一种转氨酶及使用其进行催化制备的方法与流程

技术特征：
1.一种化合物c的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：在ph＝7.5～9.0的缓冲液中，在转氨酶、氨基供体和磷酸吡多醛存在下，将化合物b进行如下所示的转氨化反应得化合物c即可；所述转氨酶具有如seq id no:2或seq id no:3所示的氨基酸序列；r1、r2、r3、r4和r5分别独立地为h、卤素、c1‑
c3烷基、c1‑
c3烷氧基或cn。2.如权利要求1所述的化合物c的制备方法，其特征在于，在卤素中，所述的卤素为氟、氯、溴或碘，优选氟或氯；和/或，在c1‑
c3烷基中，所述的c1‑
c3烷基为甲基、乙基、正丙基或异丙基，优选甲基；和/或，在c1‑
c3烷氧基中，所述的c1‑
c3烷氧基为甲氧基、乙氧基、正丙氧基或异丙氧基，优选甲氧基。3.如权利要求1所述的化合物c的制备方法，其特征在于，r1为h、卤素或cn，优选h、氟、氯或cn，更优选h；和/或，r2为h、c1‑
c3烷基或cn，优选h、甲基或cn，更优选h；和/或，r3为h、卤素、c1‑
c3烷氧基或cn，优选h、氟、氯、甲氧基或cn，更优选cn；和/或，r4为h、c1‑
c3烷基或cn，优选h、甲基或cn，更优选h；和/或，r5为h、卤素或cn，优选h、氟、氯或cn，更优选h。4.如权利要求1所述的化合物c的制备方法，其特征在于，所述的化合物b为如下任一方案：方案一：r1为h、卤素或cn；r2为h、c1‑
c3烷基或cn；r3为h、卤素、c1‑
c3烷氧基或cn；r4为h、c1‑
c3烷基或cn；r5为h、卤素或cn；方案二：r1为h；r2为h、c1‑
c3烷基或cn；r3为h、卤素、c1‑
c3烷氧基或cn；r4为h、c1‑
c3烷基或cn；r5为h；方案三：r1为h；r2为h；
r3为h、卤素、c1‑
c3烷氧基或cn；r4为h；r5为h；较佳地，所述的化合物b为如下任一化合物：较佳地，所述的化合物b为如下任一化合物：5.如权利要求1～4中任一项所述的化合物c的制备方法，其特征在于，在所述的转氨化反应中，所述的ph＝8.0；和/或，在所述的转氨化反应中，所述的缓冲液为磷酸氢二钠
‑
磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钾
‑
磷酸二氢钾缓冲液、tris
‑
hcl缓冲液或hepes缓冲液；和/或，所述的转氨化反应还进一步包含加酸维持反应体系的ph的步骤，所述的酸例如盐酸、磷酸或硫酸；和/或，在所述的转氨化反应中，所述的氨基供体为nh2c1‑
c6烷基，所述的c1‑
c6烷基例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，优选异丙基；和/或，所述的转氨化反应还进一步包含助溶剂，所述的助溶剂例如砜类溶剂，优选二甲基亚砜；所述的化合物b与所述的助溶剂的质量体积比可为0.1g/ml～1.0g/ml，例如0.5g/ml；和/或，在所述的转氨化反应中，所述的磷酸吡多醛与所述的化合物b的质量比为0.01:1～0.1:1，例如0.01:1或0.02:1；和/或，在所述的转氨化反应中，所述的转氨酶与所述的化合物b的质量比为0.1:1～1.0:1，例如0.1:1、0.2:1或0.5:1；和/或，在所述的转氨化反应中，反应温度为30～45℃，例如40℃或45℃；和/或，在所述的转氨化反应中，反应时间为2h～80h，优选4h～39.5h；和/或，在所述的转氨化反应中，所述的化合物b与所述的缓冲液中水的质量体积比为1.0g/l～80g/l，例如1.1g/l～54g/l；和/或，在所述的转氨化反应中，所述的转氨化反应包含如下步骤：在缓冲液中，加入所述的氨基供体和酸调节ph至7.5
‑
9.0，所述的化合物b溶于助溶剂中加入，再加入所述的转氨酶和磷酸吡多醛进行所述的转氨化反应即可；和/或，所述的转氨化反应结束后，还包含后处理，所述的后处理包含如下步骤：加碱，调节ph至11～13，分层后，水相用甲基四氢呋喃萃取，分离有机相并浓缩至干，得所述的化合物c即可。6.如权利要求1～4中任一项所述的化合物c的制备方法，其特征在于，当化合物b为
时：所述的化合物b由化合物a进行如下所述的氰基化反应即得；所述的氰基化反应优选包含如下步骤：在[pd(c3h5)cl]2、三苯基膦、溶剂和氰基化试剂存在的条件下，将所述的化合物a进行所述的氰基化反应得所述的化合物b即可。7.如权利要求6所述的化合物c的制备方法，其特征在于：在所述的氰基化反应中，所述的氰基化试剂为k4[fe(cn)6]；和/或，在所述的氰基化反应中，所述的溶剂为酰胺类溶剂和/或水，所述的酰胺类溶剂例如为二甲基乙酰；和/或，在所述的氰基化反应中，所述的[pd(c3h5)cl]2与所述的化合物a的摩尔比为0.001:1～0.01:1，例如0.005:1～0.01:1；和/或，在所述的氰基化反应中，所述的三苯基膦与所述的化合物a的摩尔比为0.01:1～0.1:1，例如0.02:1～0.03:1；和/或，在所述的氰基化反应中，所述的氰基化试剂与所述的化合物a的摩尔比为0.4:1～1:1，例如0.5:1；和/或，在所述的氰基化反应中，所述的化合物a在所述的溶剂中的浓度为0.1mol/l～1mol/l，例如0.2mol/l～0.5mol/l；和/或，在所述的氰基化反应中，反应温度为60℃～95℃，例如85℃～95℃；和/或，在所述的氰基化反应中，反应时间为15h～40h，例如18h～25h。8.一种化合物d的制备方法，其特征在于，当化合物c为时，将化合物c进行如下所示的水解反应得所述的化合物d即得；其中，所述的化合物c的制备方法如权利要求1～7任一项所述；所述的水解反应优选包含如下步骤：在ph＝6.5
‑
8.0的缓冲液中，在氰基水解酶存在下，将化合物c进行所述的水解反应得
化合物d即可；所述氰基水解酶具有如seq id no:4所示的氨基酸序列。9.如权利要求8所述的化合物d的制备方法，其特征在于：在所述的水解反应中，所述的缓冲液为磷酸氢二钠
‑
磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钾
‑
磷酸二氢钾缓冲液、tris
‑
hcl缓冲液或hepes缓冲液；和/或，在所述的水解反应中，所述的氰基水解酶与所述的化合物c的质量比为0.05:1～0.3:1，例如0.08:1～0.1:1；和/或，在所述的水解反应中，所述的化合物c与所述的缓冲液中水的质量体积比为0.1g/l～1.0g/l，例如0.6g/l～1.0g/l；和/或，所述的水解反应还进一步包含助溶剂，所述的助溶剂为砜类溶剂，例如二甲基亚砜；所述的化合物c与所述的助溶剂的质量体积比可为0.5g/ml～2.0g/ml，例如1.2g/ml～1.5g/ml；和/或，所述的水解反应还进一步包含加酸维持反应体系的ph的步骤，所述的酸例如盐酸、磷酸或硫酸；和/或，在所述的水解反应中，反应温度为10℃～40℃，优选25℃～30℃，例如30℃；和/或，在所述的水解反应中，反应时间为20～40小时，优选23～30小时，例如23小时；和/或，所述的水解反应中，所述的水解反应包含如下步骤：在缓冲液中，加入溶于助溶剂的化合物c，加酸调节ph至6.5
‑
8.0，再加入所述的氰基水解酶进行水解反应，得所述的化合物d即可。10.一种转氨酶，其具有如seq id no:2或seq id no:3所示的氨基酸序列。11.一种转氨酶在制备化合物c和/或化合物e中的应用，所述的转氨酶具有如seq id no:2或seq id no:3所示的氨基酸序列；r1、r2、r3、r4和r5的定义如权利要求1～4中任一项所述；化合物c优选化合物e优选

技术总结
本发明提供了一种转氨酶及使用其进行催化制备的方法，本申请中的转氨酶具有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。此外，使用本申请中的转氨酶还能催化一种化合物C的制备方法，其包括如下步骤：在pH＝7.5～9.0的缓冲液中，在转氨酶、氨基供体和磷酸吡多醛存在下，将化合物B进行如下所示的转氨化反应得化合物C即可；所述转氨酶具有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；R1、R2、R3、R4和R5分别独立地为H、卤素、C1‑


技术研发人员：唐大林 孙丰来 李杰 张家浩 刘阳 朱景仰
受保护的技术使用者：上海合全药业股份有限公司
技术研发日：2020.12.31
技术公布日：2022/1/3