ml)的混合物中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(25.2g，589mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌18小时，然后将其在真空下浓缩。将残余物与甲苯(3
×
250ml)共沸共蒸发，得到自由流动的灰白色粉末形式的2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]乙酸(ii)(92.6g，产率100％)。产物用于下一步骤中而无需进一步纯化。
[0222]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.54(s,1h),4.62(s,2h),2.46(s,2h)。没有看到两个oh质子。
[0223]
2.中间体(iii)的制备
[0224]
(1r)-1-氟-2-[(1s)-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基]丙-2-醇盐酸盐a14-(r,s)和(1s)-1-氟-2-[(1s)-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基]丙-2-醇盐酸盐a14-(s,s)的制备
[0225][0226]
2.1.中间体(vi)-7-溴-10b-甲基-6,10b-二氢-5h-[1,3]噁唑并[2,3-a]异喹啉-2,3-二酮a9的制备
[0227]
在0℃下，向n-[2-(2-溴苯基)乙基]乙酰胺a8(市售，106.5g，439.8mmol)在dcm(1.5l)中的溶液中滴加草酰氯(72ml，838.7mmol)。在0℃下，搅拌该混合物2小时，然后使其升温至室温，并搅拌3小时。然后，将反应混合物冷却至0℃，并分2批加入氯化铁(86g，530.2mmol)。使反应混合物升温至室温，在室温下搅拌过夜，用dcm(2.5l)稀释，然后在0℃用12m的浓氨水溶液(200ml)淬灭。将有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到108g呈褐色固体的7-溴-10b-甲基-6,10b-二氢-5h-[1,3]噁唑并[2,3-a]异喹啉-2,3-二酮a9，其用于下一步骤中而无需任何进一步的纯化。
[0228]
产率(粗物质)：83％。
[0229]
lcms(es

):296/298(m h)

。
[0230]
2.2.中间体(v)-5-溴-1-甲基-3,4-二氢异喹啉a10的制备
[0231]
在室温下，向7-溴-10b-甲基-6,10b-二氢-5h-[1,3]噁唑并[2,3-a]异喹啉-2,3-二酮a9(108g，364.72mmol)在meoh(1.5l)中的悬浮液中滴加硫酸(75ml)。在65℃，搅拌该反应混合物过夜，然后，在0℃用15m的浓氨水溶液(300ml)淬灭。将该混合物在真空下浓缩，并加入水(300ml)。用dcm(1l)萃取水层6次。将有机层经mgso4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到86.44g呈褐色固体的5-溴-1-甲基-3,4-二氢异喹啉a10，其用于下一步骤中而无需任何
进一步的纯化。
[0232]
产率(粗物质)：定量的
[0233]
hplc(碱性模式):rt 4.75min，纯度87％。
[0234]
2.3.中间体(iv)-5-溴-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉a11的制备
[0235]
在0℃下，向5-溴-1-甲基-3,4-二氢异喹啉a10(86.44g，385.9mmol)在etoh(2l)中的溶液中分批(13*1g)加入硼氢化钠(13.2g，349mmol)。在0℃下，搅拌该混合物2小时，然后，在0℃下加入5n hcl水溶液(250ml)。在室温下，搅拌该反应混合物过夜，然后，在真空下浓缩etoh。加入dcm(1l)，并在0℃下，用6m浓氨水溶液(400ml)淬灭混合物。用dcm(500ml)萃取有机层两次，经mgso4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到83g呈褐色固体的5-溴-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉a11，其用于下一步骤中而无需任何进一步的纯化。
[0236]
产率(粗物质)：95％.
[0237]
hplc(碱性模式)：rt 4.53min，纯度80％。
[0238]
2.4. 5-溴-1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯-中间体a12、a12-s和a12-r的制备
[0239]
在0℃下，向5-溴-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉a11(78g，345mmol)在dcm(1l)中的溶液中加入tea(160ml，1136mmol)。然后，在0℃下，滴加二碳酸二叔丁酯(65g，294.8mmol)在dcm(250ml)中的溶液。在室温下，搅拌该反应混合物过夜，并用水(100ml)淬灭。将有机层经mgso4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残余物在meoh/正己烷(1:2，450ml)的混合物中研制(triturate)两次，得到63g呈白色固体的5-溴-1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯a12(产率：56％，hplc(碱性模式)：rt 6.59分钟，纯度98％)。
[0240]
手性分离(sfc,whelko 01(r,r),50*227mm,360ml/min,220nm,25℃，洗脱液：来自20％iproh)外消旋物5-溴1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁基酯a12，得到:
[0241]-25.1g呈固体的(1s)-5-溴-1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯a12-s
[0242]
产率：22％.
[0243]
hplc(碱性模式)：rt 6.59min，纯度91％。
[0244]
手性分析(lc,whelko-01(r,r),250*4.6mm,1ml/min,220nm,30℃，洗脱液：iproh/正庚烷/dea 50/50/0.1)rt 4.86min,97.7％ee.
[0245]-29.3g呈固体的(1r)-5-溴-1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯a12-r。
[0246]
产率：26％.
[0247]
hplc(碱性模式)：rt 6.59min，纯度98％。
[0248]
手性分析(lc,whelko-01(r,r),250*4.6mm,1ml/min,220nm,30℃，洗脱液：iproh/正庚烷/dea 50/50/0.1)rt 5.62min,92.4％ee。
[0249]
2.5.(1s)-5-[(1r)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-甲酸叔丁酯中间体a13-(s,r)和(1s)-5-[(1s)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-甲酸叔丁酯中间体a13-(s,s)的制备
[0250]
在-78℃下，将(1s)-5-溴-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-甲酸叔丁酯a12-s(7g，21.45mmol)溶于无水四氢呋喃(107ml)中。滴加n-buli(32.93mmol)，并在-78℃下搅拌该混合物10分钟。加入氟丙酮(4.78ml，64.2mmol)，并在室温下搅拌该混合物1小时。用1n的hcl水溶液(350ml)淬灭反应混合物，然后用二氯甲烷萃取三次。将有机层经mgso4干燥，过滤并
在真空下浓缩。通过反相色谱法(碱性模式，标准lc)纯化残余物。手性分离(lc，chiralpak ic，80*380mm，300ml/min，220nm，30℃，洗脱液：10％iproh的庚烷溶液)得到：
[0251]-1.137g呈米色固体的(1s)-5-[(1r)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-甲酸叔丁酯a13-(s,r)。
[0252]
产率：16％
[0253]
lcms(es

):268.0(m-tbu h)

。
[0254]
手性分析，(lc,whelko-01(r,r),150*4.6mm,1.5ml/min,220nm,30℃，洗脱液：iproh/正庚烷/dea 10/90/0.1):rt 2.37min,100％ee.
[0255]-1.074g呈米色固体的(1s)-5-[(1s)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-甲酸叔丁酯a13-(s,s)。
[0256]
产率：15％
[0257]
lcms(es

):268.0(m-tbu h)

。
[0258]
手性分析，(lc,whelko-01(r,r),150*4.6mm,1.5ml/min,220nm,30℃，洗脱液：iproh/正庚烷/dea 10/90/0.1):rt 2.72min,100％ee。
[0259]
2.6.(1r)-1-氟-2-[(1s)-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基]丙-2-醇盐酸盐a14-(r,s)和(1s)-1-氟-2-[(1s)-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基]丙-2-醇盐酸盐-中间体a14-(s,s)的制备
[0260]
在室温下，将(1s)-5-[(1r)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-甲酸叔丁酯a13-(s,r)(1.137g，3.516mmol)溶于二噁烷(18ml)中。加入4n hcl的二噁烷溶液(8.8ml，35mmol)。在室温下，搅拌该混合物过夜。将反应混合物在真空下浓缩，得到950mg呈米色固体的(1r)-1-氟-2-[(1s)-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基]丙-2-醇盐酸盐a14-(r,s)。
[0261]
产率(粗物质)：定量的
[0262]
lcms(es

):224.0(m h)

。
[0263]
(1s)-1-氟-2-[(1s)-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基]丙-2-醇盐酸盐a14-(s,s)
[0264]
化合物a14-(s,s)可以使用(1s)-5-[(1s)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-甲酸叔丁酯a13-(s,s)作为起始物质，根据相同的方法合成。
[0265]
产率(粗物质)：定量的
[0266]
lcms(es

):224(m h)

。
[0267]
3.式(i)的化合物的制备
[0268]
3.1.式(ia)的化合物-2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]-1-[(1s)-5-[(1s)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-基]乙酮的制备
[0269][0270]
向2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]乙酸a(112mg，0.476mmol)和(2s)-1-氟-2-[(1s)-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基]丙-2-醇盐酸盐a14-(s,s)(136mg，0.524mmol)在dmf(6ml)中的溶液中加入2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(hbtu，217mg，0.571mmol)。然后，在室温下，加入n,n-二异丙基乙胺(0.24ml，1.43mmol)，并搅拌该混合物2小时。将反应混合物用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤，并真空除去溶剂，得到粗产物。将粗产物用反相色谱法(碱性模式)纯化，并在真空下除去溶剂，得到呈固体的2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]-1-[(1s)-5-[(1s)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h异喹啉-2-基]乙酮1(116mg，产率55％)。
[0271]
lcms:441(mh

)
[0272]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.59(2s,1h，旋转异构体),7.37
–
7.09(m,3h),5.48(m,1h),5.34(m,2h),4.72
–
4.53(m,3h),4.53
–
4.25(m,1.3h),4.25
–
4.03(m,1.7h),4.02
–
3.69(m,2h),3.48(m,0.7h),3.38-3.33(m,部分在水信号下0.3h),3.31
–
3.07(m,1h),1.60(d,j＝6.7hz,1h),1.53(m,3h),1.37(d,j＝6.7hz,2h).
[0273]
3.2.式(ib)的化合物2-[3,5-二氯-2-(羟甲基)-4-吡啶基]-1-[(1s)-5-[(1r)-2-氟-1-羟基-1-甲基-乙基]-1-甲基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-基]乙酮的制备
[0274]
根据与式(ia)化合物所述类似的方法，由(2s)-1-氟-2-[(1r)-1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基]丙-2-醇盐酸盐a14-(s,r)开始制备标题化合物。
[0275]
lcms:441(mh

)
[0276]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.58(2s,1h,2个旋转异构体),7.42
–
7.07(m,4h),5.47(s,1h,旋转异构体),5.41
–
5.24(m,2h),4.85
–
4.66(m,1h),4.57
–
4.24(m,2h),4.09(s,3h),4.01
–
3.70(m,2h),3.58
–
3.19(m,部分在水信号下1h),1.59(d,j＝6.7hz,1h),1.53(m,3h),1.36(dd,j＝6.8,2.0hz,2h)。