一种N-羟基甲脒衍生物、制备方法及用途与流程

一种n-羟基甲脒衍生物、制备方法及用途
技术领域
1.本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种n-羟基甲脒衍生物、制备方法及用途。


背景技术：

2.乳腺癌是目前女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率逐年上升，并呈现低龄化态势。目前治疗乳腺癌仍是手术治疗联合术后辅以化疗、放疗、内分泌治疗或者靶向治疗等，但转移和复发常常导致治疗失败。细胞色素p450(cyp)酶是血液蛋白的一个重要家族，参与内外分子的代谢。cyp的重要性体现在它们负责人类药物代谢中的大多数i相代谢，它们的底物包括广泛的活性药物成分(apis)、环境毒素、致癌物和食品衍生化学品。另一方面，许多人类cyp参与大量内源性化合物的生物合成、代谢和降解，如类固醇、甾体、脂肪酸等。cyp4z1是一种新的cyp4家族成员，2004年被发现在人乳腺癌中过表达，与高级别肿瘤和预后不良有关。另有研究也表明，cyp4z1转录水平与肿瘤分级升高和肿瘤侵袭性增加相关。cyp4z1在体内和体外都能促进血管生成和肿瘤生长，cyp4z1的催化底物花生四烯酸的关键代谢物，即20-羟基二十碳三烯酸(20-hete)和14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-eet)，被认为通过影响血管生成、肿瘤生长和转移在人类癌症进展中发挥作用。cyp4z1的内源性乳腺特异性表达为乳腺癌治疗提供了一条新的途径，cyp抑制剂已经成功开发用于抗癌治疗。


技术实现要素：

3.发明目的：本发明提供一种如式(i)所示的n-羟基甲脒衍生物，该衍生物为cyp4z1抑制剂。本发明还提供了如式(i)所示的n-羟基甲脒衍生物的制备方法及用途。
4.技术方案：本发明所述的如式(i)所示的n-羟基甲脒衍生物：
[0005][0006]
r1选自：氢、卤素、c
1-c8烷基、c
1-c8烷氧基、c
1-c8卤代烷基、氨基或者c
1-c8烷基取代氨基；n为1-8；r2选自：酯基、c
1-c8烷基、氧原子、硫原子或者酰胺基；r3选自：氢、羧基、c
1-c8烷氧基羰基、c
1-c8烷基、酰胺基或者甲酸苯基。
[0007]
作为本发明的一种优选实施方式：所述r1选自：氢、卤素、c
1-c4烷基；所述n为1-4；所述r2选自：c
1-c4烷基、酯基、氧原子或者酰胺基；所述r3选自：氢、羧基、甲氧羰基、乙氧羰基、c
1-c5烷基。
[0008]
作为本发明的一种优选实施方式：所述r1选自：氢、氯、甲基；所述n为1，2，3；
[0009]
所述r2选自：亚甲基、酯基、氧原子或者酰胺基；所述r3选自：氢、羧基、c
1-c5直链烷基。
[0010]
作为本发明的一种具体实施方式，所述化合物选自以下化合物：
[0011]
[0012][0013]
本发明所述的n-羟基甲脒衍生物的制备方法，包括以下步骤：
[0014]
(1)中间体和或者与1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应生成中间体；
[0015]
(2)将步骤(1)得到的中间体与卤代脂肪烃或者是烷基酸进一步反应得到的中间体或者是步骤(1)的中间体与盐酸羟胺反应生成通式(i)的化合物，得到的通式(i)的化合物可进一步脱烷基反应得到r3为羧基的通式化合物。
[0016]
作为本发明的一种优选方式，当r3为羧基时，所述n-羟基甲脒衍生物的制备方法为：
[0017]
(1-1)苯环2位或3位被不同取代基取代的2-(4-碘苯基)烷基酸在二氯亚砜的作用下在烷基醇中生成中间体；所述的烷基酸为c
1-c8烷基酸；所述的烷基醇为c
1-c3烷基醇；
[0018]
(1-2)步骤(1-1)得到的中间体在碘化亚铜和l-脯氨酸的作用下与氨水反应生成
中间体；
[0019]
(1-3)步骤(1-2)中得到的中间体和1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应；
[0020]
(1-4)步骤(1-3)中生成的产物和盐酸羟胺反应生成n-羟基甲脒衍生物，n-羟基甲脒衍生物在氢氧化钠的作用下水解生成r3取代基为羧基的n-羟基甲脒衍生物；
[0021]
当r2为酯基，r3为c
1-c8烷基时，所述n-羟基甲脒衍生物的制备方法为：
[0022]
(2-1)2位或3位被不同取代基取代的4-氨基苯烷基醇或者4-氨基苯烷基胺与1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应生成中间体；
[0023]
(2-2)步骤(2-1)中得到的中间体和烷基酸在缩合剂edci和催化剂dmap的作用下发生缩合反应生成中间体；所述的烷基酸为c
1-c8烷基酸；
[0024]
(2-3)步骤(2-2)中得到的中间体与盐酸羟胺反应生成n-羟基甲脒衍生物；
[0025]
当r2氧原子，r3为c
1-c8烷基时，所述n-羟基甲脒衍生物的制备方法为：
[0026]
(3-1)2位和3位被不同取代基取代的4-氨基苯烷基醇与1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应生成中间体；
[0027]
(3-2)步骤(3-1)得到的中间体与溴代脂肪烃在钠氢的作用下生成中间体；所述溴代脂肪烃为c1-c8溴代脂肪烃；
[0028]
(3-3)步骤(3-2)得到的中间体与盐酸羟胺反应生成n-羟基甲脒衍生物。
[0029]
作为本发明的一种具体实施方式，其中
[0030]
1)n＝0时，r2为c1烷基，r3为羧基、甲氧羰基中的任意一个时的化合物，该方法
[0031]
包括：
[0032][0033]
苯环2位或3位被不同取代基取代的2-(4-碘苯基)乙酸(n0-1)在二氯亚砜的作用下在甲醇中生成中间体n0-2，中间体n0-2在碘化亚铜和l-脯氨酸的作用下与氨水反应生成中间体n0-3，中间体n0-3和1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应生成中间体n0-4，中间体n0-4和盐酸羟胺反应生成满足部分上述叙述条件1)的通式i中的部分n-羟基甲脒衍生物(n0-5)，化合物n0-5在氢氧化钠的作用下水解生成满足上述叙述条件1)的通式i中的部分n-羟基甲脒衍生物(n0-6)。
[0034]
2)n＝1时，r2为c1烷基、c2烷基中的任意一个，r3为羧基、乙氧羰基时的化合物，该方法包括：
[0035]
[0036]
苯环2位或3位被不同取代基取代的2-(4-碘苯基)烷基酸(n1-1)(k＝2-8)在二氯亚砜的作用下在乙醇中生成中间体n1-2，中间体n1-2在碘化亚铜和l-脯氨酸的作用下与氨水反应生成中间体n1-3，中间体n1-3和1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应生成中间体n1-4，中间体n1-4和盐酸羟胺反应生成满足部分上述叙述条件2)的通式i中的部分n-羟基甲脒衍生物(n1-5)，化合物n0-5在氢氧化钠的作用下水解生成满足上述叙述条件2)的通式i中的部分n-羟基甲脒衍生物(n1-6)。
[0037]
3)n＝2时，若r2为酯基，则r3仅为c5烷基时的化合物，该方法包括：
[0038][0039]
2位或3位被不同取代基取代的4-氨基苯乙醇(n2-1)与1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应生成中间体n2-2，中间体n2-2和正己酸在缩合剂edci和催化剂dmap的作用下发生缩合反应生成中间体n2-3，中间体n2-3与盐酸羟胺反应生成满足上述叙述条件3)的通式i中的部分n-羟基甲脒衍生物(n2-4)。
[0040]
4)n＝2时，若r2为酰胺基，则r3仅为c5烷基时的化合物，该方法包括：
[0041][0042]
2位或3位被不同取代基取代的4-氨基苯乙胺(n2-5)与1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应生成中间体n2-6，中间体n2-6和正丁酸在缩合剂edci和催化剂dmap的作用下发生缩合反应生成中间体n2-7，中间体n2-7与盐酸羟胺反应生成满足上述叙述条件4)的通式i中的部分n-羟基甲脒衍生物(n2-8)。
[0043]
5)n＝2时，若r2为氧原子，则r3为c2烷基、c4烷基、c6烷基中的任意一个时的化合物，该方法包括：
[0044][0045]
2位和3位被不同取代基取代的4-氨基苯乙醇(n2-9)与1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺反应生成中间体n2-10，中间体n2-10与不同链长的溴代脂肪烃(m＝1,3,5)在钠氢的作用下生成中间体n2-11，中间体n2-11与盐酸羟胺反应生成满足上述叙述条件5)的通式i中
的部分n-羟基甲脒衍生物(n2-12)。
[0046]
本发明还提供了包含式(i)化合物的药物组合物。本发明所述的药物组合物中含有辅料。本发明所述的药物组合物其以治疗有效量的如式(i)所示的n-羟基甲脒衍生物或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的载体或辅料制得的制剂。
[0047]
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)和局部给药。
[0048]
本发明的化合物结合药学上可接受的载体或辅料制备可用于口服的固体剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、含片、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物可以与一种或多种常规惰性赋形剂结合，其中包含如下成分：粘合剂，例如，羟甲基纤维素、明胶、聚维酮、聚氨酯、阿拉伯胶、聚苯乙烯和淀粉浆；崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或玉米淀粉、藻酸、交联聚合酮、低取代羟丙基纤维素、碳酸钠和枸橼酸；增容剂，例如，蔗糖、淀粉、甘露醇和硅酸；润滑剂，例如，硬脂酸镁、硬脂酸钙、山榆酸甘油酯、固体聚乙二醇和十二烷基硫酸钠。
[0049]
用于口服的液体剂型，包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。在这些液体制剂中，活性化合物可以结合一种或多种常规惰性稀释剂，如水、助溶剂、乳化剂、增溶剂，其中包含如下成分：乙醇、甘油、丙二醇、异丙醇、乙酸乙酯以及植物油(例如，棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物)。除了这些惰性稀释剂，这些液体剂型还可以包含一些助剂，包括防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、渗透压调节剂和着色剂。
[0050]
用于注射或输注的药物剂型可包含生理上可接受的无菌水溶液、乳液、分散剂和无菌粉末。其液体载体包括水、乙醇、多元醇及其合适的混合物。
[0051]
用于局部给药含有本发明活性化合物的药物剂型包括软膏剂、洗剂、散剂、贴剂、栓剂和吸入剂(例如，喷雾剂、气雾剂、粉雾剂)。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、抗氧剂、缓冲剂一起混合。
[0052]
应理解，上述辅料与活性化合物的结合只是起辅助作用，并不会改变活性化合物在疾病治疗过程中的主导作用。若将上述辅料与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。
[0053]
本发明还提供了上述的n-羟基甲脒衍生物或其药学上可接受的盐以及上述的药物组合物在制备cyp4z1抑制剂药物中的用途。
[0054]
本发明进一步提供了上述的n-羟基甲脒衍生物或其药学上可接受的盐以及上述的药物组合物在制备治疗和预防乳腺癌药物中的用途。
[0055]
有益效果：本发明的n-羟基甲脒衍生物为具有全新骨架结构的化合物，通过药理实验可见，n-羟基甲脒衍生物对cyp4z1蛋白酶有明显的抑制作用，可作为肿瘤治疗药物。
具体实施方式
[0056]
详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
[0057]
r1为通式i中化合物的苯环上的取代基，包括氢原子、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、甲氧基、三氟甲基、二甲胺，并且取代位置主要在除了苯环1位和4位以外的任意位置，通
式i中化合物的苯环上的取代基r1的非限制性实例包含：
[0058][0059]
当r2为“c
1-c8烷基”时，c1烷基指-ch
2-，c2烷基指-ch
2-ch
2-，c
3-c8烷基指-ch
2-连接链-ch
2-，其中连接链指碳原子数为1至6的直链脂肪烃基或支链脂肪烃基。
[0060]
当r3为“c
1-c8烷基”时，“c
1-c8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的脂族烃基团。c1烷基指甲基，c2烷基指乙基,c3烷基指正丙基、异丙基，c4烷基指正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基，c5烷基指正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基，c6烷基指1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基。
[0061]
烷基是可以被取代或未取代的，取代基优选自以下一个或多个基团，独立地选自氟、氯、溴、碘、羟基、氨基、硝基、氰基。当被取代时，取代基可以连接于任何可供连接的位置。
[0062]
当r2为酯基、酰胺基中的任意一个时，其可通过羰基或氧原子或氮原子与r3相连，酯基、酰胺基的非限制性实例包含：
[0063][0064]r2a
选自氢原子、c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、c
3-c6环烷基、羟基、氟、氯、溴、碘。其中烷基与上述当r3为“c
1-c8烷基”时含义相同。“烷氧基”指-o-烷基，烷基的定义如上当r3为“c
1-c8烷基”时所述，“c
1-c4烷氧基”指含1-4个碳原子的烷基氧基。“环烷基”指饱和或部分不饱和单环环状烃取代基，“c
3-c6环烷基”指含3-6个碳原子的环烷基。
[0065]
当r2为硫原子、氧原子中的任意一个时，其非限制性实例包含：
[0066][0067]
当r3为甲酸、甲酸甲酯、甲酸乙酯中的任意一个时，其主要通过羰基与r2相连，甲酸、甲酸甲酯、甲酸乙酯的非限制性实例包含：
[0068][0069]
当r3为酰胺基时，其主要通过羰基与r2相连，酰胺基的非限制性实例包含：
[0070][0071]r3a
和r
3b
可分别独立地选自c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基、c
3-c6环烷基、羟基、氟、氯、溴、碘。其中烷基的定义如上当r3为“c
1-c8烷基”时所述，烷氧基、环烷基的定义如上所述。
[0072]
当r3为苯甲酸时，r2可连接在苯环上可连接的任意位置，苯甲酸的非限制性实例包含：
[0073][0074]
下列实施例将更加具体的解释本发明，但应理解，下列实施例旨在说明本发明而不对本发明的范围构成任何的限制。
[0075]
一、化合物合成
[0076]
实施例1：化合物甲基2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸酯的合成
[0077][0078]
步骤(1)：将2-(4-碘苯基)乙酸(5g,19mmol)溶解于甲醇(10ml)，然后加入二氯亚砜(2ml,28mmol)，加热至60℃反应2h。冷却浓缩后柱层析(pe:ea＝100:1，v/v)，分离得到中间体甲基2-(4-碘苯基)乙酸酯(5.08g,96％)。
[0079][0080]
步骤(2)：将步骤(1)所得中间体甲基2-(4-碘苯基)乙酸酯(5.08g,18.4mmol)溶解于dmso(50ml)中，然后加入碘化亚铜(2.38g,12.5mmol)，l-脯氨酸(2.88g,25mmol)，碳酸钾(26g,187mmol)以及氨水(3.5ml,92mmol)，氩气保护下加热到80℃反应12h。反应结束后向反应体系加入适量水，用乙酸乙酯萃取三遍，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗涤，浓缩后柱层析(pe:ea＝50:1，v/v)，分离得中间体甲基2-(4-氨基苯基)乙酸酯(2.68g,88％)。
[0081][0082]
步骤(3)：将步骤(2)所得中间体甲基2-(4-氨基苯基)乙酸酯(2.68g,16mmol)溶解于甲苯(10ml)中，加入1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺(2.4ml,18mmol)，加热至110℃反应2h。冷却浓缩后柱层析(pe:ea＝6:1，v/v)，分离得到中间体甲基2-(4-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)苯基)乙酸酯(3g,84％)。
[0083][0084]
步骤(4)：将步骤(3)所得中间体甲基2-(4-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)苯基)乙酸
酯(3g,13.6mmol)溶解于甲醇(10ml)中，加入盐酸羟胺(1.04g,15mmol)，常温反应4h。冷却浓缩柱层析(pe:ea＝8:1)，分离得到化合物1：甲基2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸酯(2.35g,83％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.93(d,j＝7.7hz,1h),7.68(d,j＝7.9hz,1h),7.25
–
7.20(m,2h),7.15(dt,j＝7.4,1.1hz,2h),3.66(s,2h),3.58(t,j＝1.0hz,2h).
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ172.50,143.45,140.02,129.92,127.70,118.64,51.85,40.60.esi-ms m/z:209.1[m h]

.
[0085]
将实施例1的步骤(1)中的2-(4-碘苯基)乙酸分别替换为：2-(4-碘-3-甲基苯基)乙酸、2-(4-碘-2-甲基苯基)乙酸、2-(3-氯-4-碘苯基)乙酸、2-(2-氯-4-碘苯基)乙酸，按照实施例1中的合成方法进行合成表1所示的化合物。
[0086]
表1 式(i)所示部分化合物结构式
[0087][0088][0089]
实施例2：化合物2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸的合成
[0090][0091]
步骤(1)：将实施例1所得化合物甲基2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸酯(2.35g,11mmol)溶解于四氢呋喃和水的混合溶剂(10ml,thf:h2o＝4:1，v/v)中，加入氢氧化钠(1.13g,28mmol)，常温搅拌5h。反应结束后将四氢呋喃旋干，用1n的盐酸水溶液调ph到6-7，有白色固体析出，即化合物6：2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸(1.3g,59％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.78(s,1h),8.21(s,1h),7.66(s,1h),7.27
–
7.20(m,2h),7.19
–
7.13(m,2h),3.57(d,j＝1.1hz,2h).
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ176.08,145.12,140.04,
129.96,127.93,116.52,40.23.esi-ms m/z:195.1[m h]

.
[0092]
将化合物1-5为原料按照实施例2中的合成方法进行合成表2所示的化合物。
[0093]
表2 式(i)所示部分化合物结构式
[0094][0095][0096]
实施例3：乙基4-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)丁酸酯的合成
[0097][0098]
步骤(1)：将2-(4-碘苯基)丁酸(5g,17mmol)溶解于乙醇(10ml)，然后加入二氯亚砜(1.8ml,26mmol)，加热至80℃反应2h。冷却浓缩后柱层析(pe:ea＝100:1，v/v)，分离得到中间体乙基4-(4-碘苯基)丁酸酯(5.25g,95％)。
[0099][0100]
步骤(2)：将步骤(1)所得中间体乙基4-(4-碘苯基)丁酸酯(5.25g,16mmol)溶解于dmso(50ml)中，然后加入碘化亚铜(2.14g,11.2mmol)，l-脯氨酸(2.58g,22.4mmol)，碳酸钾(23g,168mmol)以及氨水(3.2ml,82mmol)，氩气保护下加热到80℃反应12h。反应结束后向反应体系加入适量水，用乙酸乙酯萃取三遍，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗涤，浓缩后柱层析(pe:ea＝50:1，v/v)，分离得中间体乙基4-(4-氨基苯基)丁酸酯(2.27g,66％)。
[0101][0102]
步骤(3)：将步骤2所得中间体乙基4-(4-氨基苯基)丁酸酯(2.27g,11mmol)溶解于
甲苯(10ml)中，加入1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺(1.6ml,12mmol)，加热110℃回流2h。冷却浓缩后柱层析(pe:ea＝6:1，v/v))，分离得到中间体乙基2-(4-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)苯基)乙酸酯(2.36g,82％)。
[0103][0104]
步骤(4)：将步骤(3)所得中间体乙基2-(4-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)苯基)乙酸酯(2.36g,9mmol)溶解于甲醇(10ml)中，加入盐酸羟胺(687mg,10mmol)，常温反应4h。冷却浓缩柱层析(pe:ea＝8:1，v/v)，分离得到化合物16：乙基2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸酯(2.35g,83％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.83(s,1h),8.21(s,1h),7.66(s,1h),7.22
–
7.10(m,5h),4.08(s,2h),2.54(t,j＝1.0hz,2h),2.42(s,2h),1.89(d,j＝12.5hz,1h),1.80(d,j＝12.3hz,1h),1.22(s,3h).
13
c nmr(400mhz,cdcl3)δ173.42,146.72,145.18,140.61,129.30,116.40,60.22,34.48,33.73,26.81,14.38.esi-ms m/z:251.1[m h]

.
[0105]
将实施例3的步骤(1)中的2-(4-碘苯基)乙酸分别替换为：3-(4-碘苯基)丙酸、3-(4-碘-3-甲基苯基)丙酸、3-(4-碘-2-甲基苯基)丙酸、3-(3-氯-4-碘苯基)丙酸、3-(2-氯-4-碘苯基)丙酸、4-(4-碘-3-甲基苯基)丁酸、4-(4-碘-2-甲基苯基)丁酸、4-(3-氯-4-碘苯基)丁酸、4-(2-氯-4-碘苯基)丁酸，按照实施例3中的合成方法进行合成表3所示的化合物。
[0106]
表3 式(i)所示部分化合物结构式
[0107]
[0108]
[0109][0110]
实施例4：化合物乙基2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸酯的合成
[0111][0112]
将实施例3合成的化合物乙基2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸酯(2g,8mmol)溶解于四氢呋喃和水的混合溶剂(10ml,thf:h2o＝4:1，v/v)中，加入氢氧化钠(799mg,20mmol)，常温搅拌5h。反应结束后将四氢呋喃旋干，用1n的盐酸水溶液调ph到6-7，有白色固体析出，即化合物26：乙基2-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯基)乙酸酯(827mg,46％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.78(s,1h),8.21(s,1h),7.66(s,1h),7.20
–
7.13(m,5h),2.54(d,j＝1.2hz,1h),2.23(s,2h),1.73(s,2h).
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ177.85,145.31,140.85,140.04,129.38,115.53,34.46,33.66,26.39.esi-ms m/z:223.1[m h]

.
[0113]
将化合物11-20为原料按照实施例4中的合成方法进行合成表4所示的化合物。
[0114]
表4 式(i)所示部分化合物结构式
[0115]
[0116]
[0117][0118]
实施例5：化合物4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯乙基己酸酯的合成
[0119][0120]
步骤(1)：将原料2-(4-氨基苯基)乙醇(5g,36mmol)和1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺(5ml,40mmol)溶解于甲苯(10ml)中，加热至110℃反应4h。反应结束后，浓缩，柱层析(pe:ea＝2:1，v/v)，分离得无色液体中间体n'-(4-(2-羟基乙基)苯基)-n,n-二甲基甲脒(6.57g,93％)。
[0121][0122]
步骤(2)：将步骤(1)所得中间体n'-(4-(2-羟基乙基)苯基)-n,n-二甲基甲脒(6.57g,34mmol)和己酸(4ml,34mmol)溶解于四氢呋喃(20ml)中，加入edci(19g,102mmol)和dmap(417mg,3.42mmol)，常温搅拌过夜。反应结束后，向反应体系中加入适量水，用乙酸乙酯萃取三遍，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(pe:ea＝10:1)，分离得中间体4-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)苯乙基己酸酯(8.57g,86％)。
[0123][0124]
步骤(3)：将步骤(2)所得中间体4-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)苯乙基己酸酯(8.57g,29mmol)和盐酸羟胺(2.26g,32mmol)溶解于甲醇(20ml)中，常温搅拌过夜。反应结束后，抽滤，将滤液浓缩后柱层析(pe:ea＝8:1，v/v)，分离得化合物31：4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯乙基己酸酯(7.25g,88％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.78(s,1h),8.21(s,1h),7.52(s,1h),7.16(s,1h),7.16(s,4h),4.18(s,2h),2.85(s,2h),2.30(s,2h),1.61(s,2h),1.31(d,j＝5.9hz,5h),0.89(s,3h).
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ173.58,144.75,141.63,138.12,127.81,118.19,66.56,35.12,34.36,27.72,24.65,22.35,13.90.esi-ms m/z:279.2[m h]

.
[0125]
将实施例5的步骤(1)中的2-(4-氨基苯基)乙醇分别替换为：2-(4-氨基-3-甲基苯基)乙醇、2-(4-氨基-2-甲基苯基)乙醇、2-(4-氨基-3-氯苯基)乙醇、2-(4-氨基-2-氯苯基)乙醇，按照实施例5中的合成方法进行合成表5所示的化合物。
[0126]
表5 式(i)所示部分化合物结构式
[0127][0128]
实施例6：化合物n-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯乙基)丁酰胺的合成
[0129][0130]
步骤(1)：将原料4-(2-氨基乙基)苯胺(5g,36.7mmol)溶解于甲苯(10ml)中，加入1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺(5ml,40mmol)，加热至110℃反应4h。反应结束后，浓缩，柱层析(ea:pe＝2:1，v/v)，分离得无色液体中间体n'-(4-(2-氨基乙基)苯基)-n,n-二甲基甲脒(6.04g,86％)。
[0131][0132]
步骤(2)：将步骤(1)所得中间体n'-(4-(2-氨基乙基)苯基)-n,n-二甲基甲脒(6.04g,31mmol)和丁酸(2.8ml,31mmol)溶解于四氢呋喃(20ml)中，加入edci(18g,94mmol)
和dmap(385mg,3.16mmol)，常温搅拌过夜。反应结束后，向反应体系中加入适量水，用乙酸乙酯萃取三遍，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(pe:ea＝8:1，v/v)，分离得中间体n-(4-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)苯乙基)丁酰胺(7.59g,92％)。
[0133][0134]
步骤(3)：将步骤(2)所得中间体n-(4-(((二甲氨基)亚甲基)氨基)苯乙基)丁酰胺(7.59g,29mmol)和盐酸羟胺(959mg,29mmol)溶解于甲醇(20ml)中，常温搅拌过夜。反应结束后，抽滤，将滤液浓缩后柱层析(pe:ea＝10:1)，分离得化合物36：n-(4-(n'-羟基甲亚胺酰氨基)苯乙基)丁酰胺(6.32g,87％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.90(d,j＝7.7hz,1h),7.75(d,j＝7.9hz,1h),7.26(dt,j＝7.5,1.0hz,2h),7.17
–
7.12(m,2h),6.50(t,j＝4.9hz,1h),3.36(q,j＝5.2hz,2h),2.75(tt,j＝5.4,1.0hz,2h),2.15(t,j＝6.4hz,2h),1.53(dtd,j＝13.9,7.5,6.3hz,2h),0.95(t,j＝7.5hz,3h).
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ173.57,143.42,139.69,133.52,129.42,118.55,41.44,38.85,35.13,20.10,13.90.esi-ms m/z:250.2[m h]

.
[0135]
将实施例6的步骤(1)中的2-(4-氨基苯基)乙醇分别替换为：4-(2-氨基乙基)-2-甲基苯胺、4-(2-氨基乙基)-3-甲基苯胺、4-(2-氨基乙基)-2-氯苯胺、4-(2-氨基乙基)-3-氯苯胺，按照实施例6中的合成方法进行合成表6所示的化合物。
[0136]
表6 式(i)所示部分化合物结构式
[0137]
[0138][0139]
实施例7：化合物n-(4-(2-丁氧基乙基)苯基)-n'-羟基甲脒的合成
[0140][0141]
步骤(1)：将原料2-(4-氨基苯基)乙醇(5g,36mmol)和1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺(5ml,40mmol)溶解于甲苯(10ml)中，加热110℃反应4h。反应结束后，浓缩，柱层析(pe:ea＝2:1，v/v)，分离得无色液体中间体n'-(4-(2-羟基乙基)苯基)-n,n-二甲基甲脒(6.57g,93％)。
[0142][0143]
步骤(2)：将步骤(1)所得中间体n'-(4-(2-羟基乙基)苯基)-n,n-二甲基甲脒
(6.57g,34mmol)溶解于无水四氢呋喃(10ml)中，冰浴下分批加入钠氢(820mg,34mmol)，常温搅拌2h后加入溴丁烷(3.6ml,34mmol)，常温反应12h。反应结束后向反应体系中加入适量水，用乙酸乙酯萃取三遍，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗涤，浓缩，柱层析(pe:ea＝8:1)，分离得中间体n'-(4-(2-丁氧基乙基)苯基)-n,n-二甲基甲脒(7.53g,88％)。
[0144][0145]
步骤(3)：将步骤(2)所得中间体n'-(4-(2-丁氧基乙基)苯基)-n,n-二甲基甲脒(7.53g,30mmol)和盐酸羟胺(2.11g,30mmol)溶解于甲醇(20ml)中，常温搅拌过夜。反应结束后，抽滤，将滤液浓缩后柱层析(pe:ea＝10:1，v/v)，分离得化合物46：n-(4-(2-丁氧基乙基)苯基)-n'-羟基甲脒(6.37g,89％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.93(d,j＝7.7hz,1h),7.72(d,j＝7.9hz,1h),7.18
–
7.08(m,4h),3.69(t,j＝5.9hz,2h),3.47(t,j＝6.5hz,2h),2.83(tt,j＝6.0,1.0hz,2h),1.53(p,j＝6.8hz,2h),1.34(h,j＝7.0hz,2h),0.93(t,j＝7.0hz,3h).
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ143.42,139.65,133.21,129.55,118.55,70.94,69.06,36.28,32.43,19.82,14.02.esi-ms m/z:237.2[m h]

.
[0146]
以实施例7的步骤(1)中的2-(4-氨基苯基)乙醇为原料，或替换为：：2-(4-氨基-3-甲基苯基)乙醇、2-(4-氨基-2-甲基苯基)乙醇、2-(4-氨基-3-氯苯基)乙醇、2-(4-氨基-2-氯苯基)乙醇，与溴乙烷按照实施例7中的合成方法进行合成表7所示的化合物41-45；将实施例7的步骤(1)中的2-(4-氨基苯基)乙醇分别替换为：2-(4-氨基-3-甲基苯基)乙醇、2-(4-氨基-2-甲基苯基)乙醇、2-(4-氨基-3-氯苯基)乙醇、2-(4-氨基-2-氯苯基)乙醇，与溴丁烷按照实施例7中的合成方法进行合成表7所示的化合物47-50。
[0147]
表7 式(i)所示部分化合物结构式
[0148]
[0149]
[0150][0151]
二、化合物药理活性评价
[0152]
本发明的n-羟基甲脒衍生物的cyp4z1酶抑制活性测定
[0153]
(1)在96孔板中每孔加12.5μl测试化合物(1μm)。如果测试化合物的体积小于12.5μl，则加水使体积达到12.5μl。在未处理孔和无-p450对照孔中加入12.5μl水。
[0154]
(2)cyp反应：每孔加入12.5μl 4x cyp反应混合物，轻轻混合。
[0155]
无-p450对照组反应：向每孔中加入12.5μl由缺乏cyp活性组分制备的4x对照反应混合物，轻轻混合。
[0156]
(3)在37℃或室温下预孵育10分钟。
[0157]
(4)在cyp测定反应和无-p450对照组反应中加入25μl 2x nadph启动cyp反应。
[0158]
(5)在与预孵育相同的温度下(37℃或室温下)孵育30分钟。
[0159]
(6)在cyp测定和对照反应中加入50μl重组荧光素检测试剂。
[0160]
(7)将96孔板在摇床上振荡10s。
[0161]
(8)室温孵育20分钟，使发光信号稳定。
[0162]
(9)使用光度计测定发光情况。
[0163]
注意：“2x”和“4x”分别是指以最终试剂浓度的2倍或4倍制备的试剂。
[0164]
表1 部分化合物对cyp4z1酶的抑制活性(抑制率)
[0165]
[0166]
[0167]
[0168]
[0169][0170]
从以上结果可以看出，本发明的化合物对cyp4z1酶活性具有显著的限制，可以用于制备cyp4z1抑制剂，特别是可抑制cyp4z1相关的乳腺癌疾病的发生、发展。