本发明涉及具有优异的抗肿瘤效果的具有吡咯并嘧啶骨架的新型的磷酸酯或其药学上可接受的盐。另外，本发明涉及具有吡咯并嘧啶骨架的新型的磷酸酯或其药学上可接受的盐与烷基化剂和/或放射线疗法的联合使用。
背景技术
以细胞的增殖异常为特征的肿瘤现在也仍旧是需要有效的治疗方法的难治性疾病。肿瘤的细胞增殖也需要核酸的生物合成，参与其生物合成的分子的模拟化合物作为扰乱肿瘤的核酸代谢的核酸代谢拮抗剂被进行着全力开发。
但是，即使发现了具有高效力的核酸代谢拮抗作用的化合物，也多在毒性或药代动力学的方面存在问题，这样的化合物在临床上无法成为有用的药剂。为了克服这样的问题，最大限度发挥本来的效力，有时将这样的化合物转变为前药。由此，只要化合物具有抗肿瘤效果，就可以期待化合物的药代动力学的改善、以及对癌组织的作用选择性提高。但是，即使存在这样的希望，将具有高效力的核酸代谢拮抗作用的化合物转变为前药而制成临床上有用的药剂也并不容易。
作为具有吡咯并嘧啶骨架的化合物，报道有具有4-氨基-5-卤代-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶骨架的脱氧核糖核苷衍生物(非专利文献1、2、3、4)。而且，报道有在5位具有碘的脱氧核糖核苷衍生物(专利文献1)。但是，并没有教导对应于这些核苷衍生物的核苷酸衍生物的记载。
另外，报道有具有4-氨基-5-卤代-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶骨架的脱氧核糖核苷酸衍生物(专利文献2、3)。另外，报道有在脱氧核糖核苷酸的5位具有氟的衍生物(专利文献3)。此外，报道有具有4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶骨架的脱氧核糖核苷酸(专利文献1)。但是，对这些核苷酸衍生物并没有教导对应的核苷衍生物的前药的记载。
此外，还报道有在3’位具有磷酸酯的核糖核苷酸衍生物(非专利文献5)。但是，这些核苷酸衍生物并没有在吡咯并[2,3-d]嘧啶骨架的5位具有卤素的化合物的记载，也没有教导对应的核苷衍生物的前药的记载。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：WO 2013/009735
专利文献2：WO 2014/124430
专利文献3：WO 2017/165489
非专利文献
非专利文献1：Li等、Acta Cryst.2014，E70，o120
非专利文献2：Perlikova等、ChemMedChem，2013，8，832-846
非专利文献3：Naus等、Bioorg.Med.Chem，20，2012，5202-5214
非专利文献4：Brown等、J Med Chem.2016 July 28；59(14)：6860-6877
非专利文献5：Ikehara等、Chemical&Pharmaceutical Bulletin 1966，14(12)，1338-46
技术实现要素：
发明要解决的技术问题
本发明提供一种具有嘧啶骨架的化合物，其具有比具有嘧啶骨架的现有化合物更优异的安全性，并且显示高抗肿瘤效果。并且，本发明提供该具有嘧啶骨架的化合物、与烷基化剂和/或放射线疗法的联合使用疗法。
用于解决技术问题的技术方案
本发明的发明人发现了具有通式(1)所示的吡咯并[2,3-d]嘧啶骨架的脱氧核糖核苷酸。这些化合物是在5位具有特定的卤素且在3’位或5’位具有磷酸酯的化合物。
即，本发明的一个方式包括下述内容。
[1]下述通式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
[式中，
X表示氯原子、溴原子或碘原子，
Y相同或不同，表示氧原子或硫原子，
m表示0或1的任意整数，
n表示0或1的任意整数，
m n＝1。]
[2]如上述[1]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X为溴原子或碘原子。
[3]如上述[2]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X为碘原子。
[4]如上述[3]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Y为氧原子。
[5]如上述[4]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，m＝0，n＝1。
[6]如上述[1]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，X为溴原子或碘原子，Y为氧原子，m＝0，n＝1。
[7]选自以下的化合物组中的化合物或其药学上可接受的盐：：
(1)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯；
(2)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯；
(3)O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基)O,O-二氢硫代磷酸酯；
(4)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基二氢磷酸酯；和
(5)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯。
[8]一种抗肿瘤剂，其包含上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
[9]一种医药组合物，其含有上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
[10]如上述[8]所述的抗肿瘤剂或上述[9]所述的医药组合物，其为被制剂化为口服剂或注射剂的抗肿瘤剂或医药组合物。
[11]一种肿瘤的预防和/或治疗方法，其特征在于：投予上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[12]一种肿瘤的预防和/或治疗方法，其包括将制剂化为口服剂或注射剂的上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐向需要其的对象投予的步骤。
[13]如上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于作为医药组合物使用。
[14]如上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防和/或治疗肿瘤。
[15]如上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其被制剂化为口服剂或注射剂，且用于在肿瘤的预防和/或治疗中使用。
[16]上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤剂的制造中的应用。
[17]上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在医药组合物的制造中的应用。
[18]上述[1]～[7]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制剂化为口服剂或注射剂的抗肿瘤剂的制造中的应用。
[19]如上述[8]所述的抗肿瘤剂、上述[11]或[12]所述的肿瘤的预防和/或治疗方法、上述[13]～[15]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者上述[16]～[18]中任一项所述的应用，其中，上述肿瘤选自头颈部癌(口腔癌、咽癌、喉癌、鼻腔癌、鼻窦癌、唾液腺癌、甲状腺癌等)、消化器官癌(食管癌、胃癌、十二指肠癌、肝癌、胆道癌(胆囊/胆管癌等)、胰腺癌、大肠癌(结肠癌、直肠癌等)等)、肺癌(非小细胞肺癌、小细胞肺癌、间皮瘤等)、乳腺癌、生殖器官癌(卵巢癌、子宫癌(宫颈癌、子宫体癌等)等)、泌尿器官癌(肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸肿瘤等)、造血器官肿瘤(白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等)、骨/软组织肉瘤、皮肤癌和脑肿瘤。
[20]如上述[19]所述的抗肿瘤剂、肿瘤的预防和/或治疗方法、化合物或其药学上可接受的盐、或者应用，其中，上述肿瘤为脑肿瘤。
[21]下述通式(2)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
[式中，X表示氯原子、溴原子或碘原子。]。
[22]一种抗肿瘤剂，其包含上述[21]所述的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
[23]一种医药组合物，其含有上述[21]所述的化合物或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的载体。
[24]如上述[22]所述的抗肿瘤剂或上述[23]所述的医药组合物，其为被制剂化为口服剂或注射剂的抗肿瘤剂或医药组合物。
[25]一种肿瘤的预防和/或治疗方法，其特征在于：投予上述[21]所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[26]如上述[21]所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防和/或治疗肿瘤。
[27]上述[21]所述的化合物或其药学上可接受的盐在医药组合物或抗肿瘤剂的制造中的应用。
[28]如上述[22]所述的抗肿瘤剂、上述[25]所述的肿瘤的预防和/或治疗方法、上述[26]所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者上述[27]所述的应用，其中，上述肿瘤选自头颈部癌(口腔癌、咽癌、喉癌、鼻腔癌、鼻窦癌、唾液腺癌、甲状腺癌等)、消化器官癌(食管癌、胃癌、十二指肠癌、肝癌、胆道癌(胆囊/胆管癌等)、胰腺癌、大肠癌(结肠癌、直肠癌等)等)、肺癌(非小细胞肺癌、小细胞肺癌、间皮瘤等)、乳腺癌、生殖器官癌(卵巢癌、子宫癌(宫颈癌、子宫体癌等)等)、泌尿器官癌(肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸肿瘤等)、造血器官肿瘤(白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等)、骨/软组织肉瘤、皮肤癌和脑肿瘤。
[29]如上述[28]所述的抗肿瘤剂、肿瘤的预防和/或治疗方法、化合物或其药学上可接受的盐、或者应用，其中，上述肿瘤为脑肿瘤。
[30]一种抗肿瘤剂或医药组合物，其包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，并且与烷基化剂联合使用。
[31]一种抗肿瘤效果增强剂，其包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，且用于增强烷基化剂的抗肿瘤效果。
[32]一种抗肿瘤剂，其包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，且用于治疗接受了烷基化剂的投予的癌患者。
[33]一种肿瘤的治疗方法，其特征在于，包括投予上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的步骤，并且与烷基化剂联合使用。
[34]一种用于增强烷基化剂的抗肿瘤效果的方法，其包括向患者投予上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
[35]一种肿瘤的预防和/或治疗方法，其包括投予包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的抗肿瘤剂、以及烷基化剂的步骤。
[36]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在治疗肿瘤中的应用，其特征在于，联合使用而投予烷基化剂。
[37]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于增强烷基化剂的抗肿瘤效果的应用，其特征在于，联合使用而投予烷基化剂。
[38]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在治疗肿瘤中的应用，其特征在于，治疗接受了烷基化剂的投予的癌患者。
[39]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于增强烷基化剂的抗肿瘤效果的应用，其特征在于，治疗接受了烷基化剂的投予的癌患者。
[40]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤剂的制造中的应用，其特征在于，上述抗肿瘤剂与烷基化剂联合使用而投予。
[41]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在烷基化剂的抗肿瘤效果增强剂的制造中的应用，其特征在于，上述抗肿瘤效果增强剂与烷基化剂联合使用而投予。
[42]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤剂的制造中的应用，其中，对接受了烷基化剂的投予的癌患者或者要接受烷基化剂的投予的癌患者投予上述抗肿瘤剂。
[43]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在烷基化剂的抗肿瘤效果增强剂的制造中的应用，其中，对接受了烷基化剂的投予的癌患者或者要接受烷基化剂的投予的癌患者投予上述抗肿瘤效果增强剂。
[44]如上述[30]或[32]所述的抗肿瘤剂、上述[31]所述的抗肿瘤效果增强剂、[33]～[35]所述的方法、或[36]～[43]所述的应用，其中，烷基化剂为替莫唑胺。
[45]如上述[30]或[32]所述的抗肿瘤剂、上述[31]所述的抗肿瘤效果增强剂、[33]～[35]所述的方法、或[36]～[43]所述的应用，其特征在于，在烷基化剂以外，还联合使用放射线疗法。
[46]一种抗肿瘤剂，其特征在于，包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，并且与放射线疗法联合使用。
[47]一种抗肿瘤效果增强剂，其包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，并且用于增强放射线疗法的抗肿瘤效果。
[48]一种抗肿瘤剂或医药组合物，其包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，并且用于治疗接受了放射线疗法的癌患者。
[49]一种肿瘤的预防和/或治疗方法，其特征在于，包括使用上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，并且与放射线疗法联合使用。
[50]一种用于增强放射线疗法的抗肿瘤效果的方法，其包括对患者投予上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
[51]一种肿瘤的预防和/或治疗方法，其包括对接受了放射线疗法的癌患者投予包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的抗肿瘤剂的步骤。
[52]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在治疗肿瘤中的应用，其特征在于，与放射线疗法联合使用。
[53]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于增强抗肿瘤效果的应用，其特征在于，与放射线疗法联合使用。
[54]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在治疗肿瘤中的应用，其特征在于，治疗接受了放射线疗法的癌患者。
[55]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于增强抗肿瘤效果的应用，其特征在于，治疗接受了放射线疗法的癌患者。
[56]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤剂的制造中的应用，其特征在于，上述抗肿瘤剂与放射线疗法联合使用。
[57]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤效果增强剂的制造中的应用，其特征在于，上述抗肿瘤效果增强剂与放射线疗法联合使用。
[58]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤剂的制造中的应用，其中，对接受了放射线疗法的癌患者投予上述抗肿瘤剂。
[59]上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤效果增强剂的制造中的应用，其中，对接受了放射线疗法的癌患者投予上述抗肿瘤效果增强剂。
[60]如上述[46]或[48]所述的抗肿瘤剂、上述[47]所述的抗肿瘤效果增强剂、[49]～[51]所述的方法、或[52]～[59]所述的应用，其特征在于，在放射线疗法以外，还联合使用烷基化剂。
[61]如上述[60]所述的抗肿瘤剂、抗肿瘤效果增强剂、方法、或者应用，其中，烷基化剂为替莫唑胺。
[62]一种组合物，其包括：包含上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的医药组合物；和烷基化剂。
[63]一种复方制剂，其包括：上述[1]～[7]和[21]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；和烷基化剂。
[64]如上述[62]所述的组合物或上述[63]所述的复方制剂，其特征在于，与放射线疗法联合使用。
[65]如上述[62]所述的组合物或上述[63]所述的复方制剂，其为被制剂化为口服剂或注射剂的组合物或复方制剂。
发明的效果
具有吡咯并嘧啶骨架的新型的磷酸酯化合物或其药学上可接受的盐作为具有优异的安全性且显示高的抗肿瘤效果的抗肿瘤剂有用。并且，本发明的新型的磷酸酯化合物或其药学上可接受的盐在与烷基化剂和/或放射线疗法联合使用时显示优异的联合使用效果。
附图说明
图1表示对移植了人脑肿瘤细胞株(U-87MG)的BALB/cA Jcl-nu/nu小鼠投予比较例2和实施例2的化合物时的评价最终日的IR(纵轴)。
图2表示对移植了人脑肿瘤细胞株(U-87MG)的BALB/cA Jcl-nu/nu小鼠投予比较例2和实施例2的化合物时的各评价日(横轴)的BWC(纵轴)。○表示对照组(无处置)，■表示比较例2的化合物投予组，▲表示实施例2的化合物投予组。
图3表示对移植了人造血器官肿瘤细胞株(MV-4-11)的BALB/cA Jcl-nu/nu小鼠投予比较例2的化合物时的各评价日(横轴)的RTV(纵轴)。○表示对照组(无处置)，■表示比较例2的化合物投予组。
图4表示对移植了人造血器官肿瘤细胞株(MV-4-11)的BALB/cA Jcl-nu/nu小鼠投予实施例2的化合物时的各评价日(横轴)的BWC(纵轴)。○表示对照组(无处置)，■表示比较例2的化合物投予组。
图5表示对移植了人造血器官肿瘤细胞株(MV-4-11)的BALB/cA Jcl-nu/nu小鼠投予实施例2的化合物时的各评价日(横轴)的RTV(纵轴)。○表示对照组(无处置)，▲表示实施例2的化合物投予组。
图6表示对移植了人造血器官肿瘤细胞株(MV-4-11)的BALB/cA Jcl-nu/nu小鼠投予实施例2的化合物时的各评价日(横轴)的BWC(纵轴)。○表示对照组(无处置)，▲表示实施例2的化合物投予组。
图7表示对移植了人造血器官肿瘤细胞株(MV-4-11)的BALB/cA Jcl-nu/nu小鼠投予实施例2的化合物或比较例2的化合物时的淋巴细胞(LYMPH)、单核细胞(MONO)的评价最终日的相对于对照组(无处置)的变动。
图8表示对人脑肿瘤细胞株(U-87MG)以单剂或联合使用比较例2的化合物和放射线疗法进行处理时的细胞存活率。
图9表示对人脑肿瘤细胞株(U-87MG)以单剂或联合使用比较例2的化合物和替莫唑胺(TMZ)进行处理时的细胞存活率。
具体实施方式
以下，对本发明进行详细说明，但并不是要将本发明的范围限定为以下说明的实施方式进行解释。
＜术语的定义＞
在本说明书中使用的术语只要没有特别否定，就具有在本技术领域中通常使用的意思。
＜式(1)的化合物＞
在本发明的一个实施方式中，下述式(1)所示的本发明的化合物是以吡咯并[2,3-d]嘧啶为基本骨架的化合物，是新型的化合物：
[式中，
X表示氯原子、溴原子或碘原子，
Y相同或不同，表示氧原子或硫原子，
m表示0或1的任意整数，
n表示0或1的任意整数，
m n＝1。]。
在本发明的一个实施方式中，下述式(1)所示的本发明的化合物是以吡咯并[2,3-d]嘧啶为基本骨架的化合物，是新型的化合物：
[式中，
X表示溴原子或碘原子，
Y相同或不同，表示氧原子或硫原子，
m表示0或1的任意整数，
n表示0或1的任意整数，
m n＝1。]。
在本发明的通式(1)所示的化合物中，X表示氯原子、溴原子或碘原子，优选X表示溴原子或碘原子，更加优选X表示碘原子。
在本发明的通式(1)所示的化合物中，Y相同或不同，表示氧原子或硫原子。本发明化合物从抗肿瘤效果与毒性的平衡的观点出发，优选Y为氧原子。
在本发明的通式(1)所示的化合物中，n表示0或1的任意整数。即，n表示在5’位的羟基上取代的磷酸的数。在本发明化合物中，优选n为1。本发明化合物在具有磷酸取代的情况下，能够提高化合物的水溶性，不仅能够作为口服剂使用，还能够作为注射剂使用。
在本发明的一个实施方式中，在通式(1)所示的化合物中，优选是X为氯原子、溴原子或碘原子、Y为氧原子或硫原子、m n＝1的化合物。更优选是X为氯原子、溴原子或碘原子、Y为氧原子、m＝0、n＝1的化合物。
在本发明的一个实施方式中，在通式(1)所示的化合物中，可以列举上述的取代基，但优选是X为溴原子或碘原子、Y为氧原子、m n＝1的化合物。更优选X为溴原子或碘原子，Y为氧原子，m＝0，n＝1。
在本发明的一个实施方式中，在本发明的通式(1)所示的化合物中，优选是X为碘原子、Y为氧原子或硫原子、m n＝1的化合物。更优选是X为碘原子、Y为氧原子、m＝0、n＝1的化合物。
此外，在本发明的一个实施方式中，在本发明的通式(1)所示的化合物中，优选是X为溴原子、Y为氧原子或硫原子、m n＝1的化合物。更优选是X为溴、Y为氧原子、m＝0、n＝1的化合物。
作为具体的本发明的化合物，能够例示以下的化合物或其药学上可接受的盐，但不限定于这些。
(1)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
(2)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
(3)O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基)O,O-二氢硫代磷酸酯
(4)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基二氢磷酸酯
(5)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
本发明的化合物可以在这些(1)～(5)的化合物中，优选为选自以下的化合物组中的化合物或其药学上可接受的盐。
(1)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯；或
(2)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯。
在本发明的一个实施方式中，提供下述式(2)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[式中，X表示氯原子、溴原子或碘原子。]。
在本发明的一个实施方式中，本发明的化合物提供选自以下的化合物组中的化合物或其药学上可接受的盐。
(1)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇、
(2)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇、或
(3)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇。
＜式(1)所示的化合物的制造方法＞
接下来，对本发明的化合物的制造方法进行说明。
本发明的式(1)所示的化合物例如能够通过下述的制造方法或实施例所示的方法等制造。但是，本发明的式(1)所示的化合物的制造方法不限于这些反应例。各工序中得到的产物能够通过已知的分离纯化手段、例如浓缩、减压浓缩、结晶化、溶剂提取、再沉淀、色谱等进行分离纯化或者不进行分离纯化，而供于下一个工序。另外，在下述的制造方法中，不论有无记载，可以根据需要进行保护基的导入、或去保护，各工序的顺序可以适当变更。
关于在各工序中得到的生成物和原料，依照需要，通过导入能够容易地转换成该官能团的保护基能够对于各工序有效的情况下，或者也可以变更各工序顺序。作为这里使用的保护基，例如能够使用文献记载的方法[Greene和Wuts著、“Protective Groups in Organic Synthesis”、第5版、John Wiley&Sons Inc、2014年]中记载的保护基等，可以根据各工序中使用的反应条件适当选择。在导入该保护基进行反应后，根据需要将保护基去除，由此能够得到所希望的化合物。[制造方法1]通式(1a)(在通式(1)中，m＝0)的化合物的制造方法
[式中，X、Y、n的含义与上述相同，A1表示酰基]
(第一工序)
在本工序中，在碱存在下，使通式(2)所示的化合物与通式(3)所示的化合物反应，得到通式(4)所示的化合物。
通式(2)所示的化合物的A1只要是能够由氨去保护，就没有特别限制，可以列举苯甲酰基、乙酰基等的酰基。
作为用于本反应的碱，可以列举氢氧化钠、氢化钠、氢氧化锂、氢化钾、氢氧化钾等的无机碱。作为用于本反应的溶剂，只要不参与反应即可，没有特别限制，例如可以列举乙腈、二噁烷、四氢呋喃、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等，可以将它们单独或混合使用。在反应时可以根据需要使用三(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)胺等的有机叔胺。在该反应中，相对于通式(2)所示的化合物1摩尔，使用通式(3)所示的化合物0.5～20摩尔量左右、优选0.7～5摩尔量左右，使用碱1.0～40摩尔量、优选1.4～10摩尔量左右，使用有机叔胺0.01～10摩尔量、优选0.02～5摩尔量左右。反应温度为-30～100℃，优选为-20～60℃，反应时间为0.1～48小时，优选为1～24小时。
(第二工序)
在本工序中，能够使通式(4)所示的化合物与氨反应，制造通式(5)所示的化合物。
作为用于本反应的溶剂，只要不参与反应即可，没有特别限制，例如可以列举二噁烷、二甲氧基乙烷、四氢呋喃、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、水等，可以将它们单独或混合使用。在该反应中，相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，使用氨3～1000摩尔量左右、优选5～500摩尔量左右。反应温度为0～200℃，优选为20～150℃，反应时间为0.1～48小时，优选为1～24小时。
(第三工序)
在本工序中，使通式(5)所示的化合物与磷酸化试剂反应，选择性地仅使5’位磷酸酯化，得到通式(1a)所示的化合物。
作为本反应中使用的磷酸酯化试剂，只要能够使5’位选择性地磷酸酯化，就没有特别限制，可以列举氧氯化磷、硫氯化磷或氧溴化磷等的磷酰卤类。在反应时，根据需要可以使用碱。作为碱，例如可以列举咪唑、1-甲基咪唑、三乙基胺、三乙基胺、三丙基胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、二甲基吡啶、三甲吡啶等的有机胺类或碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾等的无机碱。作为用于本反应的溶剂，只要不参与反应即可，没有特别限制，例如可以列举磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、磷酸三丙酯、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、四氢呋喃、二噁烷、二乙醚、苯、甲苯、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜等，可以将它们单独或混合使用。在该反应中，相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，使用上述磷酸酯化试剂0.5～20摩尔量、优选1～10摩尔量左右，使用碱0.5～20摩尔量、优选1～10摩尔量左右。反应温度为-30～100℃，优选为-20～60℃，反应时间为0.1～100小时，优选为1～48小时。
[制造方法2]通式(1b)(通式(1)中，n＝0)的化合物的制造方法
[式中，X、Y、m的含义与上述相同，A2、A3表示酰基]
(第一工序)
本工序中，使通式(5)所示的核苷化合物或其盐与氨基的保护基的导入试剂反应，选择性地仅保护氨基，得到通式(6)所示的化合物。
作为本反应中选择的保护基，只要能够在碱性条件下除去，就没有特别限制，可以列举A2-Z(Z表示卤素等的脱离基。)所示的苯甲酰氯、对氯苯甲酰氯、乙酰氯等的酰卤。
在本反应中为了选择性地保护氨基，首先，使用三甲基氯硅烷进行三甲基甲硅烷化，在反应体系中预先保护2个羟基，然后在该反应体系中使A2-Z与氨基反应，接着进一步在该反应中与氨反应，将三甲基甲硅烷基去保护，可以得到通式(6)所示的化合物。作为用于本反应的溶剂，只要对反应没有影响，就没有特别限制，例如可以列举二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、四氢呋喃、二噁烷、二乙醚、苯、甲苯、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等，可以将它们单独或混合使用。在反应时，可以根据需要使用碱。作为碱，例如可以列举咪唑、1-甲基咪唑、三乙基胺、三乙基胺、三丙基胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、二甲基吡啶、三甲吡啶等的有机胺类或碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾等的无机碱，也可以仅使用碱作为溶剂。在该反应中，相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，使用三甲基氯硅烷1～20摩尔量左右、优选1～10摩尔量左右，使用上述的A2-Z 1～20摩尔量左右、优选1～10摩尔量左右，使用碱1～1000摩尔量左右、优选1～500摩尔量左右，使用氨1～10000摩尔量左右、优选1～1000摩尔量左右。反应温度为-30～100℃，优选为-10～60℃，反应时间为0.1～100小时，优选为1～48小时。
(第二工序)
在本工序中使通式(6)所示的化合物与保护化试剂反应，选择性地仅保护5’位的羟基，得到通式(7)所示的化合物。
作为本反应中选择的保护基，只要是能够在碱性条件下且与A2同时除去的基团，就没有特别限制，作为保护基的导入试剂，可以列举A3-Z(Z表示卤素等的脱离基。)所示的苯甲酰氯、对氯苯甲酰氯、乙酰氯等的酰卤。作为用于本反应的溶剂，只要对反应没有影响，就没有特别限制，例如可以列举二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、四氢呋喃、二噁烷、二乙醚、苯、甲苯、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等，可以将它们单独或混合使用。在反应时，根据需要可以使用碱。作为碱，例如，可以列举咪唑、1-甲基咪唑、三乙基胺、三乙基胺、三丙基胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、二甲基吡啶、三甲吡啶等的有机胺类或碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾等的无机碱，也可以仅使用碱作为溶剂。在该反应中，相对于通式(6)所示的化合物1摩尔，使用上述的A3-Z 1～20摩尔量左右、优选1～10摩尔量左右，使用碱1～1000摩尔量左右、优选1～500摩尔量左右。反应温度为-30～100℃，优选为-10～60℃，反应时间为0.1～100小时，优选为1～48小时。
(第三工序)
在本工序中使通式(7)所示的化合物与磷酸化试剂反应，将3’位的羟基磷酸酯化，得到通式(8)所示的化合物。
作为本反应中使用的磷酸酯化试剂，可以列举氧氯化磷、硫氯化磷或氧溴化磷等的磷酰卤类。作为用于本反应的溶剂，只要对反应没有影响，就没有特别限制，例如可以列举磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、磷酸三丙酯、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、四氢呋喃、二噁烷、二乙醚、苯、甲苯、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜等，可以将它们单独或混合使用。在该反应中，相对于通式(7)所示的化合物1摩尔，使用上述磷酸酯化试剂0.5～20摩尔量、优选1～10摩尔量左右。反应温度为-30～100℃，优选为-20～60℃，反应时间为0.1～100小时，优选为1～48小时。
(第四工序)
在本工序中，使去保护化试剂与通式(8)所示的化合物反应，将A2和A3去保护，得到通式(1b)所示的化合物。作为所使用的溶剂，只要不参与反应，就没有特别限制，例如可以列举甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、四氢呋喃、二噁烷、二乙醚、N,N-二甲基乙酰胺、水等，可以将它们单独或混合使用。作为使用的去保护试剂，可以列举甲胺、乙胺、丙胺等的单烷基胺、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂等的无机碱。在该反应中，相对于通式(8)所示的化合物1摩尔，使用上述去保护化试剂1～10000摩尔量、优选1～1000摩尔量左右。反应温度为-30～100℃，优选为-20～60℃，反应时间为0.1～100小时，优选为0.2～48小时。
这样，通式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐中，能够制造在5’位具有磷酸酯基的通式(1a)、或在3’位具有磷酸酯基的通式(1b)。
如此制造的通式(1)所示的化合物或其药学上可接受的盐能够通过通常使用的方法纯化。作为具体的纯化方法，可以列举通过硅胶色谱或反相色谱的分取、通过有机层和水层的萃取等，但不限于这些纯化方法。
本发明化合物为具有吡咯并嘧啶骨架的新型的磷酸酯化合物或其药学上可接受的盐，也能够称为新型的核苷酸衍生物。本发明化合物能够通过在生物体内除去磷酸酯，作为转化成具有抗肿瘤效果的活性核苷衍生物的前药使用。由此，能够进一步改善活性核苷衍生物所具有的药代动力学，进而能够缓解活性核苷衍生物所具有的毒性，因此本发明化合物能够作为极为优异的抗肿瘤剂使用。
通过本发明化合物的毒性的缓解与要投予本发明化合物的动物种类无关都可以实现。该缓解例如能够通过所投予的种类的动物的体重减少的抑制、血液成分减少的抑制等来确认。
在本发明化合物具有光学异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体等的异构体的情况下，只要没有特别说明，任意异构体和混合物都包含在本发明化合物中。
本发明化合物的盐是指药学上可接受的盐，能够列举碱加成盐或酸加成盐。
本发明化合物或其药学上可接受的盐可以为无定形，也可以为结晶。另外，晶型单一或多晶型混合物都包括在本发明化合物或其药学上可接受的盐中。本发明化合物或其药学上可接受的盐可以是溶剂合物(例如水合物等)，也可以是无溶剂合物，均包括在本发明化合物或其药学上可接受的盐中。由同位素(例如3H、14C、35S、125I等)等所标记的化合物也包括在本发明化合物或其药学上可接受的盐中。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐在作为医药使用时，可以根据需要配合药学上可接受的载体，根据预防或治疗目的采用各种给药方式，作为该医药的形态，例如可以是口服剂、注射剂、栓剂、软膏剂、贴剂等的任意形态，优选采用口服剂或注射剂，更优选采用注射剂。在另一实施方式中，作为该医药的形态，更优选采用口服剂。
作为本发明化合物中的各种给药方式，可以列举(1)～(5)所记载的化合物或其药学上可接受的盐的口服剂或注射剂。
(1)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
(2)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
(3)O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基)O,O-二氢硫代磷酸酯
(4)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基二氢磷酸酯
(5)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
作为本发明化合物的各种给药方式，优选为(1)所记载的化合物或其药学上可接受的盐的口服剂、(1)所记载的化合物或其药学上可接受的盐的注射剂、(2)所记载的化合物或其药学上可接受的盐的口服剂、或(2)所记载的化合物或其药学上可接受的盐的注射剂。
这些给药方式能够分别通过本领域技术人员已知的制剂方法制造。
在本说明书中使用的情况下，“进行治疗”或“治疗”包括以治愈或改善癌症为目的，或者以抑制癌的恶化、发生或复发、或以缓解症状为目的进行治疗的情况。
在本说明书中使用的情况下，“有效量”是指诱发组织、体系、动物或人的生物学或医学应答的药学上具有活性的药剂的量。这由研究者、兽医、医生或其他临床医生确定。在本发明的一个实施方式中，“有效量”是指缓解人类患者的至少1个临床症状的医药活性剂的量。在本发明的一个实施方式中，“有效量”可以是“预防有效量”、即对于预防癌症而言充分的量。在本发明的一个实施方式中，与烷基化剂联合使用而投予时的“有效量”可以考虑本发明的化合物或其药学上可接受的盐和烷基化剂各自的药剂的药效和副作用这两方面，从单剂的有效量适当减量。在本发明的一个实施方式中，与放射线疗法联合使用时的“有效量”可以考虑本发明的化合物或其药学上可接受的盐和放射线疗法各自的效果和副作用这两方面，从单剂的有效量适当减量。
在本说明书中使用的情况下，“对象”包括哺乳动物和非哺乳动物双方的动物，优选包括人。在本发明的一个实施方式中，对象为人类患者，可以是被诊断为需要与本说明书中公开的癌相关的临床症状或医学状态的治疗的人。对象有时需要已有的癌的治疗，或者有时需要用于预防或降低癌发生的风险的预防性治疗。在本说明书中使用的情况下，“需要”已有的癌的治疗或预防性治疗的对象包括由医疗专家的必要性的确定、以及患者对这种治疗的希望这两方面。
在本发明的一个实施方式中，提供包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分的抗肿瘤剂。另外，在本发明的另一个实施方式中，提供一种肿瘤的预防和/或治疗方法，其包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐向需要其的对象投予的步骤。另外，在本发明的又一个实施方式中，提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤剂的制造中的应用。另外，本发明的再一个实施方式中，提供用于肿瘤的预防和/或治疗的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方式中，提供包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐的医药组合物。本发明的一实施方式的医药组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、以及药学上可接受的载体。另外，在本发明的另一个实施方式中，提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐在医药组合物的制造中的应用。在本发明的又一个实施方式中，提供作为医药使用的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方式中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐能够与烷基化剂和/或放射线疗法联合使用。
在本发明的一个实施方式中，提供以与烷基化剂联合使用而投予为特征的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在本发明的另一个实施方式中，提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤剂的制造中的应用，其特征在于，与烷基化剂联合使用而投予。在本发明的又一个实施方式中，提供一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗肿瘤，其特征在于，与烷基化剂联合使用而投予。
在本发明中，“烷基化剂”是在体内对癌有活性、与本发明的化合物不同的任意的医药活性剂(或其医药上可接受的盐)。联合使用的烷基化剂中包括联合使用的烷基化剂的前药、游离酸、游离碱和药学上可接受的盐。通常，任意适当的追加抗癌剂可以以与本发明的化合物或其药学上可接受的盐的任意组合，以单次给药制剂(例如固定用量药物的组合)或1个以上的不同形态使用。单次给药制剂能够向对象同时(各个医药活性剂的同时投予)、逐次投予或个别投予医药活性剂。在特定的实施方式中，本发明的化合物和联合使用的烷基化剂以数分钟间隔、或数小时间隔、或数天间隔投予。在一个实施方式中，1个或多个追加抗癌剂如上所述包含在医药制剂中。
在本发明的一个实施方式中，提供包含含有本发明的化合物或其药学上可接受的盐的医药组合物、以及烷基化剂的组合物。该组合物所含的含有本发明的化合物或其药学上可接受的盐的医药组合物、以及烷基化剂能够同时(各个医药活性剂的同时投予)、或逐次投予、或个别投予，能够以数分钟间隔、或数小时间隔、或数天间隔、或数周间隔、或数月间隔投予。
在本发明中，作为“烷基化剂”的例子，可以列举苯丁酸氮芥、萘氮芥、环磷酰胺(chlorophosphamide)、环磷酰胺(cytophosphane)、雌莫司汀、异环磷酰胺、甘露醇氮芥、氮芥、盐酸氮芥、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、三氯氮芥(trimustine)氯乙胺、曲洛磷胺(trofosfamide)和尿嘧啶氮芥；白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡等磺酸烷基酯；卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、链脲佐菌素、TA-07等亚硝基脲；六甲密胺、噻替派、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基硫代磷酰胺、三亚乙基磷酰胺、三羟甲基三聚氰胺等亚乙基亚胺和甲基三聚氰胺；氨莫司汀；苯达莫司汀；达卡巴嗪；依托格鲁；伊洛福芬；马磷酰胺；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；甲基苄肼(procarbazine)；替莫唑胺；曲奥舒凡；三亚胺醌、二脱水半乳糖醇等，但不限定于这些。
在本发明的优选的实施方式中，“烷基化剂”为苯丁酸氮芥、雌莫司汀、异环磷酰胺、美法仑、卡莫司汀、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、六甲密胺、苯达莫司汀、达卡巴嗪、甲基苄肼、替莫唑胺、二脱水半乳糖醇。在本发明的更优选的实施方式中，“烷基化剂”为雌莫司汀、卡莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、苯达莫司汀、甲基苄肼、替莫唑胺、二脱水半乳糖醇。在本发明的最优选的实施方式中，“烷基化剂”为替莫唑胺。
在本发明的一个实施方式中，这些“烷基化剂”可以使用1种，也可以组合2种以上使用。
在本发明的一个实施方式中，除了与烷基化剂联合使用而投予以外，还能够进一步联合使用放射线疗法。
在本发明的一个实施方式中，提供以与放射线疗法联合使用为特征的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在本发明的另一个实施方式中，提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤剂的制造中的应用，其特征在于，与放射线疗法联合使用。在本发明的又一个实施方式中，提供一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗肿瘤，其特征在于，与放射线疗法联合使用。
用于实施放射线疗法的技术在本技术领域中广泛使用，例如，记载于“放射線治療計画ガイドライン2016(译文：放射线治疗方案指南)”等中。这些技术能够在本说明书记载的发明中使用。
放射线疗法大致被分为外部照射疗法、内部放射线疗法。外部照射疗法是指从体外照射放射线来治疗癌症，内部放射线疗法是指从体内照射放射线来治疗癌症。外部照射疗法中，通常可以选择高能放射线治疗、三维原体照射、强度调制辐射治疗(IMRT)、图像引导放射治疗(IGRT)、立体定向放射治疗(SRT)、立体定向手术照射(SRS)等的治疗方法或照射方法。内部放射线疗法中，可以选择密封小射线源疗法、以及利用非密封放射性同位元素的治疗。在这些放射线疗法中，放射线的种类可以根据癌症肿瘤选择电子射线、X射线、α射线、β射线、γ射线、质子线、重粒子线等。在本发明中，可以组合使用上述的放射线治疗和放射线的种类，而且不限定于这些。
在本发明的一个实施方式中，除了与放射线疗法联合使用以外，还能够进一步联合使用并投予烷基化剂。
在本发明的一个实施方式中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以单独用于癌的治疗，还可以与放射线疗法联合使用。此外，在将本发明的化合物或其药学上可接受的盐单独用于癌的治疗的情况、或与放射线疗法联合使用的情况下，能够与烷基化剂联合使用而投予。
在本发明的一个实施方式中，与烷基化剂和/或放射线疗法组合使用的式(I)的化合物为选自以下的化合物组中的化合物及其药学上可接受的盐。
(1)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
(2)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
(3)O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基)O,O-二氢硫代磷酸酯
(4)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基二氢磷酸酯
(5)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
在本发明的一个实施方式中，本发明的化合物可以更优选为选自以下的化合物组中的化合物或其药学上可接受的盐。
(1)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯；或
(2)((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯
在本发明的一个实施方式中，与烷基化剂和/或放射线疗法组合使用的式(2)的化合物为选自以下的化合物组中的化合物及其药学上可接受的盐。
(1)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇、
(2)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇、或
(3)(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇。
在本发明的特定的实施方式中，本发明的化合物以有效量投予。
在一个实施方式中，烷基化剂以有效量投予。
在特定的实施方式中，与本发明的化合物或其药学上可接受的盐联合使用的烷基化剂以治疗上的有效量投予。
在一个实施方式中，本发明的化合物和烷基化剂同时投予。
在一个实施方式中，本发明的化合物和烷基化剂分别投予。
在一个实施方式中，本发明的化合物和烷基化剂逐次投予。在一个实施方式中，本发明的化合物在烷基化剂之前投予。在一个实施方式中，本发明的化合物在烷基化剂之后投予。
在一个实施方式中，本发明的化合物的投予和放射线疗法同时实施。
在一个实施方式中，本发明的化合物的投予和放射线疗法逐次实施。在一个实施方式中，本发明的化合物在放射线疗法之前投予。在一个实施方式中，本发明的化合物在放射线疗法之后投予。
在一个实施方式中，本发明中记载的化合物或其药学上可接受的盐和烷基化剂通过还包含至少1种医药上可接受的载体的单一医药制剂投予。
作为药学上可接受的载体，可以使用作为制剂原材料惯用的各种有机或无机载体物质，作为固形制剂中的赋型剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、着色剂；液状制剂中的溶剂、助溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、镇痛剂等来配合。另外，还可以根据需要使用防腐剂、抗氧化剂、甜味剂、稳定剂等制剂添加物。
在制备口服用固态制剂的情况下，可以在本发明的化合物中添加赋型剂、根据需要的结合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味-矫臭剂等，之后，按照常规方法制造片剂、包衣片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等。
制备注射剂时，可以在本发明的化合物中添加pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、等渗剂、局部麻醉剂等，按照常规方法制造皮下、肌肉内和静脉内用注射剂。
在上述的各给药单位形态中应该配合的本发明的化合物的有效量根据要应用的对象的症状、其剂型等而有所不同，通常在口服剂时每给药单位形态以前药计可以设为0.05～10000mg，注射剂时每给药单位形态以前药计可以设为0.01～5000mg，栓剂时每给药单位形态以前药计可以设为1～10000mg。在本发明的一个实施方式中，给药单位形态中应该配合的本发明的化合物的有效量优选在口服剂时每给药单位形态以前药计为0.05～1000mg，注射剂时每给药单位形态以前药计为0.01～500mg，栓剂时每给药单位形态以前药计为1～1000mg。
另外，具有上述给药形态的药剂的每1天的给药量根据对象的症状、体重、年龄、性别等而有所不同，不能一概而论，以本发明的化合物计，通常，可以设为成人(体重50kg)每1天以前药计为0.05～50000mg，优选设为0.1～10000mg，优选在口服剂时以前药计为0.05～1000mg，注射剂时以前药计为0.01～500mg，栓剂时以前药计为1～1000mg。
成为本发明化合物的适用对象的肿瘤没有特别限制，例如可以列举头颈部癌(口腔癌、咽癌、喉癌、鼻腔癌、鼻窦癌、唾液腺癌、甲状腺癌等)、消化器官癌(食管癌、胃癌、十二指肠癌、肝癌、胆道癌(胆囊/胆管癌等)、胰腺癌、大肠癌(结肠癌、直肠癌等)等)、肺癌(非小细胞肺癌、小细胞肺癌、间皮瘤等)、乳腺癌、生殖器官癌(卵巢癌、子宫癌(宫颈癌、子宫体癌等)等)、泌尿器官癌(肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸肿瘤等)、造血器官肿瘤(白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等)、骨/软组织肉瘤、皮肤癌、脑肿瘤等。
由本发明的化合物治疗的脑肿瘤包括转移性脑肿瘤和原发性脑肿瘤。
脑肿瘤没有特别限制，例如可以列举转移性脑肿瘤(例如肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、膀胱癌、胆道癌、子宫癌等的脑转移)、毛细胞型星形细胞瘤、弥漫性星形细胞瘤、少突神经胶质瘤-少突星形细胞瘤、间变型星形细胞瘤-间变型少突神经胶质瘤、间变型少突神经星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、室管膜瘤、间变型室管膜瘤、神经节胶质细胞瘤、中枢神经细胞瘤、髓母细胞瘤、生殖细胞瘤(germinoma)、中枢神经系统恶性淋巴瘤、脑膜瘤、神经鞘瘤、GH型垂体腺瘤、PRL型垂体腺瘤、ACTH型垂体腺瘤、非功能性垂体腺瘤、颅咽管瘤、脊索瘤、成血管细胞瘤、表皮样瘤等。
由于本发明化合物可以作为前药使用，成为作为其活性化合物的通式(1)[式中，m和n为0，其他取代基的含义与上述相同]所示的化合物、或药学上可接受的盐的适用对象的癌症肿瘤也可以列举与上述同样的肿瘤。
由于本发明的化合物可以作为前药使用，成为作为其活性化合物的、
(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇；或
(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇；或
(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇
所示的下述的化合物或其药学上可接受的盐的适用对象的癌症肿瘤也可以列举与上述同样的肿瘤。
实施例
以下表示实施例和试验例，对本发明进一步详细地进行说明，但本发明不限定于这些实施例。
实施例中使用的各种试剂只要没有特别记载均使用市售品。硅胶柱色谱、以及碱性硅胶柱色谱使用Shoko Scientific Co.,Ltd.制或Biotage公司制预装柱。
反相制备HPLC柱色谱以下述条件实施。进样量和梯度适当设定来实施。
色谱柱：OSAKA SODA制CAPCELL PAK C18 MGIII，30×50mm，5μm
UV检测：254nm
柱流速：40mL/分钟
流动相：水/乙腈(0.1％甲酸)
进样量：0.1-1.0mL
梯度水/乙腈10％→90％(7分钟)
NMR谱使用AL400(400MHz；日本电子(JEOL))、Mercury400(400MHz；Agilent Technologies)、AVANCE NEO(400MHz；Bruker)、AVANCE III HD(500MHz；Bruker)型光谱仪，在氘代溶剂中含有四甲基硅烷的情况下作为内部基准使用四甲基硅烷，在除此以外的情况下作为内部基准使用NMR溶剂进行测定，全部δ值用ppm表示。
LCMS谱使用Waters公司制SQD以下述2个条件测定，表示[M H] 值。
MS检测：ESI positive
UV检测：254和210nm
柱流速：0.5mL/分钟
流动相：水/乙腈(0.1％甲酸)
进样量：1μL
色谱柱：Acquity BEH、2.1X50mm、1.7μm
梯度：
缩写符号的含义如下。
s：单峰
d：二重峰
t：三重峰
q：四重峰
dd：双二重峰
m：多重峰
br：宽峰
brs：宽单峰
DMSO-d6：氘代二甲基亚砜
D2O：氘代水
HPMC：羟丙甲纤维素
[比较例1]
(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇的合成
(工序1)
使5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.2g)悬浮于乙腈(80mL)中，加入三(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)胺(0.17mL)和粉末状的氢氧化钾(1.1g)，在50℃加热搅拌5小时。在该混合液中在室温下加入文献(Bioorg.Med.Chem，20，2012，5202-5214)记载的方法中得到的((2R,3R,4S,5R)-3-(苯甲酰氧基)-5-溴-4-氟四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯(4.5g)的乙腈(20mL)溶液，在该温度下搅拌1.5小时。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认((2R,3R,4S,5R)-3-(苯甲酰氧基)-5-(5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到该苯甲酸酯(5.1g)。
(工序2)
将本比较例的工序1得到的苯甲酸酯(3.0g)悬浮于25％氨水溶液(16mL)和1,4-二噁烷(16mL)的混合液，在120℃搅拌5小时。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认标题化合物的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到标记化合物(1.3g)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：3.55-3.67(2H，m)，3.74-3.78(1H，m)，4.29-4.37(1H，m)，5.02-5.17(1H，m)，5.06(1H，t，J＝5.6Hz)，5.87(1H，d，J＝4.8Hz)，6.52(1H，dd，J＝4.4，14Hz)，6.83(2H，brs)，7.48(1H，d，J＝2.0Hz)，8.09(1H，s)
ESI-MS：m/z 347，349(MH )
[比较例2]
(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇的合成
通过文献(Bioorg.Med.Chem，20，2012，5202-5214)记载的方法合成。
[比较例3]
(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇的合成
从5-氯-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶通过比较例1记载的方法合成。
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：3.63-3.79(3H，m)，4.34-4.39(1H，m)，5.09-5.20(2H，m)，5.90(1H，s)，6.56(1H，d，J＝12Hz)，6.93(2H，brs)，7.46(1H，s)，8.12(1H，s)
ESI-MS：m/z 303，305(MH )
[比较例4]
(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4,4-二氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇的合成
通过文献(ChemMedChem，8，2013，832-846)记载的方法合成。
[实施例1]
((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯的合成
使由比较例1得到的(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇(300mg)溶解于磷酸三乙酯(5mL)，在冰冷下加入氧氯化磷(0.16mL)，在4℃搅拌12小时。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认标题化合物的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到标记化合物(220mg)。
[实施例2]
((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯的合成
使比较例2中记载的化合物(200mg)溶解于磷酸三乙酯(2.5mL)，在冰冷下加入氧氯化磷(0.11mL)，在4℃搅拌12小时。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认标题化合物的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到标记化合物(158mg)。
[实施例3]
O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基)O,O-二氢硫代磷酸酯的合成
使比较例2中记载的化合物(100mg)溶解于磷酸三乙酯(1mL)，在冰冷下加入2,6-二甲基吡啶(0.12mL)和硫氯化磷(0.077mL)，在冰冷下搅拌3小时。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认标题化合物的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到标记化合物(99mg)。
[实施例4]
(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基二氢磷酸酯的合成
(工序1)
使比较例2中记载的化合物(200mg)溶解于吡啶(2.5mL)，加入三甲基氯硅烷(0.32mL)，在室温下搅拌2小时。然后在反应溶液中加入苯甲酰氯(0.025mL)，在室温下搅拌3小时。然后将反应液进行冰冷，加入水(1mL)和30％氨水溶液(1mL)，在室温下搅拌。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认N-(7-((2R,3S,4R,5R)-3-氟-4-羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到该苯甲酰胺(105mg)。
(工序2)
使本实施例的工序1中得到的苯甲酰胺(105mg)溶解于吡啶(2mL)，加入苯甲酰氯(0.025mL)，在室温下搅拌12小时。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认((2R,3R,4S,5R)-5-(4-苯甲酰胺-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到该苯甲酸酯(105mg)。
(工序3)
使本实施例的工序2中得到的苯甲酸酯(105mg)溶解于磷酸三乙酯(1.5mL)，在冰冷下加入氧氯化磷(0.065mL)，在室温下搅拌36小时。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认((2R,3R,4S,5R)-5-(4-苯甲酰胺-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-(膦氧基)四氢呋喃-2-基)甲基苯甲酸酯的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到该苯甲酸酯(100mg)。
(工序4)
使本实施例的工序3中得到的苯甲酸酯(100mg)溶解于40％甲胺水溶液(3mL)，在室温下搅拌2小时。采集一部分该溶液，通过LCMS谱确认标题化合物的存在后，通过通常使用的方法进行纯化，得到标记化合物(21mg)。
[实施例5]
((2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-3-羟基四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯的合成
由比较例3得到的(2R,3R,4S,5R)-5-(4-氨基-5-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-氟-2-(羟基甲基)四氢呋喃-3-醇(100mg)通过与实施例1同样的方法得到标记化合物(88mg)。
将实施例1～5的化合物的化学结构式和物性值表示于以下表1。
[表1]
使用以下的试验方法评价上述实施例和比较例的化合物。
[试验例1]小鼠中的前药的确认和吸收性的评价1
以比较例1的化合物、实施例1的化合物的三乙胺盐、比较例2的化合物和实施例2的化合物的各投予量分别成为50mg/10mL/kg、62mg/10mL/kg(以游离体换算50mg/10mL/kg)、3mg/10mL/kg和3.6mg/10mL/kg的方式，用0.5％HPMC水溶液制备投予液。其中，实施例1的化合物的三乙胺盐在制备投予液时，通过添加1摩尔当量的三乙胺来制备。
以比较例3的化合物和实施例5的化合物的各投予量分别成为3mg/10mL/kg和3.8mg/10mL/kg的方式，用0.5％HPMC水溶液制备投予液。
其中，关于“mg/10mL/kg”的记载，例如“50mg/10mL/kg”意指：相对于小鼠的体重每1kg，使50mg的评价对象化合物分散或溶解于10mL的投予液，以下的记载也同样。
将这些投予液分别使用口服投予导管(Sonde)对非绝食条件下的小鼠(Balb/cA，雄)口服投予。
在投予0.5、1、2、4、6小时后，在异氟醚麻醉下，使用专用的针(Animal Lancet)和肝素涂层血细胞比容管，从面部静脉采血。
采集的血液通过快速离心分离(13000rpm，2分钟，4℃)制备血浆，进行除蛋白处理后，用LC/MS/MS测定本化合物的血浆中浓度。
药物血中浓度-时间曲线下面积(AUC)的值使用分析软件Phoenix(注册商标)WinNonlin(注册商标)计算。
关于投予后0～6小时的AUC(AUC0-6hr)，将比较例1、2和实施例1的三乙胺体以及实施例2的结果示于表2，将比较例3和实施例5的结果示于表3。在表2和表3中，“比较例1”、“比较例2”和“比较例3”分别表示“比较例1的化合物”(Br体)、“比较例2的化合物”(I体)和“比较例3的化合物”(Cl体)。
[表2]
[表3]
由此可知，实施例1的磷酸酯是作为活性化合物的比较例1(Br体)的前药。还可知，实施例2的磷酸酯是作为活性化合物的比较例2(I体)的前药。而且，实施例1～2的磷酸酯与口服投予比较例1～2所示的对应的活性化合物本身相比，有AUC增加的倾向。还可知，实施例5的化合物是作为活性化合物的比较例3(Cl体)的前药。
[试验例2]小鼠中的前药的确认和吸收性的评价2
以实施例1的化合物的2钠盐、实施例2的化合物的2钠盐、实施例3的化合物的2钠盐、实施例4的化合物的2钠盐、实施例5的化合物的2钠盐的各投予量分别成为26mg/5mL/kg、12mg/5mL/kg、12mg/5mL/kg、12mg/5mL/kg和11mg/5mL/kg的方式，溶解于生理盐水制备投予液。其中，关于实施例1～4的化合物的2钠盐，在制备投予液时，通过添加2摩尔当量的氢氧化钠来制备。
将非绝食条件下的小鼠(Balb/cA，雄)固定于专用固定台，用消毒用乙醇消毒后，使用注射器和注射针，从尾静脉部位投予。
在投予0.25、0.5、1、2、4、6小时后，使用专用的针(Animal Lancet)和肝素涂层血细胞比容管，从面部静脉采血。
采集的血液通过快速离心分离(13000rpm，2分钟，4℃)制备血浆，进行除蛋白处理后，用LC/MS/MS测定本化合物的血浆中浓度。
AUC的值使用分析软件Phoenix(注册商标)WinNonlin(注册商标)计算。
将实施例1～4的化合物的钠盐的投予后0～6小时的AUC(AUC0-6hr)的结果示于表4，将实施例5的化合物的钠盐的投予后0～6小时的AUC(AUC0-6hr)的结果示于表5。在表4和表5中，“比较例1”、“比较例2”和“比较例3”分别表示“比较例1的化合物”(Br体)、“比较例2的化合物”(I体)和“比较例3的化合物”(Cl体)。
[表4]
[表5]
由此可知，实施例1的磷酸酯是作为活性化合物的比较例1(Br体)的前药。还可知，实施例2～4是作为活性化合物的比较例2(I体)的前药。而且可知实施例5是作为活性化合物的比较例(Cl体)的前药。
[试验例3]人肿瘤细胞株的增殖抑制活性的评价1
使各种人肿瘤细胞株悬浮于培养基中，接种于多孔板的各孔进行培养。培养开始第二天，添加梯度稀释的化合物溶液，再培养3天。细胞数的测量使用CellTiter-Glo(Promega公司制)，基于Promega公司推荐的操作步骤进行。通过以下的式子计算细胞存活率，求出抑制50％的化合物的浓度(IC50(μM))。
细胞存活率(％)＝(T/C)×100
T：添加了化合物的孔的发光强度；
C：没有添加化合物的孔的发光强度。
将使用比较例1的化合物(Br体)时的结果示于表6，将使用比较例2的化合物(I体)时的结果示于表7。在表6和表7中，“比较例1”和“比较例2”分别表示“比较例1的化合物”(Br体)和“比较例2的化合物”(I体)。
[表6]
[表7]
由此，可知比较例1和比较例2中记载的化合物对多种肿瘤广泛具有抗肿瘤作用。
[试验例4]人肿瘤细胞株的增殖抑制活性的评价2
使各种人肿瘤细胞株悬浮于培养基中，接种于多孔板的各孔进行培养。培养开始第二天，添加梯度稀释的化合物溶液，再培养3天。细胞数的测量使用CellTiter-Glo(Promega公司制)，基于Promega公司推荐的操作步骤进行。通过以下的式子计算细胞存活率，求出抑制50％的化合物的浓度(IC50(μM))。
细胞存活率(％)＝(T/C)×100
T：添加了化合物的孔的发光强度；
C：没有添加化合物的孔的发光强度。
将使用比较例1和比较例2的化合物时的结果示于表8，将使用比较例3的化合物时的结果示于表9。在表8中，“比较例1”和“比较例2”分别表示“比较例1的化合物”(Br体)和“比较例2的化合物”(I体)。并且，在表9中，“比较例3”表示“比较例3的化合物”(Cl体)。
[表8]
[表9]
由此可知，比较例1、比较例2和比较例3中记载的化合物对多种肿瘤广泛具有抗肿瘤作用。
[试验例5]人肿瘤细胞株的增殖抑制活性的评价3
将各种人肿瘤细胞株悬浮于培养基中，接种于多孔板的各孔进行培养。在培养开始第二天添加梯度稀释的化合物溶液，再培养3天。细胞数的测量使用CellTiter-Glo(Promega公司制)，基于Promega公司推荐的操作步骤进行。通过以下的式子计算细胞存活率，求出抑制50％的化合物的浓度(IC50(nM))。
细胞存活率(％)＝(T/C)×100
T：添加了化合物的孔的发光强度；
C：没有添加化合物的孔的发光强度。
将结果示于表10。在表10中，“比较例2”和“比较例4”分别表示“比较例2的化合物”(I体)和“比较例4的化合物”(二氟体)。
[表10]
由此可知，比较例2的化合物与比较例4的化合物相比，IC50低10倍以上，具有优异的抗肿瘤作用。
[试验例6]小鼠的抗肿瘤效果和毒性的评价1
将人脑肿瘤细胞株(U-87MG)移植到BALB/cAJcl-nu/nu小鼠的右侧胸部的皮下。在肿瘤移植后测定肿瘤的长径(mm)和短径(mm)，计算肿瘤体积(tumor volume：TV)后，以各组的平均TV均等的方式将小鼠分成各组，将实施分组的天记作Day0。
从Day1起，将比较例2的化合物(I体)以12mg/kg/day每天经口投予，将实施例2的化合物以14.4mg/kg/day每天经口投予。之后持续投予直到可允许的程度的体重减少为止，进行评价。对以下的文献也进行参考，持续投予和评价观察直到体重减少达到20％以上的时刻。LABIO 21，No.30，OCT.2007，P27
作为抗肿瘤效果和毒性的指标，评价各组的肿瘤体积(tumor volume)(TV)和体重(body weight)(BW)，通过下式，求出基于相对于Day0的相对肿瘤体积(relative tumor volume：RTV)的肿瘤增殖的抑制率(Inhibition Rate：IR)和体重变化(body weight change：BWC)，比较对照组(无处置)、实施例2的化合物投予组、比较例2的化合物投予组的IR和BWC。
TV(mm3)＝(长径×短径2)/2
RTV＝(评价日的TV)/(Day0的TV)
IR(％)＝(1－(评价日的投予组的RTV)/(评价日的对照组的RTV))×100
BWC(％)＝(评价日的BW－Day0的BW)/(Day0的BW)×100
将投予了比较例2和实施例2的化合物的组的评价最终日(使用比较例2的化合物的情况下为Day6，使用实施例2的化合物的情况下为Day13)的IR示于图1，将BWC的随时间的变化示于图2。
以上的评价的结果，实施例2的化合物投予组，与比较例2的化合物投予组相比，投予持续性增加，对体重的影响也平稳，并且观察到了较高的抗肿瘤效果。
由此可知，实施例2的化合物具有高的抗肿瘤效果，并且在安全性方面也优异。
[试验例7]小鼠的抗肿瘤效果和毒性的评价2
将人造血器官肿瘤细胞株(MV-4-11)移植到BALB/cAJcl-nu/nu小鼠的右侧胸部的皮下。在肿瘤移植后测定肿瘤的长径(mm)和短径(mm)，计算肿瘤体积(tumor volume：TV)后，以各组的平均TV均等的方式将小鼠分成各组，将实施分组的天作为Day0。
从Day1起，将比较例2的化合物(I体)以12mg/kg/day每天经口投予，将实施例2的化合物以20mg/kg/day通过14天用渗透泵(注射剂样器件)持续地进行投予。之后持续投予直到可允许的程度的体重减少为止，进行评价。对以下的文献也进行参考，持续投予和评价观察直到体重减少达到20％以上的时刻。LABIO 21，No.30，OCT.2007，P27
作为抗肿瘤效果和毒性的指标，评价各组的肿瘤体积tumor volume(TV)和体重body weight(BW)，通过下式求出相对于Day0的相对肿瘤体积(relative tumor volume：RTV)和体重变化(body weight change：BWC)并绘图，比较对照组(无处置)、实施例2投予组、比较例2投予组的RTV和BWC的随时间的变化。
TV(mm3)＝(长径×短径2)/2
RTV＝(评价日的TV)/(Day0的TV)
BWC(％)＝(评价日的BW－Day0的BW)/(Day0的BW)×100
图3和图4表示投予比较例2的化合物时的RTV和BWC的随时间的变化，图5和图6表示投予实施例2的化合物时的随时间的变化。
作为进一步的毒性的指标，在评价最终日(在使用比较例2的化合物的情况下为Day11，在使用实施例2的化合物的情况下为Day15)进行各组的血细胞成分的分析(淋巴细胞：LYMPH(Lymphocyte)、单核细胞：MONO(Monocyte))，通过下式求出实施例2投予组、比较例2投予组的相对于对照组的变动(T/C，％)。将其结果示于图7。
T/C(％)＝(投予组的血细胞成分的数量/对照组的血细胞成分的数量)×100
以上的评价的结果，实施例2的化合物投予组与比较例2的化合物投予组相比，投予持续性增加，对体重的影响和血液毒性也轻微，并且观察到了确认肿瘤消退的显著的抗肿瘤效果。
由此可知，实施例2的化合物具有高的抗肿瘤效果，并且在安全性方面也优异。
[试验例8]放射线联合使用效果的评价
将人脑肿瘤细胞株(U-87MG)悬浮于培养基中，接种于多孔板的各孔进行培养。关于同日操作，在培养开始第三天进行放射线照射和化合物添加。关于化合物的先添加，在培养开始第二天添加梯度稀释的化合物溶液，在培养开始第三天照射放射线。关于放射线的先照射，在培养开始第二天照射放射线，在培养开始第三天添加梯度稀释的化合物溶液。接种日的5天后使用25％戊二醛水溶液，固定细胞，使用染色液(20％甲醇中的0.05w/v％结晶紫)进行染色。添加提取液(0.1N NaH2PO4﹕100％乙醇＝1﹕1)混合后，测定540nm的吸光度，由此测量细胞数。通过以下的式子计算细胞存活率。统计处理使用Student t检验进行。
细胞存活率(％)＝(T/C)×100
T：进行了放射线照射或添加了化合物的孔的吸光度；
C：没有进行放射线照射且没有添加化合物的孔的吸光度。
将结果示于图8。
以上的评价的结果，在任何一种联合使用顺序(同日、化合物优先、放射线优先)中，与比较例2的化合物和放射线各自单独的处理相比，都观察到了通过联合使用，细胞存活率的显著降低。
由此可知，比较例2的化合物显示与放射线的抗肿瘤性的联合使用效果。
[试验例9]替莫唑胺(TMZ)联合使用效果的评价
将人脑肿瘤细胞株(U-87MG)悬浮于培养基中，接种于多孔板的各孔进行培养。关于同日操作，在培养开始第三天进行两剂的化合物添加。关于化合物的先添加，在培养开始第二天添加梯度稀释的化合物溶液，在培养开始第三天添加梯度稀释的TMZ溶液。关于TMZ的先添加，在培养开始第二天添加梯度稀释的TMZ溶液，在培养开始第三天添加梯度稀释的化合物溶液。在接种日的5天后使用25％戊二醛水溶液，固定细胞，使用染色液(在20％甲醇中的0.05w/v％结晶紫)进行染色。添加提取液(0.1N NaH2PO4﹕100％乙醇＝1﹕1)混合后，测定540nm的吸光度，由此测量细胞数。通过以下的式子计算细胞存活率。统计处理使用Student t检验进行。
细胞存活率(％)＝(T/C)×100
T：添加了TMZ或化合物的孔的吸光度；
C：没有添加TMZ和化合物的孔的吸光度。
将结果示于图9。
以上的评价的结果，在任何一种联合使用顺序(同日、化合物优先、TMZ优先)中，与比较例2的化合物和TMZ各自单独的处理相比，通过联合使用，都观察到了细胞存活率的显著降低。
由此可知，比较例2的化合物显示与TMZ的抗肿瘤性的联合使用效果。
如上所述，本发明的化合物作为具有优异的安全性并且显示高的抗肿瘤效果的抗肿瘤剂有用。并且，本发明的化合物在与烷基化剂和/或放射线疗法联合使用的情况下，显示优异的联合使用效果。
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