一种耐盐的RPK突变体及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种蛋白酶k突变体，其是：(a)氨基酸序列对应于seq id no:1所示的蛋白酶k，以下位点发生突变的酶：第266位、第279位；所述位点突变为亲水性或中性氨基酸。2.如权利要求1所述的蛋白酶k突变体，其特征在于，第266位突变为tyr、第279位突变为gly；较佳地，所述的蛋白酶k突变体的氨基酸序列如seq id no:2所示。3.分离的多核苷酸，其编码权利要求1～2任一所述的蛋白酶k突变体。4.一种载体，它含有权利要求3所述的多核苷酸。5.一种遗传工程化的宿主细胞，它含有权利要求4所述的载体，或基因组中整合有权利要求3所述的的多核苷酸；较佳地，所述的宿主细胞包括原核细胞或真核细胞；较佳地，所述真核细胞包括酵母细胞、霉菌细胞、昆虫细胞、植物细胞、真菌细胞或哺乳动物细胞等；较佳地，所述的原核细胞包括大肠杆菌细胞、枯草杆菌细胞等。6.一种提高蛋白酶k的耐盐性或稳定性的方法，包括对其进行突变改造，对应于seq id no:1所示的蛋白酶k，对选自下组的位点或位点组合进行突变：第266位、第279位；所述位点突变为亲水性或中性氨基酸。7.权利要求1～2任一所述的蛋白酶k突变体的制备方法，该方法包含：(i)培养权利要求5所述的宿主细胞；(ii)收集含有所述的蛋白酶k突变体的培养物；(iii)从培养物中分离出所述的蛋白酶k突变体。8.权利要求1～2任一所述的蛋白酶k突变体、表达该突变体的宿主细胞或其裂解产物的用途，用于酶解蛋白质；较佳地，用于特异性识别和切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，酶解蛋白质。9.一种酶解蛋白质的方法，包括：利用前面任一所述的蛋白酶k突变体、表达该突变体的宿主细胞或其裂解产物进行酶解反应。10.一种用于酶解蛋白质的检测体系或检测试剂盒，其中含有：权利要求1～2任一所述的蛋白酶k突变体，表达该突变体的宿主细胞或其裂解产物。

技术总结
本发明提供了一种耐盐的RPK突变体及其应用。本发明人发现蛋白酶K的一些位点与其耐盐性及稳定性密切相关，在此基础上开发了一种蛋白酶K突变体，与野生型相比，所述突变体的耐盐性及稳定性更好。本发明也提供了优化的表达重组蛋白酶K突变体的方法，其产量高、生产成本低、适合规模化生产。适合规模化生产。


技术研发人员：权利要求书1页说明书9页序列表4页附图2页
受保护的技术使用者：上海雅心生物技术有限公司
技术研发日：2021.08.11
技术公布日：2022/1/11