用于制备ClC-1氯离子通道抑制剂的方法与流程

用于制备clc-1氯离子通道抑制剂的方法
技术领域
1.本公开涉及用于合成clc-1氯离子通道抑制剂的新化学方法。
2.背景
3.本公开涉及用于制备为clc-1氯离子通道抑制剂的化合物的化学方法。如wo 2016/202341中所述，clc-1氯离子通道抑制剂可用于治疗神经肌肉障碍，例如重症肌无力(myasthenia gravis)和als，或用于逆转和/或改善神经肌肉阻滞。


技术实现要素：

4.为了开发神经肌肉疾病的治疗方法，需要clc-1氯离子通道抑制剂。本公开提供了一种用于制备式i化合物的新的可工业应用的方法。如通过在本文描述的生物模型中研究化合物集所产生的数据所证明的，式i化合物抑制clc-1离子通道并能够恢复神经肌肉传递。因此，这些化合物可用于治疗或改善由疾病或神经肌肉阻滞剂引起的神经肌肉接头障碍中的肌肉无力和肌肉疲劳。
5.一方面，本公开提供了一种用于制备式i化合物的方法
[0006][0007]
包括步骤a)，其中
[0008]
i)使式ii化合物与酸或碱反应
[0009][0010]
以及
[0011]
ii)从反应混合物中分离式i化合物，
[0012]
其中r1至r9和n如本文所定义。
[0013]
本公开还涉及本文所定义的新的式ii化合物。
附图说明
[0014]
图1：图片a说明了用于在表达人clc-1通道的cho细胞的全细胞膜片中诱发电流的电压方案。图片b显示了来自表达人clc-1通道的膜片化的(patched)cho细胞的代表性全细胞电流迹线。通过应用图片a中所示的电压方案来诱发电流。
[0015]
图2：图片a显示了在应用100μm的clc-1抑制剂9-蒽甲酸(9-ac，sigma a89405)之前(圆)和之后(方块)在表达clc-1的cho细胞中恒定电流密度的代表性i/v图。图片b显示了在应用100μm 9-ac之前(圆)和之后(方块)，从与图片a所示相同的表达clc-1的cho细胞中获得的瞬时尾电流密度的i/v图。
[0016]
图3：图3显示了在应用100μm 9-ac之前(圆)和之后(方块)从表达clc-1的cho细胞膜片获得的归一化的瞬时尾电流的代表性图。将每个电压阶跃(voltage step)时的瞬时尾电流相对于( )120mv电压阶跃后获得的最大尾电流进行归一化，并用玻尔兹曼(boltzmann)函数拟合以确定半激活电位v
1/2
。
[0017]
定义
[0018]
术语“c
1-3
烷基”和“c
1-5
烷基”分别是指具有一至三个或一至五个碳原子的支链或非支链烷基，包括但不限于甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、2,2-二甲基-丙-1-基、丁-1-基、丁-2-基、3-甲基-丁-1-基、3-甲基-丁-2-基、戊-1-基、戊-2-基和戊-3-基。
[0019]
术语“c
2-5
烯基”是指具有二至五个碳原子的支链或非支链烯基，其中两个碳原子通过双键连接，包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、戊烯基和异戊烯基。
[0020]
术语“c
2-5
炔基”是指具有二至五个碳原子的支链或非支链炔基，其中两个碳原子通过三键连接，包括但不限于乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、丁-1,3-二炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、戊-4-炔基、戊-2,4-二炔基和戊-1,3-二炔基。
[0021]
术语“c
3-5
环烷基”和“c
3-6
环烷基”分别是指具有三至五个或三至六个碳原子的基团，包括单环或双环碳环，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
[0022]
详细说明
[0023]
本公开提供了用于制备为clc-1氯离子通道抑制剂的式i化合物的新型工业适用方法。本发明的方法允许更好地控制杂质，减少或消除对色谱步骤的需要并且具有更高的收率，从而提供更好的商品成本。
[0024]
因此，一方面，本公开提供了一种用于制备式i化合物的方法，
[0025]
[0026]
其包括步骤a)，其中
[0027]
i)使式ii化合物与酸或碱反应，
[0028][0029]
以及
[0030]
ii)从反应混合物中分离出式i化合物，
[0031]
其中
[0032]-r1选自h、f、cl、br和i；
[0033]-r2选自c
1-5
烷基和c
3-5
环烷基；
[0034]-r3选自氘、f、cl、br和i；
[0035]-r4选自h、氘、c
1-5
烷基、c
2-5
烯基、c
2-5
炔基、c
3-5
环烷基和c5环烯基，其中每一个都可以任选地被一个或多个相同或不同的取代基r7取代；
[0036]-r5选自任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
1-5
烷基、c
2-5
烯基、c
2-5
炔基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
3-6
环烷基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r9取代的苯基和任选地被一个或多个相同或不同的取代基r9取代的苄基；
[0037]-r6选自h、氘、c
1-5
烷基和c
3-5
环烷基；
[0038]-r7独立地选自氘、氚、f、cl、br、i、cn、异氰基(isocyanide)、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
3-5
环烷基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的o-c
1-3
烷基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的s-c
1-3
烷基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的ch
2-o-c
1-3
烷基和任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的ch
2-s-c
1-3
烷基；
[0039]-r8独立地选自氘和f；
[0040]-r9独立地选自氘、甲氧基、硝基、氰基、cl、br、i和f；且
[0041]-n是整数0、1、2或3。
[0042]
在一个实施方案中，r1是cl或br。在一个实施方案中，r1是cl。在一个实施方案中，r1是br。
[0043]
在一个实施方案中，r2是c
1-5
烷基。在一个实施方案中，r2选自甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、2,2-二甲基-丙-1-基、丁-1-基、丁-2-基、3-甲基-丁-1-基、3-甲基-丁-2-基、戊-1-基、戊-2-基和戊-3-基。在一个实施方案中，r2是乙基。在一个实施方案中，r2是丙-1-基。在一个实施方案中，r2是丙-2-基。在一个实施方案中，r2是丁-1-基。在一个实施方案中，r2是2-甲基-丙-2-基。
[0044]
在一个实施方案中，r3是氘。在一个实施方案中，r3是f。
[0045]
在一个实施方案中，r4是h。在一个实施方案中，r4是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r7取代的c
1-5
烷基。在一个实施方案中，r4是被c
3-5
环烷基取代的c
1-5
烷基，该c
3-5
环烷基任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代。在一个实施方案中，r4是me。在一个实施方案中，r4是et。在一个实施方案中，r4是-ch2f。在一个实施方案中，r5是环丙基。
[0046]
在一个实施方案中，r5是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
1-5
烷基。在一个实施方案中，r5是me。在一个实施方案中，r5是et。在一个实施方案中，r5是2-甲基-丙-2-基。
[0047]
在一个实施方案中，r6是h。在一个实施方案中，r6是氘。在一个实施方案中，r6是c
1-5
烷基。在一个实施方案中，r6选自甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、2,2-二甲基-丙-1-基、丁-1-基、丁-2-基、3-甲基-丁-1-基、3-甲基-丁-2-基、戊-1-基、戊-2-基和戊-3-基。
[0048]
在一个实施方案中，r7是氘。在一个实施方案中，r7是f。在一个实施方案中，r7是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
3-5
环烷基。在一个实施方案中，r4是被r7取代的c
1-5
烷基，其中r7是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
3-5
环烷基。
[0049]
在一个实施方案中，n是0。在一个实施方案中，n是1。在一个实施方案中，n是2。在一个实施方案中，n是3。
[0050]
在一个实施方案中，使式ii化合物与酸反应。在一个实施方案中，使式ii化合物与浓酸反应。在一个实施方案中，使式ii化合物与选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、苯甲酸、盐酸和硫酸或其混合物(例如甲酸和乙酸的混合物)的酸反应。在一个实施方案中，酸是乙酸。在一个实施方案中，酸是甲酸。在一个实施方案中，酸是浓乙酸。在一个实施方案中，酸是浓甲酸。在一个实施方案中，酸是浓乙酸。在一个实施方案中，酸是浓甲酸和浓乙酸的混合物。
[0051]
在一个实施方案中，步骤a)i)在70℃至140℃、例如80℃至130℃、例如90℃至120℃的温度下进行。
[0052]
在一个实施方案中，步骤a)i)的反应时间为12小时至96小时，例如24小时至72小时，例如36小时至60小时。
[0053]
在一个实施方案中，步骤a)i)中使用的酸的量为每克起始材料3ml至每克起始材料15ml。
[0054]
在一个实施方案中，通过添加水并将产物萃取到有机溶剂中而从反应混合物中分离式i化合物。在一个实施方案中，用于萃取的有机溶剂选自甲苯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯和甲基叔丁基醚。在一个实施方案中，用于萃取的有机溶剂是甲基叔丁基醚。
[0055]
在一个实施方案中，通过从选自甲苯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯和甲基叔丁基醚的有机溶剂中结晶来纯化式i化合物。在一个实施方案中，通过从甲苯中结晶来纯化式i化合物。
[0056]
在一个实施方案中，该方法还包括步骤b)，其中
[0057]
i)使式iii化合物
[0058][0059]
在有机溶剂中与n-氯代琥珀酰亚胺反应；
[0060]
ii)将式iv化合物
[0061][0062]
将碱添加到反应混合物中；以及
[0063]
iii)从反应混合物中分离式ii化合物，
[0064]
其中r1至r9和n如本文所定义。
[0065]
在一个实施方案中，步骤b)i)中的溶剂是二甲基甲酰胺(dmf)。在一个实施方案中，式iv化合物选自乙基乙烯基醚、正丁基乙烯基醚和叔丁基乙烯基醚。在一个实施方案中，式iv化合物是正丁基乙烯基醚。在一个实施方案中，步骤b)ii)中的碱是三烷基胺。在一个实施方案中，步骤b)ii)中的碱选自三甲胺、三乙胺、三异丙胺和n,n-二异丙基乙胺。在一个实施方案中，步骤b)ii)中的碱是三乙胺。
[0066]
在一个实施方案中，该方法还包括步骤c)，其中
[0067]
i)使式v化合物
[0068][0069]
在有机溶剂中与羟胺反应；
[0070]
ii)向反应混合物中添加碱；以及
[0071]
iii)从反应混合物中分离式iii化合物，
[0072]
其中r1至r9和n如本文所定义。
[0073]
在一个实施方案中，该方法还包括步骤d)，其中
[0074]
i)将式vi化合物
[0075][0076]
添加到在有机溶剂中的式vii化合物中；
[0077][0078]
ii)向反应混合物中添加碱；以及
[0079]
iii)从反应混合物中分离式v化合物，
[0080]
其中r1至r9和n如本文所定义且lg是离去基团。
[0081]
在一个实施方案中，离去基团选自甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯、间硝基苯磺酸酯(nosylate)、对溴苯磺酸酯(brosylate)、溴化物、碘化物和氯化物。
[0082]
在一个实施方案中，该方法包括如方案1中概述的步骤a)。在一个实施方案中，该方法包括如方案1中概述的步骤a)和b)。在一个实施方案中，该方法包括如方案1中概述的步骤a)、b)和c)。在一个实施方案中，该方法包括如方案1中概述的步骤a)、b)、c)和d)。
[0083][0084]
方案1：式i化合物的合成
[0085]
在一个实施方案中，式i化合物是clc-1氯离子通道的抑制剂。
[0086]
在一个实施方案中，式i化合物的纯度为至少80％，例如纯度为至少90％，例如纯度为至少95％，例如纯度为至少96％，例如纯度为至少97％，例如纯度为至少98％。
[0087]
在某些实施方案中，根据本公开的化合物或者根据本公开使用的化合物可以具有》90％的对映体过量。在某些实施方案中，根据本公开的化合物或者根据本公开使用的化合物可以具有》95％e.e.。
[0088]
在一个实施方案中，式i化合物选自：
[0089]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸；
[0090]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸；
[0091]
2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸；
[0092]
2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸；
[0093]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0094]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0095]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0096]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸；
[0097]
(2s)-2-[4-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0098]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0099]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸；
[0100]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丁酸；
[0101]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0102]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸；
[0103]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丁酸；
[0104]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸；
[0105]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0106]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；和
[0107]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸。
[0108]
一方面，本公开涉及一种用于制备药物组合物的方法，其包括以下步骤：
[0109]
i)制备根据本发明的化合物，所述化合物选自以下：
[0110]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸；
[0111]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸；
[0112]
2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸；
[0113]
2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸；
[0114]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0115]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0116]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0117]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸；
[0118]
(2s)-2-[4-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0119]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0120]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸；
[0121]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丁酸；
[0122]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0123]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸；
[0124]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丁酸；
[0125]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸；
[0126]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0127]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；和
[0128]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸，以及
[0129]
ii)将所述化合物配制成药物组合物。
[0130]
一方面，本公开涉及如本文所定义的式ii化合物。
[0131]
在一个实施方案中，式ii化合物选自：
[0132]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0133]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0134]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0135]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0136]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0137]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0138]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0139]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0140]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0141]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0142]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0143]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0144]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0145]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0146]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0147]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0148]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0149]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0150]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0151]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0152]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙
酯；
[0153]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0154]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0155]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0156]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸甲酯；
[0157]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸甲酯；
[0158]
2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸甲酯；
[0159]
2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸甲酯；
[0160]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0161]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0162]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0163]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸甲酯；
[0164]
(2s)-2-[4-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0165]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸甲酯；
[0166]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸甲酯；
[0167]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0168]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸甲酯；
[0169]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸甲酯；
[0170]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸甲酯；
[0171]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0172]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸乙酯；
[0173]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸乙酯；
[0174]
2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸乙酯；
[0175]
2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸乙酯；
[0176]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0177]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0178]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0179]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸乙酯；
[0180]
(2s)-2-[4-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0181]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸乙酯；
[0182]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸乙酯；
[0183]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0184]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸乙酯；
[0185]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸乙酯；
[0186]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸乙酯；
[0187]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0188]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸叔丁酯；
[0189]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸叔丁酯；
[0190]
2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸叔丁酯；
[0191]
2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸叔丁酯；
[0192]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0193]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0194]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0195]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸叔丁酯；
[0196]
(2s)-2-[4-氟-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0197]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸叔丁酯；
[0198]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸叔丁酯；
[0199]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0200]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸叔丁酯；
[0201]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸叔丁酯；
[0202]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸叔丁酯；
[0203]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0204]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸甲酯；
[0205]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸甲酯；
[0206]
2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸甲酯；
[0207]
2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸甲酯；
[0208]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0209]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0210]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0211]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸甲酯；
[0212]
(2s)-2-[4-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0213]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸甲酯；
[0214]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸甲酯；
[0215]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0216]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸甲酯；
[0217]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸甲酯；
[0218]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸甲酯；
[0219]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸甲酯；
[0220]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸乙酯；
[0221]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸乙酯；
[0222]
2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸乙酯；
[0223]
2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸乙酯；
[0224]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0225]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0226]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0227]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸乙酯；
[0228]
(2s)-2-[4-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0229]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸乙酯；
[0230]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸乙酯；
[0231]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0232]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸乙酯；
[0233]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸乙酯；
[0234]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸乙酯；
[0235]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸乙酯；
[0236]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸叔丁酯；
[0237]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸叔丁酯；
[0238]
2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸叔丁酯；
[0239]
2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]乙酸叔丁酯；
[0240]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0241]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0242]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0243]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸叔丁酯；
[0244]
(2s)-2-[4-氟-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0245]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸叔丁酯；
[0246]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸叔丁酯；
[0247]
(2s)-2-[4-氯-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯；
[0248]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸叔丁酯；
[0249]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丁酸叔丁酯；
[0250]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸叔丁酯；和
[0251]
(2s)-2-[4-溴-2-(4-乙氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基]丙酸叔丁酯。
[0252]
本公开还部分地涉及包含通过所公开的方法制备的式i化合物的药物组合物。在一个实施方案中，通过上述方法制备的式i化合物可以被包含在药物组合物中。这些组合物还可以包含一种或多种常规的药学上可接受的载体。组合物可以包含另外的活性成分/药剂或其他组分以增加组合物的功效。
[0253]
因此，本公开的另一方面是用于制备包含式i化合物的药物组合物的方法，其特征在于通过根据本发明的方法制备式i化合物。
[0254]
包含本公开的式i化合物和药学上可接受的载体的药物组合物构成本发明的另一方面。
[0255]
项目
[0256]
1.一种用于制备式i化合物的方法
[0257][0258]
其包括步骤a)，其中
[0259]
i)使式ii化合物与酸或碱反应
[0260][0261]
以及
[0262]
ii)从反应混合物中分离式i化合物，
[0263]
其中
[0264]-r1选自h、f、cl、br和i；
[0265]-r2选自c
1-5
烷基和c
3-5
环烷基；
[0266]-r3选自氘、f、cl、br和i；
[0267]-r4选自h、氘、c
1-5
烷基、c
2-5
烯基、c
2-5
炔基、c
3-5
环烷基和c5环烯基，其中每一个可以任选地被一个或多个相同或不同的取代基r7取代；
[0268]-r5选自任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
1-5
烷基、c
2-5
烯基、c
2-5
炔基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
3-6
环烷基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r9取代的苯基和任选地被一个或多个相同或不同的取代基r9取代的苄基；
[0269]-r6选自h、氘、c
1-5
烷基和c
3-5
环烷基；
[0270]-r7独立地选自氘、氚、f、cl、br、i、cn、异氰基，r7是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
3-5
环烷基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的o-c
1-3
烷基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的s-c
1-3
烷基、任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的ch
2-o-c
1-3
烷基和任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的ch
2-s-c
1-3
烷基；
[0271]-r8独立地选自氘和f；
[0272]-r9独立地选自氘、甲氧基、硝基、氰基、cl、br、i和f；且
[0273]-n是整数0、1、2或3。
[0274]
2.前述项目中任一项的方法，其中r1是cl或br。
[0275]
3.前述项目中任一项的方法，其中r1是cl。
[0276]
4.前述项目中任一项的方法，其中r1是br。
[0277]
5.前述项目中任一项的方法，其中r2是c
1-5
烷基。
[0278]
6.前述项目中任一项的方法，其中r2选自甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、2,2-二甲基-丙-1-基、丁-1-基、丁-2-基、3-甲基-丁-1-基、3-甲基-丁-2-基、戊-1-基、戊-2-基和戊-3-基。
[0279]
7.前述项目中任一项的方法，其中r2是乙基。
[0280]
8.前述项目中任一项的方法，其中r2是丙-1-基。
[0281]
9.前述项目中任一项的方法，其中r2是丙-2-基。
[0282]
10.前述项目中任一项的方法，其中r2是丁-1-基。
[0283]
11.前述项目中任一项的方法，其中r2是2-甲基-丙-2-基。
[0284]
12.前述项目中任一项的方法，其中r3是f。
[0285]
13.前述项目中任一项的方法，其中r3是氘。
[0286]
14.前述项目中任一项的方法，其中r4是h。
[0287]
15.前述项目中任一项的方法，其中r4是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r7取代的c
1-5
烷基。
[0288]
16.前述项目中任一项的方法，其中r4是me。
[0289]
17.前述项目中任一项的方法，其中r4是et。
[0290]
18.前述项目中任一项的方法，其中r4是-ch2f。
[0291]
19.前述项目中任一项的方法，其中r4是环丙基。
[0292]
20.前述项目中任一项的方法，其中r5是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
1-5
烷基。
[0293]
21.前述项目中任一项的方法，其中r5是me。
[0294]
22.前述项目中任一项的方法，其中r5是et。
[0295]
23.前述项目中任一项的方法，其中r5是2-甲基-丙-2-基。
[0296]
24.前述项目中任一项的方法，其中r6是h。
[0297]
25.前述项目中任一项的方法，其中r6是d。
[0298]
26.前述项目中任一项的方法，其中r6是c
1-5
烷基。
[0299]
27.前述项目中任一项的方法，其中r6选自甲基、乙基、丙-1-基、丙-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、2,2-二甲基-丙-1-基、丁-1-基、丁-2-基、3-甲基-丁-1-基、3-甲基-丁-2-基、戊-1-基、戊-2-基和戊-3-基。
[0300]
28.前述项目中任一项的方法，其中r7是氘。
[0301]
29.前述项目中任一项的方法，其中r7是f。
[0302]
30.前述项目中任一项的方法，其中r7是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
3-5
环烷基。
[0303]
31.前述项目中任一项的方法，其中r4是被r7取代的c
1-5
烷基，其中r7是任选地被一个或多个相同或不同的取代基r8取代的c
3-5
环烷基。
[0304]
32.前述项目中任一项的方法，其中n＝0。
[0305]
33.前述项目中任一项的方法，其中n＝1。
[0306]
34.前述项目中任一项的方法，其中n＝2。
[0307]
35.前述项目中任一项的方法，其中n＝3。
[0308]
36.前述项目中任一项的方法，其中使式ii化合物与碱反应。
[0309]
37.前述项目中任一项的方法，其中使式ii化合物与酸反应。
[0310]
38.前述项目中任一项的方法，其中使式ii化合物与浓酸反应。
[0311]
39.前述项目中任一项的方法，其中使式ii化合物与选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、苯甲酸、盐酸和硫酸或其混合物的酸反应。
[0312]
40.前述项目中任一项的方法，其中使式ii化合物与浓甲酸反应。
[0313]
41.前述项目中任一项的方法，其中使式ii化合物与浓乙酸反应。
[0314]
42.前述项目中任一项的方法，其中使式ii化合物与浓甲酸和浓乙酸的混合物反应。
[0315]
43.前述项目中任一项的方法，其中步骤a)在70℃至140℃、例如80℃至130℃、例如90℃至120℃的温度下进行。
[0316]
44.前述项目中任一项的方法，其中步骤a)的反应时间为12小时至96小时，例如24小时至72小时，例如36小时至60小时。
[0317]
45.前述项目中任一项的方法，其中在步骤a)i)中使用的酸的量为每克起始材料3ml至每克起始材料15ml。
[0318]
46.前述项目中任一项的方法，其中在步骤b)中通过添加水并将产物萃取到有机溶剂中而从反应混合物中分离式i化合物。
[0319]
47.前述项目中任一项的方法，其中在步骤b)中通过添加水并将产物萃取到选自甲苯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯和甲基叔丁基醚中而从反应混合物中分离式i化合物。
[0320]
48.前述项目中任一项的方法，其中通过从有机溶剂中结晶来纯化式i化合物。
[0321]
49.前述项目中任一项的方法，其中通过从选自甲苯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯和甲基叔丁基醚的有机溶剂中结晶来纯化式i化合物。
[0322]
50.前述项目中任一项的方法，其中该方法还包括步骤b)，
[0323]
i)使式iii化合物
[0324][0325]
在有机溶剂中与n-氯代琥珀酰亚胺反应；
[0326]
ii)将式iv化合物
[0327][0328]
和碱添加到反应混合物中；以及
[0329]
iii)从反应混合物中分离式ii化合物，
[0330]
其中r1至r9和n如项目1中所定义。
[0331]
51.前述项目中任一项的方法，其中步骤b)i)中的溶剂是二甲基甲酰胺(dmf)。
[0332]
52.前述项目中任一项的方法，其中式iv混合物选自乙基乙烯基醚、正丁基乙烯基醚和叔丁基乙烯基醚。
[0333]
53.前述项目中任一项的方法，其中步骤b)ii)中的碱选自三甲胺、三乙胺、三异丙胺和n,n-二异丙基乙胺。
[0334]
54.前述项目中任一项的方法，其中该方法进一步包括步骤c)，其中
[0335]
i)使式v化合物
[0336][0337]
在有机溶剂中与羟胺反应；
[0338]
ii)向反应混合物中添加碱；以及
[0339]
iii)从反应混合物中分离式iii化合物，
[0340]
其中r1至r9和n如权利要求1中所定义。
[0341]
55.前述项目中任一项的方法，其中步骤c)i)中的有机溶剂是醇。
[0342]
56.前述项目中任一项的方法，其中步骤c)i)中的有机溶剂是选自甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇和叔丁醇的醇。
[0343]
57.前述项目中任一项的方法，其中步骤c)ii)中的碱选自吡啶、三甲胺、三乙胺、三异丙胺和n,n-二异丙基乙胺。
[0344]
58.前述项目中任一项的方法，其中该方法还包括步骤d)，其中
[0345]
i)将式vi化合物
[0346][0347]
添加到在有机溶剂中的式vii化合物中；
[0348][0349]
ii)向反应混合物中添加碱；以及
[0350]
iii)从反应混合物中分离式v化合物，
[0351]
其中r1至r9和n如本文所定义且lg是离去基团。
[0352]
59.前述项目中任一项的方法，其中式vi的离去基团(lg)选自甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯、间硝基苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、溴化物、碘化物和氯化物。
[0353]
60.前述项目中任一项的方法，其中式vi的离去基团(lg)是甲苯磺酸酯。
[0354]
61.前述项目中任一项的方法，其中有机溶剂选自戊烷、己烷、庚烷、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃和乙腈。
[0355]
62.前述项目中任一项的方法，其中步骤d)ii)中的碱是无机碱。
[0356]
63.前述项目中任一项的方法，其中步骤d)ii)中的碱是选自碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、碳酸氢锂、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化锂、氢氧化钠和氢氧化钾的无机碱。
[0357]
64.前述项目中任一项的方法，其中式i化合物选自：
[0358]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸；
[0359]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸；
[0360]
2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸；
[0361]
2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸；
[0362]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0363]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0364]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0365]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸；
[0366]
(2s)-2-[4-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0367]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0368]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸；
[0369]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丁酸；
[0370]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0371]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸；
[0372]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丁酸；
[0373]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸；
[0374]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0375]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；和
[0376]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸。
[0377]
65.前述项目中任一项的方法，其中式i化合物是clc-1氯离子通道的抑制剂。
[0378]
66.前述项目中任一项的方法，其中式i化合物的纯度为至少80％，例如纯度为至少90％，例如纯度为至少95％，例如纯度为至少96％，例如纯度为至少97％，例如纯度为至少98％。
[0379]
67.一种用于制备药物组合物的方法，其包括以下步骤
[0380]
i)根据前述项目中任一项制备选自以下的化合物：
[0381]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-2-环丙基乙酸；
[0382]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丁基丙酸；
[0383]
2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸；
[0384]
2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸；
[0385]
(2s)-2-[4,5-二氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0386]
(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0387]
(2s)-2-[4-氯-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0388]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸；
[0389]
(2s)-2-[4-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0390]
(2s)-2-[4-氯-2-(5-环丙基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0391]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸；
[0392]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丁酸；
[0393]
(2s)-2-[4-氯-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0394]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-环丙基丙酸；
[0395]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丁酸；
[0396]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]-3-甲基丁酸；
[0397]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；
[0398]
(2s)-2-[4-溴-2-(5-环丙基-1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；和
[0399]
(2s)-2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸；以及
[0400]
ii)将所述化合物配制成药物组合物。
实施例
[0401]
材料和方法
[0402]
nmr光谱
[0403]
在jeol la400(400mhz)光谱仪上记录1h-nmr光谱，并使用残留的非氘代溶剂作为内部参考(对于chcl3为7.24ppm)对其进行校准。
[0404]
lcms方法
[0405]
仪器：agilent 1260infinity系列lc(高压脱气机、二元泵、自动进样器和柱温箱)，配备agilent 1100dad检测器，扫描范围从210nm到315nm。用api 2000质谱仪(电喷雾)提供质量检测。
[0406]
柱：agilent poroshell 120ec-c18(2.7μm，3.0x 50mm)。
[0407]
条件：0.1％v/v甲酸水溶液[洗脱液a]；mecn[洗脱液b]；流速为0.8ml/min，且样品之间的平衡时间为1.5分钟。
[0408]
梯度：
[0409]
时间(min)洗脱液a(％)洗脱液b(％)0.019550.209552.005953.005953.259553.50955
[0410]
手性scf方法
[0411]
使用配备二元溶剂输送泵、自动进样器、柱温箱(cm-30s)、背压调节器和二极管阵列检测器的waters acquity超高效合相色谱(upc2)系统分析化合物。
[0412]
柱：lux a1(4.6mm x 250mm，5μm)。
[0413]
条件：40℃，4ml/min，等梯度15:85etoh:co2(0.1％v/v tfa)，125barg。
[0414]
实施例1：(2s)-2-(4-溴-2-(异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸的合成
[0415]
使用如下所示的示意图制备(s)-2-(4-溴-2-(异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸b.6。
[0416][0417]
(s)-2-(4-溴-2-甲酰基苯氧基)丙酸甲酯b.3的合成
[0418]
将5-溴-2-羟基苯甲醛b.1(9.26g，46.10mmol)添加到搅拌的(r)-2-(甲苯磺酰氧基)丙酸甲酯b.2(11.90g，46.10mmol)在己烷(180ml)中的溶液中并将所得混合物加热至80℃直至溶解。将碳酸钾(12.74g，92.20mmol)添加到反应混合物中，并在80℃下搅拌36h，在室温下搅拌60h。
[0419]
在真空下除去溶剂并将残余物在水(400ml)和乙酸乙酯(400ml)之间分配。将水层用更多的乙酸乙酯萃取。将有机层合并在一起并用水(2x 300ml)和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供浅黄色油。使用庚烷:乙酸乙酯10-20％作为溶剂系统，通过硅胶快速柱色谱来纯化该粗物质以提供期望的产物：(s)-2-(4-溴-2-甲酰基苯氧基)丙酸甲酯b.3，为无色油，其固化过夜(8.08g，62％收率)。
[0420]
1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.54(s,1h),7.94(d,j＝2.7hz,1h),7.56(dd,j＝8.9,2.7hz,1h),6.71(d,j＝8.9hz,1h),4.84(q,j＝6.8hz,1h),3.74(s,3h),1.68(d,j＝6.8hz,3h)。lc/ms(agilent)m/z 286.8(m h)

，在2.54min处。
[0421]
(s,e)-2-(4-溴-2-((羟基亚氨基)-甲基)苯氧基)丙酸甲酯b.4的合成
[0422]
在氮气下将盐酸羟胺(1.87g，26.90mmol)添加到搅拌的预先冷却到-40℃的(s)-2-(4-溴-2-甲酰基苯氧基)丙酸甲酯b.3(7.25g，26.90mmol)在甲醇(150ml)中的溶液中。然后，将吡啶(2.6ml，29.60mmol)滴加到混合物中并在该温度下搅拌1h。将反应混合物在4℃下储存过夜。
[0423]
将反应混合物升温至室温并倒入水(400ml)中。将该溶液用乙酸乙酯(2x 400ml)萃取。将有机层合并在一起并用水(2x 300ml)和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供期望的产物(s,e)-2-(4-溴-2-((羟基亚氨基)-甲基)苯氧基)丙酸甲酯b.4，为白色固体(8.20g，定量收率)。
[0424]
1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.49(s,1h),7.87(d,j＝2.6hz,1h),7.35(dd,j＝8.8,
2.6hz,1h),6.61(d,j＝8.8hz,1h),4.74(q,j＝6.8hz,1h),3.72(s,3h),1.63(d,j＝6.8hz,3h)。lc/ms(agilent)m/z 301.9(m h)

，在2.42min处。
[0425]
(2s)-2-(4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸甲酯b.5的合成
[0426]
在室温下将n-氯代琥珀酰亚胺(3.90g，28.95mmol)添加到(s,e)-2-(4-溴-2-((羟基亚氨基)-甲基)苯氧基)丙酸甲酯b.4(7.95g，26.40mmol)在二甲基甲酰胺(200ml)中的溶液中，然后添加1m盐酸溶液(1ml水溶液)。将所得反应混合物在室温下搅拌75min。此后，将混合物冷却至0℃并向其中添加三乙胺(4.42ml，31.70mmol)，随后添加丁基乙烯基醚(4.1ml，31.70mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3.5h。
[0427]
将反应混合物倒入水(350ml)中，用1m盐酸溶液酸化至ph 5，并用甲基叔丁基醚(2x 350ml)萃取。将有机层合并在一起，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到期望的产物(2s)-2-(4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸甲酯b.5(非对映异构体的约1:1混合物)，为黄色油(10.30g，98％收率)。
[0428]
1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.99和7.97(两个d,j＝2.5hz,1h),7.37(dd,j＝8.9,2.5hz,1h),6.63和6.61(两个d,j＝8.9hz,1h),5.62(m,1h),4.78(m,1h),3.81(m,1h),3.73和3.71(两个s,3h),3.59(m,1h),3.48(m,1h),3.35和3.31(两个dd,j＝13.4,1.5hz,1h),1.61(d,j＝6.8hz,3h),1.56(m,2h),1.35(m,2h),0.90和0.89(两个t,j＝7.4hz,3h)。lc/ms(agilent)m/z 399.9(m h)

，在2.91min处。
[0429]
(2s)-2-(4-溴-2-(异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸b.6的合成
[0430]
在100℃下将(2s)-2-(4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸乙酯b.5(9.15g，22.90mmol)在甲酸水溶液(90％)(100ml，2.39mol)中的溶液加热6h。
[0431]
将反应混合物冷却至室温并在真空下除去溶剂。将粗物质与乙腈共沸并在40℃下真空干燥1h。将分离出的油在甲基叔丁基醚和水之间分配。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到黄色油。将该油在二氯甲烷(20ml)和己烷(400ml)中研磨并将分离的固体在真空烘箱中干燥过夜，以提供期望的产物(2s)-2-(4-溴-2-(异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸b.6，为米色固体(5.52g，78％收率)。
[0432]
1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.49(d,j＝1.8hz,1h),7.77(d,j＝2.4hz,1h),7.53(dd,j＝8.8,2.4hz,1h),6.90(d,j＝8.8hz,1h),6.78(d,j＝1.8hz,1h),4.91(q,j＝6.9hz,1h),1.73(d,j＝6.9hz,3h)。lc/ms(agilent)m/z 312.0(m h)

，在2.40min处。
[0433]
从5-溴-2-羟基苯甲醛b.1开始的总收率为48％，并且通过lc/ms和1h nmr判断的产物纯度为》98％。
[0434]
手性scf方法：(s)-对映体，2.12min；(r)-对映体，2.79min。
[0435]
实施例2：(2s)-2-(4-溴-2-(异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸的合成
[0436]
(2s)-2-(4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸甲酯b.5的合成
[0437]
将dmf(595ml)添加到(s,e)-2-(4-溴-2-((羟基亚氨基)甲基)苯氧基)丙酸甲酯b.4(119g)中并将温度调节至20℃。添加n-氯琥珀酰亚胺(16.0g，0.3eq)并将反应在15-30℃下搅拌20分钟。以4等份每5分钟添加n-氯代琥珀酰亚胺(4x 10.5g，4x 0.2eq)，保持温度在20-30℃之间，并将反应在15-30℃下搅拌20分钟。将反应冷却至0-5℃并添加丁基乙烯基醚(56.6ml，1.1eq)，随后在0-5℃下经1小时滴加三乙胺(54.9ml，1.0eq)。将反应在0-5℃下搅拌12小时，然后在5分钟内添加水(1.19l)。将产物用甲基叔丁基醚(2x 600ml)萃取，并将
有机相用10％w/w盐水(2x 350ml)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩以得到(2s)-2-(4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸甲酯b.5，为非对映异构体的大约1:1混合物(157.1g，定量)，为琥珀色油。
[0438]
(2s)-2-(4-溴-2-(异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸b.6的合成
[0439]
将(2s)-2-(4-溴-2-(4-丁氧基-4,5-二氢异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸酯b.5(151g)溶解在乙酸(755ml)并在15-25℃下添加水(226ml)。将反应加热至回流(约107℃)48小时或直到过程内控制显示反应完成。将反应冷却至15-25℃并添加水(1.5l)。将产物用甲基叔丁基醚(755ml然后450ml)萃取，并且将合并的有机相用10％w/w盐水(3x 450ml)洗涤。蒸馏有机相，留下大约4体积，然后添加甲苯(1.5l)。蒸馏有机相，留下大约5体积，然后添加甲苯(750ml)。蒸馏有机相，留下大约4体积，然后冷却至80-90℃并过滤。将有机相冷却至50-55℃，加入晶种。将溶液在50-55℃下搅拌30分钟，在12小时内冷却至0-5℃，在0-5℃下搅拌5小时，然后过滤，甲苯(150ml)和正庚烷(2x 300ml)洗涤。将固体在40℃下干燥直至质量不再发生变化，得到(2s)-2-(4-溴-2-(异噁唑-3-基)苯氧基)丙酸b.6，为米色固体(83.9g，71％)，通过lc/ms和1h nmr测定纯度为》98％，并且通过手性hplc确定对映异构体过量为》98％。
[0440]
实施例3：使用自动膜片钳在cho细胞中表达的人clc-1同种型上筛选化合物
[0441]
这些实验的研究目标是评估化合物如何影响cho细胞中表达的人clc-1通道的开放概率和电流幅度。使用自动膜片钳系统进行实验，该系统允许对全细胞膜片以及细胞内和细胞外添加化合物进行高通量测试。
[0442]
自动电压钳测量
[0443]
使用qpatch 16系统(sophion bioscience，ballerup，丹麦)在室温下进行自动全细胞膜片钳实验。在qassay软件(版本5.6，odense)中进行数据采集和分析。
[0444]
全细胞clc-1电流的电压方案和分析
[0445]
为了在全细胞膜片中诱发clc-1电流，膜电位最初从-30mv的保持电位阶跃到 60mv，持续100ms，然后阶跃到 120mv到-140mv范围内的各种测试电压(扫描)，步阶为20mv，持续300ms。为了获得尾电流，在每个测试电压后，将膜电位阶跃到-100mv，持续300ms，然后在扫描之间弛豫到-30mv，持续2sec(图1)。
[0446]
通过将300ms阶跃开始和结束时的平均电流密度相对于膜电位绘图来获得全细胞瞬时和稳态电流幅度的i/v关系(图2)。
[0447]
为了确定相对总开放概率(p0)，将瞬时尾电流相对于在最正电压阶跃之后获得的最大尾电流进行归一化，并相对于测试电压绘图。然后将来自每个全细胞膜片的归一化的尾电流图拟合到玻尔兹曼函数，允许确定半激活电压(v
1/2
，图3)。
[0448]
溶液
[0449]
对于自动膜片钳实验，细胞外溶液包含：2mm cacl2、1mm mgcl2、10mm hepes、4mm kcl、145mm nacl、10mm葡萄糖，ph用naoh(2m)调节至7.4。使用蔗糖将摩尔渗透压浓度(osmolality)调节至～320。
[0450]
细胞内溶液包含：80mm csf、60mm cscl、5/1mm koh/egta、10mm hepes、10mm nacl，ph用naoh(2m)调节至7.2。使用蔗糖将摩尔渗透压浓度调节至～320mosm。
[0451]
细胞系信息：
[0452]
膜片钳实验中使用的细胞是组成性地表达人clc-1通道的中国仓鼠卵巢细胞(cho)。被用于产生该细胞系的cdna编码的氨基酸序列与genbank登录号nm_000083.2的翻译序列相同。细胞由charles river(目录ct6175，cleveland oh，usa)生产，为冷冻保存的形式。在解冻后直接对细胞进行实验(每次实验中使用3x 106个细胞)。
[0453]
测试方案
[0454]
为了评价化合物对clc-1的作用，当直接应用于细胞膜的细胞内侧时，从将化合物添加到细胞内溶液中的全细胞膜片中确定半激活电压v
1/2
，然后将其与从仅将载体添加到细胞内溶液中的对照细胞膜片中确定的v
1/2
进行比较。此外，通过在交换细胞外溶液以含有化合物之前和之后确定v
1/2
和稳态电流幅度来评价细胞外添加的化合物的作用。
[0455]
clc-1通道的半激活电压的差值δv
1/2
被确定为用化合物进行细胞内处理的细胞膜片与对照细胞膜片之间的差值，并报告于下表1中。δv
1/2
的正偏移反映了被测化合物对clc-1通道的抑制。p-值《0.05被认为是显著的。
[0456]
表1：半激活电压v
1/2
的偏移
[0457][0458]
实施例4：原位肌肉收缩特性的测量
[0459]
在存在和不存在化合物的情况下，在12周龄的雌性lewis大鼠中测量等长(isometric)后肢力。
[0460]
将大鼠置于异氟烷(2-4％)麻醉下，插管并随后连接到微型呼吸机(microvent 1，hallowell emc，us)。将两个刺激电极通过皮肤插入以刺激坐骨神经。在踝的近端做一个小切口，以暴露跟腱，将其用棉线系上，并连接到位置可调(游标控制)的力传感器(fort250，world precision instruments)。然后在连接的棉线的远端切断跟腱。将大鼠放在加热垫上，为了防止踝背屈肌(dorsiflexor)收缩造成运动赝象(artefact)，用胶带将脚固定在踏板上。
[0461]
通过(在超最大电压条件下)向神经施加电流并记录肌肉产生的力来评估肌肉收缩性质。当通过2hz刺激来评估时，肌肉被拉伸，直到获得最大的力。在12hz(抽搐)、10次脉冲下每30秒测量一次等长力，在80hz(强直)下每5分钟测量一次，持续1秒(80次脉冲)。在整个实验过程中都采用了这种刺激模式，除了在少数情况下80hz刺激被12hz(10次脉冲)替代。通过以可调节的输注速度以0.1mg/kg的浓度恒速输注顺阿曲库铵(cisatracurium)(nimbex，glaxosmithkline)，来部分抑制神经肌肉传递，对每只动物进行单独调整，以获得对在第4次脉冲以12hz刺激产生的力的约5％的抑制水平。当神经肌肉抑制水平稳定时，以选定的浓度静脉注射测试制品。根据测试制品增加由施加的刺激模式产生的力的能力来评
估测试制品的作用。在增加力本身的能力(强直，80hz，刺激)和各个抽搐峰值(12hz刺激)之间的比率方面评估作用。注射测试制品后监测作用至少1小时。此外，如果可能，记录从注射测试制品到对力产生最大作用(抽搐和强直两者)的时间以及该作用消失(回到基线)的时间。适当时停止输注神经肌肉阻滞剂，继续刺激模式，并监测力恢复到对照水平。在仍然完全镇静的情况下通过颈椎脱位处死动物。
[0462]
将(2s)-2-[4-溴-5-氟-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]丙酸以24.6mg/kg静脉注射给药。强直力的平均增加为46.2％(3次实验)。
[0463]
将2-[4-溴-2-(1,2-噁唑-3-基)苯氧基]乙酸以44.8mg/kg静脉注射给药。强直力的平均增加为57.7％(2次实验)。
[0464]
这表明本发明的化合物可以在体内恢复已被神经肌肉阻滞剂部分抑制的肌肉的力。