从人多能干细胞获得眼野祖细胞的方法与流程

技术特征：
1.从人多能干细胞获得眼野祖细胞的方法，其包括以下步骤：
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培养所述人多能干细胞以获得分化细胞，以及
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使所述分化细胞与bmp5(seq id no:1)接触，其中让所述分化细胞分化为眼野祖细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述眼野祖细胞是眼睛的不同细胞谱系的多种祖细胞，包括但不限于视杯祖细胞，如rpe祖细胞和nr祖细胞、晶状体祖细胞和角膜祖细胞。3.从人多能干细胞获得眼野祖细胞的方法，其包括以下步骤：
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将所述人多能干细胞接种在用基质包被的基底上，
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在细胞培养基中培养所述人多能干细胞，以获得分化细胞，
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使所述分化细胞与small mothers against decapentaplegic(smad)蛋白信号传导抑制剂接触，以及
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使所述分化细胞与bmp5(seq id no:1)接触，其中让所述分化细胞分化为眼野祖细胞。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使所述分化细胞与bmp5(seq id no:1)接触。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中bmp5的浓度为约0.1ng/ml至约2500ng/ml，优选约100ng/ml至约500ng/ml，更优选约150ng/ml至约450ng/ml，甚至更优选约200ng/ml至约400ng/ml。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使所述分化细胞与选自gw788388、ldn
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193189、ly2157299、ly364947、noggin、repsox、sb431542和tew
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7197的small mothers against decapentaplegic(smad)蛋白信号传导抑制剂接触。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述small mothers against decapentaplegic(smad)蛋白信号传导抑制剂为gw788388和/或repsox。8.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述基质为选自层粘连蛋白
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511、层粘连蛋白
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521和层粘连蛋白
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332或其组合的层粘连蛋白或其片段。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中从大约第5天至大约第15天起，优选地从大约第6天至大约第12天起，更优选地从大约第6天至大约第8天起，甚至更优选地从大约第7天起，使所述分化细胞与bmp5(seq id no:1)接触。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中从大约第0天至大约第15天起，优选地至大约第14天起，更优选地至大约第13天起，甚至更优选地至大约第12天起，使所述分化细胞与small mothers against decapentaplegic(smad)蛋白信号传导抑制剂接触。11.根据权利要求2
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11所述的方法，其中所述眼野祖细胞是rpe祖细胞，并且其中所述方法进一步包括以下步骤：
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使所述分化细胞与gsk3抑制剂接触。12.根据权利要求11所述的方法，其中从大约第7天至大约第15天起，优选地从大约第12天起，使所述分化细胞与所述gsk3抑制剂接触。13.根据权利要求11和12中任一项所述的方法，其中所述gsk3抑制剂为chir99021。14.眼野祖细胞的体外细胞群体，其中至少40％的眼野祖细胞共表达pax6和otx2，以及vsx2和/或mitf中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的眼野祖细胞的体外细胞群体，其中至少50％、60％、70％、80％或90％的眼野祖细胞共表达pax6和otx2，并且至少10％、20％、30％、40％、50％的眼野祖细胞进一步共表达vsx2和/或mitf中的至少一种。

技术总结
本发明涉及从hPSC获得眼野祖细胞的方法，所述眼野祖细胞适合进一步分化为例如视网膜色素上皮细胞和/或神经视网膜细胞。该方案提供了具有目的细胞高产量的简单方法，并且有助于转化为GMP合规性。于转化为GMP合规性。


技术研发人员：J
受保护的技术使用者：诺和诺德股份有限公司
技术研发日：2020.05.14
技术公布日：2021/12/17