具有抗BCMA抗体和gamma分泌酶抑制剂的联合疗法的制作方法

具有抗bcma抗体和gamma分泌酶抑制剂的联合疗法
发明领域
1.本发明涉及用于治疗癌症的具有药学活性的抗原结合蛋白的联合疗法，例如单克隆抗体和γ-分泌酶抑制剂。特定的剂量方案和施用方法也包括在内。
2.发明背景
3.多发性骨髓瘤(mm)是一种不可治愈的恶性肿瘤，且占所有癌症的1％以及所有血液系统恶性肿瘤的10％。已经评估并发现多种药物和联合治疗对于治疗多发性骨髓瘤有效(national comprehensive cancer network,2016；moreau,san miguel et al.,2017)。然而，即使不是全部患者，这些患者中大多数不可避免地复发(richardson,barlogie et al.,2003；richardson,barlogie et al.,2006；jagannath,barlogie et al.,2008)。
4.对于先前治疗过mm的患者出现了药物组合，但是这些方案可能受到毒性作用的限制(national comprehensive cancer network,2016)。需要可以与现有疗法组合而不增加严重的毒性的具有新的作用机制的药剂。
5.癌细胞上b细胞成熟抗原(bcma)表面表达低或可溶性bcma可以限制或阻止治疗性药剂的功效，由于与癌细胞表面上存在的bcma的结合不充分。用抗体、抗体药物缀合物或嵌合抗原受体t细胞靶向的肿瘤细胞上其他靶分子(例如cd19、cd20)的低水平已显示限制这些疗法的功效，并使得表达低水平靶分子的癌细胞能够逃逸消除。在bcma的情况下，分子的短细胞外部分通过gamma分泌酶(γ-分泌酶，一种参与蛋白质切割的膜定位细胞酶)的作用从细胞表面切割并脱落(shed)。这种切割降低了表达bcma的细胞(如骨髓瘤癌细胞)上该分子的密度，并导致患有某些自身免疫疾病(例如系统性红斑狼疮)以及癌症(例如多发性骨髓瘤)的患者的血清中可溶性bcma(sbcma)的水平提升。
6.目前，在免疫疗法领域仍然需要可替代的或改善的组合物和方法用于更有效地治疗自身免疫疾病和癌症。
7.发明概述
8.在本发明的一个方面，提供了包含抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂的组合。
9.在本发明的另一方面，组合包含贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他。
10.在本发明的一个方面，本文提供了用于治疗癌症的包含抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂的组合。
11.在本发明的另一方面，本文提供了治疗有此需要的受试者中的癌症的方法，其包括施用治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白以及γ-分泌酶抑制剂。
12.在本发明的另一方面，本文提供了用于治疗癌症的试剂盒，其包含：
13.i)抗bcma抗原结合蛋白；以及
14.ii)与γ-分泌酶抑制剂联合时的使用说明。
附图说明
15.图1表明用不同剂量的γ-分泌酶抑制剂(尼罗司他)联合贝兰他单抗莫福汀或对
照组igg-mmaf处理时骨髓瘤细胞系l363的存活力。
16.图2表明在骨髓瘤细胞系l363中评估贝兰他单抗莫福汀联合尼罗司他的adcc活性。
17.图3表明在表达bcma的细胞系中的adc活性。
18.图4表明在表达bcma的细胞系中的adcc活性。
19.图5表明用尼罗司他处理后的sbcma水平。
20.图6表明用尼罗司他处理后bcma的细胞表面水平。
21.发明详述
22.在本发明的一个方面，本文提供了用于治疗癌症或其他b细胞介导的疾病或病症的包含抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂的组合。
23.b细胞病症可以分为b细胞发育/免疫球蛋白生成的缺陷(免疫缺陷)和过量的/不可控的增殖(淋巴瘤、白血病)。如本文中所用，b细胞病症指两种类型的疾病，并且提供了用抗原结合蛋白治疗b细胞病症的方法。
24.癌症，且特别是b细胞介导的或浆细胞介导的疾病或抗体介导的疾病或病症的实例包括多发性骨髓瘤(mm)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、滤泡性淋巴瘤(fl)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、非分泌性多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、意义未明的单克隆免疫球蛋白血症(mgus)、孤立性浆细胞瘤(骨、髓外)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl)、华氏巨球蛋白血症、浆细胞白血病、原发性淀粉样变性(al)、重链病、系统性红斑狼疮(sle)、poems综合征/骨硬化性骨髓瘤，i型和ii型冷球蛋白血症、轻链沉积病、goodpasture综合征、特发性血小板减少性紫癜(itp)、急性肾小球肾炎、天疱疮和类天疱疮病症、以及获得性大疱性表皮松解症或任何非霍奇金淋巴瘤b细胞白血病(nhl)和霍奇金淋巴瘤(hl)。
25.在特定实施方案中，疾病或病症选自下组：多发性骨髓瘤(mm)、非霍奇金淋巴瘤b细胞白血病(nhl)、滤泡性淋巴瘤(fl)和弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)。
26.在本发明的一个实施方案中，疾病是多发性骨髓瘤或非霍奇金淋巴瘤b细胞白血病(nhl)。
27.在本发明的一个实施方案中，疾病是多发性骨髓瘤。
28.在本发明的一个实施方案中，癌症可以是造血(或血液学或血液病学或血液相关的)癌症，例如，来源于血液细胞或免疫细胞的癌症，其可以称为“液体肿瘤”。在一个实施方案中，癌症是b细胞相关的癌症，并且特别是表达bcma的癌症。在进一步的实施方案中，癌症是白血病，如慢性髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病。在另一个实施方案中，癌症是淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤；等。在另一个实施方案中，癌症是浆细胞恶性肿瘤，如多发性骨髓瘤、mgus al淀粉样病变和华氏巨球蛋白血症。
29.在一个实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症是复发性和/或难治性多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，患有复发性和/或难治性多发性骨髓瘤的患者先前已用至少一种、至少两种、至少三种或至少四种治疗药物进行治疗以治疗多发性骨髓瘤。
30.在另一个实施方案中，患者在用本文所述的组合治疗之前可以已经具有0、1、2、3或4或更多个先前的治疗线。在另一个实施方案中，患者可以患有复发性和/或难治性多发
性骨髓瘤，并且在用本文所述的组合治疗之前已经具有0、1、2、3或4或更多个先前的治疗线。在另一个实施方案中，患者先前已用至少3个先前的线进行治疗，所述先前的线可以包括以下项：免疫调节性药物(imid)、蛋白酶体抑制剂(pi)以及抗cd38治疗(例如达雷妥尤单抗(daratumumab))。疗法线可以由国际骨髓瘤研讨会(imwg)的共识小组定义[rajkumar,2011]。
[0031]
在如本文提供的本发明的一个方面，bcma抗原结合蛋白以特定的剂量或剂量范围施用。全文中，mg/kg指每千克患者体重的治疗药物(例如抗原结合蛋白)的毫克数。在如本文提供的本发明的一个方面，抗bcma抗原结合蛋白以大约0.5-4.0mg/kg或约1.0至4.0mg/kg的剂量施用。在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约0.5至2.0mg/kg、约0.5至1.0mg/kg、约1.0至3.0mg/kg，或约2.0至4.0mg/kg或约2.0至3.0mg/kg的剂量施用。在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约0.5至2.0mg/kg或约2.0至3.5mg/kg的剂量施用。在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约0.5mg/kg、约0.95mg/kg、约1mg/kg、约1.25mg/kg、约1.7mg/kg、约1.9mg/kg、约2.5mg/kg或约3.4mg/kg的剂量施用。
[0032]
在另一个实施方案中，bcma抗原结合蛋白的治疗有效剂量是固定剂量的而不是以mg/kg计。使用固定剂量可能导致与基于体重的给药相似的暴露范围。固定给药可以提供以下优势：减少给药误差、减少药物浪费、缩短制备时间以及改善施用的便捷性。因此，在一个实施方案中，bcma抗原结合蛋白的固定剂量基于70kg或80kg的参考体重(参与体重中值)。
[0033]
在如本文提供的本发明的一个方面，γ-分泌酶抑制剂以约25-220mg的剂量施用。在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂以约50-150mg的剂量施用。在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂以约50mg、约100mg或约150mg的剂量施用。在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂以50mg、100mg或150mg的剂量施用。在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂以50mg的剂量施用。在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂以100mg的剂量施用。在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂以150mg的剂量施用。
[0034]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约3.4mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约150mg的剂量施用。
[0035]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约2.5mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约150mg的剂量施用。
[0036]
在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约1.9mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约150mg的剂量施用。
[0037]
在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约0.95mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约150mg的剂量施用。
[0038]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约3.4mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约100mg的剂量施用。
[0039]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约2.5mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约100mg的剂量施用。
[0040]
在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约1.9mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约100mg的剂量施用。
[0041]
在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约0.95mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约100mg的剂量施用。
[0042]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约3.4mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约50mg的剂量施用。
[0043]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约2.5mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约50mg的剂量施用。
[0044]
在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约1.9mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约50mg的剂量施用。
[0045]
在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白以约0.95mg/kg的剂量施用，且γ-分泌酶抑制剂以约50mg的剂量施用。
[0046]
在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂每天两次(bid)施用。在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂每天给予。在又一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂可以“7天on/14天off”时间表给予，其中γ-分泌酶抑制剂在21天周期的1到7天每天两次(bid)施用，而不在第8天到第14天施用。
[0047]
在本发明的一个方面，γ-分泌酶抑制剂可以与抗bcma抗原结合蛋白同时或依次施用。在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂在抗bcma抗原结合蛋白之前施用。例如，在一个方面，γ-分泌酶抑制剂在抗bcma抗原结合蛋白前至少1小时施用。
[0048]
在本发明的一个方面，抗bcma抗原结合蛋白每周给药。在进一步的方面，抗bcma抗原结合蛋白每21天给药一次(即21天周期的第1天)。
[0049]
在进一步的实施方案中，调整抗bcma抗原结合蛋白的剂量以控制最大血浆浓度，例如，将剂量分开并例如间隔一周施用。在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白在21天周期的第1天(全部剂量的一半)和第8天(全部剂量的另一半)施用。例如，如果全部剂量是3.4mg/kg，“分开剂量”方案可以包含21天周期的第1天的1.7mg/kg的剂量和在第8天的1.7mg/kg的另一剂量。在另一个实施方案中，如果全部剂量是2.5mg/kg，“分开剂量”方案可以包含21天周期的第1天的1.25mg/kg的剂量和在第8天的1.25mg/kg的另一剂量。在另一个实施方案中，如果全部剂量是1.9mg/kg，“分开剂量”方案可以包含21天周期的第1天的0.95mg/kg的剂量和在第8天的0.95mg/kg的另一剂量。
[0050]
在一个实施方案中，约0.95mg/kg、约1.9mg/kg、约2.5mg/kg或约3.4mg/kg的抗bcma抗原结合蛋白在21天周期的第1天施用。
[0051]
在一个实施方案中，0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg的抗bcma抗原结合蛋白在21天周期的第1天施用。在一个实施方案中，0.95mg/kg的抗bcma抗原结合蛋白在21天周期的第1天施用。在一个实施方案中，1.9mg/kg的抗bcma抗原结合蛋白在21天周期的第1天施用。在一个实施方案中，2.5mg/kg的抗bcma抗原结合蛋白在21天周期的第1天施用。
[0052]
在进一步的实施方案中，负荷剂量的抗bcma抗原结合蛋白在21天周期的第1天施用，随后在后续周期中降低剂量。如本文所提供的，本发明所考虑的任何剂量均以这种方式施用。例如，第1剂可以包含施用约3.4mg/kg的抗bcma抗原结合蛋白，且后续周期可以使用约2.4mg/kg的抗bcma抗原结合蛋白的剂量。
[0053]
在如本文所述的本发明的一个方面，抗bcma抗原结合蛋白是抗bcma抗体或其片段或car-t或免疫缀合物。在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是抗bcma抗体。在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是单克隆抗体。在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是人源化的。
[0054]
在如本文所述的本发明的一个方面，抗bcma抗原结合蛋白包含cdr序列，其与根据seq id no:1的cdrh1；根据seq id no:2的cdrh2；根据seq id no:3的cdrh3；根据seq id no:4的cdrl1；根据seq id no:5的cdrl2；和根据seq id no:6的cdrl3具有至少90％或95％或99％的序列一致性。
[0055]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白包含根据seq id no:1的cdrh1；根据seq id no:2的cdrh2；根据seq id no:3的cdrh3；根据seq id no:4的cdrl1；根据seq id no:5的cdrl2；和根据seq id no:6的cdrl3。在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白包含根据seq id no:7的重链可变区(vh)；和根据seq id no:8的轻链可变区(vl)。在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白包含根据seq id no:9的重链(h)和根据seq id no:10的轻链(l)。
[0056]
在如本文所述的本发明的一个方面，抗bcma抗原结合蛋白进一步得以缀合。
[0057]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是包含如本文所述根据本发明的抗原结合蛋白的免疫缀合物，其包括但不限于与一种或多种细胞毒性剂缀合的抗体，所述细胞毒性剂如化学治疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如蛋白质毒素、细菌、真菌、植物或动物来源的具有酶活性的毒素或其片段)或放射性同位素(即放射性缀合物)。在进一步的实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白与毒素如澳瑞他汀(auristatin)缀合，例如一甲基澳瑞他汀e(mmae)或一甲基澳瑞他汀f(mmaf)。在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白与一甲基澳瑞他汀f(mmaf)缀合。
[0058]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是具有如下通用结构的免疫缀合物：
[0059]
abp-((linker)n-ctx)m
[0060]
其中
[0061]
abp是抗原结合蛋白
[0062]
linker不存在或是任何可切割或不可切割的接头
[0063]
ctx是本文所述的任何细胞毒性剂
[0064]
n是0、1、2或3以及
[0065]
m是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
[0066]
示例性接头包括6-马来酰亚胺己酰基(mc)、马来酰亚胺丙酰基(mp)、缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)、对氨基苄氧羰基(pab)、n-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸盐(spp)、n-琥珀酰亚胺基4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1羧酸盐(smcc)和n-琥珀酰亚胺基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯(siab)。
[0067]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是含有与mmae或mmaf连接的单克隆抗体的免疫缀合物。在另一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是含有通过mc接头与mmae或mmaf连接的单克隆抗体的免疫缀合物，如以下结构所描绘：
[0068][0069]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是抗体贝兰他单抗。在另一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是免疫缀合物贝兰他单抗莫福汀。
[0070]
本发明的缀合抗体(抗体-药物缀合物或adc)是强大的抗癌剂，其经设计以允许高功效的细胞毒性剂特异性靶向肿瘤细胞且不影响健康组织。尽管使用肿瘤特异性抗体，新出现的adc的临床数据表明，在adc达到其最佳治疗剂量之前经常会出现不良事件。因此，即使这些adc在临床前的肿瘤模型中具有高活性，其在临床中的治疗窗口很窄，并且给药方案似乎受到剂量限制性毒性的阻碍，所述毒性不能总是基于来自临床前模型的数据进行预测。
[0071]
可以联合以协同增强治疗功效而不使安全概况恶化的疗法将是癌症患者治疗的重大进步，特别是在治疗中出现的不良事件如眼毒性的发生率和严重性方面。
[0072]
从根本上说，可以增强药剂功效从而导致总体应答率(orr)显著更高，同时具有最佳风险获益概况的与药物的联合将导致在管理用此类抗原结合蛋白治疗的患者方面产生范式转移。
[0073]
实现最佳风险获益概况的关键依赖于疗法的给药方案。
[0074]
在如本文所述的本发明的一个方面，以给定时间地点和控制剂量施用抗bcma抗原结合蛋白(例如在γ-分泌酶抑制剂后)允许血浆浓度有机会达到其峰值，并且因此从添加抗bcma抗原结合蛋白获得最大作用。
[0075]
在如本文所述的本发明的一个方面，γ-分泌酶抑制剂是以下的任何一种：尼罗司他(pf-03084014)；ly3039478(克雷尼加西司他(crenigacestat))；cb-103；塔伦福比勒(tarenflurbil)；司马司他(semagacestat)；rg-4733；evp-0962；阿瓦加西司他(avagacestat)；mk-0752；bms-906024；或ly450139(司马司他).
[0076]
在一个实施方案中，γ-分泌酶抑制剂是尼罗司他((s)-2-(((s)-6,8-二氟-1,2,3,4-四氢萘-2-基)氨基)-n-(1-(2-甲基-1-(新戊氨基)丙-2-基)-1h-咪唑-4-基)戊酰胺)，(pf-03084014)，其具有以下化学结构：
[0077][0078]
在本发明的一个方面，本文提供了用于预防和/或减少患有癌症(如多发性骨髓瘤)的患者中眼毒性的组合，其包含抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂。在一个实施方案中，眼毒性当与使用单独的抗bcma抗原结合蛋白(单一疗法)治疗的患者相比时得以预防或减少。
[0079]“预防”是指患者未发生任何眼毒性体征、诊断或症状。“减少”是指眼毒性体征、诊断或症状的严重性或等级的任何减少。
[0080]“眼毒性”是指治疗剂对眼组织的任何意外暴露。眼毒性可以包括：角膜上皮改变、干眼、刺激、发红、视力模糊、干眼、畏光和/或视觉敏锐度改变。
[0081]
眼科检查可由眼科医生或验光师进行。眼科检查可以包括以下的一种或多种：
[0082]
1.最佳矫正视觉敏锐度，
[0083]
2.显然屈光的记录和用于获得最佳矫正视觉敏锐度的方法，
[0084]
3.当前眼镜规定(如适用)，
[0085]
4.眼内压测量，
[0086]
5.前节(裂隙灯)检查，包括角膜和晶状体检查的荧光素染色，
[0087]
6.扩张眼底镜检查，和/或
[0088]
7.眼表疾病指数(osdi)，其是评估潜在的眼部视力改变对功能和健康相关的生活质量的影响的视觉功能问卷。
[0089]
上述方法是本领域技术人员已知且实践的。眼部检查可以在治疗之前、治疗期间和/或治疗之后进行。
[0090]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包括施用治疗有效剂量的如本文所述的根据本发明的抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂。
[0091]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包括施用：
[0092]
i)治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白，其包含根据seq id no:1的cdrh1；根据seq id no:2的cdrh2；根据seq id no:3的cdrh3；根据seq id no:4的cdrl1；根据seq id no:5的cdrl2；和根据seq id no:6的cdrl3；以及
[0093]
ii)尼罗司他。
[0094]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包括施用：
[0095]
i)治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白，其包含根据seq id no:7的重链可变区(vh)；和根据seq id no:8的轻链可变区(vl)；以及
[0096]
ii)尼罗司他。
[0097]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包括施用：
[0098]
i)治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白，其包含根据seq id no:9的重链(h)和根据seq id no:10的轻链(l)；以及
[0099]
ii)尼罗司他。
[0100]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包括施用贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他。
[0101]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包括施用0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg贝兰他单抗莫福汀和50mg、100mg或150mg尼罗司他。
[0102]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包括在21天周期的第1天施用0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg贝兰他单抗莫福汀，以及每天两次(bid)施用50mg、100mg或150mg尼罗司他。
[0103]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包括施用0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg贝兰他单抗莫福汀，其中剂量的一半在21天周期的第1天施用，且剂量的一半在21天周期的第8天施用；以及在21天周期的1到7天每天两次(bid)施用50mg、100mg或150mg尼罗司他。
[0104]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中多发性骨髓瘤的方法，其包括在21天周期的第1天施用0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg贝兰他单抗莫福汀，以及每天两次(bid)施用50mg、100mg或150mg尼罗司他。
[0105]
在本发明的一个方面，提供了治疗有此需要的受试者中多发性骨髓瘤的方法，其包括施用0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg贝兰他单抗莫福汀，其中剂量的一半在21天周期的第1天施用，且剂量的一半在21天周期的第8天施用；以及在21天周期的1到7天每天两次(bid)施用50mg、100mg或150mg尼罗司他。
[0106]
在一个方面，提供了如本文所述用于治疗癌症的根据本发明的组合，其包含抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂。
[0107]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的组合，其包含治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白；以及尼罗司他，该抗原结合蛋白包含根据seq id no:1的cdrh1；根据seq id no:2的cdrh2；根据seq id no:3的cdrh3；根据seq id no:4的cdrl1；根据seq id no:5的cdrl2；和根据seq id no:6的cdrl3。
[0108]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的组合，其包含治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白；以及尼罗司他，该抗原结合蛋白包含根据seq id no:7的重链可变区(vh)和根据seq id no:8的轻链可变区(vl)。
[0109]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的组合，其包含治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白；以及尼罗司他，该抗原结合蛋白包含根据seq id no:9的重链(h)和根据seq id no:10的轻链(l)。
[0110]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的组合，其包含贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他。
[0111]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的组合，其包含贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他，其中贝兰他单抗莫福汀以0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg施用，且尼罗司他以50mg、100mg或150mg施用。
[0112]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的组合，其包含贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他，其中贝兰他单抗莫福汀在21天周期中第1天以0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg施用，且尼罗司他以50mg、100mg或150mg每天两次(bid)施用。
[0113]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的组合，其包含贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他，
其中贝兰他单抗莫福汀以0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg施用，且剂量的一半在21天周期的第1天施用，且剂量的一半在21天周期的第8天施用；且尼罗司他在21天周期的1到7天以50mg、100mg或150mg每天两次(bid)施用。
[0114]
在一个方面，提供了用于治疗多发性骨髓瘤的组合，其包含贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他，其中贝兰他单抗莫福汀以0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg施用，且尼罗司他以50mg、100mg或150mg施用。
[0115]
在一个方面，提供了用于治疗多发性骨髓瘤的组合，其包含贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他，其中贝兰他单抗莫福汀以0.95mg/kg、1.9mg/kg、2.5mg/kg或3.4mg/kg施用，且剂量的一半在21天周期的第1天施用，且剂量的一半在21天周期的第8天施用；且尼罗司他在21天周期的1到7天以50mg、100mg或150mg每天两次(bid)施用。
[0116]
在一个方面，如本文所述根据本发明，提供了用于制备用于治疗癌症的药物的组合，其中所述组合包含抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂。
[0117]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的试剂盒，其包含：
[0118]
(i)如本文所述根据本发明的抗bcma抗原结合蛋白；以及，
[0119]
(ii)如本文所述根据本发明的与γ-分泌酶抑制剂组合时的使用说明。
[0120]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的试剂盒，其包含：
[0121]
(i)如本文所述根据本发明的γ-分泌酶抑制剂；以及，
[0122]
(ii)如本文所述根据本发明的与抗bcma抗原结合蛋白组合时的使用说明。
[0123]
在一个方面，提供了用于治疗癌症的试剂盒，其包含：
[0124]
(i)如本文所述根据本发明的抗bcma抗原结合蛋白；
[0125]
(ii)如本文所述根据本发明的γ-分泌酶抑制剂(根据本发明中本文所述)；以及，
[0126]
(iii)使用说明。
[0127]
在本发明的一个方面，提供了预防患有癌症(如多发性骨髓瘤)的患者中眼毒性的方法，其包括施用治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂。
[0128]
在本发明的一个方面，提供了减少患有癌症(如多发性骨髓瘤)的患者中眼毒性的方法，其包括施用治疗有效剂量的抗bcma抗原结合蛋白和γ-分泌酶抑制剂。
[0129]
定义
[0130]
本文所述术语“组合”指至少两种治疗剂。如本文所用，术语“治疗剂”可理解为在组织、系统、动物、哺乳动物、人类或其他受试者中产生期望的效果的物质。在一个实施方案中，组合可以含有另外的治疗剂，诸如例如另外的癌症治疗剂。在一个实施方案中，另外的癌症治疗剂是免疫调节性酰亚胺药物(imid)，如沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、阿普司特或其他沙利度胺类似物。
[0131]
与单独施用单一治疗剂相比，施用本发明的组合可以比单独的治疗剂更有利，因为所述组合可以提供下列一种或多种改善的特性：i)比最具活性的单一药剂具有更大的抗癌效果，ii)协同或高度协同的抗癌活性，iii)提供增强的抗癌活性和减少的副作用概况的给药方案，iv)毒性作用概况的减少，v)治疗窗口的增加，或vi)一种或两种治疗剂的生物可利用度的增加。
[0132]
本文所述的组合可以是药物组合物的形式。“药物组合物”含有本文所述的组合，以及一种或多种可接受药物的载体、稀释剂或赋形剂。所述载体、稀释剂或赋形剂在与配制
剂的其他成分相容的意义上必须是可接受的，能够制成药物配制剂并且对其接受者无害。在一个实施方案中，组合中的每个治疗剂单独地制成其自己的药物组合物，且施用每个药物组合物以治疗癌症。在这个实施方案中，每个药物组合物可以具有相同的或不同的载体、稀释剂或赋形剂。
[0133]
本文所述的组合中抗bcma抗原结合蛋白可用于治疗或预防癌症。本文所述的抗bcma抗原结合蛋白可以与人bcma结合，其包括，例如，含有与之具有至少百分之90同源性或至少百分之90一致性的genbank登录号q02223.2的氨基酸序列的人bcma，或编码人bcma的基因。
[0134]
如本文所用，术语“抗原结合蛋白”指抗体、抗体片段或其他能够与人bcma结合的蛋白质构建体。本发明的抗原结合蛋白可以包含本发明的重链可变区和轻链可变区，其可以形成天然抗体的结构或有功能的片段或其等价物。因此，当与合适的轻链配对时，本发明的抗原结合蛋白可以为本发明所述vh区经格式化形成的全长抗体，其中vh区包括(fab’)2片段、fab片段或其等价物(例如scfv、二三或四体、坦达布等)。抗体可以是igg1、igg2、igg3或igg；或igm；iga、ige或igd；或其更改的变体。可以相应地选择抗体重链的恒定结构域。轻链的恒定结构域可以是κ或λ恒定结构域。进一步，抗原结合蛋白可能包含以下所有分类的更改形式，例如，igg二聚体，不在于fc受体结合或介导c1q结合的fc突变体。抗原结合蛋白可能也是嵌合的抗体，所述类型在wo86/01533中描述，其包含抗原结合区域和非免疫球蛋白区域。
[0135]
在另一方面，抗原结合蛋白选自以下组，其包含dab、fab、fab’、f(ab’)2、fv、双体、三体、四体、微型抗体和微体。在本发明的一方面，抗原结合蛋白是人源化的或嵌合的抗体。在另一方面，抗体是人源化的。在一方面，抗体是单克隆抗体。已开发的嵌合抗原受体(car)作为人工的t细胞受体，不需要与mhc抗原肽复合物结合即可够使t细胞产生新的特异性。这些合成的受体包含靶标结合结构域，在单一的融合分子中，靶标结合结构域通过灵活的接头与一种或多种信号结构域联系起来。靶标结合结构域用于靶向病理性的细胞表面特定的靶标，且信号结构域包含使t细胞激活和增殖的分子机械。灵活的接头能够通过t细胞膜(或者说形成跨膜结构域)，允许将car的靶标结合结构域展示在细胞膜上。car已经成功地使t细胞重定向于多种恶性肿瘤的肿瘤细胞表面所表达的抗原，其中恶性肿瘤包括淋巴瘤和实体瘤(jena et al.(2010)blood,116(7):1035-44)。
[0136]
在一个实施方案中，抗bcma抗原结合蛋白是抗体，其具有增强的抗体依赖性地细胞介导的细胞毒活性(adcc)效应器功能。本文所用术语“效应器功能”意思是指下列一种或多种，其包含，抗体依赖性的细胞介导的细胞毒活性(adcc)、补体依赖性的细胞毒活性(cdc)介导的响应、fc介导的吞噬作用以及通过fcrn受体的抗体回收。
[0137]“γ-分泌酶”是多亚基膜整合的蛋白酶，其在单一跨膜蛋白的跨膜结构域内部切割。γ-分泌酶复合体在加工各种底物的过程中起作用，其底物包括notch、cd44、钙黏素和肝配蛋白b2，以及，γ-分泌酶将淀粉样蛋白的前体蛋白切割成与阿尔茨海默病相关的淀粉样蛋白β肽。已知γ-分泌酶复合体也切割b细胞成熟抗原(bcma)。示例性的γ-分泌酶抑制剂(gsis)包含小分子、拟肽化合物或γ-分泌酶特异性结合蛋白。gsi可以靶向所提供的任意一种或多种γ-分泌酶复合体蛋白，其γ-分泌酶的切割活性比不抑制的γ-分泌酶活性降低。在某些实施方案中，γ-分泌酶的活性降低了至少约80％。测量γ-分泌酶活性的测定
在本领域是已知的(详见，例如，laurent等人,2015)。例如，可溶性bcma的水平可以作为测量γ-分泌酶活性的替代指标。γ-分泌酶抑制剂尼罗司他吸收迅速，其cmax(tmax)值出现的中位数时间为1到2.5小时。尼罗司他在肿瘤患者中的消除缓慢，其终末半衰期为22.5到38.6小时。尼罗司他的暴露通常在20到330mg bid(一天两次给药)，其以剂量成比例的方式增加。重复地bid施用后，到第8天达到稳定状态，且蓄积比中位数在1.18到2.84范围。
[0138]“cdr”定义为抗原结合蛋白的互补决定区氨基酸序列。其是免疫球蛋白重链和轻链的高度可变区。在免疫球蛋白的可变部分有三个重链和三个轻链cdrs(或cdr区)。因此，本文所使用的“cdr”指所有三个重链cdrs、所有三个轻链cdrs、所有重链和轻链cdr或至少两个cdr。本文所使用的术语“vh”和“vl”分别指抗原结合蛋白的重链可变区和轻链可变区。
[0139]
在本说明书中，可变结构域序列的氨基酸残基和全长抗体序列根据kabat编号惯例编号。相似地，实例中使用的术语“cdr”,“cdrl1”,“cdrl2”,“cdrl3”,“cdrh1”,“cdrh2”,“cdrh3”遵从kabat编号惯例(见kabat et al.,sequences of proteins of immunological interest,5th ed.,u.s.department of health and human services,national institutes of health(1991))。可替代的cdr序列编号惯例，例如chothia等人提出的，参考chothia等人(1989)nature 342:877-883。技术人员也可以获得其他的cdr序列编号惯例，包括“abm”(巴斯大学)和“联系”(伦敦大学学院)方法。
[0140]
序列表
[0141]
seq.id.no.1
–
cdrh1
[0142]
nywmh
[0143]
seq.id.no.2:cdrh2
[0144]
atyrghsdtyynqkfkg
[0145]
seq.id.no.3:cdrh3
[0146]
gaiydgydvldn
[0147]
seq.id.no.4:cdrl1
[0148]
sasqdisnyln
[0149]
seq.id.no.5:cdrl2
[0150]
ytsnlhs
[0151]
seq.id.no.6:cdrl3
[0152]
qqyrklpwt
[0153]
seq.id.no.7:重链可变区
[0154]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfsnywmhwvrqapgqglewmgatyrghsdtyynqkfkgrvtitadkststaymelsslrsedtavyycargaiydgydvldnwgqgtlvtvss
[0155]
sed.id.no.8:轻链可变区
[0156]
diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasqdisnylnwyqqkpgkapklliyytsnlhsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqyrklpwtfgqgtkleikr
[0157]
seq.id.no.9:重链区
[0158]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfsnywmhwvrqapgqglewmgatyrghsdtyynqkfkgrvtitadkststaymelsslrsedtavyycargaiydgydvldnwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepks
cdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0159]
seq.id.no.10:轻链区
[0160]
diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasqdisnylnwyqqkpgkapklliyytsnlhsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqyrklpwtfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0161]
实施例组合的理论依据
[0162]
γ-分泌酶抑制剂是一种整合的膜蛋白复合物，其对于跨膜结构域内的单一跨膜蛋白具有蛋白酶活性(wolfe，2010)。γ-分泌酶的底物之一是bcma，所述bcma是贝兰他单抗莫福汀和贝兰他单抗的靶标。在γ-分泌酶的底物中，bcma的不同之处在于其在γ-分泌酶切割之前或之后不需要另外的蛋白水解步骤以释放bcma的细胞外结构域。该切割产生可溶形式的bcma(“sbcma”)。γ-分泌酶是唯一负责生产sbcma的酶，并且在体外和体内，γ-分泌酶的抑制减少sbcma并增加浆细胞上bcma的细胞表面水平。在多发性骨髓瘤的情况下，多发性骨髓瘤患者中sbcma的水平升高，并且与骨髓中浆细胞的百分比相关(sanchez,2018)。另外，在患有多发性骨髓瘤的患者中sbcma与免疫缺陷有关。
[0163]
γ-分泌酶抑制将通过多发性骨髓瘤的bcma的细胞表面表达增加以及内化增强潜在地增强贝兰他单抗莫福汀和贝兰他单抗的作用机制。bcma的细胞表面表达增加将增加结合至细胞表面的贝兰他单抗莫福汀和贝兰他单抗的量，从而潜在地通过增加fcγr相互作用和免疫细胞募集来增强贝兰他单抗莫福汀和贝兰他单抗的adcc机制。另外，阻断bcma的脱落将潜在地增加结合的贝兰他单抗莫福汀和贝兰他单抗的内化，从而允许cys-mcmmaf毒素向多发性骨髓瘤细胞的递送增强。
[0164]
在临床前实验中，使用一组具有不同的bcma表达水平的多发性骨髓瘤和淋巴瘤细胞系，在设计用于测量adc和adcc活性的测定中以尼罗司他和贝兰他单抗莫福汀和贝兰他单抗的联合治疗观察到广泛协同。
[0165]
实施例1
[0166]
在图1中所示的实施例中，用四种不同浓度的尼罗司他(pf-03084014)预处理多发性骨髓瘤细胞系l363 24小时，然后用一定剂量范围的贝兰他单抗莫福汀或对照处理另外的72小时并测量细胞存活力。贝兰他单抗、单独的尼罗司他、缀合的同种型抗体(igg-mmaf)或igg-mmaf和尼罗司他的组合对细胞存活力没有影响。然而，与贝兰他单抗相比，以尼罗司他和贝兰他单抗莫福汀的组合观察到ec50最大1000倍的移动(shift)。
[0167]
实施例2
[0168]
在图2中所示的实施例中，评估了贝兰他单抗莫福汀联合尼罗司他的adcc活性。用不同浓度的尼罗司他预处理l363细胞24小时，暴露于贝兰他单抗，并用工程化jurkat细胞系评估fcγr衔接。通过尼罗司他和贝兰他单抗的组合，fcγr衔接的ec50比单独的贝兰他单抗提高了10倍。在另外的19个具有贝兰他单抗莫福汀活性证据的多发性骨髓瘤和淋巴瘤细胞系中，以尼罗司他和贝兰他单抗莫福汀的组合观察到相似的对数倍数移动。因此，临床前数据支持通过γ-分泌酶抑制增强贝兰他单抗莫福汀活性的机械理论依据。
[0169]
虽然以其他γ-分泌酶抑制剂观察到相似的结果，尼罗司他似乎比其他已评估过
的γ-分泌酶抑制剂有更好的安全概况。相比于许多其他gsi，改善的安全概况可以能够使尼罗司他每天给药。另外，由于药物更一贯的暴露，每天给药尼罗司他可以通过不断地阻止bcma切割来改善靶标覆盖。具体而言，当与其他γ-分泌酶抑制剂如ro4929097或mk-0752相比时，剂量限制性腹泻和肝酶升高的发生率似乎没有那么高(messersmith,2015)。此外，不像其他γ-分泌酶抑制剂(例如司马司他(semagacestat))，具有尼罗司他治疗的继发性原发性恶性肿瘤(spm)或治疗中出现感染的发生率似乎没有增加(messersmith,2015)(henley,2014)。由于γ-分泌酶抑制剂药理上和功能上多样(ran，2017)，这些在不同γ-分泌酶抑制剂之间的对比发现可能与靶标结合亲和性和药物渗透进入特定器官干细胞区室的差异有关。
[0170]
实施例3
[0171]
在这个预见的实施例中，贝兰他单抗莫福汀和尼罗司他的协同活性将在临床中进行研究：
[0172]
第1组：将在与以连续的bid时间表施用的多至三种不同剂量的尼罗司他组合的多至五个单独的给药队列中对两种剂量的贝兰他单抗莫福汀(即，1.9mg/kg和2.5mg/kg)进行评估。
[0173]
第1组的主要目的是获取确认的证据，即1.9mg/kg的贝兰他单抗莫福汀剂量当与50mg、100mg或150mg bid尼罗司他组合时至少具有与普通对照臂中使用的贝兰他单抗莫福汀单一疗法的剂量相似的总体应答率(“orr”)。
[0174]
仅若确定起始剂量的贝兰他单抗莫福汀(1.9mg/kg)和尼罗司他(100mg bid)的安全概况是可接受的，才可以平行起始第1组中第2和第3组给药队列。
[0175]
在确定起始剂量(队列1)的总体安全概况不利的情况下，则将尼罗司他减少至50mg bid，并且贝兰他单抗莫福汀的剂量将不改变，为1.9mg/kg(即给药队列-1)。允许尼罗司他的剂量强度不进一步减少至《50mg bid，因为处于此类剂量水平的药物的药效学活性(即γ-分泌酶抑制)据认为很低。
[0176]
如果确定当作为单次输注施用时2.5mg/kg剂量的贝兰他单抗莫福汀具有不可接受的安全概况，则选择在作为该给药时间表的q3w时间表的第1天和第8天起始以两个等分剂量的1.25mg/kg施用2.5mg/kg的“夹层(mezzanine)”剂量水平与q3w给药相比将提供最大浓度约25％的减少同时在一个周期内维持相同的暴露(auc)，从而潜在地积极影响贝兰他单抗莫福汀的获益/风险。
[0177]
第1组中最大的可评估剂量为2.5mg/kg贝兰他单抗莫福汀和150mg bid尼罗司他(队列4)。只有当队列3(即2.5mg/kg贝兰他单抗莫福汀和100mg bid尼罗司他)的总体安全概况确定为可接受的，才将起始队列4。为了避免疑问，缩略词bid指每天两次给药。
[0178]
第1组给药水平
[0179]
第二和第三给药水平可以同时开始
[0180][0181]
第2组：这是一个任选的组，只有当第1组的主要目的(如上文所述)得到满足时，并且如果1.9mg/kg贝兰他单抗莫福汀联合50mg、100mg或150mg bid尼罗司他的总体获益-风险概况确定为可接受的，才将起始该组。
[0182]
第2组的主要目的是鉴定贝兰他单抗莫福汀《1.9mg/kg的单一剂量，当其与50mg、100mg或150mg bid尼罗司他组合时具有比普通对照臂中的贝兰他单抗莫福汀单一疗法剂量更高的orr。
[0183]
可以组合一种特定剂量的尼罗司他在第2组中评估贝兰他单抗莫福汀剂量水平《1.9mg/kg时一个或多个单独的给药队列。基于药代动力学(“pk”)、治疗中出现的不良事件(“teae”)和orr发现，将选择这些较低贝兰他单抗莫福汀剂量水平用于评估。
[0184]
第3组：这是一个任选的组，只有当普通对照臂中3.4mg/kg为贝兰他单抗莫福汀单一疗法的剂量，并且在第1天作为单次输注施用或在第1天和第8天作为两个等分剂量施用的2.5mg/kg贝兰他单抗莫福汀的安全/耐受性是有利的，才将起始该组。
[0185]
第3组的主要目的是为了证明，当与一种特定剂量的尼罗司他联合时，3.4mg/kg剂量的贝兰他单抗莫福汀当在第1天和第8天作为两个等分剂量的1.7mg/kg施用(以减弱潜在cmax驱动毒性的风险)时具有比普通对照臂更高的orr，但具有不比平台试验内3.4mg/kg贝兰他单抗莫福汀单一疗法显著更差的总体安全概况。
[0186]
如果治疗起始后超过7天出现潜在重叠的尼罗司他相关3级毒性，可能以“7天on/14天off”每天两次给药时间表施用尼罗司他，特别地由于尼罗司他的药效学活性血浆水平得以迅速达到，通常在治疗起始后《48小时，并且到每天两次给药时间表的第8天达到尼罗司他的稳定状态血浆水平。
[0187]
实施例4
[0188]
对于该预见的子研究已选择0.95mg/kg的贝兰他单抗莫福汀的较低起始剂量。基于ftih试验数据的贝叶斯逻辑回归建模(blrm)预测贝兰他单抗莫福汀单一疗法剂量《1.9mg/kg的临床活性低，虽然少量的参与者以低于1.9mg/kg的剂量治疗(例如，0.48mg/kg时n＝3，0.96mg/kg时n＝4)。虽然预期0.95mg/kg的起始剂量本身仅具有有限的功效，预计尼罗司他将加强贝兰他单抗莫福汀的作用。这种较低的起始剂量与贝兰他单抗莫福汀单一疗法试验中所使用的较高的剂量相比，预计具有改善的安全概况，例如，与2.5mg/kg和3.4mg/kg的较高剂量相比(其与血液学反应的较高预测水平相关)，角膜毒性事件可能与较低的2级事件发生率相关。
[0189]
将对三个队列给予0.95mg/kg贝兰他单抗莫福汀，但具有不同剂量的尼罗司他：
[0190]
·
0.95mg/kg贝兰他单抗莫福汀联合尼罗司他50mg bid
[0191]
·
0.95mg/kg贝兰他单抗莫福汀联合尼罗司他100mg bid
[0192]
·
0.95mg/kg贝兰他单抗莫福汀联合尼罗司他150mg bid。
[0193]
尼罗司他将间歇性施用，例如，以7天on/14天off或持续地。临床试验的结果将提供数据来支持最大风险-获益所需的最佳剂量方案。
[0194]
实施例5：adc活性
[0195]
为确定在抗体依赖性细胞毒性测定中贝兰他单抗莫福汀是否显示出与gsi的组合协同，在3天细胞增殖测定中对表达bcma的多发性骨髓瘤和淋巴瘤癌细胞系进行测试。在384孔板中铺板细胞后，以2.5μm、0.25μm、0.025μm和0.0025μm的固定浓度给药尼罗司他。将平板温育过夜，然后对于每个固定浓度的尼罗司他，以从9.9μg/ml至0.00025μg/ml的10点剂量滴定的贝兰他单抗莫福汀给药。温育3天后，使用promega的cell-titer glo分析细胞存活力并使用graphpad软件对其进行分析。代表性数据如图3中所示。结果显示以贝兰他单抗莫福汀联合尼罗司他，效力多至3对数倍数的移动。
[0196]
实施例6：adcc活性
[0197]
使用promega的jurkat adcc测定联合尼罗司他评估贝兰他单抗，即mmaf未缀合形式的贝兰他单抗莫福汀的adcc活性。将表达bcma的多发性骨髓瘤和淋巴瘤癌细胞系以10:1的比率(jurkat效应细胞:癌细胞)在1536孔形式中铺板。然后立即用2.5μm、0.25μm、0.025μm和0.0025μm的固定浓度的尼罗司他对细胞给药。然后在每个固定浓度从9.9μg/ml至0.00025μg/ml对贝兰他单抗滴定。将平板温育24小时并通过添加promega bio-glo评估adcc活性。使用graphpad软件分析数据。adcc活性的代表性数据如图4中所示。
[0198]
实施例7：sbcma水平
[0199]
使用r&d人sbcmaelisa试剂盒在用处于2.5μm、0.25μm、0.025μm和0.0025μm的固定浓度的尼罗司他处理后的表达bcma的细胞系的3日龄细胞培养上清液中检测可溶性bcma。我们检测到在用尼罗司他处理后sbcma以剂量依赖性方式丧失(图5)。
[0200]
实施例8：bcma水平的细胞表面检测
[0201]
在表达bcma的细胞系中，用处于2.5μm、0.25μm、0.025μm和0.0025μm的固定浓度的尼罗司他进行3天处理后，通过流式细胞术检查bcma细胞表面水平。将bcma的水平与同种型对照组比较。检测到细胞表面bcma以剂量依赖性方式增加。细胞表面bcma水平的代表性数据如图6中所示。