基于环构象的抗菌化合物设计、合成及应用的制作方法

1.本发明具体为基于环构象的抗菌化合物设计、合成及应用，并涉及合成方法。
2.背景介绍
3.结核病是由结核分枝杆菌感染导致的一种传染病，根据世界卫生组织(who)最新发布的《2020年全球结核病报告》，2019年全球大约有1000万人罹患结核病。从2019 年结核病例中可以发现，结核病影响到男女和所有年龄组的人，我国依然属于结核病感染非常严重的国家。在全球范围内，耐多药或利福平结核病在结核病病例数量中所占比例仍然稳定。从数据看结核病形势依然严峻，而对于耐多药结核杆菌引起的感染，传统的治疗方法的效果日渐减弱，发现和发展新的治疗耐药结核病的药物与方法迫在眉睫。
4.pyridomycin由umezawa,h.等人于1953年首次从链霉素菌株6706中分离得到。该类天然产物对于分枝杆菌具有特异性活性，但对其他细菌没有活性。实验表明它能够杀死携带katg突变的结核分枝杆菌的耐异烟肼临床分离株。通过研究发现pyridomycin 的作用靶点是inha。在inha中它能够占据inha活性中心的多个nhad结合位点，从而抑制nhad与inha的结合，使菌膜的形成受阻，从而使其具有抗结核杆菌的能力。因此关于pyridomycin及其衍生物的研究对于开发新的对抗耐药结核杆菌药物具有深远的意义。
5.pyridomycin结构式为：
[0006][0007]
1989年mitsuhiro报道了pyridomycin的全合成。2012年k.-h.altmann报道了关于pyridomycin衍生物的合成路线及活性，发现环外不饱和双键结构并非其抗结核杆菌活性的必须基团。随后该课题组通过合成不同结构的衍生物对pyridomycin的构效关系进行研究，发现c2取代基越大抗结核杆菌活性越高，当c2取代基为极性基团时化合物抗结核杆菌活性减弱。c2的手性影响着化合物的抗结核活性。n-6位取代的3-羟基吡啶甲酸为必需基团，缺失或者羟基取代位置改变均会导致该化合物抗结核杆菌活性减弱甚至消失。


技术实现要素：

[0008]
经查阅文献发现pyridomycin结构中环外烯烃并非其抗结核杆菌活性必要，为衍生物设计的主要位点。本发明以c2位为衍生位点设计了pyridomycin衍生物及小分子进行合成并研究其活性。本发明具体为：
[0009]
一种pyridomycin的衍生物，所述pyridomycin的结构为：
[0010]
。其大环衍生物为：。
[0011]
该大环衍生物保留了天然产物中12元杂环的骨架结构以及n6位的3-羟基-2-吡啶甲酸结构，其中，r，r3分别为氢，c1-c4烷基，氟，氯，氨基，羟基，硝基，磺酸基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基。r1，r2分别为氢，c1-c4烷基。r4，为氢， c1-c4烷基，氟，氯，氨基，羟基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基。x为 ch2，氧或氮。n＝1-2。芳基指苯、萘芳香结构。杂芳基指噁唑、噻唑、吡啶、嘧啶、喹啉等芳香杂环结构。
[0012]
此外：
[0013]
(1)将c2位的环外不饱和双键置换为环状氨基酸，所述环状氨基酸可以调控大环的构象。具体利用环大小和羧基alpha-位手性构型控制大环的构象。
[0014]
(2)利用pyridomycin分子6-7位邻二胺结构特征，保留了pyridomycin中3-羟基-2-吡啶甲酸以及3-吡啶两个活性相关结构通过调整邻二胺的二面角，使小分子具有 pyridomycin的独特构象。
[0015]
此处，小分子是指：。其中，r，r3分别为氢，c1-c4烷基，氟，氯，氨基，羟基，硝基，磺酸基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基。r5，r6， r7，r8分别为氢，c1-c4烷基，组合成环或芳基结构。r6为氧并与所连碳原子形成双键构成羰基。r5与r6可环合为五元或六元环结构。r6与r7可环合为五元或六元饱和环结构，或与所连原子共同组成苯环及取代的苯环。r7与r8可环合为五元或六元环结构。r9为氢，c1-c4烷基，氟，氯，氨基，羟基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基。r9与 r5可环合为五元或六元环结构。r9与所连碳原子形成双键构成羰基。m＝1-4。
[0016]
进一步说，d-脯氨酸(d-pro-8),l-脯氨酸(l-pro-8)、d-哌啶酸(d-pip-8), l-哌啶酸(l-pip-8)具体结构为：8)具体结构为：
[0017]
d-pro-8和l-pro-8对应于pyridomycin替换了其1-2位的官能团，用脯氨酸控制大环的构象。d-pip-8和l-pip-8对应于pyridomycin替换了其1-2位的官能团，用哌啶酸控制大环的构象。所有的分子都保留了原有的取代的吡啶环，保持其与靶蛋白的结合能力。
[0018]
进一步说，小分子保留了两端吡啶结合位点的小分子简化构象形式。将pyridomycin 分子6-7位的邻二胺结构简化为苯基(s-1，s-3，s-5)，环己二胺(s-2，s-4)，哌啶(s-6，s-7)等结构，通过调整邻位二胺的二面角模拟大环构象，使pyridomycin的两个吡
啶符合结合构象的形式。邻二胺结构也可用环戊二胺，脯氨酸等结构形式替换。
[0019]
所述苯基为n,n
’‑
吡啶衍生基-邻苯二胺类小分子，其构型包括：苯基第一结构 (s-1)、苯基第二结构(s-3)、苯基第三结构(s-5)，具体结构依次为：
[0020][0021]
所述环己二胺为n,n
’‑
吡啶衍生基-环己二胺类小分子，其构型包括：环己二胺第一结构(s-2)和环己二胺第二结构(s-4)，具体结构依次为：
[0022][0023]
所述哌啶为n,n
’‑
吡啶衍生基-哌啶酸类小分子，其构型包括：哌啶第一结构(s-6) 和哌啶第二结构(s-7)，具体结构为：
[0024][0025]
进一步说，以五元环胺(d/l-脯氨酸)替代pyridomycin的1-2位原子，所述五元环胺为d-脯氨酸和/或l-脯氨酸。以控制大环构象。衍生物记为d-pro-8、l-pro-8。合成工艺为：将化合物d/l-pro-1在edci条件下与化合物l-tre-1发生酰胺化反应得到化合物d/l-pro-2。所述化合物d/l-pro-1为n-fmoc-d-pro-oh，化合物l-tre-1为 n-boc-l-thr-obn。随后化合物d/l-pro-2在二乙胺、二氯甲烷条件下脱除fmoc保护基团得到化合物d/l-pro-3，然后与吡啶非天然氨基酸三乙胺盐p2发生酰胺化反应得到化合物d/l-pro-4。接着化合物d/l-pro-4经过钯碳加氢反应得到关环前体后再在hatu、 dipea、dmf条件下进行一步环化得到化合物d/l-pro-6。最后将化合物d/l-pro-6上的 boc保护基用tfa脱去后与3-羟基-2-吡啶甲酸在hatu，dipea条件下进行酰胺化反应从而完成化合物d/l-pro-8的合成。
[0026]
进一步说，以六元环胺(d/l-哌啶酸)替代pyridomycin的1-2位原子，以控制大环构象。六元环胺为d-哌啶酸和/或l-哌啶酸。衍生物记为d-pip-8、l-pip-8。合成工艺为：化合物d/l-pip-1{n-fmoc-d/l-pro-oh}在edci条件下与化合物 l-tre-1{n-boc-l-thr-obn}发生接肽反应得到化合物d/l-pip-2。所述化合物d/l-pip-1 为n-fmoc-d/l-pro-oh。所述
化合物l-tre-1为n-boc-l-thr-obn。随后化合物d/l-pip-2 在二乙胺、二氯甲烷条件下脱除fmoc保护基团得到化合物d/l-pip-3，然后化合物 d/l-pip-3再与吡啶非天然氨基酸三乙胺盐p2发生酰胺化反应得到化合物d/l-pip-4。接着化合物d/l-pip-4经过钯碳加氢反应后再在hatu，dipea条件下进行一步环化反应得到化合物d/l-pip-6。最后将化合物d/l-pip-6上的boc保护基用tfa脱去后与3-羟基-2-吡啶甲酸在hatu，dipea条件下得到化合物d/l-pip-8的合成。
[0027]
进一步说，n,n
’‑
吡啶衍生基-邻苯二胺类小分子s-1、s-3、s-5的合成工艺为：将化合物s-1-1{请具体介绍s-1-1的化学结构，如是现有产物可直接给商品名或通用名} 与叔丁氧羰基邻苯二胺发生酰胺化反应得到化合物s-1-2，然后用tfa脱去叔丁氧羰基保护基。将3-羟基-2-吡啶甲酸的羟基用甲氧基甲醚保护起来后，与化合物s-2-3进行酰胺化反应，脱掉mom保护基即可得到目标产物s-1。
[0028]
进一步说，n,n
’‑
吡啶衍生基-环己二胺类小分子s-2、s-4的合成工艺为：1h nmr (300mhz,cdcl3)δ11.81(s,1h),8.96(d,j＝2.3hz,1h),8.67(dd,j＝4.9, 1.7hz,1h),8.21(d,j＝7.4hz,1h),8.07
–
7.97(m,2h),7.37
–
7.29(m, 2h),7.28
–
7.25(m,1h),7.23(dd,j＝6.9,4.0hz,1h),4.12
–
3.87(m,2h), 2.36(dt,j＝12.5,2.8hz,1h),2.14(dt,j＝12.5,2.6hz,1h),1.95
–
1.77 (m,2h),1.68
–
1.27(m,4h).hrms(esi)calcd for:c
18h21
n4o3 [m h] 341.16082, found 341.16165；c
18h20
n4nao
3
[m na]

363.14276；found 363.14346。
[0029]
进一步说，n,n
’‑
吡啶衍生基-哌啶酸类小分子化合物s-6的合成方法为：氮气保护下将化合物s-4-1溶解于干燥二氯甲烷中，冷却至0℃，加入edci、3-氨甲基吡啶和dmap,恢复室温搅拌，薄层色谱监测。反应完全后加水淬灭，dcm萃取有机相依次用水、饱和nahco3溶液洗涤、饱和nacl溶液洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离，得到化合物s-6-2。
[0030]
将化合物s-6-2溶解于二氯甲烷中，室温加入二乙胺室温反应，薄层色谱监测。反应完全后旋干，得到化合物s-6-3粗产物，直接用于下一步。化合物s-6-3粗产物溶解于干燥dmf中，加入mom保护的3-羟基-2-吡啶甲酸的钠盐，冷却。依次加入hatu、dipea，室温搅拌过夜，lc-ms监测。向体系中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和nahco3溶液、水、饱和nacl溶液洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，将残留物用thf 溶解，加入稀盐酸，室温搅拌过夜，薄层色谱监测。加乙酸乙酯稀释，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取除去酯溶性杂质，保留水相，加入甲醇，冷却，用naoh溶液调节ph 至碱性，反应体系用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和nahco3溶液、水、饱和nacl溶液洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离得到化合物s-6。
[0031]
进一步说，模拟pyridomycin天然产物的大环构象，利用脯氨酸或哌啶酸等五元或六元环结构控制大环构象，保留侧链两个吡啶环衍生物结构。进一步以苯二胺、环己二胺或哌啶酸等六元或五元环状邻二胺模拟pyridomycin分子的6-7位邻二胺结构，通过邻二胺取代形式的变化调节二面角，模拟天然产物构象，调整侧链两个吡啶衍生官能团与靶标蛋白的结合能力。
[0032]
这一类分子，或其合理的盐形、组合形式，可以具有潜在的抗微生物、抗细菌、抗真菌等活性，特别针对结核杆菌具有一定的抗性。进一步可以具有其他潜在的生物学活性。
[0033]
有益的技术效果
[0034]
以活性测试评价本发明的技术效果：
[0035]
所有待筛选的化合物溶解在100％二甲基亚砜(dmso)中，并以2mg/ml的浓度储存。瑞唑林钠盐(resazurin sodium salt)粉溶解在蒸馏水中，浓度0.01％(w/v)，无菌过滤储存于4度(一周用完)。所有常规化学品都市场购买获得，未经进一步纯化。
[0036]
m.smegmatis、m.aurum、m.abscessus、m.avium、bcg在含有10％(v/v)adc(油酸、白蛋白、葡萄糖、过氧化氢酶)的middlebrook 7h9培养基，和含有0.05％的tween 80 琼脂中在37度进行培养。
[0037]
mic用瑞唑林还原微板试验(resazurin reduction microplate assay，rema)中测定(参考antimicrob.agents chemother.2002,46,2720实验步骤)。在96孔板(100μl) 中，将化合物(按梯度稀释)加入到稀释的细菌悬浮液中，用pcr膜密封试板并孵育(7 天，37℃)。使用氧化还原指示剂(0.025％w/v、16h)测定细菌活力，并使用tecaninfinite m200读板机通过荧光(ex：560nm，em：590nm)进行测定。最小的抑制作用浓度(mic)被确定为瑞唑林钠荧光处于背景水平的化合物的最低浓度(相当于无细菌控制)。实验至少进行了两次，并报告其平均值。
[0038]
活性表格
[0039][0040][0041]
备注：mic(ug/ml): 代表mic《10； 代表10《mic《50； 代表50《mic；
[0042]
由上表可知，本发明的产物达到了预期目的，活性优异。
[0043]
如图1所示，大环衍生物保留了天然产物中12元杂环的骨架结构以及n6位的3
‑ꢀ
羟基-2-吡啶甲酸结构，将c2位的环外不饱和双键置换为d,l-脯氨酸、d,l-哌啶酸。小分子保留了pyridomycin中3-羟基-2-吡啶甲酸以及3-吡啶两个活性相关结构。
附图说明
[0044]
图1位为本发明中衍生物及小分子结构式的汇总图。
[0045]
图2为d-脯氨酸衍生物d-pro-8(非天然氨基酸片段的合成)的合成工艺流程图。
[0046]
图3为d-脯氨酸衍生物的合成工艺流程图。
[0047]
图4为l-脯氨酸衍生物的合成工艺流程图。
[0048]
图5为d-哌啶酸衍生物的合成工艺流程图。
[0049]
图6为l-哌啶酸衍生物的合成工艺流程图。
[0050]
图7为化合物s-1的合成工艺流程图。
[0051]
图8为化合物s-2的合成工艺流程图。
[0052]
图9为化合物s-3的合成工艺流程图。
[0053]
图10为化合物s-4的合成工艺流程图。
[0054]
图11为化合物s-5的合成工艺流程图。
[0055]
图12为化合物s-6的合成工艺流程图。
[0056]
图13为化合物s-7的合成工艺流程图。
具体实施方式
[0057]
现结合附图详细说明本发明的技术特点。
[0058]
参见图1，一种pyridomycin的衍生物，所述pyridomycin的结构为：
[0059]
。其大环衍生物为：。
[0060]
该大环衍生物保留了天然产物中12元杂环的骨架结构以及n6位的3-羟基-2-吡啶甲酸结构，其中，r，r3分别为氢，c1-c4烷基，氟，氯，氨基，羟基，硝基，磺酸基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基。r1，r2分别为氢，c1-c4烷基。r4，为氢，c1-c4烷基，氟，氯，氨基，羟基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基。x为 ch2，氧或氮。n＝1-2。芳基指苯、萘芳香结构。杂芳基指噁唑、噻唑、吡啶、嘧啶、喹啉等芳香杂环结构。(1)将c2位的环外不饱和双键置换为环状氨基酸，所述环状氨基酸可以调控大环的构象。具体利用环大小和羧基alpha-位手性构型控制大环的构象。(2)利用pyridomycin分子6-7位邻二胺结构特征，保留了pyridomycin中3-羟基-2
‑ꢀ
吡啶甲酸以及3-吡啶两个活性相关结构通过调整邻二胺的二面角，使小分子具有 pyridomycin的独特构象。
[0061]
此处，小分子是指：。其中，r，r3分别为氢，c1-c4烷基，氟，氯，氨基，羟基，硝基，磺酸基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基。r5，r6， r7，r8分别为氢，c1-c4烷基，组合成环或芳基结构。r6为氧并与所连碳原子形成双键构成羰基。r5与r6可环合为五元或六元环结构。r6与r7可环合为五元或六元饱和环结构，或与所连原子共同组成苯环及取代的苯环。r7与r8可环合为五元或六元环结构。r9为氢， c1-c4烷基，氟，氯，氨基，羟基，芳基，取代的芳基，杂芳基，取代的杂芳基。r9与 r5可环合为五元或六元环结构。r9与所连碳原子形成双键构成羰基。m＝1-4。
[0062]
实施例一：d-脯氨酸衍生物d-pro-8
[0063]
非天然氨基酸片段的合成如图2所示。参考mitsuhiro课题组报道的合成路线并进行改进，例如甲磺酸化时将溶剂由吡啶换成二氯甲烷，同时加入三乙胺作为缚酸剂，可以短时间内完成化合物2-4的合成，产率与非对映异构体比例不变，操作更简便。此外，使用亚氯
化酸钠、磷酸二氢钠条件代替溴素作为氧化条件得到化合物2-6，最后在三乙胺甲醇条件下进行酯交换反应得到化合物p2。
[0064]
如图3所示，化合物d-pro-1在edci条件下与化合物l-tre-1发生酰胺化反应得到化合物d-pro-2，随后化合物d-pro-2在二乙胺、二氯甲烷条件下脱除fmoc保护基团得到化合物d-pro-3，然后与吡啶非天然氨基酸三乙胺盐p2发生酰胺化反应得到化合物d-pro-4。接着化合物d-pro-4经过钯碳加氢反应得到关环前体后再在hatu、dipea、dmf条件下进行一步环化得到化合物d-pro-6。最后将化合物d-pro-6上的boc保护基用tfa脱去后与3-羟基-2-吡啶甲酸在hatu，dipea条件下进行酰胺化反应从而完成化合物d-pro-8的合成。
[0065]
(1)化合物d-pro-2的合成
[0066]
氮气保护下，将化合物d-pro-1(1g，1eq.)溶解于15ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入edci(1.14g，2eq.)、化合物l-tre-1(0.92g，1eq.)，加入4-二甲氨基吡啶(dmap，0.18g，0.5eq.)，移除冰浴，恢复室温反应2h，薄层色谱监测。反应完全后，向体系中加入10ml水淬灭，分离有机相，水相用二氯甲烷(20ml
×
3)萃取，合并有机相，分别用饱和nahco3溶液(20ml)、水(20ml)、饱和nacl溶液(20ml)洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶色谱柱分离得到化合物d-pro-2(1.8g，96％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.76(d,j＝7.4hz,2h),7.61(ddd,j＝20.9,14.8,7.4hz,2h),7.35(dp,j＝20.0,7.5hz,9h),5.50(ddt,j＝21.1,7.9,5.3hz,1h),5.13(d,j＝15.6hz,2h),4.64
–
4.04(m,5h),3.61(td,j＝8.5,6.9,3.7hz,1h),3.48(dtd,j＝10.4,7.3,3.5hz,1h),2.18
–
1.98(m,1h),1.83(ddt,j＝28.2,14.8,8.8hz,3h),1.49(s,3h),1.45(s,6h),1.36(d,j＝6.5hz,2h),1.25(d,j＝6.4hz,1h).hrms(esi)calcdforc
36h40
n2nao
8
[m na]

651.26769；found651.26782.
[0067]
(2)化合物d-pro-4的合成
[0068]
将化合物d-pro-2(0.6g，1eq.)溶解于5ml二氯甲烷中，室温加入5mldea。室温反应1.5h，直接减压浓缩除去二氯甲烷和dea，加入二氯甲烷(3ml
×
3)，减压浓缩，得到化合物d-pro-3粗产物(0.60g)，无需纯化直接用于下一步。将非天然吡啶氨基酸的三乙胺盐p2(0.25g，1eq.)溶于4ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入hatu(0.54g，2eq.)搅拌5min，将化合物d-pro-3的粗产物(0.30g，0.7eq.)溶于4ml二氯甲烷中加入反应体系中，0℃搅拌5min，加入dipea(0.63ml，5eq.)，0℃搅拌30min，薄层色谱监测。反应完全后，向体系中加入4ml水淬灭，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(10ml
×
3),合并有机相，依次用水(10ml)、饱和nacl溶液(10ml)洗涤，无水na2so4干燥，过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离，回收0.29g未反应的d-pro-2，得到化合物d-pro-4(0.15g，两步产率47％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.56(d,j＝2.2hz,1h),8.54
–
8.49(m,1h),7.63(dt,j＝7.9,2.0hz,1h),7.35(d,j＝3.3hz,5h),7.27
–
7.22(m,1h),5.51(td,j＝6.5,2.5hz,1h),5.12(d,j＝2.5hz,2h),4.49(dd,j＝9.8,2.5hz,1h),4.42(dd,j＝8.6,4.2hz,1h),3.88(dt,j＝9.7,6.4hz,1h),3.73(dt,j＝7.3,3.1hz,1h),3.54(dt,j＝9.7,7.2hz,1h),3.37(ddd,j＝8.5,6.4,2.2hz,1h),3.17(dd,j＝14.0,8.3hz,1h),3.13
–
3.05(m,1h),3.02(dd,j＝7.9,6.6hz,1h),2.17
–
2.03(m,1h),1.92(p,j＝6.3hz,2h),1.79
–
1.75(m,1h),1.47(s,9h),1.32(d,j＝6.5hz,3h),1.06(d,j＝6.8hz,3h).hrms(esi)calcdforc
32h43
n6o
8
[m h]

639.31369；found639.31384；c
32h42
n6nao
8
[m na]

661.29563；found661.29553.
[0069]
(3)化合物d-pro-6的合成
[0070]
将化合物d-pro-4(0.1g，1eq.)溶解于8ml甲醇中，用真空水泵减压换气，用氮气置换溶剂中残留空气，加入钯碳催化剂(10％，67.30mg，0.4eq.)，真空水泵减压换气，用氢气置换体系中氮气，在氢气球条件下室温搅拌3h，薄层色谱监测。反应完全后，将反应体系直接用硅藻土过滤，除去钯碳催化剂，减压浓缩除去溶剂，得到化合物d-pro-5的粗产物，直接用于下一步，向化合物d-pro-5的粗产物中加入干燥甲苯(10ml
×
3)共沸除去残存的少量水后加入156ml干燥dmf，冷却至0℃，加入hatu(0.6g，10eq.),0℃搅拌5min，加入dipea(0.42ml，15eq.)，缓慢恢复室温搅拌过夜，薄层色谱监测。反应完全后减压浓缩除去dmf,加入乙酸乙酯和水各10ml溶解，分离有机相，水相用乙酸乙酯(10ml
×
5)萃取。合并有机相，有机相分别用水(10ml)、饱和nahco3溶液(10ml)、饱和nacl溶液(10ml)洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离，得到化合物d-pro-6(20mg，26％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.57(d,j＝2.2hz,1h),8.49(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),7.66(dt,j＝7.9,2.0hz,1h),7.26
–
7.21(m,1h),5.28(d,j＝11.1hz,1h),4.54(dd,j＝8.5,3.5hz,1h),4.26(s,1h),3.92(d,j＝7.7hz,1h),3.58(ddd,j＝9.9,7.5,5.4hz,1h),3.52(s,1h),3.49
–
3.39(m,1h),3.06
–
2.94(m,2h),2.50
–
2.34(m,1h),2.22(d,j＝14.8hz,1h),2.12(dh,j＝13.0,5.9hz,2h),2.00(d,j＝7.6hz,1h),1.46(d,j＝4.6hz,9h),1.34(d,j＝7.3hz,3h),1.29(d,j＝6.5hz,3h).hrms(esi)calcdforc
25h37
n4o
7
[m h]

505.26568,found505.26575.
[0071]
(4)d-pro-8的合成
[0072]
将化合物d-pro-6(6mg，1eq.)溶于0.5ml二氯甲烷中，加入0.5mltfa，室温反应2h，薄层色谱监测。反应完全后减压浓缩除去二氯甲烷与tfa，加入二氯甲烷(2ml
×
3)减压浓缩除去残留tfa，加入甲苯(2ml
×
3)，减压共沸除去体系中残留水分，得到化合物d-pro-7的粗产物，直接用于下一步，将化合物l-pro-7的粗产物溶于0.5ml干燥乙腈中，加入3-羟基-2-吡啶甲酸(8.1mg，5eq.)，冷却至0℃，搅拌5min，依次加入hatu(44.4mg，10eq.)，dipea(0.04ml，15eq.)，缓慢升温至室温反应过夜，lc-ms监测。反应完全后，向体系中加入1ml水淬灭，用乙酸乙酯(2ml
×
5)萃取，合并有机相，依次用饱和nahco3溶液(2ml)、水(2ml)、饱和nacl溶液(2ml)洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离得到化合物d-pro-8(1.6mg，25％)。1hnmr(500mhz,methanol-d4)δ8.40(d,j＝2.2hz,1h),8.18(dd,j＝4.9,1.6hz,1h),8.17
–
8.07(m,1h),7.70(dt,j＝7.8,2.0hz,1h),7.48(dd,j＝8.5,4.3hz,1h),7.38(dd,j＝8.5,1.4hz,1h),7.19(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),5.15(dd,j＝6.5,5.2hz,1h),4.72(d,j＝5.1hz,1h),4.25(dd,j＝9.0,5.2hz,1h),3.81
–
3.65(m,2h),3.60(tt,j＝10.2,6.9hz,1h),2.99(d,j＝7.6hz,1h),2.82
–
2.69(m,1h),2.33
–
2.18(m,1h),2.12(dd,j＝13.3,7.7hz,1h),2.09
–
1.92(m,2h),1.37(dd,j＝11.6,6.8hz,3h),1.29(s,3h).
13
cnmr(150mhz,methanol-d4)δ178.46,172.66,169.75,169.65,150.96,147.91,147.90,139.27,139.24,136.35,136.33,130.49,124.90,124.88,78.06,72.31,61.51,57.87,55.59,48.39,39.76,37.24,30.80,29.62,26.03,16.01.hrms(esi)calcdforc
26h32
n5o
7
[m h]

526.22962,found526.22974.
[0073]
实施例二：l-脯氨酸衍生物的合成
[0074]
参考实施例一，如图(图4)所示，首先化合物l-pro-1在edci条件下与化合物l-tre-1发生酰胺化反应得到化合物l-pro-2，然后化合物l-pro-2在二乙胺、二氯甲烷条件下脱除fmoc保护基得到化合物l-pro-3，随后与吡啶非天然氨基酸三乙胺盐p2发生酰胺化反
应得到化合物l-pro-4。接着化合物l-pro-4经过钯碳加氢反应得到关环前体后再在hatu，dipea条件下进行一步环化得到化合物l-pro-6。最后化合物l-pro-6上的boc保护基用tfa脱去后与3-羟基-2-吡啶甲酸在hatu，dipea条件下完成化合物l-pro-8的合成。
[0075]
(1)化合物l-pro-2的合成
[0076]
化合物l-pro-2(1.7g，91％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.76(dd,j＝7.6,4.0hz,2h),7.66
–
7.48(m,2h),7.45
–
7.23(m,9h),5.54
–
5.36(m,1h),5.25
–
4.92(m,2h),4.57
–
4.42(m,1h),4.43
–
4.30(m,2h),4.25(dq,j＝18.7,6.2,5.0hz,2h),3.70
–
3.56(m,1h),3.51(dt,j＝10.4,7.1hz,1h),2.19(dtd,j＝18.1,8.2,3.8hz,1h),2.02
–
1.78(m,3h),1.42(d,j＝2.2hz,9h),1.30(d,j＝6.4hz,2h),1.19(d,j＝6.4hz,1h).hrms(esi)calcdforc
36h40
n2nao8 [m na]

651.26769；found651.26782.
[0077]
(2)化合物l-pro-4的合成
[0078]
化合物l-pro-4(0.17g,两步产率56％)。1hnmr(500mhz,methanol-d4)δ8.51(d,j＝2.1hz,1h),8.43(dd,j＝4.9,1.6hz,1h),7.84(dt,j＝7.9,1.9hz,1h),7.47
–
7.28(m,6h),5.38(tt,j＝6.5,3.3hz,1h),5.25
–
5.06(m,2h),4.48
–
4.33(m,2h),3.83
–
3.71(m,2h),3.65(dt,j＝9.8,6.5hz,1h),3.58(ddd,j＝8.8,6.0,1.8hz,1h),3.17(dd,j＝14.0,8.8hz,1h),3.12
–
2.94(m,2h),2.16(dt,j＝12.6,8.0hz,1h),2.01
–
1.91(m,2h),1.84(dt,j＝13.4,5.6hz,1h),1.45(s,9h),1.22(d,j＝6.4hz,3h),1.06(d,j＝6.9hz,3h).hrms(esi)calcdforc
32h43
n6o
8
[m h]

639.31369；found639.31384；c
32h42
n6o8na

[m na]

661.29563；found661.29553.
[0079]
(3)化合物l-pro-6的合成
[0080]
化合物l-pro-6(25mg，31.6％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)：δ8.45(d,j＝2.2hz,1h),8.38(dd,j＝4.9,1.6hz,1h),7.78(dt,j＝7.8,1.9hz,1h),7.38(dd,j＝7.9,4.9hz,1h),5.59(dt,j＝9.7,4.7hz,1h),4.36(ddd,j＝13.0,9.4,5.2hz,3h),3.76
–
3.40(m,3h),3.07
–
2.83(m,2h),2.62(dq,j＝9.9,6.5hz,1h),2.20(dddd,j＝28.9,15.0,7.8,2.9hz,2h),2.11
–
2.00(m,1h),1.92(qd,j＝6.6,2.7hz,1h),1.44(s,9h),1.29(d,j＝6.2hz,3h),1.06(d,j＝6.5hz,3h).hrms(esi)calcdforc
25h37
n4o
7
[m h]

505.26568,found505.26575.
[0081]
(4)化合物l-pro-8的合成
[0082]
化合物l-pro-8(1mg，16％)。1hnmr(500mhz,methanol-d4)δ8.46(d,j＝2.2hz,1h),8.37(dd,j＝4.9,1.6hz,1h),8.22
–
8.13(m,1h),7.79(dt,j＝7.9,2.0hz,1h),7.48(dd,j＝8.5,4.4hz,1h),7.37(ddd,j＝8.4,3.5,1.1hz,2h),5.73(qd,j＝6.4,3.4hz,1h),4.45(dd,j＝8.5,3.1hz,1h),4.39(dd,j＝9.4,6.1hz,1h),3.79
–
3.64(m,2h),3.60(d,j＝9.9hz,1h),3.49(dt,j＝11.7,7.6hz,1h),3.23(q,j＝7.4hz,1h),3.07
–
2.91(m,2h),2.71(dq,j＝9.9,6.6hz,1h),2.39
–
2.25(m,1h),2.25
–
2.12(m,1h),2.07(ddt,j＝12.9,6.6,3.5hz,1h),1.94(ddt,j＝15.2,7.1,3.5hz,1h),1.33(d,j＝6.4hz,3h),1.12(d,j＝6.6hz,3h).
13
cnmr(150mhz,methanol-d4)δ175.27,172.84,168.98,168.69,149.26,146.73,137.46,135.32,135.12,129.04,128.99,125.45,123.85,123.80,74.85,73.53,59.34,54.90,51.38,46.29,41.17,34.42,30.50,22.73,15.18,13.49.hrms(esi)calcdforc
26h32
n5o
7
[m h]

526.22962,found526.22974。
[0083]
实施例三：d-哌啶酸衍生物的合成
[0084]
如图5所示，化合物d-pip-1在edci条件下与化合物l-tre-1发生接肽反应得到化合物d-pip-2，随后化合物d-pip-2在二乙胺、二氯甲烷条件下脱除fmoc保护基团得到化合物d-pip-3，然后化合物d-pip-3再与吡啶非天然氨基酸三乙胺盐p2发生酰胺化反应得到化合物d-pip-4。接着化合物d-pip-4经过钯碳加氢反应后再在hatu，dipea 条件下进行一步环化反应得到化合物d-pip-6。最后将化合物d-pip-6上的boc保护基用tfa脱去后与3-羟基-2-吡啶甲酸在hatu，dipea条件下得到化合物d-pip-8的合成。 (1)化合物d-pip-2的合成
[0085]
化合物d-pip-2(1.48g，90％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.77(d,j＝7.6hz, 2h),7.61(t,j＝6.7hz,1h),7.53(dd,j＝7.5,4.6hz,1h),7.49
–
7.25(m, 9h),5.49(d,j＝6.5hz,1h),5.34
–
5.03(m,3h),4.94
–
4.65(m,1h),4.43 (ddd,j＝31.7,14.3,9.4hz,3h),4.26(dt,j＝29.9,7.1hz,1h),4.14
–
3.94 (m,1h),3.15
–
2.85(m,1h),2.10(t,j＝15.5hz,1h),1.71
–
1.58(m,4h), 1.47(s,3h),1.40(s,6h),1.32(d,j＝6.4hz,3h).hrms(esi)calcd for c
37h42
n2nao
8 [m na]

665.28334,found 665.28339。
[0086]
(2)化合物d-pip-4的合成
[0087]
化合物d-pip-4(0.15g，两步产率46％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.61
–
8.46 (m,2h),7.64(d,j＝8.1hz,1h),7.36(q,j＝4.7,3.9hz,5h),7.25(d,j ＝4.7hz,1h),5.52
–
5.47(m,1h),5.28(d,j＝5.8hz,1h),5.15(q,j＝12.3 hz,2h),4.55(dd,j＝9.8,2.7hz,1h),4.27(d,j＝5.5hz,1h),3.92(d,j ＝13.6hz,1h),3.79(s,1h),3.41(td,j＝7.4,2.6hz,1h),3.27
–
3.17(m, 1h),3.14
–
3.08(m,2h),2.19(d,j＝14.1hz,1h),1.77
–
1.62(m,5h),1.47 (s,9h),1.32(d,j＝6.4hz,3h),1.10(d,j＝6.9hz,3h).hrms(esi)calcdfor c
33h45
n6o
8
[m h]

653.32934,found 653.33130。
[0088]
(3)化合物d-pip-6的合成
[0089]
化合物d-pip-6(24mg，31.5％)。1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ8.46(s, 1h),8.36(d,j＝4.9hz,1h),7.73(d,j＝7.8hz,1h),7.32(dd,j＝7.8,5.0 hz,1h),5.26(d,j＝5.7hz,1h),5.17
–
5.01(m,1h),4.30(d,j＝6.0hz, 1h),4.07(t,j＝7.4hz,1h),3.93
–
3.76(m,1h),3.64(s,1h),3.00(dd, j＝13.5,7.4hz,1h),2.90(dt,j＝15.0,8.4hz,2h),2.79(q,j＝7.3hz, 1h),2.29(d,j＝13.9hz,1h),1.81
–
1.50(m,4h),1.46(s,10h),1.33(d, j＝7.2hz,3h),1.26(d,j＝6.4hz,3h).hrms(esi)calcd for c
26h39
n4o
7
[m h]
519.28133,found 519.28149.
[0090]
(4)化合物d-pip-8的合成
[0091]
化合物d-pip-8(0.6mg，16％)。1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ8.39(d,j ＝2.2hz,1h),8.14(dd,j＝4.4,1.4hz,1h),8.04(dd,j＝4.9,1.6hz,1h), 7.67(dt,j＝7.9,1.9hz,1h),7.50(dd,j＝8.5,4.3hz,1h),7.39(dd,j＝ 8.5,1.4hz,1h),7.07(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),5.33(d,j＝5.7hz,1h),5.24 (t,j＝6.4hz,1h),4.79(d,j＝6.4hz,1h),4.17(ddd,j＝8.6,6.3,2.2hz, 1h),3.88(d,j＝13.5hz,1h),3.75(t,j＝1.6hz,1h),3.02
–
2.82(m,4h), 2.32(d,j＝13.8hz,1h),1.84
–
1.66(m,2h),1.67
–
1.41(m,3h),1.38(d, j＝7.3hz,3h),1.28(s,3h).
13
c nmr(151mhz,meod)δ179.09,168.97,168.30, 167.97,157.73,149.74,146.32,139.72,138.02,134.81,130.54,129.14,125.91, 123.24,76.14,68.60,
56.40,52.80,51.57,43.62,35.75,35.59,25.00,24.62, 20.19,17.08,12.96.hrms(esi)calcd for c
27h34
n5o
7
[m h]

540.24527,found540.24512。
[0092]
实施例四：l-哌啶酸衍生物的合成
[0093]
如图6所示，化合物l-pip-1在edci条件下与化合物l-tre-1发生接肽反应得到化合物l-pip-2，然后化合物l-pip-2在二乙胺、二氯甲烷条件下脱除fmoc保护基团得到化合物l-pip-3，随后化合物l-pip-3与吡啶非天然氨基酸三乙胺盐p2发生酰胺化反应得到化合物l-pip-4。接着化合物l-pip-4经过钯碳加氢反应得到关环前体后再在 hatu，dipea条件下进行一步环化反应得到化合物l-pip-6。最后将化合物l-pip-6上的boc保护基用tfa脱去后与3-羟基-2-吡啶甲酸在hatu，dipea条件下完成化合物 l-pip-8的合成。
[0094]
(1)化合物l-pip-2的合成
[0095]
化合物l-pip-2(1.5g，91％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.77(d,j＝7.1hz, 2h),7.57(ddd,j＝44.2,17.2,7.5hz,2h),7.41(td,j＝7.4,2.9hz,2h), 7.37
–
7.27(m,7h),5.49(dt,j＝12.9,4.6hz,1h),5.29
–
5.01(m,3h), 4.96
–
4.74(m,1h),4.51(dq,j＝10.8,7.7,5.6hz,1h),4.46
–
4.34(m, 1h),4.34
–
4.18(m,1h),4.05(td,j＝15.8,13.8,7.6hz,1h),3.11
–
2.72 (m,1h),2.25
–
2.11(m,1h),1.65(dd,j＝13.3,6.6hz,3h),1.40(s,7h), 1.37(s,3h),1.31(d,j＝6.4hz,2h),1.20(d,j＝6.8hz,1h).hrms(esi) calcd for c
37h42
n2nao
8
[m na]

665.28334,found 665.28339。
[0096]
(2)化合物l-pip-4的合成
[0097]
化合物l-pip-4(0.16g，两步产率49％)。1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ8.52 (d,j＝2.2hz,1h),8.43(dd,j＝4.9,1.6hz,1h),7.85(dt,j＝7.9,1.9hz, 1h),7.49
–
7.27(m,6h),5.58
–
5.24(m,2h),5.24
–
5.03(m,2h),4.40(d, j＝3.5hz,1h),3.92(dd,j＝42.0,10.8hz,1h),3.76(dd,j＝8.4,1.8hz, 1h),3.71
–
3.45(m,1h),3.27
–
2.90(m,4h),2.26(dd,j＝31.8,13.7hz, 1h),1.71
–
1.47(m,5h),1.46(d,j＝15.0hz,9h),1.33(d,j＝6.3hz,1h), 1.26(d,j＝6.4hz,2h),1.05(d,j＝6.9hz,3h).hrms(esi)calcd for c
33h45
n6o
8 [m h]

653.32934,found 653.33130。
[0098]
(3)化合物l-pip-6的合成
[0099]
化合物l-pip-6(25mg，28％)。1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ8.44(d,j ＝2.2hz,1h),8.37(dd,j＝5.0,1.6hz,1h),7.77(d,j＝7.9hz,1h),7.37 (ddd,j＝7.9,4.9,0.9hz,1h),5.48(dd,j＝6.4,3.6hz,1h),4.46(dd,j ＝6.9,3.4hz,1h),4.38(d,j＝3.5hz,1h),4.36
–
4.21(m,2h),3.53(d, j＝9.4hz,1h),3.24
–
3.07(m,2h),3.06
–
2.85(m,2h),2.78(dq,j＝9.6, 6.6hz,1h),2.05
–
1.68(m,3h),1.68
–
1.51(m,2h),1.43(s,9h),1.29(d, j＝6.3hz,3h),1.04(d,j＝6.6hz,3h).hrms(esi)calcd for c
26h39
n4o
7
[m h]
519.28133,found 519.28149。
[0100]
(4)化合物l-pip-8的合成
[0101]
化合物l-pip-8(1mg，24％)。1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ8.45(d,j＝ 2.2hz,1h),8.36(dd,j＝4.9,1.6hz,1h),8.14(dd,j＝4.4,1.4hz,1h), 7.77(dt,j＝8.0,1.9hz,1h),7.47(dd,j＝8.5,4.4hz,1h),7.43
–
7.26 (m,2h),5.65
–
5.56(m,1h),4.61
–
4.52(m,2h),4.40
–
4.25(m,2h),3.58 (d,j＝9.4hz,1h),3.20(td,j＝13.0,4.2hz,1h),3.04
–
2.79(m,4h),2.00
ꢀ–
1.80(m,3h),1.62(q,j＝4.9hz,2h),1.32(d,j＝6.4hz,3h),1.09(d, j＝
6.6hz,3h).
13
c nmr(150mhz,meod)δ177.79,171.59,168.93,168.74,149.26, 149.23,146.73,146.49,137.77,137.49,135.10,129.04,123.79,123.56,75.14, 73.37,55.59,55.01,51.48,38.97,38.70,34.61,25.63,23.13,17.97,15.21, 13.49.hrms(esi)calcd for c
27h34
n5o
7
[m h]

540.24527,found 540.24512。
[0102]
实施例五：小分子s-1的合成
[0103]
如图(图7)所示，化合物s-1-1与叔丁氧羰基邻苯二胺发生酰胺化反应得到化合物s-1-2，然后用tfa脱去叔丁氧羰基保护基。将3-羟基-2-吡啶甲酸的羟基用甲氧基甲醚保护起来后，与化合物s-2-3进行酰胺化反应，脱掉mom保护基即可得到目标产物 s-1。
[0104]
氮气保护下将0.2g化合物s-1-1溶解于8ml干燥dmf中，冷却至0℃，依次加入edci(0.62g，2eq.)、叔丁氧基邻苯二胺(0.35g，1eq.)、dmap(0.02g，0.1 eq.)，恢复室温反应5h，薄层色谱监测。向体系中加入8ml乙酸乙酯，10ml饱和 nahco3溶液淬灭，分离有机相，水相用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，有机相依次用水(10 ml)、饱和nahco3溶液(10ml)洗涤、饱和nacl溶液(10ml)洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离，得到化合物s-1-2(0.51g，98％)。
[0105]
将0.32g化合物s-1-2溶解于5ml二氯甲烷中，室温加入2m氯化氢的乙醇溶液 (5ml，10eq.)，室温反应过夜，薄层色谱监测。减压浓缩除去过量氯化氢乙醇溶液，加入二氯甲烷(5ml
×
3)，减压浓缩除去残留的酸，加入甲苯(5ml
×
3)减压共沸除去体系中残留水分。得到化合物s-1-3的粗产物0.2g。
[0106]
将0.2g化合物s-1-3的粗产物溶解于4.3ml干燥dmf中，加入mom保护的3-羟基-2-吡啶甲酸的钠盐(0.28g，1eq.)，冷却至0℃。依次加入hatu(1.66g，5eq.)、 dipea(1.55ml，10eq.)，室温搅拌过夜，lc-ms监测。向体系中加入5ml水淬灭，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相用饱和nahco3溶液(10ml)、水(10ml)、饱和 nacl溶液(10ml)洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，将残留物用5ml thf溶解，加入5ml 2m稀盐酸，室温搅拌过夜，薄层色谱监测。加10ml乙酸乙酯稀释，分离有机相，水相用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取除去酯溶性杂质，保留水相，加入5ml 甲醇，冷却至0℃，用10％naoh溶液调节ph至碱性，反应体系用乙酸乙酯(10ml
×
5) 萃取，有机相用饱和nahco3溶液(10ml)、水(10ml)、饱和nacl溶液(10ml)洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离得到化合物s-1(0.09g，四步总产率为27％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.03
–
11.78(m,1h),10.57(d, j＝16.3hz,2h),9.16(d,j＝2.3hz,1h),8.77(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.33 (dt,j＝8.0,2.0hz,1h),8.11(d,j＝4.3hz,1h),7.92(d,j＝7.9hz,1h), 7.62
–
7.49(m,3h),7.45(dd,j＝8.5,1.4hz,1h),7.34(dtd,j＝24.0,7.6, 1.6hz,2h).hrms(esi)calcd for:c
18h15
n4o
3
[m h]

335.11387,found 335.11386。
[0107]
实施例六：小分子s-2的合成
[0108]
参见图8，并参照实施例五得到化合物s-2(28mg，四步产率25％)。1h nmr(300 mhz,cdcl3)δ11.81(s,1h),8.96(d,j＝2.3hz,1h),8.67(dd,j＝4.9,1.7 hz,1h),8.21(d,j＝7.4hz,1h),8.07
–
7.97(m,2h),7.37
–
7.29(m,2h), 7.28
–
7.25(m,1h),7.23(dd,j＝6.9,4.0hz,1h),4.12
–
3.87(m,2h),2.36 (dt,j＝12.5,2.8hz,1h),2.14(dt,j＝12.5,2.6hz,1h),1.95
–
1.77(m, 2h),1.68
–
1.27(m,4h).hrms(esi)calcd for:c
18h21
n4o3 [m h] 341.16082, found 341.16165；c
18h20
n4nao
3
[m na]

363.14276；found 363.14346。
[0109]
实施例七：小分子s-3的合成
[0110]
参见图，9并参照实施例五得到得到化合物s-3(0.07g，四步总产率为20％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.91(s,1h),10.39(s,1h),10.22(s,1h),8.55(d, j＝2.2hz,1h),8.41(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.14(d,j＝4.4hz,1h),7.82 (d,j＝7.8hz,1h),7.74(dt,j＝8.0,2.0hz,1h),7.59(dd,j＝8.5,4.3hz, 1h),7.47(dd,j＝8.5,1.3hz,1h),7.38(dd,j＝7.6,1.8hz,1h),7.28(dtd, j＝22.0,7.6,5.3hz,3h),3.77(s,2h).hrms(esi)calcd for:c
19h17
n4o
3
[m h]
349.12952,found 349.12958；c
19h16
n4nao
3
[m na]

371.11146；found 371.11148。
[0111]
实施例八：小分子s-4的合成
[0112]
参见图10，并参照实施例五得到得到化合物s-2(20mg，四步产率27％)。1h nmr (500mhz,methanol-d4)δ8.31(d,j＝2.2hz,1h),8.14(dd,j＝4.9,1.6hz, 1h),7.98(dd,j＝4.4,1.3hz,1h),7.53(dt,j＝8.0,1.8hz,1h),7.39(dd, j＝8.5,4.3hz,1h),7.29(dd,j＝8.5,1.3hz,1h),6.97(dd,j＝7.9,4.9 hz,1h),3.84(dtd,j＝27.9,10.7,3.8hz,2h),3.53
–
3.36(m,2h),2.11
–ꢀ
1.92(m,2h),1.90
–
1.67(m,2h),1.58
–
1.29(m,4h).hrms(esi)calcd for: c
19h23
n4o
3
[m h]

355.17647,found 355.17740；c
19h22
n4nao
3
[m na]

377.15841；found377.15930。
[0113]
实施例九：化合物s-5的合成
[0114]
参见图11，并参照实施例五得到化合物s-5(0.050g,四步总收率30％).1h nmr(400 mhz,methanol-d4)δ8.60(d,j＝2.2hz,1h),8.39(dd,j＝4.9,1.6hz,1h), 8.20(dd,j＝4.4,1.4hz,1h),7.90(dt,j＝8.0,2.0hz,1h),7.49(dd,j＝ 8.5,4.3hz,1h),7.43(dd,j＝7.8,1.5hz,1h),7.41
–
7.35(m,2h),7.08 (td,j＝7.8,1.6hz,1h),6.76(td,j＝7.6,1.3hz,1h),6.69(dd,j＝8.2, 1.3hz,1h),4.45(s,2h).
13
c nmr(100mhz,methanol-d4)δ168.17,158.13,148.02, 147.11,142.41,139.64,136.47,136.09,131.62,128.93,127.34,126.05,125.82, 123.84,123.09,117.68,113.00,44.76.hrms(esi)calcd for:c
18h17
n4o
2
[m h]
321.13460,found 321.13458。
[0115]
实施例十：化合物s-6的合成
[0116]
参见图12，氮气保护下将化合物s-4-1(0.5g，1eq.)溶解于7ml干燥二氯甲烷中，冷却至0℃，加入edci(0.50g,2eq.),3-氨甲基吡啶(0.15g,1eq.)，dmap(0.01 g,0.1eq.),恢复室温搅拌5h，薄层色谱监测。反应完全后加水淬灭，dcm萃取有机相依次用水(5ml)、饱和nahco3溶液(5ml)洗涤、饱和nacl溶液(5ml)洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离，得到化合物s-6-2(0.58g， 92％)。
[0117]
将0.2g化合物s-6-2溶解于2ml二氯甲烷中，室温加入二乙胺(2ml)室温反应 2h，薄层色谱监测。反应完全后旋干，得到化合物s-6-3粗产物，直接用于下一步。化合物s-6-3粗产物溶解于干燥dmf(3ml)中，加入mom保护的3-羟基-2-吡啶甲酸的钠盐(0.0.19g，1eq.)，冷却至0℃。依次加入hatu(1.14g，5eq.)、dipea(1.06 ml，10eq.)，室温搅拌过夜，lc-ms监测。向体系中加入3ml水淬灭，乙酸乙酯(10 ml
×
3)萃取，有机相用饱和nahco3溶液(5ml)、水(5ml)、饱和nacl溶液(5ml) 洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，将残留物用5ml thf溶解，加入5ml 2m 稀盐酸，室温搅拌过夜，薄层色谱监测。加10ml乙酸乙酯稀释，分离有机相，水相用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取除去酯溶性杂质，保留水相，加入5ml甲醇，冷却
至0℃，用10％naoh溶液调节ph至碱性，反应体系用乙酸乙酯(10ml
×
5)萃取，有机相用饱和nahco3溶液(10ml)、水(10ml)、饱和nacl溶液(10ml)洗涤，无水na2so4干燥。过滤后减压浓缩，正相硅胶柱色谱分离得到化合物s-6(31mg,四步产率20％).1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.70(d,j＝7.8hz,2h),7.41
–
7.27(m,4h),7.23
–ꢀ
7.13(m,1h),4.14(dd,j＝11.9,5.2hz,1h),3.95(dd,j＝14.9,6.8hz,1h), 3.55(dd,j＝14.9,6.0hz,1h),2.87(dd,j＝12.5,5.3hz,1h),2.76(dd,j ＝10.7,3.5hz,1h),2.39
–
2.10(m,2h),2.08
–
1.95(m,1h),1.90
–
1.75 (m,3h).hrms(esi)calcd for:c
18h19
n4o
3-[m-h]-339.14626,found 39.14597。
[0118]
实施例十一：化合物s-7的合成
[0119]
参见图13，参照实施例五得到得到化合物s-8(50mg，四步产率25％).1h nmr(500 mhz,methanol-d4)δ8.53
–
8.28(m,2h),8.22
–
7.95(m,1h),7.78(dd,j＝26.5,7.9hz,1h),7.50
–
7.24(m,3h),5.28(d,j＝5.4hz,1h),3.58(ddt, j＝49.5,13.3,6.8hz,2h),2.95(tdq,j＝19.5,12.9,6.5,5.7hz,3h),2.43
ꢀ–
2.29(m,1h),1.64(ddt,j＝16.8,13.5,4.4hz,2h),1.49(tt,j＝12.0, 3.7hz,2h),1.43
–
1.16(m,2h).hrms(esi)calcd for:c
19h23
n4o
3
[m h]

355.17647, found 355.17749,c
19h22
n4nao
3
[m na]

377.15841,found 377.15936。