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一种利用内生菌防治腐烂病的方法与流程

2021-12-08 01:29:00 来源:中国专利 TAG:

技术特征:
1.一种利用内生菌防治腐烂病的方法,其特征在于,包括如下步骤:s1:产紫青霉的制备,将梨树腐烂病发病枝干韧皮部剥离,剪成组织块,投放于75%的乙醇中消毒;将步骤再用1%次氯酸钠消毒,组织经无菌水清洗5次后置于含氨苄青霉素的pda培养基表面;待组织块周围长出菌丝,挑针挑取菌落边缘菌丝或菌块,转移至新的培养基中进行纯化培养;经单孢纯化后得到单一菌株保存备用;s2:制备无菌滤液,将内生真菌jk2接种pda平板上,在25℃下培养7d;用无菌水将孢子洗脱后,用血球计数板统计浓度,并将其调整为108个/ml;接种1ml孢子液于50ml pdb培养基中,获得的发酵液过滤,即得无菌滤液;s3:制备带毒平板,取无菌滤液与冷却到50℃的pda培养基混合倒入平板,制成不同浓度(10%和20%)的带毒平板,以无菌水代替无菌滤液与pda培养基混合;s4:梨树枝条的选取,选取健康、长势一致当年生梨树枝条,经无菌水清洗干净后,用75%乙醇擦拭消毒,再用无菌水清洗,晾干;s5:用打孔器在枝条打孔,孔深至木质部;分别用内生真菌上清液或分生孢子(108个/ml)喷施处理打孔枝条,无菌水处理作为阴性对照,戊唑醇处理作为阳性对照;s6:处理后将枝条置于培养箱中保湿2d后,每个孔接种1个直径为0.5cm的梨树腐烂病菌菌饼,再用蘸无菌水的脱脂棉缠绕,外用封口膜缠绕保湿,置于25℃下光照培养箱中培养。2.根据权利要求1所述的一种利用内生菌防治腐烂病的方法,其特征在于,所述s1中乙醇消毒时间为1min,且组织块的规格为0.5cm
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0.5cm。3.根据权利要求1所述的一种利用内生菌防治腐烂病的方法,其特征在于,所述s1中次氯酸钠的消毒时间为3min,所述培养基的成分为马铃薯200g
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1、葡萄糖20g
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1和琼脂粉15g
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1;其中氨苄青霉素的含量为100mg
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1。4.根据权利要求1所述的一种利用内生菌防治腐烂病的方法,其特征在于,所述s3中培养液于25℃、180r/min条件下振荡培养7d。5.根据权利要求1所述的一种利用内生菌防治腐烂病的方法,其特征在于,所述s3中,发酵液经10000r/m离心20min后,取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤。6.根据权利要求1所述的一种利用内生菌防治腐烂病的方法,其特征在于,所述s5中打孔器所用的直径为0.5cm。7.根据权利要求1所述的一种利用内生菌防治腐烂病的方法,其特征在于,所述s6中的枝条7d后测量病斑长度,并拍照记录。8.根据权利要求1所述的一种利用内生菌防治腐烂病的方法,其特征在于,所述s6中每次接种10个孔,重复3次,发病率=(总接种点数

无病症的接种点数)/总接种点数*100%。

技术总结
本发明涉及梨树腐烂病治疗技术领域,公开了一种利用内生菌防治腐烂病的方法,S1:产紫青霉的制备;S2:制备无菌滤液;S3:制备带毒平板;S4:梨树枝条的选取;S5:用打孔器在枝条打孔,孔深至木质部;S6:处理后将枝条置于培养箱中保湿处理。本发明从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株真菌JK2,经形态学和分子生物学鉴定为青霉属产紫青霉,平板对峙试验显示,该菌株对梨树腐烂病菌具有强烈的抑制活性,抑制率达到95%以上,离体梨树枝条鉴定结果显示,JK2对梨树腐烂病具有良好的防治效果,产紫青霉是一种内生真菌,对环境和人类身体无害,有助于开发生物农药。开发生物农药。开发生物农药。


技术研发人员:袁洪波 涂洪涛 王丽 侯珲
受保护的技术使用者:中国农业科学院郑州果树研究所
技术研发日:2021.10.13
技术公布日:2021/12/7
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