吡咯并嘧啶衍生物及其应用的制作方法

1.本发明属于药物化学领域，具体地，本发明涉及吡咯并嘧啶衍生物，更具体地，本发明涉及吡咯并嘧啶衍生物及其制备方法，以及其在制备药物中的应用。


背景技术：

2.自分泌运动因子(autotaxin，缩写为atx)是一种分泌型糖蛋白，具有磷酸二酯酶(pde)活性，是胞外焦磷酸酶/磷酸二酯酶(enpp)家族的一员，因此也称作enpp2。atx还具有溶血磷脂酶d(lysopld)活性，能够将溶血磷脂酰胆碱(lpc)水解为具有生物活性的溶血磷脂酸(lpa)。lpa是影响许多生物和生物化学过程的细胞内脂质介质。
3.研究表明，在病理条件下，抑制atx可降低lpa水平，从而为未满足的临床需求提供治疗效益，包括癌症、淋巴细胞归巢、慢性炎症、神经性疼痛、纤维化、血栓形成、胆汁淤积性瘙痒，或通过lpa水平升高和/或atx激活而诱导、介导和/或传播的纤维化疾病。
4.在各种炎症性病症中观察到atx-lpa信号传导途径的上调。例如，lpa的促炎作用包括肥大细胞脱颗粒、平滑肌细胞收缩和细胞因子从树突细胞中释放。作为其在炎症中的一般作用的表现，在小鼠角叉菜胶气囊模型(该模型用于开发抗炎药，包括用于关节炎的环氧化酶抑制剂)中观察到atx-lpa信号传导途径的上调。此外，已观察到在使用atx抑制剂的大鼠角叉菜胶气囊模型中血浆和气囊中lpa减少，证实在炎症期间atx作为lpa主要来源的作用。作为在炎症性疾病中的另一种一般性的作用，已经证实lpa与淋巴细胞迁移趋化因子之间存在“协同作用”。在慢性炎症部位发现atx高表达。已经证实静脉内注射酶失活的atx抑制了t-细胞归巢至淋巴组织，可能是通过与内源性atx竞争并且发挥显性负效应来实现。在一些情况中，atx有利于淋巴细胞进入淋巴样器官。因此，atx抑制剂可以阻断淋巴细胞迁移入次级淋巴样器官并且在自身免疫疾病中具有有益性。
5.在类风湿性关节炎中，证实atx在来自类风湿性关节炎(ra)患者的滑膜纤维母细胞中的表达增加，并且消除间质细胞(包括滑膜纤维母细胞)中的atx表达导致类风湿性关节炎小鼠模型中的症状减弱。照此，充分地确立了自分泌运动因子在类风湿性关节炎中的作用。
6.lpa还可以通过其同源受体之一lpa1上调疼痛相关蛋白质，atx介导的lpa生物合成的靶向抑制可提供预防神经损伤引起的神经性疼痛的机制，如骨关节炎相关的疼痛。已经观察到，自分泌运动因子抑制剂减少lpa和pge2并且还减轻了炎性痛。还有研究表明，atx介导的lpa生物合成的靶向抑制可能是预防神经损伤引起的神经性疼痛的新机制。
7.在炎症消退和组织损伤修复之后，组织通常恢复至其最初的状态。过度的不受控制的组织修复会导致通常所称纤维变性的情形。纤维变性的特征在于细胞外基质成分的过度沉积和成纤维细胞的过度生长。纤维变性可发生于所有组织，但是在经常受到化学和生物损伤的器官包括肺、皮肤、消化道、肾和肝中尤其普遍。纤维变性常常严重危害器官的正常功能。
8.在某些情形下，lpa刺激肝星形细胞增殖，同时抑制肝细胞中的dna合成。lpa水平
和血清atx活性在患有慢性丙型肝炎的患者中有所升高。在具有不同肝损伤的兔血液中，血浆lpa浓度和血清atx活性在四氯化碳诱发的肝纤维化中相对较高。血浆lpa浓度和血清atx活性在不同肝损伤中随其严重程度有所升高。
9.肺纤维化是以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质聚集并伴炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类肺疾病的终末期改变，也就是正常的肺泡组织被损坏后经过异常修复导致结构异常(疤痕形成)。多种原因引起肺脏损伤时，间质会分泌胶原蛋白进行修补，如果过度修复，即成纤维细胞过度增殖和细胞外基质大量聚集，就会形成肺纤维化。
10.lpa信号特异性的通过lpa1受体对上皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞具有促纤维化作用：该受体的遗传缺失降低了肺纤维化模型中的上皮细胞凋亡、血管渗漏和成纤维细胞的积累。
11.特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，ipf)是一种病因不明，以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱为特征的慢性、进行性、纤维化性间质性肺炎，在影像学和病理组织学中主要表现为普通型间质性肺炎。随着病程进展它会使肺组织纤维化，患者肺部组织会变厚、变硬，以致形成永久疤痕，或使患者的肺呈蜂巢状，又被形象地称为“蜂窝肺”或“丝瓜筋肺”。这种慢性进行性病变会导致肺功能不可逆性持续下降。有50％的患者在确诊后，平均生存期仅2.8年，因此特发性肺纤维化又被称为“类肿瘤疾病”。目前已有的药物治疗存在不良反应多、治疗效果差的问题；非药物治疗手段主要是肺移植手术，但器官移植价格昂贵且资源有限，并且存在一定的临床风险。
12.有证据表明，由lpa刺激的纤维母细胞增殖和收缩以及细胞外基质分泌促进其它气道疾病的纤维增殖，例如慢性支气管炎和间质肺疾病以及重度哮喘中存在的细支气管周纤维变性。lpa在纤维变性间质肺疾病和闭塞性细支气管炎中起作用，其中胶原和肌纤维母细胞均增加。与ipf(特发性肺纤维变性)相关的研究表明患者的支气管肺泡灌洗液中lpa水平增加。进一步的lpa1敲除和抑制剂研究揭露了lpa在肺中纤维变性过程中的关键作用，并且由使用支气管上皮细胞和巨噬细胞中缺乏atx的细胞特异性敲除小鼠的研究补充。已显示这些小鼠对肺纤维变性模型敏感性较小。lpa在其它纤维变性疾病(肾和皮肤)中的作用基于类似类型的观察。lpa在肺重塑中的作用与lpa对肺纤维母细胞(通过lpa1)和上皮细胞(通过lpa2)两者的作用有关，已显示lpa2在纤维变性病症下在上皮细胞中的tgfβ活化中起关键作用。lpa在重塑和纤维变性中的作用与copd、ipf和哮喘有关，其中肺重塑作为长期结果的疾病将限制肺功能。最后，在对肺疾病的关注中，在小鼠中，atx是似乎与肺功能差异相关的三种主要定量性状位点之一。
13.已有研究发现lpa在卵巢癌患者早期和晚期的血浆和腹水中浓度升高。lpa水平升高、lpa受体表达和反应的改变可能是卵巢癌发病、进展或结果的原因之一。lpa还与前列腺癌、乳腺癌、黑素瘤癌、头颈癌、肠癌、脑癌和甲状腺癌有关。lpa参与肿瘤细胞的增殖和侵袭邻近组织，导致转移。这些生物学和病理生物学过程是由g蛋白偶联受体的lpa激活而启动的。可以通过抑制与lpa生物合成有关的酶，如atx，来降低lpa水平，从而治疗肿瘤患者。
14.在血管生成过程中，atx与其他血管生成因子共同导致血管形成。血管生成在肿瘤生长过程中为肿瘤提供营养。因此，抑制血管生成可以说是癌症和肿瘤治疗的重要出发点。
15.专利申请wo2014202458a1中公开了atx-lpa信号传导在不同病理生理学情况中的作用，例如增殖性疾病、神经性疼痛、炎症、自身免疫疾病、纤维化、淋巴结中的淋巴细胞追
踪、肥胖、糖尿病或胚胎血管形成。
16.目前癌症、纤维变性疾病、增殖性疾病、炎症性疾病、自身免疫疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤病学障碍和/或异常血管生成相关疾病领域的治疗取得了一定的进展但仍存在不足。目前已上市的ipf治疗药有吡非尼酮和尼达尼布。吡非尼酮存在肝功能损害(如肝功能衰竭、黄疸)、超敏反应(如面部肿胀、喉头水肿、呼吸困难、喘憋等)、严重的胃肠道反应，光遗传毒性试验显示可能引起染色体结构异常、光照后有导致皮肤致癌的可能。尼达尼布存在腹泻、恶心、腹痛的不良反应，胃肠道反应的发生率高达50％，常见不良反应还有体重下降、食欲减退、肝损伤、出血等。接受吡非尼酮和尼达尼布治疗的患者中，因严重不良事件导致停药的概率分别为20.9％和26.3％。ipf患者的生活质量会受到严重影响，而临床试验中吡非尼酮和尼达尼布都不能改善患者生活质量。虽然这两种药物都可能改善整体结果，但只能延缓病程却不能逆转肺纤维化，因此重度特异性肺纤维化患者可能无法受益。目前治疗ipf药物开发进展较快的glpg-1690，虽然表现出逆转病程的趋势，但是存在酶活性低、临床用药量大、用药依从性差的问题。因此，目前的疗法并不令人满意，仍有大量的患者需要新的活性更高、药效更好的治疗方法，在更大程度上减缓甚至逆转疾病进程，提高用药依从性，让更多的特发性肺纤维化患者受益。
17.鉴于此，本发明在现有技术基础上设计了式(i)所示化合物，其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物或前药，以提供结构新颖、药代动力学性质更优良、药效更好、成药性强的atx抑制剂，用于有效治疗atx相关的疾病、病症，包括但不限于癌症、代谢疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、纤维变性疾病、肺纤维化、肝纤维化、增殖性疾病、炎性疾病、疼痛、骨关节炎相关的疼痛、自身免疫疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤病学障碍和/或异常血管生成相关疾病的产品。


技术实现要素：

18.本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。
19.根据本发明的一个方面，本发明提出了一种化合物，其为式(i)所示化合物，或者式(i)所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药：
[0020][0021]
其中：
[0022]
m1、m2、m3、m4、m5中至少有1个为-c(r1)＝，且至少有1个为-n(r2)-或-n＝；
[0023]
r1和r2相同或不同，独立地选自：不存在、-h、-cn、卤素、任选被卤素或c
1-6
烷基取代的以下基团：c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷基、c
3-6
环烷氧基；
[0024]
r3、r4、r5和r6相同或不同，每个r3、r4、r5和r6独立地选自h、-cn、卤素、任选被卤素或c
1-6
烷基取代的以下基团：c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷基、c
3-6
环烷氧基；
[0025]
r4还可以和z、以及r5形成一个5～6元杂环烷基，其中5～6元杂环烷基内可以含有一个或多个n、o、s原子，并且所述5～6元杂环烷基上可以进一步被一个或多个的c
1-6
烷基、卤素所取代；
[0026]
r3还可以和r1或r2形成一个5～6元环烷基或5～6元杂环烷基，其中5～6元杂环烷基内可以含有一个或多个n、o、s原子，并且5～6元环烷基或5～6元杂环基上可以进一步被一个或多个烷基、卤素所取代；
[0027]
z选自-o-、-s-、
[0028]
m选自0-6的整数；n选自0-6的整数；
[0029]
y1和y2相同或不同，每个y1和y2独立地选自-h、-cn、卤素；
[0030]
且所述所述式(i)化合物，或者式(i)所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学可接受的盐或前药不包括下列化合物或其对映异构体、互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学可接受的盐或前药：
br、-cf3、-ch2x、-chx-ch2x、-chx-chx-ch2x、每个x独立地选自-h、-f、-cl、-br，其余变量如本发明所定义。
[0037]
在本发明的一些方案中，式(i)中，r1和r2独立地选自h、-f、-cl、-cf3、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3、其余变量如本发明所定义。
[0038]
在本发明的一些方案中，式(i)中，选自选自或或或或其余变量如本发明所定义。
[0039]
在本发明的一些方案中，式(i)中，每个r3、r4、r5或r6独立地选自h、-cn、卤素、任选被1-6个卤素和/或c
1-6
烷基取代的c
1-6
烷基、任选被卤素取代的c
3-6
环烷基，其余变量如本发明所定义。
[0040]
在本发明的一些方案中，式(i)中，每个r3、r4、r5或r6独立地选自c
1-3
烷基，所述c
1-3
烷基任选可以被1-3个卤素和/或c
1-3
烷基取代，其余变量如本发明所定义。
[0041]
在本发明的一些方案中，式(i)中，每个r3、r4、r5或r6独立地选自-h、-cn、-x、-ch2x、-chx-ch2x、-chx-chx-ch2x、-cf3，每个x独立地选自-h、-f、-cl、-br，其余变量如本发明所定义。
[0042]
在本发明的一些方案中，式(i)中，每个r3、r4、r5或r6独立地选自h、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3，其余变量如本发明所定义。
[0043]
在本发明的一些方案中，式(i)中，r4还可以和z、以及r5形成一个5～6元杂环烷基，其中5～6元杂环烷基内可以含有一个或多个n、o、s原子，并且所述5～6元杂环烷基上可以进一步被一个或多个的c
1-6
烷基、卤素所取代，其余变量如本发明所定义。
[0044]
在本发明的一些方案中，式(i)中，r3还可以和r1或r2形成一个5～6元环烷基或5～6元杂环烷基，其中5～6元杂环烷基内可以含有一个或多个n、o、s原子，并且5～6元环烷基或5～6元杂环基上可以进一步被一个或多个烷基、卤素所取代，其余变量如本发明所定义。
[0045]
在本发明的一些方案中，式(i)中，m＝1,2,3或4；n＝0,1,2或3，其余变量如本发明所定义。
[0046]
在本发明的一些方案中，式(i)中，每个r3、r4、r5或r6独立地选自h、-cn、-f、-cl、甲基、乙基、-ch2f、-ch2cl、-cf3、-ch2cf3、-ch2ch2cl，其余变量如本发明所定义。
[0047]
在本发明的一些方案中，当z是o或s时，r4还可以和z、以及r5形成一个五元杂环烷基，并且所述五元杂环烷基上可以进一步被一个或多个取代基取代，所述取代基选自-ch3、-f或cl，其余变量如本发明所定义。
[0048]
在本发明的一些方案中，式(i)中，m＝1,2或3；n＝0,1或2，其余变量如本发明所定义。
[0049]
在本发明的一些方案中，式(i)中，选自选自选自其余变量如本发明所定义。
[0050]
在本发明的一些方案中，式(i)中，选自选自选自其余变量如本发明所定义。
[0051]
根据本发明的实施方案，本发明化合物包含下式所示的化合物，或者下式所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学可接受的盐或前药：
[0052]
[0053][0054]
根据本发明的实施方案，本发明化合物包含下式所示的化合物，或者下式所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学可接受的盐或前药：
[0055][0056]
本发明化合物可以存在互变异构现象。本发明包括化合物的所有互变异构形式，无论处于平衡状态还是一种形式占优势，本发明均包含每种互变异构形式。
[0057]
根据本发明的又一方面，本发明提出了一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效剂量的至少一种本发明式(i)所述化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物或前药。
[0058]“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
[0059]
根据本发明的又一方面，本发明提出了式(i)所示化合物，其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物或前药，或含有式(i)所示化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物或前药的药物组合物在制备治疗与atx相关疾病的药物中的用途。
[0060]
在本发明的一些方案中，其中所述的atx相关疾病选自癌症、代谢疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、纤维变性疾病、间质性肺病、增殖性疾病、炎症性疾病、疼痛、自身免疫疾病、呼吸系统疾病、心血管疾病、神经变性疾病、皮肤病学障碍和/或异常血管生成相关的疾病。
[0061]
在本发明的一些方案中，其中所述的atx相关疾病选自间质性肺病、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化。
[0062]
在本发明的一些方案中，选自特发性肺纤维化。根据本发明的实施例，本发明化合物在治疗肺纤维化，特别是特发性肺纤维化方面有显著优势。
[0063]
在本发明的一些方案中，其中所述的atx相关疾病选自代谢疾病。
[0064]
在本发明的一些方案中，选自ii型糖尿病、非酒精性脂肪肝炎。根据本发明的实施例，本发明化合物在治疗代谢疾病，特别是ii型糖尿病、非酒精性脂肪肝炎方面有显著优势。
[0065]
在本发明的一些方案中，其中所述的atx相关疾病选自神经性疼痛、炎症性疼痛。
[0066]
在本发明的一些方案中，选自骨关节炎相关的疼痛。根据本发明的实施例，本发明化合物在治疗骨关节炎相关的疼痛方面有显著优势。
[0067]
在本发明的一些方案中，其中所述的atx相关疾病选自癌症。根据本发明的实施例，本发明化合物在治疗癌症方面有显著优势。
[0068]
术语定义和说明
[0069]
除非另有说明，本技术说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本技术说明书记载的范围内。
[0070]
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。
[0071]
除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、nmr、ir和uv/vis光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本技术的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，ch2o等同于och2。
[0072]
本技术说明书和权利要求书记载的数值范围，当该数值范围被理解为“整数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数。例如，“1～6的整数”应当理解为记载了0、1、2、3、4、5和6的每一个整数。当该数值范围被理解为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“1～10的数”应当被理解为不仅记载了1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。
[0073]
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0074]
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。
[0075]
除了药学可接受的盐外，本发明还考虑其他盐。它们可以在化合物纯化中或在制备其它药学上课接受的盐中充当中间体或可用于本发明化合物的鉴别、表征或纯化。
[0076]
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。本发明使用的立体化学定义和惯例大体上按照s.p.parker，ed.，mcgraw-hill dictionary of chemical terms(1984)mcgraw-hill book company，new york；and eliel，e.and wilen，s.，“stereochemistry of organic compounds”，john wiley&sons，inc.，new york，1994来定义。
[0077]
依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀d和l或r和s来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀d和l或( )和(
–
)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(
–
)或l表示化合物是左旋的。前缀为( )或d的化合物是右旋的。就给定的化学结构而言，除了这些立体异构体互为镜像外，这些立体异构体是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体，并且所述异构体的混合物通常称作对映异构体的混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或方法中没有立体选择性或立体特异性时，可出现所述外消旋混合物或外消旋体。烯烃、c＝n双键等的许多几何异构体也可以存在于本文所述的化合物中，且所有这种稳定的异构体在本发明中均被考虑。当本文所描述化合物含有烯双键时，除非另外说明，否则，这种双键包括e和z几何异构体。如果化合物中含有二取代的环烷基，环烷基的取代基可能为顺式或反式(cis-或trans-)构型。
[0078]
当将本发明式中与手性碳的键描写直成线时，应当理解为，手性碳的(r)和(s)两种构型和由此产生的其对映体纯的化合物和混合物两者包括在该通式范围内。本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自maehr，j.chem.ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。
[0079]
旋光性的(r)-或(s)-异构体可使用手性合成子或手性制剂制备，或使用常规技术拆分。含有不对称取代的碳原子的本发明化合物能够以旋光活性形式或外消旋形式分离。化合物的外消旋混合物的拆分可以通过本领域已知的许多方法中的任一种来进行。示例性方法包括使用手性拆分酸的分级重结晶，该手性拆分酸是旋光活性的成盐有机酸。用于分级重结晶方法的适合的拆分剂例如是旋光活性酸，例如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或各种旋光活性樟脑磺酸如β-樟脑磺酸的d和l形式。适合于分级结晶方法的其它的拆分剂包括立体异构纯形式的α-甲基-苄胺(例如，s和r形式或者非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、降麻黄碱、麻黄碱、n-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1，2-二氨基环己烷等。外消旋混合物的拆分还可以通过在填充有旋光活性拆分剂(例如，二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱子上洗脱来进行。可以采用高效液相色谱(hplc)法也可以采用超
临界流体色谱法(sfc)进行。具体方法的选择以及洗脱条件、色谱柱的选择可以由本领域技术人员根据化合物的结构以及试验结果选择。进一步的，还可以使用已知构型的光学纯的起始原料或试剂，通过立体有机合成，获得本发明所描述化合物的任何对映体或非对映体。
[0080]
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
[0081]
本发明的实例中，质子可以占据杂环体系的两个或多个位置的环状形式，例如，1h-和3h-咪唑，1h-、2h-和4h-1，2，4-三唑，1h-和2h-异吲哚，以及1h-和2h-吡唑。互变异构形式可以通过适当的取代而处于平衡或空间上固定于一种形式。例如：
[0082][0083]
由于共振的原因，三氮唑上氮的氢可以在三个氮的任何一个上，所以命名会有所区别，但这三种形式表示的其实是一种化合物。
[0084]
术语“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
[0085]
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效剂量”、“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
[0086]
术语“活性成分”、“治疗剂”、“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
[0087]
术语“溶剂化物”指本发明化合物或其盐包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂，当溶剂为水时，则为水合物。
[0088]
术语“前药”是指可以在生理条件下或者通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰在该化合物中的功能基团来制备，该修饰可以按常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。前药包括本发明化合物中的一个羟基或者氨基连接到任何基团上所形成的化合物，当本发明化合物的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂而分别形成游离的羟基、游离的氨基。
[0089]
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘(2h)，氚(3h)，碘-125(
125
i)或c-14(
14
c)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
[0090]
术语“c
1-6
烷基”应理解为优选表示具有1～6个碳原子的直连或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“c
1-c3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
[0091]
术语“c
3-6
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～6个碳原子，如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
[0092]
术语“烷氧基”是指通过氧桥连接的具有所示碳原子数的以上定义的烷基。烷氧基的实例包括，但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和仲戊氧基。
[0093]
术语“c
1-6
烷氧基”应理解为-o-(c
1-6
烷基)，其中“c
1-6
烷基”具有上述定义。
[0094]
术语“c
3-6
环烷氧基”应理解为-o-(c
3-6
环烷基)，其中“c
1-6
烷基”具有上述定义。
[0095]
本文所用术语“卤代基”或“卤素”指氟、氯、溴和碘。
[0096]“卤代烷基”指包括具有特定数目的碳原子、被一或多个卤素取代的支链和直链的饱和脂族烃基(如-cvfw，其中v＝1至3，w＝1至(2v 1))。卤代烷基的实例包括，但不限于三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2，2，2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。
[0097]
术语“5-6元杂环烷基”意指饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-5个独立选自n、o和s的杂原子。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1h-吡咯基、4h-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4h-[1,4]噻嗪基。根据本发明，所述杂环基是无芳香性的。
[0098]
有益效果
[0099]
根据本发明的具体示例，本发明所述式(i)所示化合物或者式(i)所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药，对atx酶有很好的抑制作用。
[0100]
与对照化合物相比，本发明化合物热力学溶解度显著升高，预期在人体内肠道吸收程度高，口服给药暴露量较高，可降低临床给药剂量，提高临床顺应性。
[0101]
与对照化合物相比，本发明化合物具有显著的心脏安全优势、更为优良的肝代谢稳定性和药代动力学性质，可降低临床给药剂量和给药频次，降低临床给药的毒副作用，提高临床顺应性。
[0102]
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
[0103]
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪
器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0104]
本发明的实施例提供了式(i)所示化合物，其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药，制备式(i)所示化合物或其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药的方法和中间体、药物组合物、以及本发明的化合物和药物组合物在制备药物中的用途。
[0105]
本发明所述的各反应步骤所使用的反应溶剂没有特别限制，任何在一定程度上能溶解起始原料并且不抑制反应的溶剂均包含在本发明中。另外，本领域的许多类似改动，等同替换，或等同于本发明所描述的溶剂，溶剂组合，及溶剂组合的不同比例，均视为本发明的包含范围。
[0106]
化合物的结构是通过核磁共振(nmr)和/或液质联用(lc-ms)来确定的。nmr位移的单位为10-6
(ppm)。nmr测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(tms)。
[0107]
液质联用(lc-ms)由watersacquityh-classuplc-qda质谱仪测定，使用acquityuplcbehc18，2.1*50mm，1.7μm色谱柱监测。梯度洗脱条件：以1.0ml/min流速，95-5％溶剂a1和5-95％溶剂b1，然后95％b1和5％a1保持0.5min，百分数为某一溶剂占总溶剂体积的体积百分数。其中溶剂a1：0.1％甲酸的水溶液；溶剂b1：0.1％甲酸的乙腈溶液。百分数为溶质占溶液的体积百分数。
[0108]
本发明的缩写定义如下：
[0109]
n：当量浓度，例如2n盐酸表示2mol/l盐酸溶液
[0110]
m：mol/l，例如正丁基锂(14.56ml，29.1mmol，2.5m的正己烷溶液)表示摩尔浓度为2.5mol/l的正丁基锂的正己烷溶液
[0111]
dess-martin氧化剂：又称戴斯-马丁氧化剂、戴斯-马丁试剂，cas登记号为87413-09-0，催化剂及助剂一种。
[0112]
aq：水溶液
[0113]
dioxane：1,4-二氧六环
[0114]
hf：氟化氢
[0115]
thf：四氢呋喃
[0116]
nah：钠氢，氢化钠
[0117]
dmf：n,n-二甲基甲酰胺
[0118]
dcm：二氯甲烷
[0119]
meoh：甲醇
[0120]
t3p：丙基磷酸三环酸酐，亦即2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦-2,4,6-三氧化物或者1-丙基磷酸酐
[0121]
nmm：n-甲基吗啡啉
[0122]
dma：n,n-二甲基乙酰胺
[0123]
dipea：二异丙基乙胺，亦即n,n-二异丙基乙胺
[0124]
hplc：高效液相色谱
[0125]
sfc：超临界流体色谱
[0126]
dmso：二甲基亚砜
[0127]
nadph：还原型辅酶ii
[0128]
hepes：(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)
[0129]
egta：乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸
[0130]
ic
50
：半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。
[0131]
rt：保留时间
[0132]
除非作出相反的指示，本文例举的化合物使用chembiodraw ultra 13.0命名和编号。对照例1：对照化合物及其制备
[0133][0134]
对照化合物参考专利申请wo2014110000a1合成。
[0135]
下文测试例的对照化合物均指对照例1所述化合物。
[0136]
制备1：中间体a的合成
[0137]
n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(中间体a)
[0138]
目标化合物中间体a的合成路线如下所示：
[0139][0140]
第一步：2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(化合物a-3)的合成
[0141]
将原料2-氯-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(化合物a-1)(10g，39.2mmol)，n,n-二异丙基乙胺(15.16g，117.6mmol)和化合物a-2(4.6g，39.2mmol)加入到n-甲基吡咯烷酮(50ml)中，加热至95℃，搅拌48h。将反应液冷却至室温，加入乙酸乙酯(1l)，有机相分别用水(200ml)，饱和碳酸氢钠水溶液，饱和食盐水(200ml
×
2)洗涤，分液。有机相用无水硫酸钠干燥，将溶液旋干后加入乙酸乙酯(50ml)重结晶，过滤，得化合物a-3(8g，产率59％)。
[0142]
第二步：n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(中间体a)的合成
[0143]
将原料2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸叔丁酯(125mg，0.36mmol)室温加入到二氯甲烷(3ml)中，加入4m的盐酸二氧六环溶液(1ml)，室温搅拌2h，将溶液浓缩得中间体a，黄色固体(113mg，产率98％)。
[0144]
lc-ms m/z：253.1[m h]

。
[0145]
实施例1：化合物1、化合物1s和化合物1r的合成
[0146]
2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,
7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物1)
[0147]
(s)-2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物1s)
[0148]
(r)-2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物1r)
[0149]
目标化合物1、化合物1s和化合物1r的合成路线如下所示：
[0150][0151]
第一步：3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-甲基丙-1-醇(化合物1b)的合成
[0152]
向2-甲基丙烷-1,3-二醇(化合物1a)(15g，166mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中加入叔丁基二甲基氯硅烷(25.09g，166mmol)和三乙胺(33.7g，333mmol)，将混合物在25℃下搅拌12小时。加碳酸氢钠水溶液(50ml)淬灭，用水(200ml)稀释，然后用用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，浓缩合并有机层，得到粗品，通过柱纯化得到化合物1b(26g，收率76.5％)。
[0153]
第二步：3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-甲基丙醛(化合物1c)的合成
[0154]
将dmso(4.51ml，63.6mmol)加入二氯甲烷(60ml)，冷却至-78℃，然后滴加草酰氯(2.77ml，31.8mmol)，保持内部温度低于-60℃。在-78℃下搅拌30分钟，然后加入化合物1b(5g，24.46mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液，保持温度低于-70℃。继续搅拌2小时，并将混合物逐渐温热至-55℃，随后在15分钟内加入干燥的三乙胺(17.05ml，122mmol)。使反应温度升至室温并加入饱和氯化铵溶液(50ml)，分离有机层并用盐水(50ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到化合物1c，浅黄色油状物(4.9g，收率98.9％)直接用于下一步反应。
[0155]
第三步：叔丁基((4,4-二溴-2-甲基丁-3-烯-1-基)氧基)二甲基硅烷(化合物1d)的合成
[0156]
将化合物1c(11g，54.4mmol)溶于二氯甲烷(250ml)中，在0℃下分批加入三苯基膦
(57.0g，217mmol)和四溴甲烷(36.1g，109mmol)。在室温下搅拌1小时后，加入石油醚(1200ml)并将悬浮液通过硅藻土过滤并将滤饼用石油醚(3
×
300ml)洗涤。将滤液真空浓缩。通过快速色谱法(石油醚/乙醚(v/v)＝100/1)纯化，得到化合物1d，无色油状物(18g，收率92％)。
[0157]
第四步：叔丁基二甲基((2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)硅烷(化合物1e)的合成
[0158]
在氮气保护下，将化合物1d(11g，30.7mmol)溶于无水四氢呋喃(250ml)中，冷却到-78℃，在30分钟内滴加正丁基锂(41.9ml，92mmol)。后在室温下搅拌溶液1小时，加入饱和碳酸氢钠溶液(400ml)和甲基叔丁基醚(300ml)，分层后，水相用甲基叔丁基醚(3
×
100ml)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过快速色谱法(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝50：1)纯化，得到化合物1e，无色油状液体(3.1g，收率50.9％)。
[0159]
第五步：2-甲基丁-3-炔-1-醇(化合物1f)的合成
[0160]
向化合物1e(5g，25.2mmol)的乙腈(100ml)溶液中加入70％的hf吡啶络合物(5ml)。将混合物室温搅拌14小时，并用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。加入甲基叔丁基醚(100ml)，有机层用饱和食盐水(2
×
20ml)，水(2
×
20ml)洗涤，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，低温真空浓缩，得到化合物1f的粗产品(2.1g，收率99％)。产物不经进一步纯化直接使用。
[0161]
第六步：2-((2-甲基丁-3-炔-1-基)氧基)乙酸叔丁酯(化合物1g)的合成
[0162]
将化合物1f(2.1g，24.97mmol)溶于二氯甲烷(20ml)和40％氢氧化钠水溶液(20ml)的混合溶液中，在0℃下，加入四丁基硫酸氢胺(0.2g，2.5mmol)和2-溴乙酸叔丁酯(5.84g，30.0mmol)，然后将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用水(60ml)稀释，然后用dcm(20ml
×
3)萃取，合并有机层，得到粗品。通过柱纯化(石油醚)纯化粗产物，得到产物化合物1g(2g，收率40.4％)。
[0163]
第七步：2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)乙酸叔丁酯(化合物1h)的合成
[0164]
将化合物1g(0.8g，4.04mmol)溶于dmf(10ml)和meoh(2ml)的混合溶液中，然后在0℃下加入碘化铜(0.077g，0.404mmol)和叠氮基三甲基硅烷(0.930g，8.07mmol)。将混合物在氮气保护95℃下搅拌15小时。将反应混合物浓缩得到粗品。柱分离纯化得到化合物1h(0.6g，收率61.4％)。
[0165]
第八步：2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)乙酸(化合物1i)的合成
[0166]
向化合物1h(0.07g，0.29mmol)的dcm(2ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml，26.0mmol)，将反应混合物在15-20℃下搅拌5小时，然后浓缩得到粗品化合物1i(0.05g，0.27mmol，收率93.1％)。
[0167]
第九步：2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)-1-(2
–
((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物1)的合成
[0168]
在0℃下，向n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(中间体a)(0.105g，0.324mmol)的dmf溶液(3ml)中依次加入化合物1i(0.05g，0.27mmol)和n-乙基-n-异丙基丙-2-胺(0.349g，2.7mmol)。然后在0℃下加入1-丙基磷酸酐(0.129g，0.405mmol，50％的dmf溶液)，缓慢升到室温，在室温下搅拌12小时。用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，然后用水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，浓缩合并的有机层，得到粗品。通过硅胶板(dcm：meoh＝10：1)纯化粗产物，得到化合物1(0.03g,0.072mmol,收
率26.5％)。
[0169]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.35-8.31(d,1h),7.76-7.52(m,2h),7.24-7.15(m,4h),4.65-4.45(m,5h),4.25-4.23(m,2h),3.72-3.63(m,2h),3.36-3.24(m,3h),2.93-2.89(m,2h)，1.28(d,3h).
[0170]
lc-ms m/z：420.4[m h]

。
[0171]
第十步：目标化合物1s和化合物1r的制备
[0172]
将消旋体2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物1)(0.2g)通过sfc拆分，拆分方法为：柱型：amycoat50
×
4.6mm i.d.,3um；流动相：流动相a为co2，流动相b为50％乙醇(含0.05％二乙胺)；梯度洗脱：在co2中的40％乙醇(含0.05％二乙胺)；流速：3ml/min；波长：220nm；柱温：35℃；背压：100bar。得到峰1(保留时间：2.95min)：(s)-2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(目标化合物1s)(25.8mg，100％ee，收率12.9％)和峰2(保留时间：4.52min)(r)-2-(2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(目标化合物1r)(23.9mg，97％ee,收率11.9％)。
[0173]
目标化合物1s：
[0174]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(d,1h),7.73(t,1h),7.66
–
7.52(m,2h),7.27
–
7.08(m,4h),4.68
–
4.50(m,4h),4.22(m,2h),3.63(m,2h),3.28
–
3.14(m,3h),2.90(m,2h),1.26(d,3h).
[0175]
lc-ms m/z：420.3[m h]

。
[0176]
目标化合物1r:
[0177]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(d,1h),7.69(d,1h),7.55(m 2h),7.24
–
7.08(m,4h),4.64
–
4.47(m,4h),4.21(m,2h),3.67(dd,j＝21.3,14.1hz,2h),3.28
–
3.14(m,3h),2.88(m,2h),1.26(d,3h).
[0178]
lc-ms m/z：420.3[m h]

。
[0179]
实施例2：化合物2的合成
[0180]
3-((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯[3,4-d]嘧啶-6-基)丁烷-1-酮(化合物2)
[0181]
目标化合物2的合成路线如下所示：
[0182][0183]
第一步：(e)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯[3,4-d]嘧啶-6-基)丁-2-烯-1-酮(化合物2b)的合成
[0184]
将巴豆酸(化合物2a)(142mg，1.646mmol)，n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(535mg，1.646mmol)，n,n-二异丙基乙胺(2.127g，16.46mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，反应液搅拌冷却至0℃左右，滴加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物(1.257g，1.975mmol，50％n,n-二甲基甲酰胺溶液)，滴加完毕，室温反应3h。加入水(50ml)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1：2)得到化合物2b，浅黄色固体(220mg，收率41.7％)。
[0185]
lc-ms m/z：321.3[m h]

。
[0186]
第二步：1-(2-((2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-(丙-2-炔-1-基氧基)丁-1-酮(化合物2c)的合成
[0187]
将化合物2b(220mg，0.687mmol)溶解在丙炔醇(5ml，84.688mmol)中，加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(21mg，0.137mmol)，升温至60℃反应72h。减压除掉溶剂，残余物硅胶板分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1：3)得到化合物2c，白色固体(100mg，收率38.7％)。
[0188]
lc-ms m/z：377.3[m h]

。
[0189]
第三步：3-((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯[3,4-d]嘧啶-6-基)丁-1-酮(化合物2)的合成
[0190]
氮气保护下，将化合物2c(100mg，0.266mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(3ml)和甲醇(1ml)中，加入l-抗坏血酸钠(105mg，0.531mmol)，室温搅拌30min，再加入叠氮基三甲基硅烷(306mg，2.66mmol)和五水硫酸铜(27mg，0.106mmol)，升温至90℃反应2h。反应液冷却至室温，加入水(30ml)，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇(v/v)＝10：1，氨水)得到化合物2(29.4mg，收率26.4％)。
[0191]1h nmr(400mhz,dmso-d6)：δ8.24(d,1h),7.72(s,1h),7.56(t,1h),7.18-7.09(m,4h),4.67-4.36(m,7h),3.98-3.91(m,1h),3.23-3.17(dd,2h),2.86-2.81(dd,2h),2.71-2.63(m,1h),2.41-2.34(m,1h),1.17-1.14(dd,3h)。
[0192]
lc-ms m/z：420.4[m h]

。
[0193]
实施例3：化合物3的合成
[0194]
2-(2-(1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物3)
[0195]
目标化合物3的合成路线如下所示：
[0196][0197]
第一步：2-氯-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物3b)的合成
[0198]
室温下，将三乙胺(0.289ml，2.072mmol)滴入正在搅拌的n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(200mg，0.615mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中。5分钟后，在0℃下，将氯乙酰氯(81mg，0.713mmol)滴入上述反应液，并在室温下搅拌过夜。监测反应完后，加入蒸馏水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝3:1～1:1)得到化合物3b，淡黄色固体(180mg，产率89％)。
[0199]
第二步：2-(2-(1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)-1-(2-(((2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物3)的合成
[0200]
0℃下，将2-(1h-1,2,3-三唑-1-基)乙醇(30.3mg，0.268mmol)加到nah(9.73mg，0.243mmol)的四氢呋喃(2ml)溶液中，室温搅拌15分钟后，将化合物3b(80mg,0.243mmol)的四氢呋喃(1ml)溶液滴加到上述反应液中，并且室温搅拌3h。lcms监测反应有40％产物生成。反应液用饱和氯化铵溶液淬灭后，直接浓缩。残留物用制备色谱分离得到化合物3，淡黄色固体(8.7mg，产率8.82％)。
[0201]1h nmr(400mhz,meod)δ8.24(d,1h),8.13(s,1h),7.71(d,1h),7.25
–
7.09(m,4h),4.76
–
4.66(m,3h),4.64-4.60(m,2h),4.54(d,2h),4.27(d,2h),4.01(t,2h),3.35-3.31(m,2h),2.90(dd,2h)。
[0202]
lc-ms m/z：406.3[m h]

。
[0203]
实施例4：化合物4的合成
[0204]
3-(1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)丙-1-酮(化合物4)
[0205]
目标化合物4合成路线如下所示：
[0206][0207]
第一步：3-(丁-3-炔-2-基氧基)丙酸甲酯(化合物4b)的合成
[0208]
将nah(1.712g,42.8mmol，60％)小心加入正在搅拌的丁-3-炔-2-醇(3.0g,42.8mmol)的四氢呋喃(20ml)溶液中，室温搅拌过夜。tlc监测反应完后，加入蒸馏水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10：1)得到化合物4b，黄色液体(3.3g，产率49.4％)。
[0209]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.18-4.13(m,1h),3.96-3.93(m,1h),3.70(s,1h),3.68-3.65(m,3h),3.55(t,1h),2.90(t,1h),2.60(t,2h),2.42(d,1h),1.39(d,3h).
[0210]
第二步：3-(1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)丙酸甲酯(化合物4c)的合成
[0211]
在0℃下，将叠氮基三甲基硅烷(3.32g，28.8mmol)加到含有化合物4b(3g,19.21mmol)，碘化亚铜(0.182g，0.960mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(25ml)和甲醇(5ml)溶液中，并在90℃下搅拌过夜。冷却至室温，tlc监测反应完后，加入蒸馏水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(500ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10:1～1:1)得到化合物4c，黄色固体(1.6g，产率41.8％)。
[0212]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.64(s,1h),4.74(q,1h),3.73-3.63(m,5h),2.64
–
2.53(m,2h),1.50(t,3h)。
[0213]
第三步：3-(1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)丙酸(化合物4d)的合成
[0214]
将氢氧化锂(0.337g，14.06mmol,4m)滴入含有化合物4c(1.4g，7.03mmol)的甲醇(20ml)溶液中并且在50℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕后，浓缩，加入蒸馏水(10ml)，用甲基叔丁基醚(100ml
×
3)洗，水相用盐酸(1n)调节ph＝3～4后浓缩得到化合物4d，油状物(1.4g)。粗产品直接用于下一步。
[0215]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.74(s,1h),4.63(q,1h),3.43-3.57(m,2h),2.39-2.45(m,2h),1.37-1.41(m,3h)。
[0216]
第四步：3-(1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)丙-1-酮(化合物4)的合成
[0217]
在0℃下，将2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物(587mg,0.922mmol，50％的n,n-二甲基甲酰胺溶液)滴入含化合物4d(171mg，0.922mmol)，n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(250mg，0.769mmol)，n,n-二异丙基乙基胺(497mg，3.84mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中，室温搅拌16h。
lcms监测反应完后，加入蒸馏水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离得到化合物4(130.7mg，产率40.5％)。
[0218]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30(s,1h),7.74(s,1h),7.59(t,1h),7.16-7.12(m,4h),4.69-4.59(m,4h),4.46(s,1h),4.38(s,1h),3.67-3.53(m,2h),3.35-3.21(m,2h),2.91-2.83(m,2h),2.51-2.49(m,2h),1.42(d,3h)。
[0219]
lc-ms m/z：420.4[m h]

。
[0220]
实施例5：化合物5的合成
[0221]
3-((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-(2-(((2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2,2-二甲基丙烷-1-酮(化合物5)
[0222]
目标化合物5的合成路线如下所示：
[0223][0224]
第一步：2,2-二甲基-3-(丙-2-炔-1-基氧基)丙酸甲酯(化合物5b)的合成
[0225]
将3-羟基-2,2-二甲基丙酸甲酯(化合物5a)(3g，22.7mmol)溶于四氢呋喃(30ml)中，冷却至-5～0℃，加入氢化钠(1.090g，27.2mmol，60％)，升温至室温反应30min。加入3-溴丙炔(4.05g，34.1mmol)，继续室温反应18h。加入饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50ml
×
3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝100：1)得到化合物5b，黄色液体(1.95g，收率50.5％)。
[0226]
第二步：2,2-二甲基-3-(丙-2-炔-1-基氧基)丙酸(化合物5c)的合成
[0227]
将化合物5b(1g，5.88mmol)溶于甲醇(10ml)中，加入15％氢氧化钠溶液(7.83g，29.4mmol)，升温至80℃反应4h。冷却至室温，加入2n稀盐酸调节ph《2，加入二氯甲烷萃取(30ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物5c，黄色油状物(0.8g，收率87％)。
[0228]1h nmr(400mhz,cdcl3)：δ4.18-4.17(d,2h)，3.54(s,2h),2.43(t,1h),1.23(s,6h).
[0229]
第三步：1-(2-((2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2,2-二甲基-3-(丙-2-炔-1-基氧基)丙-1-酮(化合物5d)的合成
[0230]
将化合物5c(400mg，2.56mmol)，n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(中间体a，833mg，2.56mmol)，n,n-二异丙基乙胺(3.31g，25.6mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，反应液搅拌冷却至0℃左右，滴加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物(1.956g，3.07mmol，50％的n，n-二甲基甲酰胺溶液)，滴加完毕，室温反应3h。加入水(50ml)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，有机相
合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1：1)得到化合物5d，黄色固体(400mg，收率40％)。
[0231]
lc-ms m/z：391.4[m h]

。
[0232]
第四步：3-((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-1-(2-(((2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2,2-二甲基丙烷-1-酮(化合物5)的合成
[0233]
氮气保护下，将化合物d(200mg，0.512mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(3ml)和甲醇(1ml)中，加入l-抗坏血酸钠(203mg，1.024mmol)，室温搅拌30min，再加入叠氮基三甲基硅烷(590mg，5.12mmol)和五水硫酸铜(38.4mg，0.154mmol)，升温至90℃反应2h。反应液冷却至室温，加入水(30ml)，乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇(v/v)＝10：1，氨水)得到化合物5(60mg，收率27％)。
[0234]1h nmr(400mhz,dmso-d6)：δ8.24(s,1h),7.67(s,1h),7.52-7.51(d,1h),7.19-7.09(m,4h),4.58-4.57(m,5h),4.54(s,2h),3.50(s,2h),3.30-3.28(m,2h),3.4-3.18(dd,2h),1.20-1.16(d,6h)。
[0235]
lc-ms m/z：434.4[m h]

。
[0236]
实施例6：化合物6的合成
[0237]
2-(2-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)乙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基丙烷-1-酮(化合物6)
[0238]
目标化合物6的合成路线如下所示：
[0239][0240]
第一步：2-(烯丙氧基)-2-甲基丙酸甲酯(化合物6b)的合成
[0241]
将原料2-羟基-2-甲基丙酸甲酯(2.0g，16.9，mmol)加入到20mlthf中，冷却至0℃，加入60％nah(1.2g，30mmol)，并搅拌30分钟，0℃下加入烯丙基溴(2.4g，20mmol)，室温下搅拌15h。0℃下将水(40ml)加入到反应液中，用1n盐酸调节ph＝1～2，用乙酸乙酯(40ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得标题化合物淡黄色液体2-(烯丙氧基)-2-甲基丙酸甲酯(化合物6b)(2.5g，产率92.8％)。
[0242]
lc-ms m/z：159.1[m h]

。
[0243]
第二步：2-(3-羟丙氧基)-2-甲基丙酸甲酯(化合物6c)的合成
[0244]
将化合物6b(0.5g，3.16mmol)加入到thf(10ml)中，冷却至0℃，加入硼烷四氢呋喃溶液(3.48ml，3.48mmol)，0℃下搅拌16h。加入0.5ml饱和碳酸氢钠溶液，5ml双氧水，将反应液加热至40℃，搅拌4h。冷却至室温，加入水50ml，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得化合物6c，无色液体(0.17g，产率30.5％)。
[0245]
lc-ms m/z：177.1[m h]

。
[0246]
第三步：2-(3-羟基丙氧基)-2-甲基丙酸(化合物6d)的合成
[0247]
将原料2-(3-羟丙氧基)-2-甲基丙酸甲酯(0.5g，2.84mmol)加入到5ml thf和5ml水中，加入氢氧化钠(227mg，5.68mmol)，加热至70℃，搅拌3h。将反应液浓缩，用盐酸调节ph＝1，水相冻干，得化合物6d，无色液体(0.62g，产率100％)。
[0248]
lc-ms m/z：163.1[m h]

。
[0249]
第四步：1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-(3-羟基丙氧基)-2-甲基丙烷-1-酮(化合物6e)的合成
[0250]
室温下将化合物6d(0.62g，2.84mmol)加入到10ml dma中，加入1-丙基磷酸酐(1.6g，4.26mmol)、n-甲基吗啉(1.4g，14.2mmol)、n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(中间体a，833mg，2.56mmol)，室温搅拌2h。加入乙酸乙酯(300ml)，用饱和碳酸氢钠溶液(30ml
×
3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物6e(0.23g，产率16.5％)。
[0251]
lc-ms m/z：397.2[m h]

。
[0252]
第五步：3-((1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基-1-氧丙烷-2-基)氧)丙醛(化合物6f)的合成
[0253]
室温下将化合物6e(0.23g，0.58mmol)加入到10ml二氯甲烷中，加入dess-martin氧化剂(369mg，0.87mmol)，搅拌2h。加入乙酸乙酯(300ml)，用饱和碳酸氢钠溶液(50ml
×
3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物6f粗品，棕色液体(0.3g，产率100％)。
[0254]
lc-ms m/z：395.2[m h]

。
[0255]
第六步：2-(丁基-3-炔-1-基氧)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基丙烷-1-酮(化合物6g)的合成
[0256]
将化合物6e(0.3g，0.76mmol)加入到20ml甲醇中，然后加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(218mg，1.14mmol)和碳酸钾(315mg,2.28mmol)，室温下搅拌16h，加入水(200ml)，用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v/v)＝10:1)得化合物6g，棕色液体(180mg，产率60.5％)。
[0257]
lc-ms m/z：391.2[m h]

。
[0258]
第七步：2-(2-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)乙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-甲基丙烷-1-酮(化合物6)的合成
[0259]
将化合物6g(160mg,0.41mmol)加入到叔丁醇(10ml)和水(10ml)中，氮气保护下加入叠氮基三甲基硅烷(141mg，1.23mmol)、五水硫酸铜(102mg，0.41mmol)和异败血酸钠(81.2mg，0.41mmol)，加热至80℃，搅拌2h。将反应液浓缩，残留物制备得化合物6，白色固体
(14mg，产率63.7％)。
[0260]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30(d,1h),7.60(s,1h),7.53(d,1h),7.21-7.20(m,2h),7.15-7.12(m,2h),4.73-4.56(m,4h),4.45(s,1h),3.58(d,2h),3.24(dd,2h),2.91-2.89(m,4h),1.37(s,6h)。
[0261]
lc-ms m/z：434.2[m h]

。
[0262]
实施例7：化合物7s和化合物7r的合成
[0263]
(r)-2-(((s)-1-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)丙烷-2-基)氧)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)丙烷-1-酮(化合物7s)
[0264]
(r)-2-(((r)-1-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)丙烷-2-基)氧)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)丙烷-1-酮(化合物7r)
[0265]
目标化合物7s和化合物7r的合成路线如下所示：
[0266][0267]
第一步：(2r)-2-(戊基-4-炔-2-氧基)丙酸(化合物7a)的合成
[0268]
将4-戊炔-2-醇(200mg，2.38mmol)加入到10ml四氢呋喃中，冷却至0℃，氮气保护下加入60％nah(120mg，3mmol)，并搅拌30分钟，0℃下加入原料(s)-2-溴丙酸(303mg，1.98mmol)，自然升至室温，搅拌16h。0℃下将水(100ml)加入到反应液中，用1n盐酸调节ph＝1～2，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得化合物7a，棕色液体(350mg，产率100％)。
[0269]
lc-ms m/z：157.1[m h]

。
[0270]
第二步：(2r)-2-((1-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)丙烷-2-基)氧)丙酸(化合物7b)的合成
[0271]
室温下将化合物7a(800mg，5.12mmol)加入到25ml dmf和5ml甲醇中，在氮气保护下分别加入叠氮基三甲基硅烷(885mg，7.68mmol)和碘化亚铜(190mg，1.02mmol)，将反应液加热至100℃，搅拌16h。将反应液冷却至室温，加入水(20ml)，过滤，用乙酸乙酯(10ml
×
3)
洗涤，水相冻干得化合物7b，黄色固体(710mg，69.6％)。
[0272]
lc-ms m/z：200.2[m h]

。
[0273]
第三步：(2r)-2-((1-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)丙烷-2-基)氧)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)丙烷-1-酮(化合物7c)的合成
[0274]
室温下将化合物7b(620mg,3.1mmol)加入到10ml dmf和5ml乙酸乙酯中，加入1-丙基磷酸酐(1.98g，3.53mmol)、n-甲基吗啉(840mg，8.3mmol)和n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐)(600mg，1.85mol)，冷却至0℃，搅拌0.5h，自然升至室温，搅拌16h。加入水(200ml)，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物制备得标题化合物白色固体(2r)-2-((1-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)丙烷-2-基)氧)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)丙烷-1-酮(化合物7c)(18.5mg，产率2.1％)。
[0275]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(d,1h),7.62-7.55(m,2h),7.22-7.19(m,2h),7.15-7.12(m,2h),4.75(d,1h),4.70-4.57(m,2h),4.53-4.32(m,3h),3.78-3.75(m,1h),3.27-3.16(m,3h),2.91-2.81(m,4h),1.19(dd,3h),1.09(t,3h)。
[0276]
lc-ms m/z：434.0[m h]

。
[0277]
第四步：化合物7s和化合物7r的合成
[0278][0279]
化合物7s和化合物7r经由化合物7c制备拆分获得。制备条件为welch，ultimate c18柱，10nm，21.2nm
×
250mm。流动相由流动相a和流动相b组成。流动相a为1
‰
的三氟醋酸纯水溶液，流动相b为1
‰
的三氟醋酸乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相a保持90％，3～18分钟梯度洗脱，流动相a由90％变为5％，18～22分钟保持流动相a比例为5％。
[0280]
化合物7s和化合物7r拆分出来后经过以下条件确定其保留时间，hplc条件为：acquity uplc beh c18 1.7μm 2.1mm*150mm。流动相由流动相a和流动相b组成。流动相a为0.02％的甲酸纯水溶液，流动相b为0.02％的甲酸乙腈溶液。梯度条件：0～0.5分钟，流动相a保持90％，0.05～11.5分钟梯度洗脱，流动相a由90％变为5％，13～15分钟梯度洗脱，流动相a由90％变为5％。
[0281]
第一个洗脱的对映体：rt：7.181min。
[0282]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(d,1h),7.62-7.55(m,2h),7.22-7.19(m,2h),7.15-7.12(m,2h),4.75(d,1h),4.70-4.57(m,2h),4.53-4.32(m,3h),3.78-3.75(m,1h),3.27-3.16(m,3h),2.91-2.81(m,4h),1.19(dd,3h),1.09(t,3h)。
[0283]
lc-ms m/z：434.0[m h]

。
[0284]
第二个洗脱的对映体：rt：7.753min。
[0285]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30(d,1h),7.65(d,2h),7.22-7.20(m,2h),7.16-7.13(m,2h),4.75(d,1h),4.63(dd,2h),4.56-4.39(m,3h),3.81(dt,1h),3.25(dd,2h),
2.92-2.88(m,3h),2.80-2.76(m,1h),1.28(dd,3h),1.11(t,3h)。
[0286]
lc-ms m/z：434.0[m h]

。
[0287]
实施例8：化合物8r和化合物8s的合成
[0288]
(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丁-2-基)氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚吡啶-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物8r)
[0289]
(s)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丁-2-基)氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚吡啶-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物8s)
[0290]
化合物8r的合成路线如下所示：
[0291][0292]
第一步：(r)-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔-3-醇(化合物8b)的合成
[0293]
将三甲基硅基乙炔(2.78g，28.3mmol)溶于四氢呋喃(30ml)中，冷却至-78℃，滴加正丁基锂(14.56ml，29.1mmol,2.5m的正己烷溶液)，滴加完毕后，保持-78℃下反应1小时，随后加入三氟化硼的四氢呋喃溶液(2ml)和(r)-2-乙基环氧乙烷(化合物8a)(2g，27.7mmol)，-78℃下反应半小时。加饱和碳酸氢钠溶液(30ml)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10：1)得到化合物8b，无色液体(2.0g，收率42.3％)。
[0294]
第二步：(r)-2-((6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔-3-基)氧基)乙酸叔丁酯(化合物8c)的合成
[0295]
冰浴下，往化合物8b(2.0g，11.74mmol)的四氢呋喃(30ml)溶液中加入氢化钠(0.611g，15.27mmol,60％)，保持该温度下搅拌反应半小时。随后加入2-溴乙酸叔丁酯(2.75g，14.09mmol)，室温搅拌过夜。加水(30ml)淬灭，用乙酸乙酯萃取(50ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝100：1)得到化合物8c，无色液体(1.9g，收率56.9％)。
[0296]
第三步：(r)-2-(己-5-炔-3-基氧基)乙酸叔丁酯(化合物8d)的合成
[0297]
将化合物8c(1.9g，6.68mmol)溶于四氢呋喃(30ml)中，加入四丁基氟化铵三水合物(2.53g，8.02mmol)，室温搅拌反应16小时。加水(30ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(50ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/
v)＝100：1)得到化合物8d，无色液体(1.0g，收率70.5％)。
[0298]
第四步：(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丁-2-基)氧基)乙酸叔丁酯(化合物8e)的合成
[0299]
氮气保护下，将化合物8d(1g，4.71mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)和甲醇(4ml)的混合溶液中，加入叠氮基三甲基硅烷(814mg，7.07mmol)和五水硫酸铜(45mg，0.236mmol)，升温至100℃反应16个小时。反应液冷却至室温，减压除去溶剂，加入水(40ml)，乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2：1)得到化合物8e，黄色液体(0.7g，收率58.2％)。
[0300]
lc-ms m/z：256.4[m h]

。
[0301]
第五步：(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丁-2-基)氧)乙酸(化合物8f)的合成
[0302]
氮气保护下，向化合物8e(0.7g，2.74mmol)中加入4m的氯化氢二氧六环溶液(10ml)，室温搅拌反应2个小时。过滤得到化合物8f，白色固体(0.47g，收率86％)。
[0303]
第六步：(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丁-2-基)氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚吡啶-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物8r)的合成
[0304]
将化合物8f(0.25g，1.061mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(6ml)溶液中，向体系中加入n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(0.204g，0.628mmol)和n,n-二异丙基乙胺(0.548g，4.24mmol)。冰浴下，向体系中继续加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦-2,4,6-三氧化物(0.675g，1.061mmol)，室温搅拌反应16个小时。加水(30ml)淬灭，乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇(v/v)＝10：1，氨水)得到化合物8r(105.2mg，收率37.3％)。
[0305]1h nmr(400mhz,dmso-d6)：δ8.30(s,2h),7.57(s,2h),7.24-7.18(m,2h),7.17-7.10(m,2h),4.65-4.55(m,3h),4.50(s,1h),4.41(s,1h),4.25-4.15(m,2h),3.66(dd,1h),3.24(dd,2h),2.88(dd,4h),1.55-1.42(m,2h),0.92-0.86(m,3h)。
[0306]
lc-ms m/z：434.4[m h]

。
[0307]
化合物8s的合成路线如下所示：
[0308][0309]
第一步：(s)-6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔-3-醇(化合物8h)的合成
[0310]
将三甲基硅基乙炔(8.34g，85mmol)溶于四氢呋喃(80ml)中，冷却至-78℃，滴加正丁基锂(34.9ml，87mmol，2.5m的正己烷溶液)，滴加完毕后，保持-78℃下反应1小时，随后加入三氟化硼的四氢呋喃溶液(6ml)和(s)-2-乙基环氧乙烷(化合物8g)(6g，83mmol)，-78℃下反应半小时。加饱和碳酸氢钠溶液(60ml)淬灭，用乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝10：1)得到化合物8h，无色液体(6.3g，收率45％)。
[0311]
第二步：(s)-2-((6-(三甲基甲硅烷基)己-5-炔-3-基)氧基)乙酸叔丁酯(化合物8i)的合成
[0312]
冰浴下，往化合物8h(6.3g，37mmol)的四氢呋喃(80ml)溶液中加入氢化钠(1.07g，44.6mmol，60％)，保持该温度下搅拌反应半小时。随后加入2-溴乙酸叔丁酯(7.97g，40.9mmol)，室温搅拌过夜。加水(60ml)淬灭，用乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝100：1)得到化合物8i，无色液体(6.4g，收率60.6％)。
[0313]
第三步：(s)-2-(己-5-炔-3-基氧基)乙酸叔丁酯(化合物8j)的合成
[0314]
将化合物8i(6.4g，22.5mmol)溶于四氢呋喃(80ml)中，加入四丁基氟化铵三水合物(8.52g，27mmol)，室温搅拌反应16小时。加水(60ml)稀释，用乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝100：1)得到化合物8j，无色液体(2.5g，收率52.3％)。
[0315]
第四步：(s)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丁-2-基)氧基)乙酸叔丁酯(化合物8k)的合成
[0316]
氮气保护下，将化合物8j(1g，4.71mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)和甲醇(4ml)的混合溶液中，加入叠氮基三甲基硅烷(814mg，7.07mmol)和五水硫酸铜(45mg，0.236mmol)，升温至100℃反应16个小时。反应液冷却至室温，减压除去溶剂，加入水(40ml)，乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶
柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝2：1)得到化合物8k，黄色液体(0.8g，收率66.5％)。
[0317]
lc-ms m/z：256.4[m h]

。
[0318]
第五步：(s)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丁-2-基)氧)乙酸(化合物8l)的合成
[0319]
氮气保护下，向化合物8k(0.8g，3.13mmol)中加入4m的氯化氢二氧六环溶液(10ml)，室温搅拌反应2个小时。过滤得到化合物8l，白色固体(0.5g，收率80.2％)。
[0320]
第六步：(s)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丁-2-基)氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚吡啶-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物8s)的合成
[0321]
将化合物8l(0.25g，1.061mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(6ml)溶液中，向体系中加入n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(0.204g，0.628mmol)和n,n-二异丙基乙胺(0.548g，4.24mmol)。冰浴下，向体系中继续加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦-2,4,6-三氧化物(0.675g，1.061mmol)，室温搅拌反应16个小时。加水(30ml)淬灭，乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)，有机相合并，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物用硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇(v/v)＝10：1，氨水)得到化合物8s(113.9mg，收率37.2％)。
[0322]1h nmr(400mhz,dmso-d6)：δ8.29(d,1h),7.68-7.50(m,2h),7.23-7.17(m,2h),7.16-7.10(m,2h),4.67-4.57(m,3h),4.50(s,1h),4.40(s,1h),4.26-4.14(m,2h),3.65(dd,1h),3.23(dd,2h),2.87(dd,4h),1.54-1.41(m,2h),0.91-0.85(m,3h)。
[0323]
lc-ms m/z：434.4[m h]

。
[0324]
实施例9：化合物9的合成
[0325]
2-(2-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)乙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)丁烷-1-酮(化合物9)
[0326]
化合物9的合成路线如下所示：
[0327][0328]
第一步：2-(丁基-3-炔-1-氧基)丁酸甲酯(化合物9a)的合成
[0329]
将原料3-丁炔-1醇(700mg，10mmol)加入到四氢呋喃(50ml)中，冷却至0℃，加入60％的钠氢(600mg,15mmol)，并搅拌30分钟，0℃下加入原料2-溴丁酸甲酯(1.98g，11mmol)，室温下搅拌15h。0℃下将水(20ml)加入到反应液中，用1n盐酸调节ph＝1～2，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1：1)得化合物9a，淡黄色液体(1.1g，产率64.7％)。
[0330]
lc-ms m/z：171.1[m h]

。
[0331]
第二步：2-(2-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)乙氧基)丁酸甲酯(化合物9b)的合成
[0332]
将化合物9a(1.32g，7.76mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(10ml)和甲醇(3ml)中，氮气保护下分别加入叠氮基三甲基硅烷(1.33g，11.6mmol)、碘化亚铜(177mg，0.93mmol)，将反应液加热至110℃，搅拌15h。将反应液冷却至室温，加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷：甲醇(v/v)＝10：1)得化合物9b，黄色液体(1.5g，产率90.7％)。
[0333]
lc-ms m/z：214.1[m h]

。
[0334]
第三步：2-(2-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)乙氧基)丁酸(化合物9c)
[0335]
室温下将化合物9b(3.60g，16.9mmol)加入到水(15ml)，甲醇(15ml)和四氢呋喃(15ml)中，加入氢氧化钠(2.7g，67.6mmol)，室温搅拌15h。将反应液浓缩至15毫升，用盐酸调节ph＝3，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备得化合物9c，淡黄色液体(3.0g，产率89.2％)。
[0336]
lc-ms m/z：200.1[m h]

。
[0337]
第四步：2-(2-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)乙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)丁烷-1-酮(化合物9)
[0338]
室温下将化合物9c(163mg,0.83mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(3ml)中，加入1-丙基磷酸酐(750mg，1.19mmol，50％乙酸乙酯溶液)、n-甲基吗啉(160mg，1.58mmol)、n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(200mg，0.615mmol)，室温搅拌15h。加入水(10ml)，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物制备得(制备条件参照本发明实施例7第四步所述的“制备条件”并由本领域技术人员根据实际情况适当调整色谱条件)化合物9(35mg，产率10.2％)。
[0339]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(d,1h),7.65(s,1h),7.58(d,1h),7.22-7.20(m,2h),7.15-7.13(m,2h),4.75-4.44(m,5h),4.06(d,1h),3.70(d,1h),3.62(d,1h),3.27-3.22(m,2h),2.91-2.85(m,4h),1.69-1.64(m,2h),0.90-0.86(m,3h)。
[0340]
lc-ms m/z：434.2[m h]

。
[0341]
实施例10：化合物10的合成
[0342]
4-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)丁烷-2-基-2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸酯(化合物10)
[0343]
化合物10的合成路线如下所示：
[0344][0345]
第一步：戊烷-4-炔醛(化合物10a)的合成
[0346]
室温下将原料戊烷-4-炔醇(2g，23.8mmol)加入到30ml二氯甲烷中，加入戴斯-马丁氧化剂(20g，47.6mmol)，并搅拌1h。过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，浓缩，得化合物10a粗品(2.0g)。
[0347]
lc-ms m/z：83.0[m h]

。
[0348]
第二步：己烷-5-炔-2-醇(化合物10b)的合成
[0349]
室温下将化合物10a(2.1g，23.8mmol)加入到30ml乙醚中，冷却至-70℃，将甲基锂(23.8ml，35.7mmol)缓慢加入到体系中，自然升至室温，搅拌1h。加入30ml饱和氯化铵溶液，用乙醚(30ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物10b粗品(2.2g，产率89％)。
[0350]
lc-ms m/z：99.1[m h]

。
[0351]
第三步：4-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)丁烷-2-醇(化合物10c)的合成
[0352]
室温下将化合物10b(0.3g，3.12mmol)加入到5ml dmf和1ml甲醇中，在氮气保护下分别加入叠氮基三甲基硅烷(538mg，4.68mmol)和碘化亚铜(118mg，0.62mmol)，将反应液加热至90℃，搅拌4h。将反应液冷却至室温，加入水(20ml)，过滤，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得化合物10c，黄色液体(110mg，产率25％)。
[0353]
lc-ms m/z：142.1[m h]

。
[0354]
第四步：4-(1h-1,2,3-三氮唑-4-基)丁烷-2-基-2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸酯(化合物10)的合成
[0355]
室温下将化合物10c(110mg，0.78mmol)加入到2ml dmf中，加入n,n-羰基二咪唑(126mg，0.78mmol)、三乙胺(150mg，1.5mmol)和n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(198mg，0.609mmol)，搅拌2h。加入水(10ml)，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物制备(制备条件参照本发明实施例7第四步所述的“制备条件”并由本领域技术人员根据实际情况适当调整色谱条件)得化合物10(4mg，产率1.5％)。
[0356]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.23(d,1h),7.54(s,1h),7.20(dd,2h),7.13(dd,2h),4.74-4.70(m,1h),4.56-4.46(m,4h),3.34(dd,2h),2.92-2.87(m,4h),2.03(d,3h),1.31(t,5h)。
[0357]
lc-ms m/z：420.2[m h]

。
[0358]
实施例11：化合物11、化合物11s和化合物11r的合成
[0359]
((2r)-5-((1h-1,2,3-三氮唑-4-基)甲基)四氢呋喃-2-基)(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(化合物11)
[0360]
化合物11的合成路线如下所示：
[0361][0362]
第一步：(r)-5-(羟甲基)二氢呋喃-2(3h)-酮(化合物11a)的合成
[0363]
将原料(r)-5-氧代四氢呋喃-2-甲酸(2.2g,30.7mmol)加入到20ml无水thf中，冷却至0℃，加入硼烷二甲硫醚溶液(3.68ml，36.8mmol)，并搅拌1h。加入甲醇(20ml)，浓缩，得化合物11a粗品，淡黄色液体(2.5g，产率100％)。
[0364]
lc-ms m/z：117.1[m h]

。
[0365]
第二步：(r)-5-(((叔丁二甲硅基)氧)甲基)二氢呋喃-2(3h)-酮(化合物11b)的合成
[0366]
将原料化合物11a(2.5g，30.7mmol)加入到30ml二氯甲烷中，室温下加入咪唑(2.5g，36.8mmol)，叔丁基二甲基氯硅烷(5.5g，36.8mmol)，搅拌1h。加入水200ml，用二氯甲烷(60ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得化合物11b，无色液体(2.4g，产率33.8％)。
[0367]
lc-ms m/z：231.1[m h]

。
[0368]
第三步：(5r)-5-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)四氢呋喃-2-醇(化合物11c)的合成
[0369]
将化合物11b(2.4g，10.4mmol)加入到20ml无水thf中，冷却至-70℃，加入二异丙基氢铝(9ml，13.5mmol)，低温下搅拌3h。低温下加入饱和氯化铵溶液(30ml)，升至室温，搅拌3h。用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得化合物11c，无色液体(1.5g，产率62.0％)。
[0370]
lc-ms m/z：233.1[m h]

。
[0371]
第四步：2-((5r)-5-(((叔丁基二甲基硅基)氧)甲基)四氢呋喃-2-基)乙醛(化合物11d)的合成
[0372]
将化合物11c(1.5g，6.46mmol)加入到20ml甲苯中，加入甲酰基亚甲基三苯基膦(1.96g，6.46mmol)，加热至70℃，搅拌16h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得化合物11d，无色液体(0.6g，产率36.0％)。
[0373]
lc-ms m/z：259.2[m h]

。
[0374]
第五步：(((2r)-5-(丙基-2-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)叔丁基二甲基硅烷(化合物11e)的合成
[0375]
将化合物11d(0.6g，2.32mmol)加入到10ml甲醇中，然后加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(670mg，3.49mmol)和碳酸钾(800mg，5.8mmol)，室温下搅拌16h，加入水(200ml)，用乙酸乙酯(60ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得化合物11e，无色液体(181mg，产率30.6％)。
[0376]
lc-ms m/z：255.2[m h]

。
[0377]
第六步：((2r)-5-(丙基-2-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲醇(化合物11f)的合成
[0378]
将化合物11e(180mg，0.71mmol)加入到5ml thf中，加入四丁基氟化铵溶液(4ml，4mmol)，室温搅拌2h。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得化合物11f，无色液体(60mg，产率60.0％)。
[0379]
lc-ms m/z：141.1[m h]

。
[0380]
第七步：(2r)-5-(丙基-2-炔-1-基)四氢呋喃-2-甲醛(化合物11g)的合成
[0381]
室温下将化合物11f(0.5g，3.57mmol)加入到50ml二氯甲烷中，加入dess-martin氧化剂(2.27g，5.36mmol)，搅拌2h。加入乙酸乙酯(300ml)，用饱和碳酸氢钠溶液(50ml
×
3)洗涤，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物11g粗品，无色液体(1.6g，产率100％)。
[0382]
lc-ms m/z：139.0[m h]

。
[0383]
第八步：(2r)-5-(丙基-2-炔-1-基)四氢呋喃-2-甲酸(化合物11h)的合成
[0384]
室温下将化合物11g(1.6g，3.57mmol)加入到10ml叔丁醇和10ml水中，加入磷酸二氢钠(3g，25mmol)、2-甲基-2-丁烯(5g，71.4mmol)和亚氯酸钠(385mg，4.28mmol)，搅拌16h。用1m盐酸调节ph＝1，加入乙酸乙酯(50ml)，用饱和碳酸氢钠溶液(50ml
×
3)洗涤，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物11h粗品，白色固体(0.18g，产率10.1％)。
[0385]
lc-ms m/z：155.0[m h]

。
[0386]
第九步：(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)((2r)-5-(丙基-2-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲酮(化合物11i)的合成
[0387]
室温下将化合物11h(85mg，0.55mmol)加入到10ml dmf中，加入1-丙基磷酸酐
(527mg，0.83mmol)、n-甲基吗啉(276mg，2.76mmol)、n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(161mg，0.495mmol)，室温搅拌4h。加入饱和碳酸氢钠溶液(50ml)，用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物11i粗品，棕色固体(220mg，产率100％)。
[0388]
lc-ms m/z：389.2[m h]

。
[0389]
第十步：((2r)-5-((1h-1,2,3-三氮唑-4-基)甲基)四氢呋喃-2-基)(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(化合物11)的合成
[0390]
将化合物11i(220mg，0.57mmol)加入到叔丁醇(2ml)和水(2ml)中，氮气保护下加入叠氮基三甲基硅烷(492mg,4.28mmol)、五水硫酸铜(107.2mg,0.43mmol)和异败血酸钠(84.9mg,0.43mmol)，加热至80℃，搅拌2h。将反应液浓缩，残留物制备(制备条件参照本发明实施例7第四步所述的“制备条件”并由本领域技术人员根据实际情况适当调整具体参数)得化合物11(21.3mg，产率8.7％)。
[0391]
lc-ms m/z：432.2[m h]

。
[0392]
第十一步：化合物11s和化合物11r的合成
[0393]
((2r,5s)-5-((1h-1,2,3-三氮唑-4-基)甲基)四氢呋喃-2-基)(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(化合物11s)
[0394]
((2r,5r)-5-((1h-1,2,3-三氮唑-4-基)甲基)四氢呋喃-2-基)(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)甲酮(化合物11r)
[0395]
化合物11s和化合物11r经由化合物11制备拆分获得。制备条件为welch，ultimate c18柱，10nm，21.2nm
×
250mm。流动相由流动相a和流动相b组成。流动相a为1
‰
的三氟醋酸纯水溶液，流动相b为1
‰
的三氟醋酸乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相a保持90％，3～18分钟梯度洗脱，流动相a由90％变为5％，18～22分钟保持流动相a比例为5％。
[0396]
化合物11s和化合物11r拆分出来后经过以下条件确定其保留时间，hplc条件为：acquity uplc beh c18 1.7um 2.1mm*150mm。流动相由流动相a和流动相b组成。流动相a为0.02％的甲酸纯水溶液，流动相b为0.02％的甲酸乙腈溶液。梯度条件：0～0.5分钟，流动相a保持90％，0.05～11.5分钟梯度洗脱，流动相a由90％变为5％，13～15分钟梯度洗脱，流动相a由90％变为5％。
[0397]
第一个洗脱的对映体，rt＝2.279min。
[0398]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.33(s,1h),7.63(d,2h),7.22-7.20(m,2h),7.16-7.13(m,2h),4.85-4.19(m,7h),3.28-3.22(m,2h),2.92-2.87(m,4h),2.13-1.96(m,3h),1.66-1.46(m,1h).
[0399]
第二个洗脱的对映体，rt＝3.408min。
[0400]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32(s,1h),7.60(d,2h),7.22(d,2h),7.16-7.13(m,2h),4.85-4.27(m,7h),3.28-3.22(m,2h),2.91-2.85(m,4h),2.14-1.98(m,3h),1.57-1.44(m,1h).实施例12：化合物12的合成
[0401]
2-((2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙基)硫基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物12)
[0402]
化合物12的合成路线如下所示：
[0403][0404]
第一步：4-氯丁-1-炔(化合物12b)的合成
[0405]
在0℃下，将氯化亚砜(2.91ml，39.9mmol)小心加入含有丁-3-炔-1-醇(化合物12a)(3.02ml，39.9mmol)的吡啶(0.322ml，3.99mmol)溶液中，然后在70℃下搅拌2h。反应液直接用于下一步。
[0406]
第二步：2-(丁-3-炔-1-基硫代)乙酸甲酯(化合物12d)的合成
[0407]
将碳酸钾(9.37g，67.8mmol)加至含有4-氯丁-1-炔(2.0g，22.59mmol)，2-巯基乙酸甲酯(2.020ml，22.59mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(20ml)溶液中，60℃下搅拌12h。tlc监测反应完毕后，加入蒸馏水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得到化合物12d，黄色液体(3.85g)。
[0408]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ3.71-3.68(m,3h),3.27-3.23(m,2h),2.80-2.74(m,2h),2.51-2.44(m,2h),2.03-1.99(m,1h).
[0409]
第三步：2-((2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙基)硫代)乙酸甲酯(化合物12e)的合成
[0410]
在0℃下，将叠氮基三甲基硅烷(3.90g，33.9mmol)加到含有2-(丁-3-炔-1-基硫代)乙酸甲酯(3.83g，24.21mmol)，碘化亚铜(460mg，2.421mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)和甲醇(2ml)溶液中，并在90℃下搅拌过夜。冷却至室温，tlc监测反应完后，加入蒸馏水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1～1:5)得到化合物12e，黄色油状物(3.0g,产率61.6％)。
[0411]
lc-ms m/z：202.2[m h]

。
[0412]
第四步：2-((2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙基)硫代)乙酸(化合物12f)的合成
[0413]
将氢氧化锂(0.595g，24.85mmol)的水(5ml)溶液加至含有化合物12e(2.5g，12.42mmol)的甲醇(25ml)溶液中，50℃下搅拌16h。冷却至室温，浓缩除去大部分溶剂。用盐酸(1n)调节ph＝3～4后，制备纯化得到化合物12f，白色固体(910mg，产率39.1％)。
[0414]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.55(s,1h),7.88(s,0.2h),7.60(s,0.8h),3.27(s,2h),2.99
–
2.83(m,4h)。
[0415]
第五步：2-((2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙基)硫基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物12)的合成
[0416]
在0℃下，将2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物(1632mg，2.56mmol，50％的n,n-二甲基甲酰胺溶液)滴入含化合物16f(400mg，2.137mmol)，n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(834mg，2.56mmol)，
n,n-二异丙基乙基胺(3.73ml,21.37mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中，室温搅拌16h。lcms监测反应完后，加入蒸馏水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离得到化合物12(15.6mg，产率1.73％)。
[0417]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(s,1h),7.65(s,1h),7.57(t,1h),7.15-7.12(m,4h),4.76-4.71(m,2h),4.64-4.59(m,1h),4.57-4.42(m,2h),3.49(d,2h),3.27-3.21(m,2h),2.96-2.88(m,6h)。
[0418]
lc-ms m/z：422.4[m h]

。
[0419]
实施例13：化合物13的合成
[0420]
2-(((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)硫基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物13)
[0421]
化合物13的合成路线如下所示：
[0422][0423]
第一步：2-(丙-2-炔-1-基硫代)乙酸甲酯(化合物13c)的合成
[0424]
在0℃下，将氢氧化钾(2.59g，46.2mmol)加入含有2-巯基乙酸甲酯(4.46g,42.0mmol)的甲醇(10ml)的溶液中，搅拌5分钟后，滴入3-溴丁炔(5.0g，42.0mmol)的甲醇(10ml)溶液。反应液在室温下搅拌3h。tlc监测反应完后，加入蒸馏水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝20:1)得到化合物13c，黄色液体(4.58g，产率76％)。
[0425]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ3.73(s,3h),3.42(s,2h),3.39(d,2h),2.27(t,1h)。
[0426]
第二步：2-(((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)硫代)乙酸甲酯(化合物13d)的合成
[0427]
在0℃下，将叠氮基三甲基硅烷(5.03g，43.7mmol)加到含有化合物13c(4.5g，31.2mmol)，cui(0.593g，3.12mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(20ml)和甲醇(5ml)溶液中，并在90℃下搅拌16h。冷却至室温，tlc监测反应完后，加入蒸馏水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1～1:5)得到化合物13d，黄色液体(4.58g，产率78％)。
[0428]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.03(s,1h),7.66(s,1h),3.94(s,2h),3.70(s,3h),3.20(s,2h)。
[0429]
第三步：2-(((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)硫代)乙酸(化合物13e)的合成
[0430]
将氢氧化锂(0.595g，24.85mmol)的水(10ml)溶液加至含有化合物13d(4.58g，24.46mmol)的甲醇(50ml)溶液中，50℃下搅拌16h。冷却至室温，加入蒸馏水(30ml)稀释，用甲基叔丁基醚(50ml)萃取。水相用1n盐酸调节ph＝3～4后，浓缩得到化合物13e，黄色油状物(4.0g，产率94％)。
[0431]
第四步：2-(((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)硫基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物13)的合成
[0432]
在0℃下，将2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物(2.021g，3.18mmol，50％n,n-二甲基甲酰胺溶液)滴入含化合物13e(0.5g,2.89mmol)，n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(1.033g，3.18mmol)，n,n-二异丙基乙基胺(1.866g，14.43mmol)的n,n-二甲基甲酰胺溶液(10ml)中，室温搅拌16h。tlc监测反应完后，加入蒸馏水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱(制备条件参照本发明实施例7第四步所述的“制备条件”并由本领域技术人员根据实际情况适当调整色谱条件)分离得到化合物13(45.3mg，产率3.85％)。
[0433]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(d,1h),7.77(s,1h),7.57(t,1h),7.22-7.12(m,4h),4.70-4.57(m,3h),4.50(s,1h),4.42(s,1h),3.91(d,2h),3.47(d,2h),3.27-3.21(m,2h),2.91-2.85(m,2h)。
[0434]
lc-ms m/z：408.3[m h]

。
[0435]
实施例14：化合物14(hw021066)的合成
[0436]
2-((2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙基)亚磺酰基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物14)
[0437]
化合物14的合成路线如下所示：
[0438]
第一步：将间氯过氧苯甲酸(10.23mg，0.047mmol)加入含有2-((2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙基)硫基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物12)(50mg，0.119mmol)的二氯甲烷(2ml)中，室温搅拌0.5小时后，再加入一批间氯过氧苯甲酸(10.23mg，0.047mmol)，反应液在室温下搅拌12h。tlc监测反应完成后，加入蒸馏水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离得到化合物14(20.8mg，产率38.5％)。
[0439]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31(s,1h),7.73(s,1h),7.62(s,1h),7.20-7.13(m,4h),4.81-4.66(m,2h),4.60-4.45(m,3h),4.08(s,2h),3.29-2.98(m,6h),2.87(d,2h)。
[0440]
lc-ms m/z：438.2[m h]

。
[0441]
实施例15：化合物15的合成
[0442]
2-((2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙基)磺酰基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物15)
[0443]
化合物15的合成路线如下所示：
[0444][0445]
第一步：室温下，将间氯过氧苯甲酸(230mg，1.068mmol，60％)加入含有2-((2-(1h-1,2,3-三唑-4-基)乙基)硫基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物12)(150mg，0.356mmol)的二氯甲烷(5ml)中，反应液在40℃搅拌48h。tlc监测反应完成后，加入蒸馏水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离得到化合物15(46.3mg，产率28.1％)。
[0446]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32(s,1h),7.75(s,1h),7.63(s,1h),7.20
–
7.14(m,4h),4.84-4.78(m,2h),4.62
–
4.47(m,5h),3.77
–
3.60(m,2h),3.30
–
3.09(m,4h),2.90-2.85(m,2h)。
[0447]
lc-ms m/z：454.3[m h]

。
[0448]
实施例16：化合物16的合成
[0449]
2-(((1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)磺酰基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物16)
[0450]
化合物16的合成路线如下所示：
[0451][0452]
第一步：室温下，将间氯过氧苯甲酸(159mg，0.736mmol，60％)加入含有化合物13(100mg，0.245mmol)的二氯甲烷(5ml)中，反应液在室温下搅拌16h。tlc监测反应完成后，加入蒸馏水(10ml)稀释，用二氯甲烷(20ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离得到化合物16(17.0mg，产率15.76％)。
[0453]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32(d,1h),7.93(s,1h),7.60(d,1h),7.20
–
7.12(m,4h),4.85
–
4.71(m,4h),4.68
–
4.41(m,5h),3.33-3.21(m,2h),2.91-2.85(m,2h)。
[0454]
lc-ms m/z：440.3[m h]

。
[0455]
实施例17：化合物17的合成
[0456]
2-(2-(5-氯-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)-1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)胺基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙-1-酮(化合物17)
[0457]
化合物17的合成路线如下所示：
2-(2-(5-三氟甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙-1-酮(化合物18)
[0471]
化合物18的合成路线如下所示：
[0472][0473]
第一步：2-(3-炔基-1-丁烷氧基)乙酸叔丁酯(化合物18b)的合成
[0474]
0℃下，将3-丁炔-1-醇(6.00g，85.60mmol)，四丁基硫酸氢铵(2.07g，8.54mmol)和naoh(40％wt/wt，150ml)加入到二氯甲烷(150ml)中，将溴乙酸叔丁酯(19.34ml，128.40mmol)缓慢加入到体系中，反应液室温搅拌过夜。然后加入100ml水静置分液，水相继续用二氯甲烷萃取(2
×
100ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，所得物过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)得化合物18b，油状物(10g，产率63.4％)。
[0475]
第二步：2-(4-碘-3-炔基-1-丁烷氧基)乙酸叔丁酯(化合物18c)的合成
[0476]
将2-(3-炔基-1-丁烷氧基)乙酸叔丁酯(5.52g，30mmol)和四丁基碘化铵(11.6g，31.4mmol)加到乙腈(200ml)中，室温下慢慢加入二乙酰氧基碘苯(9.65g,30mmol)的圆底烧瓶中，室温搅拌过夜。浓缩，所得物过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)得含化合物18c的油状产物(7.1g，产率76.4％)。
[0477]
第三步：2-(2-(1-苄基-5-碘-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙酸叔丁酯(化合物18d)的合成
[0478]
将化合物18c(4.65g，15mmol)，苄基叠氮(2.4g，18mmol)和碘化亚铜(0.57g，3mmol)加入n,n-二甲基甲酰胺(50ml)溶液中，70℃搅拌过夜。降至室温，将n,n-二甲基甲酰胺浓缩干后，加入蒸馏水(100ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得化合物18d(5.0g，产率75.2％)。
[0479]
第四步：2-(2-(1-苄基-4-三氟甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙酸叔丁酯(化合物18e)的合成
[0480]
将化合物18d(4.0g，9mmol)、三甲基三氟甲基硅烷(3.85g，27mmol)、1,10-菲啰啉(1.63g，9mmol)、氟化钾(1.6g，27.5mmol)、碳酸银(4.98g，18mmol)和碘化亚铜(1.72g，
9mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(150ml)中，氮气保护下，体系加热至120℃，搅拌3小时，降至室温，n,n-二甲基甲酰胺浓缩至干后，加入蒸馏水(100ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得化合物18e(1.5g，产率43.1％)。
[0481]
第五步：2-(2-(5-三氟甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙酸(化合物18f)的合成
[0482]
将化合物18e(1.5g，3.9mmol)，氯化钯(0.25g，1.4mmol)加入到甲醇(50ml)中，氢气氛围下，室温搅拌过夜。过滤除去固体，母液浓缩得化合物18f(0.7g，产率74.3％)。
[0483]
第六步：1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)胺基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3，4-d]嘧啶-6-基)-2-(2-(5-三氟甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙-1-酮(化合物18)的合成
[0484]
在0℃下，将1-丙基磷酸酐的50％n,n-二甲基甲酰胺溶液(1.53g，2.4mmol)加到含化合物18f(480mg,2.0mmol)、二异丙基乙胺(442mg,3.426mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中。搅拌5分钟，向反应液加入n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(中间体a)(500mg，1.54mmol)，室温搅拌16h。加入蒸馏水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离(分离条件)得到化合物18(22mg，产率2.3％)。
[0485]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.27(d,1h),7.54(t,1h),7.17-7.09(m,4h),4.57-4.43(m,5h),4.25(s,2h),3.77(s,2h),3.22-3.18(m,2h),3.04(s,2h),2.87-2.81(s,2h)。
[0486]
lc-ms m/z：474.4[m h]

。
[0487]
实施例19：化合物19的合成
[0488]
1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)胺基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-((4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-yl)甲氧基)乙-1-酮(化合物19)
[0489]
化合物19的合成路线如下所示：
[0490][0491]
第一步：1-苄基-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-酮(化合物19b)的合成
[0492]
将2-环己烯-1-酮(15.0g，156.0mmol)，苄基叠氮(30.0g，225.3mmol)和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(24.0g，153.6mmol)加入到水(300ml)中，90℃搅拌过夜。然后降至室温，用乙酸乙酯萃取(3
×
150ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，所得物过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得固体状化合物19b(6.4g，产率18.3％)。
[0493]
第二步：1-苄基-4-亚甲基-4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑(化合物19c)的合成
[0494]
将三苯基甲基碘化磷(6.4g，15.8mmol)加入到无水thf(60ml)中，氮气氛围下室温慢慢滴加六甲基二硅基胺基锂(20ml，1m，20mmol)，滴加完毕后室温搅拌1小时，然后加入化合物19b(3.0g，13.2mmol)，45℃搅拌过夜。然后降至室温，加入饱和氯化铵(200ml)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(3
×
100ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，所得物过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得固体状化合物19c(2.2g，产率74.2％)。
[0495]
第三步：(1-苄基-4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)甲醇(化合物19d)的合成
[0496]
将化合物19c(1.0g，4.4mmol)，加入到无水四氢呋喃(15ml)中，0℃下慢慢滴加硼烷的二甲硫醚溶液(4ml，10m，40mmol)滴加完毕后室温搅拌过夜。然后依次滴加水(5ml)，naoh水溶液(3m，5ml)，双氧水(30％，5ml)温度升至60℃搅拌4小时，降至室温，加入亚硫酸钠水溶液(5ml)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(3
×
50ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，所得化合物19d粗品，直接用于下一步反应。
[0497]
第四步：2-((1-苄基-4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)甲氧基)乙酸叔丁酯(化合物19e)的合成
[0498]
将上一步所得化合物19d粗品，加入到二氯甲烷(10ml)中，然后加入naoh水溶液(40％，10.6g)，再加入四丁基硫酸氢铵(0.2g，0.589mmol)和溴乙酸叔丁酯(4.2g，21.5mmol)。室温搅拌过夜。加入水(50ml)用乙酸乙酯萃取(3
×
30ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，所得物用制备tlc分离，得化合物19e(200mg，两步收率12.7％)。
[0499]
第五步：2-((4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)甲氧基)乙酸叔丁酯(化合物19f)的合成
[0500]
将化合物19e(200mg，0.56mmol)和氯化钯(40mg，0.23mmol)加入到甲醇(10ml)中，氢气氛围下45℃搅拌过夜。然后降至室温，过滤除去固体，浓缩，得化合物19f粗品直接用于下一步。
[0501]
第六步：2-((4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)甲氧基)乙酸(化合物19g)的合成
[0502]
将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4m，2ml)加到盛有上一步所得化合物19f粗品的圆底烧瓶中，室温搅拌1h。浓缩得到固体化合物19g(130mg)。粗产品不需要纯化，直接用于下一步。
[0503]
第七步：1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)胺基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3，4-d]嘧啶-6-基)-2-((4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)甲氧基)乙-1-酮(化合物19)的合成
[0504]
在0℃下，将1-丙基磷酸酐的50％n,n-二甲基甲酰胺溶液(440mg，0.692mmol)加到含有化合物19g(130mg,0.62mmol)，二异丙基乙胺(400mg，3.1mmol)的n,n-二甲基甲酰胺
(5ml)中。搅拌5分钟，向反应液加入n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(中间体a)(201mg，0.62mmol)，室温搅拌16h。加入蒸馏水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离得到化合物19(76mg,产率27.4％)。
[0505]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,1h),7.53(t,1h),7.18-7.15(m,2h),7.12-7.09(m,2h),4.61-4.40(m,5h),4.19(s,2h),3.62(b,1h),3.48(b,1h),3.23-3.18(m,2h),3.04(s,1h),2.87-2.81(m,2h),2.58-2.56(m,2h),1.88(b,2h),1.63(b,2h)。
[0506]
lc-ms m/z：446.5[m h]

。
[0507]
实施例20：化合物20的合成
[0508]
1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-(2-(5-甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙-1-酮(化合物20)
[0509]
化合物20的合成路线如下所示：
[0510][0511]
第一步：2-(1-苄基-5-甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙-1-醇(化合物20b)的合成
[0512]
将戊-3-炔-1-醇(1.068g，12.69mmol)，氯(五甲基环戊二烯)双(三苯基膦)合钌(ii)(777mg，0.976mmol)溶在甲苯(25ml)中，100℃下搅拌过夜。tlc监测反应完，直接浓缩除去溶剂。残留物用硅胶柱纯化(二氯甲烷:甲醇(v/v)＝20:1～10:1)得到化合物20b，黄色固体(1.07g，产率50.4％)。
[0513]
lc-ms m/z：218.2[m h]

。
[0514]
第二步：2-(2-(1-苄基-5-甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙酸叔丁酯(化合物20c)的合成
[0515]
在0℃下，依次将氢氧化钠(875mg，4.49mmol)的水溶液(10ml)、2-溴乙酸叔丁酯(875mg，4.49mmol)滴加到含有化合物20b(750mg,3.45mmol)、四丁基氯化铵(96mg,0.345mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，然后室温搅拌过夜。tlc监测反应完后，加入蒸馏水(20ml)稀释，用二氯甲烷(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1～3:1)得到化合物20c，淡黄色油状物(790mg，产率69.1％)。
[0516]
第三步：2-(2-(5-甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙酸(化合物20d)的合成
[0517]
将氯化钯(177mg，0.996mmol)小心加到含有化合物20c(660mg，1.991mmol)的异丙醇(15ml)溶液中，用氢气置换反应瓶内气体后，在氢气氛围下室温反应过夜。tlc监测反应完成后，过滤，浓缩直接得到化合物20d，黄色油状物(170mg，产率92％)。
[0518]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ4.12(s,2h),3.69(t,2h),2.90(t,2h),2.26(s,3h)。
[0519]
第四步：1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-(2-(5-甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙-1-酮(化合物20)的合成
[0520]
在0℃下，将2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物(660mg，1.037mmol，50％n,n-二甲基甲酰胺溶液)滴入含化合物20d(160mg,0.864mmol)，n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(281mg，0.864mmol)，n,n-二异丙基乙基胺(1117mg，8.64mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中，室温搅拌16h。lcms监测反应完后，加入蒸馏水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离得到化合物20，黄色固体(4.0mg，产率1.1％)。
[0521]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30(d,1h),7.59(d,1h),7.22-7.12(m,4h),4.63
–
4.41(m,5h),4.20(s,2h),3.73-3.71(m,2h),3.26
–
3.20(m,2h),2.94
–
2.79(m,4h),2.19(s,3h)。
[0522]
lc-ms m/z：420.2[m h]

。
[0523]
实施例21：化合物21的合成
[0524]
1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)胺基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-(2-(4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)乙氧基)乙-1-酮(化合物21)
[0525]
化合物21的合成路线如下所示：
[0526][0527]
第一步：2-(1-苄基-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-亚甲基)乙酸乙酯(化合物21b)的合成
[0528]
将膦酰基乙酸三乙酯(3.6g，16.0mmol)加入到无水thf(60ml)中，氮气氛围下0℃加入nah(0.6g，60％，15.7mmol)，然后室温搅拌1小时，再加入化合物21a(3.0g，13.2mmol)，室温搅拌过夜。然后降至室温，加入饱和氯化铵(200ml)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(3
×
100ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，所得物过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得固体
状化合物21b(4.4g)。
[0529]
第二步：2-(4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)乙酸乙酯(化合物21c)的合成
[0530]
将化合物21b(4.4g，14.8mmol)和氯化钯(400mg，2.3mmol)加入到甲醇(50ml)中，氢气氛围下45℃搅拌过夜。然后降至室温，过滤除去固体，浓缩，得化合物21c(1.6g，产率51.4％)。
[0531]
第三步：2-(1-三苯甲基-4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)乙酸乙酯(化合物21d)的合成
[0532]
将化合物21c(600mg，2.9mmol)，加入到无水n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，氮气氛围下0℃加入钠氢(110mg，60％，2.9mmol)，室温搅拌10min后加入三苯基氯甲烷(960mg，3.5mmol)，体系加热至45℃搅拌过夜。然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯萃取(3
×
50ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，所得物用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得化合物21d(900mg，产率69.0％)。
[0533]
第四步：2-(1-三苯甲基-4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)乙醇(化合物21e)的合成
[0534]
将化合物21d(1.15g，2.5mmol)，加入到无水四氢呋喃(10ml)中，0℃下慢慢滴加二异丁基铝氢的甲苯溶液(2.5ml，2m，5mmol)滴加完毕后室温搅拌1.5小时。然后加入naoh水溶液(2m，10ml)淬灭反应，再加入水(20ml)，用乙酸乙酯萃取(3
×
30ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得化合物21e(850mg，产率83.0％)。
[0535]
第五步：2-(2-(1-三苯甲基-4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)乙氧基)乙酸叔丁酯(化合物21f)的合成
[0536]
将上一步所得化合物21e(250mg，0.61mmol)，加入到二氯甲烷(2ml)中，然后加入naoh水溶液(40％，2ml)，再加入四丁基硫酸氢铵(20mg，0.06mmol)和溴乙酸叔丁酯(0.5g，2.6mmol)。室温搅拌过夜。加入水(10ml)，用乙酸乙酯萃取(3
×
10ml)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，所得物用制备tlc分离(分离条件)，得化合物21f(150mg，产率47.5％)。
[0537]
第六步：2-(2-(4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)乙氧基)乙酸(化合物21g)的合成
[0538]
将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(4m，2ml)加到盛有上一步所得化合物21f(150mg，0.29mmol)的圆底烧瓶中，室温搅拌1h。浓缩得到固体化合物21g粗品，不需要纯化，直接用于下一步。
[0539]
第七步：1-(2-((2,3-二氢-1h-茚-2-基)胺基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3，4-d]嘧啶-6-基)-2-(2-(4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-基)乙氧基)乙-1-酮(化合物21)的合成
[0540]
在0℃下，将1-丙基磷酸酐的50％n,n-二甲基甲酰胺溶液(216mg，0.34mmol)加到含有化合物21g(64mg，0.28mmol)，二异丙基乙胺(100mg,0.76mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中。搅拌5分钟，向反应液加入n-(2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二盐酸盐(中间体a)(110mg，0.34mmol)(110mg，0.34mmol)，室温搅拌16h。加入蒸馏水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(5ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用制备色谱分离得到化合物21
(35mg，产率27.1％)。
[0541]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,1h),7.54(d,1h),7.18-7.16(m,2h),7.12-7.09(m,2h),4.65-4.16(m,7h),3.66(b,2h),3.20-3.18(m,2h),2.87-2.81(m,3h),2.59-2.55(m,2h),1.97-1.87(m,3h),1.63(b,2h),1.40-1.37(m,1h)。
[0542]
lc-ms m/z：460.3[m h]

。
[0543]
实施例22：化合物22、化合物22s和化合物22r的合成
[0544]
2-(((r)-1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-基)氧基)-1-(2-((5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙烷-1-酮(化合物22)
[0545]
化合物22的合成路线如下所示：
[0546][0547]
第一步：2-((5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)叔丁基-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-羧酸叔丁酯(化合物22b)的合成
[0548]
在单口瓶中加入2-氯-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-羧酸叔丁酯(200mg,0.784mmol)，5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-胺(118mg,0.784mmol)，二异丙基乙胺(202mg,1.57mmol)，n-甲基吡咯烷酮(2ml)，80℃下搅拌16小时。冷却至室温，加水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1～1:1)得浅黄色固体2-((5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)叔丁基-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-羧酸叔丁酯(化合物22b)(150mg，产率43.5％)。
[0549]
lc-msm/z：371.43[m h]

。
[0550]
第二步：n-(5-氟-2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺盐酸盐(化合物22c)的合成
[0551]
在单口瓶中加入氯化氢/1,4-二氧六环溶液(2.5m,3ml)，2-((5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)叔丁基-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-羧酸叔丁酯(150mg，0.41mmol)，室温搅1h。过滤，50℃真空干燥得到白色固体n-(5-氟-2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺盐酸盐(化合物22c)(125mg，产率100％)。
[0552]
lc-msm/z：271.31[m h]

。
[0553]
第三步：2-(((r)-1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-基)氧基)-1-(2-((5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙烷-1-酮(化合物22)的合成
[0554]
室温下将原料(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-5-基)丙-2-基)氧)乙酸(332mg,0.61mmol)，n-(5-氟-2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺盐酸盐(125mg，0.41mmol)加入到3ml dmf中，0℃下加入t3p(50％dmf溶液)(464mg,0.61mmol)和二异丙基乙胺(264mg,2.05mmol)，自然升至室温，搅拌16h，反应液过滤，滤液加入水(1ml)，浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v/v)＝10:1)得类白色固体2-(((r)-1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-基)氧基)-1-(2-((5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙烷-1-酮(化合物22)(50mg，收率27.9％)。
[0555]
lc-msm/z：437.48[m h]

。
[0556]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,1h),7.58(t,2h),7.19(t,1h),7.02(m,1h),6.92(m,1h),4.61(m,3h),4.50(d,2h),4.19(m,2h),3.83(m,1h),3.26(m,2h),2.92(m,4h),1.17(d,3h)
[0557]
第四步：化合物22s和化合物22r的合成
[0558]
2-(((r)-1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-基)氧基)-1-(2-(((s)5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙烷-1-酮(化合物22s)
[0559]
2-(((r)-1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-基)氧基)-1-(2-(((r)5-氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙烷-1-酮(化合物22r)
[0560]
化合物22s和化合物22r由化合物22制备拆分获得。制备条件为caswh-hplc-k(agilent 1260)，chiralpak id-3柱，100
×
4.6mm i.d.,3um，流动相由a2和流动相b2组成。流动相a2为0.05％的二乙胺的正庚烷溶液，流动相b2为0.05％的二乙胺的乙醇溶液。梯度条件60％b2溶液和40％a2溶液。化合物拆分出来后经过以下条件确定其保留时间，hplc：chiralpak id-3，100
×
4.6mm，3um。流动相由a和流动相b组成。流动相a为0.05％的二乙胺的正庚烷溶液，流动相b为0.05％的二乙胺的乙醇溶液,1ml/min，流动相a保持40％，b保持60％等度洗脱。
[0561]
第一个洗脱的对映异构体，rt＝7.405min。
[0562]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,1h),7.58(t,2h),7.19(t,1h),7.02(m,1h),6.92(m,1h),4.61(m,3h),4.50(d,2h),4.19(m,2h),3.83(m,1h),3.26(m,2h),2.92(m,4h),1.17(d,3h)。
[0563]
第二个洗脱的对映异构体，rt＝9.002min。
[0564]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,1h),7.58(t,2h),7.19(t,1h),7.02(m,1h),6.92(m,1h),4.61(m,3h),4.50(d,2h),4.19(m,2h),3.83(m,1h),3.26(m,2h),2.92(m,4h),1.17(d,3h)。
[0565]
实施例23：化合物23的合成
[0566]
(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-基)氧基)-1-(2-((5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙烷-1-酮(化合物23)
[0567]
化合物23的合成路线如下所示：
[0568][0569]
第一步：2-((5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-羧酸叔丁酯(化合物23b)的合成
[0570]
在单口瓶中加入2-氯-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-羧酸叔丁酯(302mg,1.18mmol)，5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-胺(200mg,1.18mmol)，二异丙基乙胺(305mg,2.36mmol)，n-甲基吡咯烷酮(2ml)，80℃下搅拌16小时。冷却至室温，加水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50ml
×
2)洗，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1～1:1)得浅黄色固体2-((5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-羧酸叔丁酯(化合物23b)(150mg，0.39mmol，产率32.7％)。
[0571]
lc-ms m/z：389.1[m h]

。
[0572]
第二步：n-(5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺盐酸盐(化合物23c)的合成
[0573]
在单口瓶中加入氯化氢/1,4-二氧六环溶液(2.5m,3ml)，2-((5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-羧酸叔丁酯(150mg，0.39mmol)，室温搅1h。过滤，50℃真空干燥得到白色固体n-(5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺盐酸盐(化合物23c)(125mg，0.39mmol，产率100％)。
[0574]
lc-msm/z：289.3[m h]

。
[0575]
第三步：(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-基)氧基)-1-(2-((5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙烷-1-酮(化合物23)的合成
[0576]
室温下将原料(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-5-基)丙-2-基)氧)乙酸盐酸盐(104mg,0.47mmol)，n-(5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚-2-基)-6,7-二氢-5h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺盐酸盐(125mg，0.39mmol)加入到3ml dmf中，0℃下加入t3p(50％dmf溶液)(299mg,0.47mmol)和二异丙基乙胺(100mg,0.78mmol)，自然升至室温，搅拌16h，反应液过滤，滤液加入水(1ml)，浓缩干，残留物制备板分离得浅黄色固体(r)-2-((1-(1h-1,2,3-三唑-4-基)丙-2-基)氧基)-1-(2-((5,6-二氟-2,3-二氢-1h-茚满-2-基)氨基)-5,7-二氢-6h-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基)乙烷-1-酮(化合物23)(71mg，0.16mmol，产率40.5％)。
[0577]
lc-msm/z：456.3[m h]

。
[0578]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,1h),7.60(d,2h),7.25(t,2h),4.65-4.40(m,5h),4.18(b,2h),3.81(t,1h),3.20-3.18(m,2h),2.86-2.82(m,4h),1.12(t,3h)。
[0579]
生物学活性及相关性质测试例
[0580]
测试例1：autotaxin(atx)酶活性抑制试验
[0581]
化合物对autotaxin酶的抑制活性采用autotaxin抑制剂筛选检测试剂盒(cayman，700580)进行检测。首先将待测化合物在dmso溶剂中配制成10mm的储备液，然后使用dmso梯度稀释8个浓度点，随后以试剂盒提供的autotaxin检测缓冲液(1
×
)将8个浓度点稀释成19
×
的化合物工作液(dmso的含量为1.9％)。取出autotaxin检测试剂(10
×
)使用autotaxin检测缓冲液(1
×
)稀释10倍。取出autotaxin底物，加入1.2ml autotaxin检测缓冲液(1
×
)溶解，混匀后室温静置。在96孔板中，每个浓度点所在的孔中，每孔加入150μl autotaxin检测缓冲液(1
×
)，10μl稀释好的19
×
的化合物工作液，10μl autotaxin检测试剂(1
×
)，20μl溶解的autotaxin底物，混匀，37℃恒温震荡摇床，避光孵育30min；取出96孔板，置于酶标仪上读取od405；实验结果输入graphpad prism软件，经拟合计算得到各化合物的ic
50
。
[0582]
表1测试化合物对atx酶活性抑制活性结果
[0583]
测试化合物ic
50
(nm)对照化合物2.60化合物12.21化合物1s4.39化合物1r6.09化合物20.44化合物3274化合物41.88化合物59.61化合物615.5化合物7s7.51化合物7r0.83化合物8s7.86化合物94.92化合物11s1.98化合物11r2.92化合物107.17化合物121.16化合物143.09化合物151.08化合物131.58化合物161.65化合物170.73
化合物1816.9化合物1919.83化合物203.35化合物210.84化合物22s1.337化合物22r1.611化合物231.301
[0584]
实验结果表明，本发明化合物对atx酶具有很好的抑制活性。
[0585]
测试例2：热力学溶解度试验
[0586]
配制ph7.4的磷酸盐缓冲液(pbs)、ph5.8的fessif溶液(含牛黄胆酸钠10mm，卵磷脂2mm，氢氧化钠81.65mm，氯化钠125.5mm，油酸钠0.8mm，单油酸甘油酯5mm，马来酸55.02mm)、ph1.6的fassgf溶液(1l溶液含牛黄胆酸钠80μm，卵磷脂20μm，胃蛋白酶0.1g，氯化钠34.2mm)。
[0587]
精确称取化合物，加入配制好的ph7.4的磷酸盐缓冲液、ph5.8的fessif溶液和ph1.6的fassgf溶液，配制成浓度为4mg/ml的溶液，以1000rpm的转速振摇1小时，然后室温孵育过夜。孵育后的溶液以12000rpm转速离心10分钟，去除未溶解的颗粒，上清液转移至新的离心管中。将上清液进行适当的稀释后，加入含内标的乙腈溶液，采用相同基质配制的标曲进行定量。
[0588]
表2热力学溶解度试验结果
[0589][0590]
实验结果表明，本发明化合物热力学溶解度显著升高，预期在人体内肠道吸收程度高，口服给药暴露量较高，可降低临床给药剂量，提高临床顺应性。
[0591]
测试例3：人肝微粒体稳定性试验
[0592]
人肝微粒体稳定性试验采用化合物与人肝微粒体体外共孵育进行检测。首先将待测化合物在dmso溶剂中配制成10mm的储备液，随后使用乙腈将化合物稀释至0.5mm。使用pbs稀释人肝微粒体(corning)成微粒体/缓冲液溶液，并使用该溶液稀释0.5mm的化合物成为工作溶液，工作溶液中化合物浓度为1.5μm，人肝微粒体浓度为0.75mg/ml。取深孔板，每孔加入30μl工作溶液，然后加入15μl预热好的6mm nadph溶液启动反应，37℃孵育。在孵育的0、5、15、30、45分钟时，加入135μl乙腈至相应的孔中终止反应。在最后45分钟时间点用乙腈终止反应后，深孔板涡旋振动10分钟(600rpm/min)，然后离心15分钟。离心后取上清，1:1加入纯化水后进行lc-ms/ms检测，获得每个时间点化合物峰面积与内标峰面积比值，将5、15、30、45分钟时化合物的峰面积比值与0分钟时的峰面积比值进行比较，计算每个时间点化合物的剩余百分比，使用excel计算t
1/2
。
[0593]
表3人肝微粒体稳定性试验结果
[0594][0595][0596]
与对照化合物相比，本发明化合物表现出更为优良的肝代谢稳定性，在人体内代谢更慢，暴露量更高，可降低临床给药剂量和给药频次，降低临床给药的毒副作用，提高临床顺应性。测试例4：全自动电生理膜片钳qpatch检测化合物对herg的抑制作用
[0597]
使用全自动电生理膜片钳qpatch检测化合物对herg的抑制作用。本试验所用的细胞为转染有herg cdna与稳定表达herg通道的cho细胞系(由丹麦sophion bioscience公司提供)，细胞代数为p24。细胞培养在含有下列成分的培养基中(皆来源于invitrogen公司)：ham’s f12培养基，10％(v/v)灭活的胎牛血清，100μg/ml潮霉素b，100μg/ml geneticin。cho herg细胞生长于含上述培养液的培养皿中，并在37℃、含5％co2的培养箱中进行培养。
[0598]
配制细胞外液(2mm cacl2、1mm mgcl2、4mm kcl、145mm nacl、10mm glucose、10mm hepes，ph约7.4，渗透压约305mosm)和细胞内液(5.374mm cacl2、1.75mm mgcl2、120mm kcl、10mm hepes、5mm egta、4mm na-atp，ph约7.25，渗透压约295mosm)。
[0599]
将待测化合物在dmso溶剂中配制成10mm的储备液，并使用dmso稀释化合物至3、1、0.3、0.1mm，然后使用细胞外液稀释化合物至30、10、3、1、0.3和0.1μm，除了30μm的化合物dmso的最终浓度为0.3％外，其它浓度化合物溶液中dmso的最终浓度都为0.1％。
[0600]
将cho herg细胞经消化重悬后，加入全自动qpatch系统(sophion，丹麦)中，按照如下预设的程序进行试验。
[0601]
在初始阶段达成破膜的全细胞配置状态后，室温环境下(约25℃)，记录全细胞电流，细胞记录至少120秒，以达到稳定，选取稳定细胞进行试验。在整个试验过程中，细胞钳制在-80mv的电压下，细胞钳制电压去极化到 20mv以激活herg钾通道，2.5秒后再钳制到-50mv以消除失活并产生外向尾电流。尾电流峰值用作为herg电流大小的数值。上述的电压模式每15秒被应用到细胞进行电生理试验。加含0.1％二甲基亚砜(溶剂)的外液到细胞，建立基线，再允许电流稳定3分钟。化合物溶液加入后细胞保持在测试环境中，直至该化合物的效果达到了稳定状态或以4分钟为限。在化合物不同浓度梯度的测试实验中，化合物由低到高浓度加至所钳制的细胞上。完成化合物测试后用外液清洗细胞直到电流恢复到稳定的状态。
[0602]
试验数据由sophion提供的qpatch分析软件，excel以及graphpad prism等进行分析。
[0603]
表4化合物对herg的抑制作用结果
[0604]
测试化合物herg ic
50
(μm)herg ic
50
/atx ic
50
对照化合物6.696.69/(2.60
×
10-3
)＝2600化合物7r25.425.4/(0.83
×
10-3
)＝30600化合物15＞30＞27800化合物16＞30＞18200
[0605]
与对照化合物相比，本发明化合物表现出更弱的herg抑制活性，结合化合物对atx酶活性抑制的ic
50
值，本发明化合物对herg的抑制表现出更优的安全窗口，具有显著的心脏安全优势。
[0606]
测试例5：药代动力学试验
[0607]
大鼠药代动力学试验，采用雄性sd大鼠3只，180-240g，禁食过夜，口服灌胃给药10mg/kg。在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血。血液样品8000转/分钟4℃离心6分钟，收集血浆，于-20℃保存。取各时间点血浆，加入3-5倍量含内标的乙腈溶液混合，涡旋混合1分钟，13000转/分钟4℃离心10分钟，取上清液加入3倍量水混合，取适量混合液进行lc-ms/ms分析。主要药代动力学参数用winnonlin 7.0软件非房室模型分析。
[0608]
小鼠药代动力学试验，使用雄性cd-1小鼠9只，20-25g，禁食过夜，口服灌胃给药10mg/kg，每个采血时间点3只小鼠，共9只小鼠交替采血。犬药代动力学试验，使用雄性比格犬3只，8-10kg，禁食过夜，口服灌胃给药5mg/kg。
[0609]
表5体内药代动力学试验结果
[0610][0611]
实验结果表明，本发明化合物表现出更为优良的药代动力学性质。