一种原代干细胞的培养方法与流程

技术特征：
1.一种原代干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：第0天，从脐带中剥胶分离出相应组织块，将剥离的组织块经过ⅱ型胶原酶ⅱ消化处理10～60分钟；终止消化后，洗涤消化后的组织块；将洗涤后的组织块直接接种到培养瓶中，添加干细胞培养基后将培养瓶静置于培养箱中进行干细胞培养；第2天和第4天，分别往培养瓶中添加干细胞培养基；第7天，对培养瓶进行全量换液，并将换下的营养液转移至离心管中离心处理，离心停止后，去除上清，将保留的沉底转入培养瓶中并再添加干细胞培养基，继续培养；第10天和第13天，对培养瓶进行半量换液，再添加干细胞培养基；第15天，停止培养，往培养瓶中加入消化液进行细胞的消化并使细胞脱离培养瓶壁，收集细胞并进行洗涤后获得原代干细胞。2.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，第0天中，所述ⅱ型胶原酶的浓度为0.01％
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0.5％。3.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，第0天中，所述培养瓶采用t175培养瓶。4.根据权利要求3所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，所述组织块直接接种到培养瓶中时，所述组织块接种量为每个t175培养瓶中接种量为2～20ml且干细胞培养基添加量为5～30ml。5.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，第2天至第13天，每次添加干细胞培养基量为2～20ml。6.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，第15天中，所述消化液为浓度0.01％
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0.25％的胰酶。7.根据权利要求1至6任一所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，所述干细胞培养基为αmem培养基或dmem/f12培养基。8.根据权利要求1所述的原代干细胞的培养方法，其特征在于，所述培养箱中，温度为37℃、co2体积百分比为含量为5％、相对饱和湿度为100％。

技术总结
本发明公开了一种原代干细胞的培养方法，包括步骤：脐带中组织块剥离以及消化处理，组织块接种后静置培养；第2天和第4天，分别往培养瓶中添加干细胞培养基；第7天，对培养瓶进行全量换液，离心处理，保留沉底再添加干细胞培养基继续培养；第10天和第13天，对培养瓶进行半量换液，再添加干细胞培养基；第15天，停止培养，加入消化液使细胞脱离培养瓶壁，收集细胞，并进行洗涤后获得原代干细胞。本方法培养的原代干细胞，组织块接种时无漂浮问题；Ⅱ型胶原酶使细胞不易老化且残留的Ⅱ型胶原酶后续也会缓慢消化，有利于脐带组织块的充分消化。有利于脐带组织块的充分消化。有利于脐带组织块的充分消化。


技术研发人员：谢海涛 钟家伟 刘元甲 薛卫巍
受保护的技术使用者：东莞再立健生物科技有限公司
技术研发日：2021.11.16
技术公布日：2022/1/4