一种具有抗衰功效的植物组合物及其在化妆品中的应用的制作方法

1.本发明提出了一种植物组合物的制备方法和用途，尤其是涉及一种可以应用于抗衰老化妆品的植物组合物的制备方法和用途。


背景技术：

2.随着人们对抗衰老这一概念认知的加深，购买抗衰老产品的消费者的年龄架构也趋于年轻化，越来越多的消费者会选择在25岁之前购买使用抗衰老产品。衰老往往随着年龄的增加而不可避免，面对这种老化我们能做的就是延缓。
3.但现在的情况是，因为工作生活以及一些外界因素反而使得人们加速衰老，年轻一代的身体内外都纷纷出现了衰老现象，在皮肤上的体现尤为明显。这些现象是身体的警告且让整个人的外形气质都大大受损，甚至会影响到我们的工作生活以及人际交往上，故而正确的抗衰手段是有必要且有益于我们的身心健康的。因为科学技术的发展，实现抗衰老的可能性也越来越高。
4.植物类化妆品不同于其他化妆品，讲究绿色天然，安全可靠，并且来源于大自然，纯正温和，毒副作用小，相对于化学合成品更加安全可靠；品类齐全，剂型多样。
5.但是，如何从中获得功效显著的有效部分，进行怎样的配伍，需要大量的研究。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种具有抗衰功效的植物组合物及其制备方法，使用草本精华成分，结合现代科技萃取，最大程度上保留了草本天然有效成本，温和无刺激，气味天然芬芳。
7.本发明的另外一个目的是提供上述植物组合物在化妆品领域中的应用，本发明植物组合物具有保湿、亮肤、修复、抗衰老、抗炎舒缓、增强弹性、淡化细纹等多种复合功效，可用作多种化妆品的基础原料。
8.本发明目的是通过以下技术方案实现的：
9.一种植物组合物，它是含有下述重量配比的原料制备而成：
10.黄精1
‑
6重量份；
11.灵芝0.1
‑
2重量份；
12.玄参0.1
‑
1重量份；和
13.芍药0.1
‑
1重量份。
14.进一步地，所述具有抗衰功效的植物组合物是由下述重量配比的原料制备而成：
15.黄精3
‑
6重量份；
16.灵芝0.1
‑
1重量份；
17.玄参0.3
‑
1重量份；和
18.芍药0.3
‑
1重量份。
19.进一步地，所述具有抗衰功效的植物组合物是由下述重量配比的原料制备而成：
20.黄精4
‑
5重量份；
21.灵芝0.5
‑
1重量份；
22.玄参0.3
‑
0.5重量份；和
23.芍药0.3
‑
0.5重量份。
24.另外，上述具有抗衰功效的植物组合物，是含有下述工艺步骤制备而成：
25.将配方量的黄精、灵芝、玄参、芍药的醇提取物为活性成分，溶于丁二醇、1.2戊二醇、水等复配而成为黄精有效物、灵芝有效物、玄参有效物、芍药有效物；
26.黄精有效物提取工艺：
27.1)对黄精按其药性进行炮制；
28.2)称取配方量的黄精进行粉碎，加入蒸馏水浸泡24h；
29.3)按一定液料比例加入蒸馏水，回流提取后离心、浓缩；
30.4)在浓缩液中加入乙醇，过滤，离心，冷冻干燥，得黄精有效成分的粗产物；
31.5)取粗产物，溶解，与氯仿
‑
正丁醇混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心去除中间层的变性蛋白；
32.6)向溶液中加入活性炭，脱色，其间每10min搅拌一次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，静置，过滤，离心。即得黄精有效物。
33.灵芝有效物提取工艺：
34.1)取配方量灵芝进行粉碎，加入药材量30倍的水，浸泡药材1h；
35.2)加热至沸腾，回流提取4h，趁热过滤，提取液单独放置；
36.3)将滤渣重新投入提取容器中，再次加入药材量30倍水，加热至沸腾，回流提取3h，趁热过滤，提取液单独放置；
37.4)两份提取液分别真空浓缩回收溶剂，记录回收溶剂后的体积，并分别取10ml置于蒸发皿中置于电热鼓风干燥箱中干燥至恒重。
38.5)剩余的两份提取液合并后继续真空浓缩至浓缩液相对密度1.05g/ml以上，放入减压干燥箱中65℃干燥至水分含量8％以下。即得灵芝有效物。
39.玄参有效物提取工艺：
40.1)对玄参按其药性进行炮制；
41.2)称取配方量的玄参进行粉碎，过80目筛，加入蒸馏水浸泡4h；
42.3)加热至沸腾，回流提取2h，趁热过滤，对提取液进行抽滤浓缩；
43.4)将浓缩液于大孔树脂过滤后加入乙醇，过滤，离心，冷冻干燥，即得玄参有效物。
44.芍药有效物提取工艺：
45.1)将配方量新鲜芍药根切片、烘干和粉碎，得芍药根原料；
46.2)将所述芍药根原料用乙醇溶液浸泡，同时进行超声提取，完成后，离心，取上清液作为提取液；
47.3)采用减压蒸馏的方式去除所述提取液中的乙醇，得芍药根提取物；
48.4)将所述芍药根提取物通过大孔吸附树脂，用洗脱剂冲洗所述大孔吸附树脂，得洗脱液；
49.5)采用减压蒸馏的方式去除所述洗脱液中的所述洗脱剂，得浓缩液，对所述浓缩液进行真空冷冻干燥，得提纯后的粉末状或膏状的芍药根提取物。
50.将分离提取后的黄精、灵芝、玄参、芍药有效成分按一定工艺和比例进行复配组方，即得所述具有抗衰功效的植物组合物。
51.本发明所述植物组合物眼霜是将分离提取后的黄精有效物成分、灵芝有效物成分、玄参有效物成分、芍药有效物成分按一定工艺和比例进行复配组方，即得所述具有抗衰功效的植物组合物。加入化妆品可接受的辅料或辅助性成分制备而成，所述化妆品包括眼霜、精华、面膜、水乳、面霜。
52.进一步地，所述含有抗衰功效的植物组合物的眼霜是由下述配比的原料及辅料制备而成：
53.a组份：去离子水、丁二醇、ha 1％溶液、尿囊素、carbopol 940、甘油、biophilic s、甜菜碱nmf
‑
50、对羟基苯乙酮；
54.b组份：植物甾醇油酸酯、乳木果油、角鲨烷、三辛酸癸酸甘油酯、异壬酸异壬酯、聚二甲基硅氧烷、鲸蜡硬脂醇、生育酚乙酸酯(非天然)、单硬脂酸乙二醇酯、橄榄油；
55.c组份：三乙醇胺、sep 400、1.2
‑
己二醇、植物组合物、香精。
56.本发明具有抗衰功效的植物组合物的眼霜的制备方法如下：
57.1)称取a相加热至75
‑
85℃，保温搅拌至分散均匀。
58.2)称取b相加入到a相，搅拌均匀。
59.3)搅拌降温至40
‑
45℃依次加入c相搅拌均匀。
60.优化地，本发明具有抗衰功效的植物组合物的眼霜的制备方法如下：
61.1)称取去离子水、丁二醇、ha 1％溶液、尿囊素、carbopol 940、甘油、biophilic s、甜菜碱nmf
‑
50、对羟基苯乙酮。加热至85℃，保温搅拌至分散均匀。
62.2)称取植物甾醇油酸酯、乳木果油、角鲨烷、三辛酸癸酸甘油酯、异壬酸异壬酯、聚二甲基硅氧烷、鲸蜡硬脂醇、生育酚乙酸酯(非天然)、单硬脂酸乙二醇酯、橄榄油。加入到a相，搅拌均匀。
63.3)搅拌降温至45℃依次加入三乙醇胺、sep 400、1.2
‑
己二醇、植物组合物、香精，搅拌均匀。
64.本发明提供了所述植物组合物在制备眼霜类产品中的用途。
65.本发明还提供了所述植物组合物在制备其他化妆品中的用途。
66.借由上述技术方案，本发明具有如下优点和有益技术效果：
67.1)本发明使用草本精华成分，结合现代科技萃取，最大程度上保留了草本天然有效成本，温和无刺激，气味天然芬芳。具有保湿、亮肤、修复、抗衰老、抗炎舒缓、增强弹性、淡化细纹等多种复合功效。
68.2)经过测试实验，本发明植物组合物产品未表现出细胞毒性；可显著提升sod活性具有抗氧化功效；可显著提升细胞抗衰相关蛋白的含量具有抗衰功效；人体测试表明使用本发明测试样品两周后具有改善鱼尾纹的效果。
附图说明
69.图1为细胞活力曲线图。
70.图2为细胞形态学检测浓度变化图。
71.图3为孵育培养结束后细胞进行免疫荧光检测，collagenⅰ结果汇总图。
72.图4为elastin检测结果图片汇总图。
具体实施方式
73.以下通过具体较佳实施例结合效果试验例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不仅限于以下的实施例。
74.本发明公开了一种具有抗衰功效的植物组合物及其在化妆品中的应用。本发明物主要由黄精1
‑
6重量份、灵芝0.1
‑
2重量份、玄参0.1
‑
1重量份、芍药0.1
‑
1重量份，经合适的方法制备而成。
75.另外，上述具有抗衰功效的植物组合物，是含有下述工艺步骤制备而成：
76.将配方量的黄精、灵芝、玄参、芍药的醇提取物为活性成分，溶于丁二醇、1.2戊二醇、水等复配而成为黄精有效物、灵芝有效物、玄参有效物、芍药有效物；
77.黄精有效物提取工艺：
78.1)对黄精按其药性进行炮制；
79.2)称取配方量的黄精进行粉碎，加入蒸馏水浸泡24h；
80.3)按一定液料比例加入蒸馏水，回流提取后离心、浓缩；
81.4)在浓缩液中加入乙醇，过滤，离心，冷冻干燥，得黄精有效成分的粗产物；
82.5)取粗产物，溶解，与氯仿
‑
正丁醇混合后，剧烈振摇30min，蛋白质变性生成凝胶状，离心去除中间层的变性蛋白；
83.6)向溶液中加入活性炭，脱色，其间每10min搅拌一次，向提取液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，静置，过滤，离心。即得黄精有效物。
84.灵芝有效物提取工艺：
85.1)取配方量灵芝进行粉碎，加入药材量30倍的水，浸泡药材1h；
86.2)加热至沸腾，回流提取4h，趁热过滤，提取液单独放置；
87.3)将滤渣重新投入提取容器中，再次加入药材量30倍水，加热至沸腾，回流提取3h，趁热过滤，提取液单独放置；
88.4)两份提取液分别真空浓缩回收溶剂，记录回收溶剂后的体积，并分别取10ml置于蒸发皿中置于电热鼓风干燥箱中干燥至恒重。
89.5)剩余的两份提取液合并后继续真空浓缩至浓缩液相对密度1.05g/ml以上，放入减压干燥箱中65℃干燥至水分含量8％以下。即得灵芝有效物。
90.玄参有效物提取工艺：
91.1)对玄参按其药性进行炮制；
92.2)称取配方量的玄参进行粉碎，过80目筛，加入蒸馏水浸泡4h；
93.3)加热至沸腾，回流提取2h，趁热过滤，对提取液进行抽滤浓缩；
94.4)将浓缩液于大孔树脂过滤后加入乙醇，过滤，离心，冷冻干燥，即得玄参有效物。
95.芍药有效物提取工艺：
96.1)将配方量新鲜芍药根切片、烘干和粉碎，得芍药根原料；
97.2)将所述芍药根原料用乙醇溶液浸泡，同时进行超声提取，完成后，离心，取上清液作为提取液；
98.3)采用减压蒸馏的方式去除所述提取液中的乙醇，得芍药根提取物；
99.4)将所述芍药根提取物通过大孔吸附树脂，用洗脱剂冲洗所述大孔吸附树脂，得洗脱液；
100.5)采用减压蒸馏的方式去除所述洗脱液中的所述洗脱剂，得浓缩液，对所述浓缩液进行真空冷冻干燥，得提纯后的粉末状或膏状的芍药根提取物。
101.将分离提取后的黄精、灵芝、玄参、芍药有效成分按一定工艺和比例进行复配组方，即得所述具有抗衰功效的植物组合物。
102.本发明植物组合物使用草本精华成分，结合现代科技萃取，最大程度上保留了草本天然有效成本，温和无刺激，气味天然芬芳。
103.本发明植物组合物具有保湿、亮肤、修复、抗衰老、抗炎舒缓、增强弹性、淡化细纹等多种复合功效，可用作多种化妆品的基础原料。
104.经过测试实验：本发明植物组合物未表现出细胞毒性；可显著提升sod活性具有抗氧化功效；可显著提升细胞抗衰相关蛋白的含量具有抗衰功效；人体测试表明使用本发明测试样品四周后具有改善鱼尾纹的效果。
105.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的保护范围。
106.显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
107.实施例1
108.本发明实施例1的植物组合物对应眼霜的配方及制备方法，可表述如下：
109.1.配方：
110.a组份：
111.65.91％去离子水、4％丁二醇、5％ha 1％溶液、0.2％尿囊素、0.2％carbopol 940、4％甘油、1.5％biophilic s、1％甜菜碱nmf
‑
50、0.5％对羟基苯乙酮。
112.b组份：
113.0.2％植物甾醇油酸酯、0.8％乳木果油、5％角鲨烷、4％三辛酸癸酸甘油酯、1％异壬酸异壬酯、1.2％聚二甲基硅氧烷、2.2％鲸蜡硬脂醇、0.15％生育酚乙酸酯(非天然)、0.5％单硬脂酸乙二醇酯、1％橄榄油。
114.c组份：
115.0.16％三乙醇胺、0.6％sep 400、0.5％1.2
‑
己二醇、1％植物组合物、0.08％香精。
116.2.制备方法：
117.1)称取65.91％去离子水、4％丁二醇、5％ha 1％溶液、0.2％尿囊素、0.2％carbopol 940、4％甘油、1.5％biophilic s、1％甜菜碱nmf
‑
50、0.5％对羟基苯乙酮。加热至85℃，保温搅拌至分散均匀。
118.2)称取0.2％植物甾醇油酸酯、0.8％乳木果油、5％角鲨烷、4％三辛酸癸酸甘油酯、1％异壬酸异壬酯、1.2％聚二甲基硅氧烷、2.2％鲸蜡硬脂醇、0.15％生育酚乙酸酯(非天然)、0.5％单硬脂酸乙二醇酯、1％橄榄油。加入到a相，搅拌均匀。
119.3)搅拌降温至45℃依次加入0.16％三乙醇胺、0.6％sep 400、0.5％1.2
‑
己二醇、1％植物组合物、0.08％香精。搅拌均匀。
120.实施例2
121.本发明实施例2的植物组合物对应精华的配方及制备方法，可表述如下：
122.1.配方：
123.a组份：
124.84％去离子水、0.15％carbopol 941polymer、5％甲基丙二醇、5％丁二醇、0.03％银耳多糖、0.5％尿素、1％甜菜碱、0.05％disodium edta、0.2％尿囊素、0.5％双甘油、0.5％对羟基苯乙酮、1％烟酰胺。
125.b组份：
126.0.1％肌肽、0.5％β
‑
葡聚糖、0.5％生物糖胶、0.5％1.2
‑
己二醇、1％植物组合物、0.1％香精。
127.2.制备方法：
128.1)将84％去离子水、0.15％carbopol 941polymer、5％甲基丙二醇、5％丁二醇、0.03％银耳多糖、0.5％尿素、1％甜菜碱、0.05％disodium edta、0.2％尿囊素、0.5％双甘油、0.5％对羟基苯乙酮、1％烟酰胺逐一加入烧杯中，升温搅拌溶解。温度达到85℃。
129.2)用搅拌桨以转速为100每分钟的转速，搅拌30分钟，降温至45℃，加入0.1％肌肽、0.5％β
‑
葡聚糖、0.5％生物糖胶、0.5％1.2
‑
己二醇、1％植物组合物、0.1％香精，搅拌均匀，测ph，出料，分装。
130.实施例3
131.本发明实施例3的植物组合物对应面膜的配方及制备方法，可表述如下：
132.1.配方：
133.a组份：
134.87％去离子水、0.06％carbopol 941polymer、3％植物丙二醇、0.05％透明质酸钠(小分子)、5％甲基丙二醇、1％甜菜碱、0.2％尿囊素、0.5％甘油聚醚
‑
26、0.06％黄原胶、0.5％尿素、0.02％银耳多糖、0.5％对羟基苯乙酮。
135.b组份：
136.0.5％生物糖胶、0.5％β
‑
葡聚糖、0.5％1,2
‑
己二醇、0.3％白鲜皮复方抗敏剂、1％植物组合物、0.01％香精。
137.2.制备方法：
138.1)将87％去离子水、0.06％carbopol 941polymer、3％植物丙二醇、0.05％透明质酸钠(小分子)、5％甲基丙二醇、1％甜菜碱、0.2％尿囊素、0.5％甘油聚醚
‑
26、0.06％黄原胶、0.5％尿素、0.02％银耳多糖、0.5％对羟基苯乙酮。逐一加入烧杯中，升温搅拌溶解。温度达到75℃。
139.2)用搅拌桨以转速为100每分钟的转速，搅拌20分钟，降温至45℃，加入0.5％生物糖胶、0.5％β
‑
葡聚糖、0.5％1,2
‑
己二醇、0.3％白鲜皮复方抗敏剂、1％植物组合物、0.01％香精。，搅拌均匀，测ph(ph：5.8
‑
6.0),出料，分装。
140.下面通过效果试验例来进一步阐述本发明的有益效果。
141.试验例1
142.本发明植物组合物对角质形成细胞毒性测试。
143.实验方法：
144.1)细胞接种：按1
×
104个/孔的接种密度接种细胞至96孔板，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。
145.2)实验分组：实验设置调零组、溶剂对照组、阳性对照组与样品组。样品组中，每个样品设置8个浓度梯度，每个浓度梯度下设置3个重复孔。
146.3)配液：按测试浓度设定表(表1)配制不同浓度的样品工作液。
147.表1测试浓度设定表
[0148][0149]
4)给药：待96孔板中细胞铺板率达到40％～60％时进行给药。溶剂对照组每孔加入200μl培养液；阳性对照组每孔加入200μl含10％dmso的培养液；样品组每孔加入200μl含有相应浓度样品的培养液；调零组无细胞接种，仅加入200μl细胞培养液。给药完成后将96孔板放置在培养箱(37℃、5％co2)中培养。
[0150]
5)检测：细胞孵育培养24h后，弃掉上清，加入mtt工作液(0.5mg/ml)，37℃避光孵育4h，孵育结束后，弃掉上清，每孔加150μldmso，在490nm处读取od值。
[0151]
6)细胞相对活力计算：根据公式计算，细胞相对活力(％)＝*100％；
[0152]
7)形态学检测：细胞接种：设立样品组与溶剂对照组，每组设两个复孔。按相应的接种密度接种细胞至24孔板中，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。
[0153]
配液：根据mtt检测结果，确定检测样品的形态学观察浓度，配制不同浓度的受试物工作液。给药：待24孔板细胞铺板率达到40％时，进行给药，样品组加入不同浓度的受试物，溶剂对照组加入细胞培养液，培养箱(37℃、5％co2)中孵育24h。细胞观察：孵育结束后，显微镜下观察细胞形态并拍照。
[0154]
根据图1的mtt和图2的形态学结果，认为样品植物组合物基于角质形成细胞，在3％的浓度范围内未表现出明显的细胞毒性。
[0155]
试验例2
[0156]
本发明植物组合物抗氧化功效检测。
[0157]
下面通过试验例来进一步阐述本发明的有益效果。
[0158]
实验分组如表2所示。
[0159]
表2实验分组
[0160][0161]
实验方法：
[0162]
1)细胞接种：按2.5
×
105个/孔的接种密度接种细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。
[0163]
2)给药：根据表10实验设计，待6孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行分组给药，每孔加样2ml，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％co2)中培养24h。
[0164]
3)uvb照射：pbs清洗细胞后，根据实验分组，对需要uvb照射的组别进行300mj/cm2的uvb辐照，培养箱(37℃、5％co2)中后孵育24h。
[0165]
4)sod活性检测：吸去细胞培养上清，用细胞刮将细胞刮下，加入1mlpbs，后按照sod检测试剂盒说明书进行sod活力的检测。
[0166]
5)结果分析：汇总各组sod活力值，各组间采用t
‑
test统计分析，*p＜0.05表示差异显著，**p＜0.01表示差异极显著。
[0167]
根据具体实验方法，进行sod活力检测，检测结果如表3、4所示。
[0168]
表3sod活力结果汇总表
[0169][0170]
备注：1.#表示与bc对比，p＜0.05；##表示与bc对比，p＜0.01；2.
＊
表示与nc对比，p＜0.05；
＊＊
表示与nc对比p＜0.01；3.
▲▲
表示与3％植物组合物对比，p＜0.01；4.
△△
表示与1.5％植物组合物对比，p＜0.01。
[0171]
表3表明与nc组相比，样品3％植物组合物sod活性显著升高；样品1.5％植物组合物sod活性显著升高；样品0.5％植物组合物sod活性显著升高。另外，与3％植物组合物相比，0.5％植物组合物sod活性显著升高；与1.5％植物组合物相比，0.5％植物组合物sod活性显著升高。
[0172]
表4 sod活力结果汇总表
[0173][0174]
备注：1.#表示与bc对比，p＜0.05；##表示与bc对比，p＜0.01；2.
＊
表示与nc对比，p＜0.05；
＊＊
表示与nc对比，p＜0.01：3.
▲▲
表示与3％植物组合物对比，p＜0.01：4.
△△
表示与1.5％植物组合物对比，p＜0.01。
[0175]
表4表明与nc组相比，样品0.2％植物组合物sod活性显著升高；样品0.75％植物组合物sod活性显著升高；样品1％植物组合物sod活性显著升高；与0.2％植物组合物相比，样
品0.75％植物组合物sod活性显著升高；样品1％植物组合物sod活性显著升高。
[0176]
试验例3
[0177]
本发明植物组合物抗衰功效检测。
[0178]
实验分组如表5所示。
[0179][0180]
备注：elastin蛋白含量检测无阳性对照。
[0181]
实验方法：
[0182]
1.免疫荧光方法
[0183]
1)细胞接种：按4
×
104个/孔的接种密度接种细胞至24孔板，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。
[0184]
2)给药：根据表16实验设计，待24孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行分组给药，每孔加样1ml，每组设3个复孔。给药完成后将24孔板放置在培养箱(37℃、5％co2)中培养24h。
[0185]
3)孵育培养结束后，在24孔板中加1ml 4％的多聚甲醛固定细胞15min，然后用pbs清洗3次/5min。
[0186]
4)封闭：滴加山羊血清200μl/孔，室温封闭60min。
[0187]
5)孵育一抗：弃掉山羊血清封闭液，滴加适当比例稀释后的一抗(200μl/孔)(山羊血清稀释)，4℃孵育过夜。
[0188]
6)孵育二抗：用pbs清洗3次/5min，滴加适当比例稀释后的荧光二抗(200μl/孔)，室温避光孵育1h。
[0189]
7)核染：用pbs清洗3次/5min，滴加hochest33342(200μl/孔)，室温孵育5min。
[0190]
8)封片：用针头挑出爬片，在载玻片上滴加一滴抗淬灭剂，并将玻片反置于载玻片上。
[0191]
9)观察拍照：24h内荧光显微镜拍照。
[0192]
2.基因检测方法
[0193]
1)细胞接种：按2
×
105个/孔的接种密度接种细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。
[0194]
2)给药：根据表16实验设计，待6孔板中细胞铺板率达到40％～60％时，进行分组给药，每孔加样2ml，每组设3个复孔。给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％co2)中培养24h。
[0195]
3)基因检测：2ml/孔pbs清洗两次，每孔加入1ml rnaiso plus，吹打裂解细胞后，
收样。依据试剂盒说明书，开展rna提取、反转录及荧光定量pcr检测，采用2
‑△△
ct方法进行结果计算。
[0196]
4)结果统计分析：应用graphpad prism program软件作图，样品组与对照组采用t
‑
test统计分析，p＜0.05表示差异显著，p＜0.01表示差异极显著。
[0197]
免疫荧光结果：孵育培养结束后细胞进行免疫荧光检测，collagen i结果汇总见图3和表6。
[0198]
表6为collagen i检测结果(iod值)汇总表
[0199]
表6 collagen i检测结果(iod值)汇总表
[0200]
样品名称相对iod平均值sdp value
ꢀꢀꢀꢀ
pc2.130.160.000
＊＊
1.5％植物组合物1.940.380.013
＊
1％植物组合物2.060.220.001
＊＊
0.5％植物组合物1.710.210.004
＊＊
[0201]
备注：
＊
表示与bc对比，p＜0.05：
＊＊
表示与bc对比，p＜0.01。
[0202]
elastin检测结果汇总见图4和表7。
[0203]
表7为elastin检测结果(iod值)汇总表
[0204]
样品名称相对iod平均值sdpvaluebc1.000.08/1.5％植物组合物1.650.300.022
＊
1％植物组合物1.920.120.000
＊＊
0.5％植物组合物1.560.100.002
＊＊
[0205]
备注：
＊
表示与bc对比，p＜0.05；
＊＊
表示与bc对比，p＜0.01。
[0206]
表8为基因检测汇总表
[0207][0208]
备注：
＊
表示与bc对比，p＜0.05；
＊＊
表示与bc对比，p＜0.01。
[0209]
基因结果：
[0210]
基于实验方法，对作用后的成纤维细胞进行rnaiso plus处理后收样，依据试剂盒说明书，开展rna提取、反转录及荧光定量pcr操作。结果汇总见表8。
[0211]
小结：通过免疫荧光方法和基因检测方法可以得出，与bc组相比，pc组对人成纤维细胞collagen i、collagen iii、elastin和fibrillin表达有显著提升作用。与bc组相比，样品植物组合物在1.5％的给药剂量下，对人成纤维细胞elastin和fibrillin基因的表达有显著抑制作用，同时对collagen iii基因的表达有显著提升作用；在1％的给药剂量下，
对人成纤维细胞collagen i、elastin和fibrillin基因的表达有显著抑制作用：在0.5％的给药剂量下对人成纤维细胞collagen i和fibrillin基因的表达有显著抑制作用。
[0212]
试验例4
[0213]
本发明植物组合物改善皱纹功效检测；实验目的：评估产品使用4周后改善皱纹的功效。
[0214]
实验方法：
[0215]
1)首次到访，对受试者进行试验说明，并签署知情同意书。
[0216]
受试者情况：
[0217]
计划入组人数：35人；
[0218]
筛选人数：40人；
[0219]
入组人数：35人；
[0220]
完成人数：34人；
[0221]
分析人数：34人；
[0222]
2)受试者测试当天早上不可以使用护肤品。受试者来访后使用清水清洁面部肌肤，清洁完成后进入恒温恒湿间内静坐30分钟。30分钟后对参加试验的受试者按照试验要求进行筛选，筛选入组35名，最终确保完成30人以上。筛选完成后，对入组的受试者进行仪器测量。
[0223]
3)测试完成后对受试者进行产品使用说明，受试者听取说明后，发放产品。受试者在家连续4周使用试验样品。
[0224]
期间，受试者按照试验的指示在产品连用2周和4周的时候进行会场回访，完成步骤2)的面部仪器测试。
[0225]
4)观察测试部位眼尾鱼尾纹(primos)：使用primos拍照并分析鱼尾纹面积占比参数。
[0226]
5)参数解释：鱼尾纹面积占比参数越小，表示鱼尾纹程度越轻。
[0227]
6)测试结果：本受试者人群(34人)，使用“植物组合物”2周后，测试结果表明：使用测试样品2周后与使用前相比较，测试区域鱼尾纹面积占比参数呈显著性降低趋势(p＜0.001)，表示该受试样品具有2周改善鱼尾纹的效果，改善率为13.69％。
[0228]
本受试者人群(34人)，使用“植物组合物”4周后，测试结果表明：使用测试样品4周后与使用前相比较，测试区域鱼尾纹面积占比参数呈显著性降低趋势(p＜0.001)，表示该受试样品具有4周改善鱼尾纹的效果，改善率为12.99％。
[0229]
原始数据见表9。
[0230]
表9为改善皱纹功效测试原始数据
[0231][0232]
综上，本发明使用草本精华成分，结合现代科技萃取，最大程度上保留了草本天然有效成本，温和无刺激，气味天然芬芳。具有保湿、亮肤、修复、抗衰老、抗炎舒缓、增强弹性、淡化细纹等多种复合功效。
[0233]
经过测试实验，本发明产品的植物组合物未表现出细胞毒性；可显著提升sod活性具有抗氧化功效；可显著提升细胞抗衰相关蛋白的含量具有抗衰功效；人体测试表明使用本发明测试样品四周后具有改善鱼尾纹的效果。
[0234]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，故凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。