SN38类甘油三酯前药、脂质制剂及其制备方法和应用与流程

sn38类甘油三酯前药、脂质制剂及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及淋巴介导转运的不同脂肪酸链长的sn38类甘油三酯前药及其制备和应用。


背景技术：

2.现如今，全球癌症负担逐年增加，伊立替康(cpt-11)作为一线抗癌化疗药物广泛应用于多种肿瘤的临床治疗。其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(sn38)，是喜树碱经化学结构改进而制得的衍生物，具有更强的抗癌作用及抗癌活性，引起越来越多的科学关注。伊立替康临床采用为静注给药，然而市售静注溶液剂会造成严重腹泻，其副作用极大限制了临床应用。口服化疗具有患者顺应性高，方便给药，治疗成本低等优点，但是sn38的溶解度低，在生理ph(ph 7.4)下不稳定，p-糖蛋白外排以及严重的首过效应使其口服生物利用度极低，目前还没有上市的sn38口服制剂。因此，开发低首过效应，高口服生物利用度的sn38口服制剂仍然是研究的热点。
3.口服药物淋巴转运可以避免首过效应，是提高口服吸收的一个有效方式。一种提高淋巴转运的策略是设计药物的类甘油三酯前药。长链甘油三酯1位和3位的脂肪酸被胰脂肪酶特异性水解，2位脂肪酸几乎不发生水解，将2位脂肪酸置换成药物，使前药模拟甘油三酯在肠道中的消化过程，以2-甘油单酯前药的形式进入肠上皮细胞进行再酯化，参与脂蛋白的组装，进而促进淋巴转运。已有很多研究者做了类甘油三酯前药的实例(pharmazie,2005,60(2),110-114；journal of medicinal chemistry,1979,22(6),683-687；j.androl.2003,24,716-720；arch.pharm.1995,328,271-276)，然而这些实例所教导的结构在提高药物口服上几乎无效，一个重要的原因是可断裂连接链的缺失，导致母药不释放。在专利cn106715456a中，发明人引入了自消除连接链，促进母药睾酮的系统释放。然而，对于化疗药物sn38，大量的系统暴露会带来严重的副反应，因此，该连接链对sn38口服递药系统的设计是无指导意义的。在专利cn 201910103306.2中，申请人设计了还原敏感的多西他赛的甘油三酯前药，通过模拟天然甘油三酯淋巴转运口服吸收的特点，改善了多西他赛的口服吸收。
4.此外，甘油三酯基团的取代，增大了药物了空间位阻，避免母药直接暴露于胃肠道中，能够有效防止药物水解失活，提高了药物的稳定性。sn38具有c10，c20两个活性位点，由于较高的反应活性及较小的空间位阻，取代基团优先取代c10位的羟基，因此选择直接将甘油三酯基团连接于c10位点，合成工艺简单，避免保护、脱保护等一系列操作。


技术实现要素：

5.本发明基于甘油三酯在体内的消化过程，设计了三种不同链长的脂肪酸基团取代的类甘油三脂前药：(a)sn38-s-s-oca，(b)sn38-s-s-la，(c)sn38-s-s-pa，旨在提高sn38的稳定性，改善sn38的口服吸收效率，并考察甘油三酯结构上1，3位脂肪酸基团的链长对于前药淋巴转运效率以及口服吸收影响。此外，引入还原敏感连接键，在促进抗肿瘤药物口服吸
收的同时，使其能够在靶部位特异性释放，提高疗效，降低毒性。在此基础上，将该前药制备成sn38类甘油三酯前药的脂质制剂，制备工艺简单，重复性强，便于产业化，性质均一稳定，该前药脂质制剂能够进一步促进难溶性药物的淋巴转运，提高其口服利用度。
6.具体的，本发明的第一个目的是提供一种如通式i所示的sn38类甘油三酯前药或其几何异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物：
[0007][0008]
其中：
[0009]
r＝(ch2)6ch3时，sn38类甘油三酯前药记为sn38-s-s-oca；
[0010]
r＝(ch2)
10
ch3时，sn38类甘油三酯前药记为sn38-s-s-la；
[0011]
r＝(ch2)
14
ch3时，sn38类甘油三酯前药记为sn38-s-s-pa。
[0012]
本发明的第二个目的是提供上述化合物的制备方法。具体制备方法如下：
[0013]
(1)1,3-甘油二酯(1,3-dg)的合成：一定量的脂肪酸溶于有机溶剂中，在edci(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和dmap(4-二甲氨基吡啶)催化作用下与一定量的1,3-二羟基丙酮发生成酯反应，再经硼氢化钠氢化反应得1,3-dg；
[0014]
(2)将二硫代二丁酸溶于乙酸酐中，室温下搅拌成二硫代二丁酸酐，与1,3-dg在edci及dmap存在的条件下反应得到中间产物，该中间产物与sn38在dmap及edci的催化条件下酯化反应得到sn38类甘油三酯前药。
[0015]
所述步骤(1)中，所述的脂肪酸选自：正辛酸(oca)，月桂酸(la)及棕榈酸(pa)。
[0016]
所述步骤中，所述有机溶剂选自：二氯甲烷，三氯甲烷，丙酮，甲醇，甲苯。
[0017][0018]
本发明的第三个目的是提供一种简单安全的含sn38类甘油三酯前药的药物组合物，所述的药物组合物为sn38类甘油三酯前药的脂质制剂，包含sn38类甘油三酯前药或其几何异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物，以及辅料，所述辅料包括磷脂类乳化剂、短链醇或醚类助乳化剂、液态油类油相，按重量百分比计，液态油类油相占脂质制剂的35％-85％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的10％-40％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-25％；sn38类甘油三酯前药或其几何异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物占辅料总重量的1％-10％。
[0019]
优选地，本发明所述的药物组合物按重量百分比计，液态油类油相占脂质制剂的60％-75％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的18％-30％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-10％，sn38类甘油三酯前药或其几何异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物占辅料总重量的3％-4％。
[0020]
更进一步地，短链醇或醚类助乳化剂、磷脂类乳化剂、液态油类油相的重量比为1:(2-4):(5-20)。
[0021]
其中，所述的磷脂选自蛋黄卵磷脂，大豆卵磷脂，合成磷脂类如1,2-二辛酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，1,2-二癸酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，优选为蛋黄卵磷脂；
[0022]
所述液态油选自长链甘油三酯、混合长链甘油酯、中链甘油三酯或其组合，包括：橄榄油、杏仁油、介花油、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、鱼油、棕榈仁油、棕榈油、花生油、菜籽油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、大豆油、向日葵油、氢化椰子油、氢化棉籽油、氢化棕榈油、氢化大豆油、部分氢化大豆油、氢化植物油、三辛酸甘油酯中、maisine、peceol的一种或几种，优选橄榄油。
[0023]
所述短链醇或醚类助乳化剂为二乙二醇单乙基醚(transcutol hp)、乙醇或丙二醇，优选transcutol hp。
[0024]
本发明所述的sn38类甘油三酯前药的脂质制剂通过如下方法制备：
[0025]
将sn38类甘油三酯前药、短链醇或醚类助乳化剂、磷脂类乳化剂、液态油类油相按比例混合，超声使辅料和前药混合均一，即得到前药的脂质制剂。
[0026]
或将磷脂类乳化剂和短链醇或醚类助乳化剂溶于液态油中，超声使其混合均匀，得到均一空白制剂。取sn38类甘油三酯前药，加入上述空白制剂，超声使前药完全溶于其中，即得到均一的脂质口服制剂。
[0027]
当所述的磷脂类乳化剂为蛋黄卵磷脂、短链醇或醚类助乳化剂为二乙二醇单乙基醚、液态油类油相为橄榄油时，且液态油类油相占脂质制剂的60％-75％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的18％-30％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-10％时，所得到的sn38类甘油三酯前药的脂质制剂具有最佳的粒径和粒径分布，具有最好的稳定性，且能明显提高sn38的口服生物利用度。
[0028]
本发明以sn38为模型药物，设计合成不同链长的脂肪酸基团取代的类甘油三脂前药，并将该前药制备成sn38-类甘油三酯前药的脂质制剂，制备工艺简单，重复性强，便于产业化，性质均一稳定，该前药脂质制剂能够进一步促进难溶性药物的淋巴转运，提高其口服利用度。进一步的，利用大鼠药动学实验对其口服吸收进行比较，寻求最优的抗肿瘤甘油三酯前药结构，为解决sn38口服生物利用度低，疗效差，系统毒性大等问题提供了一种解决方案。
[0029]
所述的sn38类甘油三酯前药或其几何异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或所述的sn38类甘油三酯前药脂质制剂在制备口服药物传递系统中的应用。
[0030]
所述的sn38类甘油三酯前药或其几何异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或所述的sn38类甘油三酯前药脂质制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0031]
本发明的优势在于：
[0032]
1、本发明设计了sn38-类甘油三酯前药，使其脂溶性增加，稳定性增强，促进了sn38的淋巴转运，降低了首过效应，进而提高了其口服吸收。
[0033]
2、本发明以还原敏感的二硫键连接桥连接脂肪酸和难溶性药物，在促进药物口服吸收的同时，使药物能够在靶部位特异性释放，增效减毒。
[0034]
3、本发明所制备的脂质口服制剂，制备工艺简单，重复性强，便于产业化，性质均一稳定，能够进一步促进难溶性药物的淋巴转运，提高其口服利用度。
附图说明
[0035]
图1为本发明实例1合成的辛酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-oca)的高分辨质谱图。
[0036]
图2为本发明实例2合成的月桂酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-la)的高分辨质谱图。
[0037]
图3为本发明实例3合成的棕榈酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-pa)的高分辨质谱图。
[0038]
图4为本发明实例1合成的辛酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-oca)的1h-nmr谱。
[0039]
图5为本发明实例2合成的月桂酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-la)
的1h-nmr谱。
[0040]
图6为本发明实例2合成的棕榈酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-pa)的1h-nmr谱。
[0041]
图7为sn38类甘油三酯前药的自微乳筛选伪三元相图。
[0042]
图8为sn38类甘油三酯前药的胃肠道稳定性图。
[0043]
图9为sn38类甘油三酯前药、sn38脂质制剂及sn38溶液剂的血药浓度-时间曲线图。
具体实施方式
[0044]
本发明通过以下实施例对本发明作进一步阐述，但并不受限于此。
[0045]
以下实施例1-3中制备的sn38类甘油三酯前药的高分辨质谱图及1h-nmr谱见附图1-6。
[0046]
实施例1
[0047]
辛酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-oca)的制备方法，包括以下步骤：
[0048]
该前药的结构如下：
[0049][0050]
(1)1,3-甘油二酯(1,3-dg)的合成：将2.5g(17.34mmol)辛酸溶于50ml二氯甲烷中，在5.2g(27.13mmol)edci和1.1g(9mmol)dmap催化作用下与0.65g(7.22mmol)1,3-二羟基丙酮发生成酯反应，再与0.2g(5.28mmol)硼氢化钠发生氢化反应得1,3-dg。
[0051]
(2)将0.7g(2.03mmol)4,4
’‑
二硫代二丁酸溶于4ml乙酸酐中，于室温下反应2h，旋蒸溶剂浓缩并复溶于30ml无水二氯甲烷中，并加入0.68g(1.98mmol)1,3-dg，22.2mg(0.2mmol)dmap。抽真空氮气保护于室温反应12h。旋蒸除溶剂，柱层析分离得到中间产物。将172.5mg(0.33mmol)中间产物溶解于20ml无水二氯甲烷中，加入105mg(0.55mmol)edci，7mg(0.06mmol)dmap，100mg(0.26mmol)sn38，抽真空氮气保护于室温反应48h。旋蒸除溶剂，制备液相分离得到终产物sn38-ss-oca。
[0052]1h-nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.25(d,j＝9.1hz,1h),7.85(d,j＝2.5hz,1h),7.56(dd,j＝9.2,2.5hz,1h),5.76(d,j＝16.3hz,1h),5.36
–
5.21(m,2h),5.27(s,2h),4.32(dd,j＝11.9,4.3hz,2h),4.15(dd,j＝11.9,5.8hz,2h),3.74(s,1h),3.16(s,1h),2.84(dt,j＝9.1,7.1hz,4h),2.76(t,j＝7.1hz,2h),2.49(t,j＝7.2hz,2h),2.32(t,j＝7.5hz,4h),2.22(t,j＝7.1hz,2h),2.10
–
2.02(m,2h),1.90(ddt,j＝18.0,14.2,7.1hz,2h),1.66
–
1.53(m,6h),1.41(t,j＝7.7hz,3h),1.27(td,j＝10.2,8.1,5.1hz,16h),1.04(t,j＝7.4hz,3h),0.93
–
0.81(m,6h).
[0053]
esi-hrms:calcd.for c49h67n2o12s2[m h

]939.414871found 939.412994。
[0054]
具体合成路线如下所示：
[0055][0056]
实施例2
[0057]
月桂酸基团取代的sn38-类甘油三酯前药(sn38-ss-la)的制备方法，包括以下步骤：
[0058]
该前药的结构如下：
[0059][0060]
(1)1,3-甘油二酯(1,3-dg)的合成：将2.5g(12.48mmol)月桂酸溶于50ml二氯甲烷中，在3.7g(19.30mmol)edci和0.7g(5.73mmol)dmap催化作用下与0.46g(5.11mmol)1,3-二羟基丙酮发生成酯反应，再与0.2g(5.28mmol)硼氢化钠发生氢化反应得1,3-dg。
[0061]
(2)将0.7g(2.03mmol)4,4
’‑
二硫代二丁酸溶于4ml乙酸酐中，于室温下反应2h，旋蒸溶剂浓缩并复溶于30ml无水二氯甲烷中，并加入0.89g(1.83mmol)1,3-dg，28.9mg(0.29mmol)dmap。抽真空氮气保护于室温反应12h。旋蒸除溶剂，柱层析分离得到中间产物。将206.2mg(0.31mmol)中间产物溶解于20ml无水二氯甲烷中，加入105mg(0.55mmol)edci，7mg(0.06mmol)dmap，100mg(0.26mmol)sn38，抽真空氮气保护于室温反应48h。旋蒸除溶剂，制备液相分离得到终产物sn38-ss-la。
[0062]1h-nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.25(d,j＝9.1hz,1h),7.85(d,j＝2.5hz,1h),7.65(s,1h),7.57(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),5.76(d,j＝16.3hz,1h),5.31(d,j＝16.4hz,1h),5.26(d,j＝5.0hz,3h),4.32
–
4.27(m,2h),4.16(dd,j＝5.8,2.9hz,2h),3.25
–
3.14(m,2h),2.88
–
2.81(m,4h),2.76(t,j＝7.0hz,2h),2.47(d,j＝7.2hz,2h),2.35
–
2.30(m,4h),2.22(t,j＝7.1hz,2h),2.10
–
2.00(m,2h),1.90(dd,j＝11.1,7.3hz,2h),1.67
–
1.57(m,6h),1.38-1.42(s,3h),1.26-1.25(m,j＝2.8hz,24h),1.06
–
1.02(m,3h),0.88(d,j＝2.6hz,6h).
[0063]
esi-hrms:calcd.for c57h81n2o12s2[m h

]1049.522414found 1049.523642。
[0064]
具体合成路线如下所示：
[0065][0066][0067]
实施例3
[0068]
棕榈酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-pa)的制备方法，包括以下步骤：
[0069]
该前药的结构如下：
[0070][0071]
(1)1,3-甘油二酯(1,3-dg)的合成：将2.5g(9.76mmol)棕榈酸溶于50ml二氯甲烷中，在2.4g(12.06mmol)edci和0.5g(4.10mmol)dmap催化作用下与0.3g(3.33mmol)1,3-二羟基丙酮发生成酯反应，再与0.2g(5.28mmol)硼氢化钠发生氢化反应得1,3-dg。
[0072]
(2)将0.7g(2.03mmol)4,4
’‑
二硫代二丁酸溶于4ml乙酸酐中，于室温下反应2h，旋蒸溶剂浓缩并复溶于30ml无水二氯甲烷中，并加入1.09g(1.83mmol)1,3-dg，35.6mg(0.29mmol)dmap。抽真空氮气保护于室温反应12h。旋蒸除溶剂，柱层析分离得到中间产物。将240.43mg(0.31mmol)中间产物溶解于20ml无水二氯甲烷中，加入105mg(0.55mmol)edci，7mg(0.06mmol)dmap，100mg(0.26mmol)sn38，抽真空氮气保护于室温反应48h。旋蒸除溶剂，制备液相分离得到终产物sn38-ss-pa。
[0073]1h-nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.22(d,j＝6.4hz,1h),8.07(d,j＝9.0hz,1h),7.55
–
7.48(m,1h),7.46(s,1h),5.40(d,j＝17.0hz,1h),5.31
–
5.21(m,1h),4.31
–
4.28(m,2h),4.16
–
4.14(m,2h),3.34(s,2h),2.75(s,8h),2.71(d,j＝7.2hz,6h),2.50
–
2.39(m,6h),2.31(td,j＝7.6,3.0hz,2h),2.04(d,j＝7.3hz,2h),1.99(d,j＝7.4hz,2h),1.61(t,j＝7.2hz,6h),1.27(d,j＝11.0hz,40h)1.12(t,j＝7.2hz,3h),0.98(s,3h),0.88(t,j＝6.7hz,6h).
[0074]
esi-hrms:calcd.for c65h99n2o12s2[m h

]1163.661764found 1163.663395。
[0075]
具体合成路线如下所示：
[0076][0077]
实施例4
[0078]
sn38类甘油三酯前药脂质制剂的处方筛选
[0079]
类甘油三酯前药的口服吸收高度依赖于脂质消化。因此，sn38类甘油三酯前药的最佳载体是基于脂质的药物递送系统(lbdds)。在lbdds的多种类型中，自微乳药物递送系统(smedds)独具优势，包括高载药量和易于放大生产规模。本发明以棕榈酸基团取代的sn38类甘油三酯前药(sn38-ss-pa)为例，对sn38类甘油三酯前药脂质制剂进行处方筛选。
[0080]
4.1油相的选择
[0081]
类甘油三酯前药的主要机制是模仿长链甘油三酸酯的口服吸收过程，该过程通过消化，吸收进入肠细胞，并再酯化组装成乳糜微粒，转运到淋巴系统然后循环。与长链甘油三酯共同给药，可以增强甘油单酯(通过肠液消化甘油三酯后获得的产物)在肠中的溶解度，从而改善口服吸收效率。因此，本发明选择长链甘油三酯作为油相，进行进一步的实验。为了保证脂质制剂的载药量，对sn38-ss-pa在几种长链甘油三酯基础的植物油中的溶解度测定，结果如表1。
[0082]
表1.sn38-ss-pa在几种植物油中的溶解度
[0083][0084]
根据溶解度结果，sn38-ss-pa脂质制剂的油相优选橄榄油。
[0085]
4.2助乳化剂的选择
[0086]
测定了sn38-ss-pa在几种不同助乳化剂中的溶解度，结果如表2。
[0087]
表2.sn38-ss-pa在不同助乳化剂中的溶解度
[0088][0089]
结果表明，当助乳化剂为transcutol hp时，前药的溶解度最高，可以获得最佳的载药量。因此，优选transcutol hp作为sn38-ss-pa脂质制剂的助乳化剂。
[0090]
4.3sn38-ss-pa脂质制剂的处方筛选
[0091]
分别以橄榄油，transcutol hp作为油相和助乳化剂。由于磷脂可以帮助改善类甘油三酯前药的口服吸收，因此初步选择蛋黄卵磷脂作为乳化剂，对sn38-ss-pa脂质制剂进行处方筛选。建立伪三元相图来寻找最适宜的三项比例。如图7所示，在图中多点围成的比例下制备出的制剂，可以通过模拟胃内搅动形成自微乳，得到不同组方的前药脂质制剂，如表3所示。将500mg脂质制剂加到5ml模拟胃液中，搅拌5min模拟胃蠕动，测定粒径和分布，另取上述脂质制剂与模拟胃液混合物1ml与5ml胰液-胆汁混合，孵育2h后，低温离心(10000rpm，10min)，取中间层液体，测定消化后粒径，以及sn38-ss-pa在中间层的占比，结果如表4所示：
[0092]
表3.不同组方的sn38-ss-pa脂质制剂
[0093]
[0094][0095]
表4.不同组方的sn38-ss-pa脂质制剂的性质
[0096][0097]
如表4所示，当橄榄油占比小于55％时(组分1-3)，蛋黄卵磷脂和transcutol hp占比较高，对sn38-ss-pa的溶解度高，因此载药量高，此外，由于乳化剂和助乳化剂的强表面
活性作用，经模拟胃液混合搅拌后，得到了粒子粒径小而均匀，但是当与胰液-胆汁混合模拟消化后，得到的中间层的水相的粒径较大，且sn38-ss-pa前药在中间层的占比小于50％，对于类甘油三酯脂质制剂，最初的体外粒径并不能准确预测出体内的口服吸收，而经模拟消化后的中间水相相当于体内肠液的溶解相，其粒径越小，前药在中间水相中的占比越大，可能会有利于体内吸收。当橄榄油占比超过80％，蛋黄卵磷脂占比低于15％时，尽管体内模拟的结果仍在可接受范围，但是最初的模拟胃液乳化粒径大于300nm，这可能会延迟后续的肠道消化过程，进而影响口服吸收；
[0098]
当trancutol hp低于5％时，橄榄油与蛋黄卵磷脂不相容，无法形成均一的脂质制剂。
[0099]
当橄榄油在35％-85％，蛋黄卵磷脂在10％-40％，trancutol hp在5％-25％时，可以形成均一稳定的脂质制剂，其粒径均小于400nm。
[0100]
当橄榄油在60％-85％，蛋黄卵磷脂在10％-30％，trancutol hp在5％-10％时，可以形成均一稳定的脂质制剂，其粒径均小于400nm，sn38-ss-pa在中间层占比大，有利于体内吸收。
[0101]
当橄榄油在60％-75％，蛋黄卵磷脂在18％-30％，trancutol hp在5％-10％时，可以形成均一稳定的脂质制剂，其粒径均小于300nm，且最有利于体内吸收。
[0102]
各组方的脂质制剂在15天时，仍能保持均一稳定，且无分层沉淀，具有较好的稳定性。
[0103]
4.4乳化剂的选择
[0104]
以橄榄油为油相，以transcutol hp作为助乳化剂，对磷脂种类进行筛选，选择蛋黄卵磷脂，大豆卵磷脂，1,2-二辛酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，1,2-二癸酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱。将乳化剂和助乳化剂溶于油相中，油相：乳化剂：助乳化剂质量比为65:25:10，超声使其混合均匀，得到均一空白制剂。取200mg的sn38-ss-pa前药加入到1g上述空白制剂中，测定oatg前药在空白制剂中的平衡溶解度。
[0105]
此外，取30mg的sn38-ss-pa前药，加入1g上述空白制剂，超声使前药完全溶于其中，得到均一的脂质口服制剂，取500mg各含药制剂加到5ml模拟胃液中，搅拌5min以模拟胃蠕动，测定粒径和分布，不同磷脂所制备的脂质制剂的各指标均无显著差异，蛋黄卵磷脂相对较好。因此，选择蛋黄卵磷脂作为优选的乳化剂。
[0106]
实施例5
[0107]
sn38类甘油三酯前药的脂质制剂的制备
[0108]
称取300mg蛋黄卵磷脂溶于1g橄榄油中，同时加入100ul的trancutol hp，超声使其混合均匀，得到均一空白制剂。精确称取23.9mg的sn38-s-s-oca、sn38-s-s-la及sn38-s-s-pa，加入1ml的空白制剂，超声使前药完全溶于其中，即得到均一的sn38脂肪酸前药脂质制剂。精密称取10mgsn38母药，加入到上述空白制剂中，即得到3种sn38类甘油三酯前药的脂质制剂。
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实施例6
[0110]
sn38类甘油三酯前药的稳定性
[0111]
将实施例5制备的sn38类甘油三酯前药的脂质制剂在人工胃液中进行预分散，将得到的3种制剂的粗乳分别于模拟胃液及胆汁-胰液模拟肠液于37℃下孵育，并且在预定的
时间点取样，考察前药在不同介质中的化学稳定性。前药在胃肠道中的稳定性结果如图8所示。由图8-a可知，3种sn38类甘油三酯前药在模拟胃液中一小时内均无降解，表现出了良好的化学稳定性，上述结果表明前药脂质制剂能够对抗胃肠道环境，不会发生制剂泄露，同时不会发生降解，具有良好的胃稳定性。由图8-b和8-c可知，3种sn38类甘油三酯前药在肠液中降解为sn38甘油单酯前药，由于1，3位脂肪酸取代基不同，三种前药的消化速率存在差异，消化速度为sn38-ss-oca》sn38-ss-la》sn38-ss-pa。1，3位的取代基影响了类甘油三酯前药的clogp和药物的疏水性，影响了胰脂肪酶的消化速率，脂肪酸链长越短消化速率越快。sn38-ss-oca生成的甘油单酯前药在30min后出现下降趋势，由于辛酸链长较短会被胰脂肪酶迅速脂解，这可能不利于后续的肠道吸收。前药对应的甘油单酯生成量与甘油三酯的消化速率的结果一致。
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实施例7
[0113]
sn38类甘油三酯前药的药动学
[0114]
以sd大鼠为模型，口服sn38类甘油三酯前药脂质制剂、sn38脂质制剂及sn38溶液剂，测定血浆母药的浓度，根据测定的浓度分别进行了药-时曲线的绘制及相应药动学参数的计算(表5)。为了计算绝对生物利用度，静脉给予sn38溶液剂，测定血浆中sn38的含量。母药的药时曲线如图9-a所示，相对于sn38溶液剂，sn38-类甘油三酯前药脂质制剂的药-时曲线下面积(auc0-24)明显高于sn38溶液剂。由静脉sn38(图9-b)的数据计算前药的口服生物利用度，sn38-ss-oca，sn38-ss-la，sn38-ss-pa相比sn38(5.1％)的口服生物利用度均显著提高(提高4.03-5.27倍)，表明sn38类甘油三酯前药显著提高sn38的口服吸收。
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此外，sn38类甘油三酯前药组中的绝对生物利用度比较结果为：sn38-ss-pa＞sn38-ss-la＞sn38-ss-oca。表明长链脂肪酸取代的类甘油三酯前药口服生物利用度更高。
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表5.sn38类甘油三酯前药主要药动学参数
[0117][0118][0119]
由于类甘油三酯前药吸收机制的特殊性，在血样中无法检测到原型甘油三酯前药，因此采用断裂的方式测定总sn38的量，sn38总量的药-时曲线如图9-c所示，相应药动学参数如表6。结果表明，断裂后的总sn38明显多于游离sn38，说明一部分药物以前药形式存
在，减少了母药在血浆中的浓度，提高了给药的安全性。
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表6.断裂后sn38总量的主要药动学参数
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