半矮化香蕉基因编辑载体及其构建方法和应用与流程

技术特征：
1.一种半矮化香蕉基因编辑载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：s1.将核苷酸序列如seq id no.2、seq id no.3所示的接头引物与pylgrna-osu6a质粒混合，同时进行酶切和连接反应，得连接产物；s2.由核苷酸序列如seq id no.4和seq id no.3所示的引物，以s1中所述的连接产物为模板进行pcr扩增反应，得产物a；由核苷酸序列如seq id no.2和seq id no.5所示的引物，以s1中所述的连接产物为模板进行pcr扩增反应，得产物b；s3.将所述产物a与所述产物b混合作为模板，以seq id no.6和seq id no.7为引物，制备得到grna表达盒；s4.将所述sgrna表达盒连接至pylcrispr/cas9pubi-h载体上。2.由权利要求1所述的半矮化香蕉基因编辑载体的构建方法制备得到的半矮化香蕉基因编辑载体。3.一种工程菌，其特征在于，所述工程菌为含有权利要求2所述的半矮化香蕉基因编辑载体的细菌。4.根据权利要求3所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌为含有权利要求2所述的半矮化香蕉基因编辑载体的农杆菌eha105。5.一种半矮化香蕉基因定点突变试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述的半矮化香蕉基因编辑载体或权利要求3-4任一项所述的工程菌或核苷酸序列如seq id no.2-3所示的引物。6.核苷酸序列如seq id no.16所示的基因ma04g15900和核苷酸序列如seq id no.17所示的基因ma08g32850在半矮化香蕉育种中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括：使所述核苷酸序列如seq id no.16所示的基因ma04g15900中的核苷酸序列如seq id no.1所示的片段突变为seq id no.18、19、20、21、22、23和24中的至少一种片段；及/或使所述核苷酸序列如seq id no.17所示的基因ma08g32850中的核苷酸序列如seq id no.25所示的片段突变为seq id no.26、27、28、29、30和31中的至少一种片段。8.一种半矮化香蕉的育种方法，其特征在于，包括以下步骤：使用权利要求3或4所述的工程菌与三倍体香蕉品种
‘
grand nain’的胚性悬浮细胞系或二倍体aa基因型的贡蕉细胞系共培养，经液体培养基筛选、半固体培养基筛选诱导产生胚。9.一种半矮化香蕉，其特征在于，由权利要求8所述的半矮化香蕉的育种方法制备得到。10.根据权利要求9所述的半矮化香蕉，其特征在于，所述半矮化香蕉的核苷酸序列如seq id no.16所示的基因ma04g15900中的核苷酸序列如seq id no.1所示的片段突变为seq id no.18、19、20、21、22、23和24中的至少一种片段；及/或所述半矮化香蕉的核苷酸序列如seq id no.17所示的基因ma08g32850中的核苷酸序列如seq id no.25所示的片段突变为seq id no.26、27、28、29、30和31中的至少一种片段。

技术总结
本发明提供了一种基于CRISPR/Cas9的香蕉GA20ox2基因编辑载体及其构建方法和应用，针对香蕉基因的序列，设计基因编辑靶位点及其引物，以及在构建香蕉GA20ox2基因编辑载体时结合特定的扩增程序，构建得到合理的sgRNA表达框，提供了一种有效且稳定的定向突变香蕉GA20ox2基因的编辑方法，从而使得香蕉GA20ox2基因的表达缺失或减弱。降低了香蕉植株的高度，可以提高香蕉抗倒伏的能力，减轻台风等恶劣天气对香蕉种植园的影响。劣天气对香蕉种植园的影响。劣天气对香蕉种植园的影响。


技术研发人员：杨乔松 邵秀红 易干军 胡春华
受保护的技术使用者：广东省农业科学院果树研究所
技术研发日：2020.06.01
技术公布日：2021/12/6