一种瞿麦配方颗粒的质量控制方法与流程

1.本发明涉及中药制备领域，具体涉及一种瞿麦配方颗粒的质量控制方法。


背景技术：

2.瞿麦为石竹科多年生草本，以干燥地上部分入药。瞿麦味苦，性寒，入心、小肠经，具有利尿通淋、活血通经的功效。用于热淋，血淋，石淋，小便不通，淋沥涩痛，经闭瘀阻。主要成分为黄酮和皂甙类，并含有少量生物碱、挥发油等。药理作用包括抗肿瘤、利尿、兴奋子宫、抗菌、免疫调节、抗氧化、溶血、止痛等。其中黄酮类化合物在抗炎、抗菌和抗病毒、抗肿瘤、抗氧化自由基以及保护肝脏等方面均有显著的疗效，是瞿麦的药理作用以及临床研究上的关键成分。
3.中药配方颗粒是以传统中药饮片为原料，经过提取、浓缩、干燥、制粒等生产工艺，加工制成的一种统一规格、统一剂量、统一质量标准的新型配方用药。它是以中药标准汤剂为基础，在中医理论指导下使用，与传统中药汤剂相比，具有服用方便、易贮藏、便携带、质量可控等特点。
4.对于配方颗粒，其质量控制要以汤剂的物质基础为标准。瞿麦经过水提取后，瞿麦中的黄酮类化合物被糖苷化，增加了其溶解度，因此黄酮类化合物为瞿麦配方颗粒质控研究的重点。但目前尚未见针对瞿麦配方颗粒黄酮类化合物质量控制的相关研究。
5.并且，现有技术中对中药配方颗粒的质量控制，通常是从提取、浓缩和干燥等制备工艺的调节入手。而发明人发现，实际上不同的原料，也会对瞿麦配方颗粒的质量造成极大的影响。


技术实现要素：

6.因此，本发明提供一种全新的质量控制方法，具体为：本发明采用从源头上，即原料选择上对瞿麦配方颗粒的质量进行控制，可以有效控制瞿麦配方颗粒质量，即，可以使瞿麦配方颗粒的出膏率及浸出物量均有效提高，并且还能保证总黄酮含量达到12.0mg/g以上。
7.一种瞿麦配方颗粒的质量控制方法，包括：采用高效液相色谱法获得瞿麦饮片的特征图谱，并在特征图谱中标注出至少2个特征峰；标注规则为：以王不留行黄酮苷特征峰为参照峰s，另外的特征峰的相对保留时间在规定值的
±
10％以内，所述规定值包括：1.06；
8.采用瞿麦饮片作为供试品获得瞿麦饮片的特征图谱，计算该特征图谱中规定值为1.06的特征峰的峰面积与参照峰s的峰面积的比值，采用比值为2-5.2的瞿麦饮片作为瞿麦配方颗粒的原料。
9.所述高效液相色谱法的色谱条件为：
10.色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱柱长为5-10cm、柱内径为2.1mm、粒径为1.8μm；检测波长：240-270nm；以乙腈为流动相a，以0.05-0.15％质量浓度的醋酸溶液、0.05-0.15％质量浓度的磷酸溶液、0.05-0.15％质量浓度的甲酸溶液或水
为流动相b，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：
[0011][0012]
用于高效液相色谱法检测的供试品溶液的制备方法为：取供试品，加入水混合均匀后，称定重量，加热回流，冷却后再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，过滤后获得滤液，滤液即为供试品溶液。
[0013]
所述供试品溶液的制备过程中，加热回流的时间为30-60min，供试品为0.5-1.0g,水为15-50ml；
[0014]
所述色谱柱的柱温25-35℃；流速0.3-0.5ml/min，理论板数按王不留行黄酮苷特征峰计算应均不低于5000。
[0015]
所述特征图谱中至少标注出4个特征峰，除参照峰s和相对保留时间为1.06的特征峰以外，还包括相对保留时间的规定值为0.24、0.35、1.35中的至少两个的特征峰。
[0016]
所述特征图谱中包括4个特征峰，各特征峰与参照峰s的相对保留时间依次为0.210～0.260、0.310～0.380、1、0.960～1.170。
[0017]
本发明还包括特征图谱的相似度检测，在相似度检测检测中，供试品为瞿麦配方颗粒，参照物为瞿麦对照药材，两者的特征图谱的相似度大于0.8。
[0018]
所述相似度检测时，所述供试品溶液的制备过程为：取瞿麦配方颗粒，加入水混合均匀后，称定重量，加热回流，冷却后再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，过滤后获得滤液，滤液即为供试品溶液；
[0019]
所述参照物溶液的制备过程为：取瞿麦对照药材，加入水混合均匀后，称定重量，加热回流，冷却后再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，过滤后获得滤液，滤液即为对照药材参照物溶液。取王不留行黄酮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为对照品参照物溶液。
[0020]
还包括总黄酮含量检测，并控制瞿麦配方颗粒中总黄酮含量不低于12.0mg/g。
[0021]
所述总黄酮含量检测的方法如下：
[0022]
将芦丁溶解在质量浓度为50％-70％乙醇溶液中配置成对照品溶液，对照品溶液经过处理后获得不同浓度值的标准溶液，采用紫外-可见分光光度法绘制出对照品的标准曲线；
[0023]
采用相同质量浓度的乙醇溶液对瞿麦配方颗粒进行溶解，处理后采用与标准溶液相同的紫外-可见分光光度法检测，根据标准曲线计算出瞿麦配方颗粒中的总黄酮含量。
[0024]
所述标准溶液的获取过程为：精密量取对照品溶液0ml、1ml、3ml、5ml、7ml、8ml，分别置10ml量瓶中分别加0.05-0.15mol/l的三氯化铝溶液2ml，加50％-70％乙醇溶液至刻度，摇匀，于40-50℃水浴中保温20-40分钟，取出迅速冷却，放置10-50分钟即可；
[0025]
所述瞿麦配方颗粒的处理过程为：将瞿麦配方颗粒研细，取0.1-0.2g精密称定，加入标准溶液中相同质量浓度的乙醇溶液100ml，称定重量，超声处理，取出后放冷，再称定重
量，用乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，然后精密量取续滤液5ml，加入0.05-0.15mol/l的三氯化铝溶液2ml，加乙醇溶液定容至10ml，摇匀，于40-50℃水浴中保温20-40分钟，取出迅速冷却，放置10-50分钟即可。
[0026]
所述特征图谱中规定值为1.06的峰面积与参照峰s的特征峰的峰面积之间的比值为2-3。
[0027]
本发明技术方案，具有如下优点：
[0028]
1.本发明提供的了一种新的质量控制方法，其能够从源头准确、稳定控制瞿麦配方颗粒质量的方法，具体为：采用高效液相色谱法获得瞿麦饮片的特征图谱，获得特定的多个特征峰，以其中王不留行黄酮苷特征峰作为参照峰s，并计算出规定值为1.06的特征峰的峰面积与参照峰s的峰面积的比值，采用比值为2-5.2的瞿麦饮片作为瞿麦配方颗粒的原料；通过检测结果可知，采用该范围值内的瞿麦饮片作为瞿麦配方颗粒的原料时，可以有效控制瞿麦配方颗粒质量，即，可以使瞿麦配方颗粒的出膏率及浸出物量均有效提高，并且还能保证总黄酮含量达到12mg/g以上，效果十分显著。
[0029]
2.本发明进一步通过特征图谱的相似度以及总黄酮含量进行质量控制，即控制瞿麦配方颗粒和瞿麦对照药材两者之间的特征图谱的相似度大于0.8，同时控制瞿麦配方颗粒中总黄酮含量不低于12.0mg/g，可以进一步有效且全面控制瞿麦配方颗粒质量的稳定。
[0030]
3.本发明进一步限定了饮片的筛选规则，即采用特征图谱中规定值为1.06的峰面积与参照峰s的特征峰的峰面积之间的比值为2-3的饮片时，可以有效控制瞿麦配方颗粒中总黄酮含量在12.6mg/g-15.5mg/g之间，保证总黄酮含量的稳定性，同时还能保证出膏率不低于17％、浸出物含量不低于30％，效果十分显著。
附图说明
[0031]
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0032]
图1是本发明实施例1的色谱条件下检测得到的瞿麦饮片的特征图谱。
[0033]
图2是本发明实施例5的色谱条件下检测得到的瞿麦饮片的特征图谱。
[0034]
图3是本发明实施例6的色谱条件下检测得到的瞿麦饮片的特征图谱。
[0035]
图4是本发明实施例7的色谱条件下检测得到的瞿麦饮片的特征图谱。
[0036]
图5是本发明实施例8的色谱条件下检测得到的瞿麦饮片的特征图谱。
具体实施方式
[0037]
实施例1
[0038]
一种瞿麦配方颗粒的质量控制方法，采用不同批号的瞿麦饮片制备得到瞿麦配方颗粒。制备工艺如下：
[0039]
取瞿麦饮片适量，煎煮两次，一煎加15倍水量，沸腾提取1小时，二煎加13倍水，沸腾提取1小时，滤过，60℃滤液减压浓缩成相对密度为1.00～1.05的纯浸膏，采用10％糊精喷雾干燥，或1％sio2喷雾干燥，或0％辅料带式干燥成细粉，加糊精适量，干法制粒，包装规
格为1g/袋复合膜、100g/瓶、250g/瓶，密封储存。
[0040]
1、计算规定值为1.06的峰面积与参照峰s的峰面积的比值以及瞿麦配方颗粒的特征图谱的相似度。
[0041]
1.1峰面积的比
[0042]
采用高效液相色谱法对不同批号的瞿麦饮片、瞿麦配方颗粒进行特征图谱检测，高效液相色谱法的色谱条件具体如下：
[0043]
以acquityhss t3(柱长为10cm，柱内径为2.1mm，粒径为1.8μm)为色谱柱；以乙腈为流动相a，以0.1％醋酸为流动相b，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温30℃；流速0.4ml/min。理论板数按4号的王不留行黄酮苷特征峰计算应均不低于5000。
[0044][0045]
参照物溶液的制备：取购置于中国食品药品检定研究院的瞿麦对照药材(批号：121617-201302)约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水10ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材的参照物溶液；取王不留行黄酮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为对照品参照物溶液。
[0046]
饮片供试品溶液的制备：取各个批号的瞿麦饮片约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0047]
配方颗粒供试品溶液的制备：取对应批号的瞿麦配方颗粒适量，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0048]
测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各4μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得不同批号的瞿麦饮片和瞿麦配方颗粒的特征图谱。
[0049]
在瞿麦饮片和瞿麦配方颗粒的特征图谱上进行特征峰标注，标注出相对保留时间在规定值的
±
10％以内的四个特征峰，分别命名为特征峰1、特征峰2、特征峰3和特征峰4，以与王不留行黄酮苷参照物峰相对应的峰为参照峰s，各个特征峰的相对保留时间的规定值为：0.24、0.35、1和1.06。其中图1所示的特征图谱为批号为170731-430082-10的瞿麦饮片的特征图谱，计算瞿麦饮片的特征图谱中特征峰4的峰面积与特征峰3的峰面积的比值，即峰4/峰3的比值，见表1所示。
[0050]
同时，使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1版本)，以4个特征峰为mark峰进行峰匹配，计算15批瞿麦配方颗粒特征图谱与对照药材参照物的相似度，见表1所示。
[0051]
2、测量计算得到瞿麦配方颗粒的出膏率％和浸出物％
[0052]
采用常规的出膏率和浸出物的检测方法对其进行检测，该出膏率和浸出物的计算
规则如下：
[0053][0054][0055]
其中，n：干燥后浸出物与蒸发皿的总重g，w：蒸发皿重g，m：待测瞿麦配方颗粒的样品重g，水分：指待测瞿麦配方颗粒中的水含量值。
[0056]
采用上述检测方法和计算规则获得的计算结果见表1所示。
[0057]
3、总黄酮含量检测
[0058]
对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，精密称定，加50％乙醇制成每1ml含芦丁40μg的溶液，即得。芦丁对照品的批号：100080-201409，中国药品生物制品检定所，纯度92.6％。
[0059]
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、1ml、3ml、5ml、7ml、8ml，分别置10ml量瓶中，分别加0.1mol/l的三氯化铝溶液2ml，加50％乙醇至刻度，摇匀。于40℃水浴中保温20分钟，取出，迅速冷却，放置20分钟，取出，以相应试剂为空白，采用tu-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)按照紫外-可见分光光度法(参照中国药典2015年版四部通则0401)，在410nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
[0060]
测定法：取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)60分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加0.1mol/l的三氯化铝溶液2ml，加50％乙醇至刻度，摇匀。于40℃水浴中保温20分钟，取出，迅速冷却，放置20分钟，取出，以未加入0.1mol/l的三氯化铝溶液的供试品溶液为空白，采用tu-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)按照紫外-可见分光光度法(参照中国药典2015年版四部通则0401)，在410nm的波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量(μg)，计算，即得，计算结果见表1所示。
[0061]
上述不同批次的瞿麦饮片和瞿麦配方颗粒的检测结果如表1所示。
[0062]
表1
[0063]
[0064][0065]
通过上述表1中的检测数据可知：采用比值为2-5.2的瞿麦饮片作为瞿麦配方颗粒的原料时，可以有效控制瞿麦配方颗粒质量，即，可以使瞿麦配方颗粒的出膏率及浸出物量均有效提高，并且还能保证总黄酮含量达到12mg/g以上，效果十分显著。
[0066]
同时，本发明还对控制与不控制饮片峰4/峰3峰面积比值在2-3之间的结果进行了对比，结果如表2所示。
[0067]
表2
[0068]
饮片峰4/峰3峰面积比未控制2-3小于2或大于3颗粒总黄酮含量(mg/g)7.91mg/g-15.5mg/g12.6mg/g-15.5mg/g7.91mg/g-15.5mg/g出膏率％12.1％-20.6％19.5％-20.6％12.1％-17.8％浸出物％21.2％-58.3％30.6％-58.3％21.2％-34.9％
[0069]
如表1、2所示，利用特征图谱规定饮片峰4/峰3峰面积的比值在2-3之间时，其出膏率、浸出物均较高，总黄酮含量较为稳定，总黄酮含量均高于12.0mg/g，特征图谱相似度均大于0.8。
[0070]
当饮片峰4/峰3峰面积比值小于2或大于3时，所得到的颗粒总黄酮含量范围较宽，表明所得颗粒质量不稳定；浸出物出膏率均远低于控制后，且出膏率低，不仅降低了企业收益，同时在规定制成量为20％、制备颗粒时需加入更多的辅料，降低同等规格颗粒的使用疗效。
[0071]
因此本发明通过从生产源头质控饮片特征图谱峰4/峰3峰面积比值在2-3之间，能够得到优质配方颗粒，并通过特征图谱相似度和总黄酮含量共同控制，即可有效、全面控制
瞿麦配方颗粒质量的稳定。
[0072]
实施例2
[0073]
本实施例采用常规的方法对特征图谱的精密度、重复性和稳定性进行验证，具体如下：
[0074]
取6份供试品溶液，获得其特征图谱，计算与对照药材参照物相似度，并计算rsd。结果6份供试品溶液的特征图谱与对照药材参照物相似度在0.850～0.851间，均大于0.80，rsd为0.1％，表明该特征图谱的重复性较好。
[0075]
采用waters uplc h-class，pda检测器，取供试品溶液，获得其特征图谱，计算与对照药材参照物相似度，并计算rsd。结果采用waters uplc h-class，pda检测器获得的特征图谱中，各特征图谱与对照药材参照物相似度在0.849～0.850间，均值为0.85，rsd为0.1％。不同仪器间rsd为0.1％，表明在不同仪器间该特征图谱与对照药材参照物相似度符合分析要求。
[0076]
取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、24h按上述优选的方法测定，获得其特征图谱，计算与对照药材参照物相似度，并计算rsd。结果，各特征图谱与对照药材参照物相似度均大于0.80，表明溶液中化学成分在24小时稳定性较好。
[0077]
实施例3
[0078]
本实施例提供了对总黄酮含量检测方法的准确度、中间精密度、重复性和稳定性进行验证的过程，具体如下：
[0079]
准确度：精密称取芦丁对照品10.558mg，置500ml容量瓶中，加50％乙醇置刻度，摇匀，备用。取重复性项下已知含量的样品，研细，取约0.05g，精密称定，共六份，每份样品中精密加入芦丁对照品溶液(19.553μg/ml)50ml，再精密加入50％乙醇50ml，按上述优选的方法测定溶液的吸光度，并计算总黄酮的含量。结果所测得的回收率范围为92.50％～97.62％，平均回收率为95.1％，rsd值为2.0％，符合方法学验证回收率要求，表明利用该方法测得的结果准确。
[0080]
重复性：取6份供试品溶液，测定吸光度，并计算其总黄酮含量。所测得的总黄酮平均含量为20.8mg/g，其rsd为0.7％，符合方法学验证重复性要求。
[0081]
中间精密度：不同分析人员在不同时间利用不同紫外-可见分光光度仪进行中间精密度试验。取6份供试品溶液，测定吸光度，并计算其总黄酮含量。结果中间精密度试验所测得的总黄酮平均含量为21.6mg/g，rsd值为1.1％，与重复性试验检测结果的rsd为2.7％，符合方法学验证精密度要求。
[0082]
取同一供试品溶液，在其显色后每隔5分钟测定其吸光度，记录2小时内吸光度的变化情况。结果样品的吸光度随着时间的延长缓慢增加，在2小时内，其变化的rsd为1.2％，首次测量与末次测量的rsd为2.5％，吸光度变化幅度小，符合分析要求。
[0083]
实施例4
[0084]
本实施例对图1中所示的特征图谱中的峰1-峰5的成分进行分析，具体如下：
[0085]
取供试品溶液，按上述优选的色谱条件，利用高效液相串联高分辨飞行时间质谱仪获得其质谱图，并根据质谱图对5个特征峰进行结构推断，推断结果如下表3所示。
[0086]
表3特征峰质谱推断结果
[0087][0088]
利用高效液相串联高分辨飞行时间质谱仪对各特征峰分析，确定了4个特征峰的分子式，并参考瞿麦化学成分相关文献，推断了3个特征峰：峰3推断为王不留行黄酮苷，峰4推断为lsoscoparin-7-o-gaiactoside，峰5推断为saponarin。
[0089]
实施例5
[0090]
本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，仅仅检测三批次的瞿麦饮片和瞿麦配方颗粒，具体如下：
[0091]
色谱柱柱温35℃；以乙腈为流动相a，以0.05％醋酸为流动相b；检测波长为240nm；流速0.4ml/min。
[0092]
其他检测条件与实施例1完全相同。
[0093]
实施例6
[0094]
本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，仅仅检测三批次的瞿麦饮片和瞿麦配方颗粒，具体如下：
[0095]
色谱柱柱温25℃；以乙腈为流动相a，以0.15％醋酸为流动相b；检测波长为270nm；流速0.3ml/min。
[0096]
其他检测条件与实施例1完全相同。
[0097]
实施例7
[0098]
本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，仅仅检测三批次的瞿麦饮片和瞿麦配方颗粒，具体如下：
[0099]
色谱柱柱温25℃；以乙腈为流动相a，以0.15％磷酸为流动相b。
[0100]
其他检测条件与实施例1完全相同。
[0101]
实施例8
[0102]
本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，仅仅检测三批次的瞿麦饮片和瞿麦配方颗粒，具体如下：
[0103]
色谱柱柱温25℃；以乙腈为流动相a，以水为流动相b。
[0104]
其他检测条件与实施例1完全相同。
[0105]
上述实施例5-8的检测结果如下表4所示。
[0106]
表4
[0107][0108]
上述实施例5-8中，批号为170731-430082-10的瞿麦饮片的特征图谱分别如图2-图5所示。
[0109]
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。