一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告系统及其构建方法与流程

技术特征：
1.一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告载体，其特征在于，所述报告载体包括：含有干扰素启动子和抗性基因的基因组合元件、表达载体、和/或报告基因元件；所述干扰素启动子位于抗性基因的5’末端，用于启动抗性基因的表达；且所述干扰素启动子与表达载体基因组转录用启动子方向相反。2.如权利要求1所述的报告载体，其特征在于，所述基因组合元件还含有kozac序列，和/或sv40 poly a信号序列；所述kozac序列3’末端与抗性基因起始密码子5’末端连接；所述sv40 poly a信号序列的5’末端与抗性基因终止子的3’末端连接。3.如权利要求1所述的报告载体，其特征在于，所述抗性基因为氨基糖苷类抗生素抗性基因，所述干扰素启动子为i型干扰素通路启动子。4.如权利要求3所述的报告载体，其特征在于，所述抗性基因包括新霉素抗性基因(neor)、潮霉素b抗性基因；所述干扰素启动子为ifn-β启动子。5.如权利要求1所述的报告载体，其特征在于，所述表达载体为fg12载体，所述基因组合元件插入到fg12载体中。6.如权利要求1所述的报告载体，其特征在于，所述基因组合元件的基因序列如seq id no.1或seq id no.3所示。7.一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的干扰素通路激活报告系统，其特征在于，所述报告系统为转染权利要求1-6任一所述报告载体的宿主细胞。8.如权利要求7所述的报告系统，其特征在于，所述宿主细胞为hela细胞。9.一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的筛选系统，其特征在于，所述筛选系统包括如权利要求8所述的报告系统和靶向敲除所述的报告系统全基因中每个基因的sgrna，所述sgrna选自human_geckov2_library_a；或所述筛选系统为分别敲除如权利要求9所述的报告系统中每个基因后获得的基因敲除细胞库。10.一种筛选干扰素信号通路负调控因子的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)构建权利要求9所述的基因敲除细胞库；(2)分别取所述基因敲除细胞库中的基因敲除细胞，加入干扰素诱导处理24小时后，在含抗性基因对应的抗生素的培养基中培养；(3)结果判定：如果所述基因敲除细胞在含抗性基因对应抗生素和干扰素的培养基中存活，则所述基因敲除细胞为干扰素信号通路负调控因子编码基因敲除的细胞，判定所述敲除的基因为干扰素信号通路负调控因子。

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告系统及其构建方法。所述用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告系统含有干扰素启动子偶联抗性基因编码区，使得该抗性基因的表达受到细胞内干扰素通路激活的上调。在干扰素处理下，细胞内的干扰素通路激活受体将被上调表达，从而对负调控因子的功能丧失更加敏感。没有敲除掉负调控因子的绝大部分细胞，不会发生干扰素通路的激活；而发生负调控因子编码基因敲除的细胞，会因为干扰素通路的激活，而激活抗性基因的表达。与基因敲除文库联合实现了干扰素激活通路中负调控因子的筛选和鉴定。通路中负调控因子的筛选和鉴定。通路中负调控因子的筛选和鉴定。


技术研发人员：穆昕 杨晗 赵振翔 朱紫祥
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日：2021.09.29
技术公布日：2022/1/14