吸入他汀类药物作为支气管扩张剂改善呼吸系统疾病的肺功能的制作方法

吸入他汀类药物作为支气管扩张剂改善呼吸系统疾病的肺功能
1.相关申请的交叉引用
2.本国际申请按照美国法典第35卷第119条(e)款要求2019年3月29日提交的美国临时申请62/826,620和2019年9月26日提交的美国临时申请62/906,427的权益；这些临时申请中每个临时申请的内容全文以引用方式并入本文。
3.关于在联邦资助的研发下进行的发明的权利的声明
4.本发明是在资助号为nih/nhlbi k08 hl114882
‑
01a1的政府资助和加州地区灵长类动物研究中心试点资助(p51 od011107)下完成的。美国政府拥有本发明的某些权利。


背景技术：

5.美国近2000万人和全世界超过3.39亿人均受哮喘影响，他们因气道过度狭窄而出现喘息和气短的症状。参见例如，s.s.an等人，eur respir j(2007年)第29卷第5期：第834
‑
860页；y.amrani等人，int j biochem cell biol(2003年)第35卷：第272
‑
276页(http://www.globalasthmareport.org/，于2019年3月29日访问)。尽管广泛使用长效β2
‑
激动剂和高剂量吸入皮质类固醇，但55％的哮喘患者症状控制不佳，导致住院、工作日损失、残疾和死亡均增加，2013年的估计年成本约为820亿美元(k.r.chapman等人，eur respir j(2008年)第31卷第2期：第320
‑
325页；s.p.peters等人，j allergy clin imunol(2007年)第119卷：第1454
‑
1461页；s.webb，nat publ gr(2011年)第29卷第10期：第860
‑
863页；t.nurmagambetov等人，ann am thorac soc(2018年)第15卷第3期：第348
‑
356页。这一严峻的现实凸显了哮喘中持续存在的未满足的治疗需求。
6.类固醇用于抑制炎性细胞因子和趋化因子，阻断免疫细胞募集至气道和局部炎症，局部炎症可使气道对促收缩激动剂敏感，导致气道高反应性。然而，在许多患有copd和严重哮喘的患者中，甚至当使用高剂量时，也观察到类固醇不敏感，这使得支气管扩张剂直接作用于气道平滑肌成为维持肺功能和提供疾病控制的关键机制。实际上，在copd中，护理标准通常省略类固醇，仅依赖于抗毒蕈碱或β
‑
激动剂支气管扩张剂来维持疾病控制。支气管扩张气道平滑肌对维持疾病控制的重要性也已广泛用于各种其他呼吸系统病症，包括囊性纤维化(d.p.cook等人，am j respir crit care med(2016年)第193卷第4期：第417
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426页；c.d.pascoe等人，am j respir cell mol biol(2018年)doi:10.1165/rcmb.2018
‑
0378ed)。然而，尽管常规使用了现有的支气管扩张剂药物，许多患者仍然控制不佳，并表现出频繁的恶化，表明需要新药。
7.气道平滑肌细胞显示表型可塑性，表现出增殖或收缩状态。支气管扩张剂靶向收缩状态以使气道松弛，并为患者提供呼吸困难的急性缓解、肺功能改善和疾病控制。在呼吸系统疾病中也观察到气道平滑肌质量的增加，并且减少气道平滑肌增殖和质量的潜在治疗的研究也正处于临床前研究中。然而，目前尚无药物进入人体临床研究，并且还不清楚仅减少气道平滑肌的增殖是否足以改善患者的肺功能和疾病控制。
8.在哮喘恶化期间，气道平滑肌(asm)收缩是急性支气管收缩的主要原因(s.s.an等
人，同上；r.k.lambert等人，j appl physiol(1997年)第83卷第11期：第140
‑
147页；p.t.macklem，am j respir crit care med(1996年)第153卷：第83
‑
89页)。在严重和致命的哮喘中，asm质量也显著增加(l.benayoun等人，am j respir crit care med(2003年)第167卷第10期：第1360
‑
1368页；n.carroll等人，am rev respir dis(1993年)第147卷第2期：第405
‑
410页)。因此，靶向asm的药剂的治疗潜力原则上在这些亚群中甚至更大。然而，目前针对克服asm收缩的疗法，诸如β2
‑
激动剂、毒蕈碱拮抗剂和半胱氨酰白三烯受体拮抗剂，并不能完全控制症状。这些疗法靶向复杂、间接且易脱敏的受体介导途径(e.j.whalen等人，cell(2007年)第129卷第3期：第511
‑
522页)。靶向asm细胞骨架是实现asm松弛的替代方法，并且已经积累了有力的临床前证据来支持靶向特定途径，例如肌动蛋白、肌球蛋白、zyxin、cofilin和rho激酶(rock)介导的信号传导(s.chen等人，am j respir cell mol biol(2014年)第50卷：第1076
‑
1083页；w.t.gerthoffer等人，curr opin pharmacol(2013年)第13卷：第324
‑
330页；t.l.lavoie等人，proc am thor soc(2009年)第6卷：第295
‑
300页；s.r.rosner等人，plos one(2017年)第12卷：第e0171728页；b.lan等人，am j physiol lung cell mol physiol(2018年)第314卷第5期：第l799
‑
807页；w.zhang等人，j physiol(2018年)第596卷：第3617
‑
3635页)。然而，这些细胞骨架靶点的进一步开发受到了对其在哮喘患者的asm中的安全性、特异性和有效性的担忧的阻碍。
9.他汀类药物是3
‑
羟基
‑3‑
甲基戊二酰辅酶a还原酶(hmg
‑
coa还原酶)抑制剂，可阻断甲羟戊酸(ma)和下游的类异戊二烯脂质法呢基焦磷酸(fpp)和香叶基香叶基焦磷酸(ggpp)的生物合成。目前，在美国，它们仅被批准作为降脂剂口服施用。在哮喘模型中，他汀类药物具有多效性，诸如抗炎、抗纤维化、抗增殖和免疫调节。尽管有积极的实验室和流行病学数据，但使用口服他汀类药物改善哮喘症状的临床试验产生了相互矛盾的和/或负面的结果。
10.虽然他汀类药物已被认为能够减轻炎症，但是仍不清楚这些抗炎效果相比于已经广泛使用的其他抗炎治疗(包括类固醇)是否将有益于患者改善肺功能。然而，过度的平滑肌支气管收缩对于患有呼吸系统疾病的患者而言仍然是日常问题，直接导致气道狭窄和肺功能下降。对于用现有疗法难以控制疾病的患者，仍然需要新的支气管扩张剂。


技术实现要素：

11.在一个实施方案中，本公开提供了用于减少受试者的气道平滑肌收缩的方法，该方法包括：通过吸入向患有非炎性肺气道疾病的受试者施用制剂，其中该制剂包含治疗有效量的他汀类药物或其异构体、对映异构体或非对映异构体，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、替伐他汀和普伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物是疏水性他汀类药物。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀和阿托伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自匹伐他汀及其异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自匹伐他汀和辛伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物是匹伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物是辛伐他汀。
12.在一些实施方案中，治疗有效量为约0.005μg至约40mg。在一些实施方案中，治疗有效量为约0.5μg至约15mg。在一些实施方案中，治疗有效量为约1.0μg至约10mg。在一些实施方案中，治疗有效量为约1.0μg至约5mg。
13.在一些实施方案中，受试者已被诊断为患有肺气道疾病。在一些实施方案中，肺气道疾病选自运动诱发的支气管痉挛、运动诱发的哮喘、阿司匹林加剧的呼吸系统疾病、nsaid加剧的呼吸系统疾病、少粒细胞性哮喘、肥胖相关的气道高反应性和病毒后气道高反应性。
14.在一些实施方案中，肺气道疾病以支气管痉挛为特征。在一些实施方案中，肺病选自：病毒、细菌、真菌和/或分枝杆菌感染引起的感染后支气管痉挛；充血性心力衰竭引起的气道水肿；肺水肿引起的气道水肿；心源性肺水肿引起的气道水肿；非心源性肺水肿引起的气道水肿；气道水肿引起的毛细支气管炎；由于解剖变形而不是炎症引起的支气管扩张；异物吸入；食物、液体和/或胃内容物的吸入；胃食管反流病；肺癌或肺转移性癌症，引起局部水肿和支气管痉挛；肺栓塞(其可释放因支气管痉挛引起喘息的局部因子)；气道创伤，包括手术；过敏反应和类过敏反应；神经介导的咳嗽和/或支气管痉挛；吸入性损伤相关的支气管痉挛；内分泌功能障碍相关的支气管痉挛；和副肿瘤综合征相关的支气管痉挛。
15.在一些实施方案中，使用机械吸入器实现施用。在一些实施方案中，机械吸入器是定量吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是加压定量气雾剂吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是加压定量吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是干粉吸入器。在一些实施方案中，机械吸入器是雾化器。在一些实施方案中，机械吸入器选自：soft mist
tm
吸入器、吸入器、吸入器、吸入器和吸入器。
16.在一些实施方案中，方法还包括施用一种、两种或三种另外的治疗剂。在一些实施方案中，一种、两种或三种另外的治疗剂在与该他汀类药物相同的制剂中施用。在一些实施方案中，一种、两种或三种另外的治疗剂不在与该他汀类药物相同的制剂中施用。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂在与该他汀类药物分开的制剂中施用。在一些实施方案中，该他汀类药物与一种、两种或三种另外的治疗剂同时施用。在一些实施方案中，该他汀类药物与一种、两种或三种另外的治疗剂在不同时间施用。
17.在一些实施方案中，另外的治疗剂选自β
‑
激动剂；皮质类固醇；毒蕈碱拮抗剂；rhoa抑制剂；ggtase
‑
i或
‑
ii抑制剂；rock1和/或rock2抑制剂；可溶性环氧化物水解酶抑制剂；脂肪酸酰胺水解酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；磷酸二酯酶
‑
4抑制剂，诸如罗氟司特；5
‑
脂氧合酶抑制剂，诸如齐留通；肥大细胞稳定剂，诸如奈多罗米；茶碱；抗il5抗体；抗ige抗体；抗il5受体抗体；抗il13/4受体抗体；生物制剂，诸如美泊利单抗、瑞利珠单抗、贝那利珠单抗、奥马珠单抗和度匹鲁单抗；β
‑
激动剂和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；β
‑
激动剂和皮质类固醇组合，包括长效和短效制剂；皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；以及β
‑
激动剂、皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂是β
‑
激动剂，其选自沙丁胺醇、阿福莫特罗、福莫特罗、沙美特罗、茚达特罗、左旋沙丁胺醇、舒喘灵、特布他林、奥达特罗、维兰特罗、异舒普林、马布特罗、齐帕特罗、班布特罗、克仑特罗、福莫特罗、沙美特罗、阿比特罗和卡莫特罗、布酚宁、博克明(bopexamine)、肾上腺素、非诺特罗、异他林、异丙肾上腺素、奥西那林、左旋沙丁胺醇(levoalbutamol)、吡布特罗、丙卡特罗、利托君、阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基炔诺醇烷、
溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、甲氧那明、奥昔非君、莱克多巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗。
18.在一些实施方案中，另外的治疗剂是皮质类固醇，其选自倍氯米松、氟替卡松、布地奈德、莫米松、氟尼缩松、阿氯米松、倍氯米松、倍他米松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、双氟可龙、氟氯龙(flurclorolone)、氟米松、氟可丁、氟可龙、氟泼尼定、氟替卡松、糠酸氟替卡松、卤米松、甲泼尼松、莫米松、糠酸莫米松、帕拉米松、泼尼立定、利美索龙、乌倍他索、安西奈德、环索奈德、地夫可特、地奈德、福美可他、氟氯缩松、氟氢缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、哈西奈德和曲安奈德。在一些实施方案中，另外的治疗剂是毒蕈碱拮抗剂，其选自异丙托溴铵、噻托溴铵、胃长宁、格隆溴铵、雷芬那辛、芜地溴铵、阿地溴铵、曲司氯铵、氧托溴铵、奥昔布宁、托特罗定、索利那新、非索罗定和达非那新。在一些实施方案中，另外的治疗剂是rock抑制剂，其选自：法舒地尔、瑞舒地尔、奈他地尔、rki
‑
1447、y
‑
27632、y
‑
30141和gsk429286a。在一些实施方案中，另外的治疗剂是rhoa抑制剂罗红辛(rhosin)。
19.在一些实施方案中，一种、两种或三种另外的治疗剂被他汀类药物增强。在一些实施方案中，以亚治疗剂量施用一种、两种或三种另外的治疗剂。
20.在一些实施方案中，药学上可接受的载体包含选自以下物质的组分：单糖、二糖、寡糖和多糖、多元醇、环糊精、dexsol、氨基酸、盐，以及它们的混合物。在一些实施方案中，该组分包括选自葡萄糖、果糖和阿拉伯糖的单糖。在一些实施方案中，该组分包括选自乳糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖的二糖。在一些实施方案中，该组分包括选自葡聚糖、糊精、麦芽糖糊精、淀粉和纤维素的寡糖或多糖。在一些实施方案中，该组分包括选自山梨糖醇、甘露糖醇和木糖醇的多元醇。在一些实施方案中，该组分包括选自α
‑
环糊精、β
‑
环糊精、χ
‑
环糊精、甲基
‑
β
‑
环糊精和羟丙基
‑
β
‑
环糊精、磺丁基环糊精(captisol)和磺丁基
‑
β
‑
环糊精的环糊精。在一些实施方案中，该组分包括精氨酸或盐酸精氨酸。在一些实施方案中，该组分包括选自氯化钠、氯化钾、溴化钠和碳酸钙的盐。
21.在另一个实施方案中，本公开提供了通过吸入向有此需要的受试者施用制剂来治疗受试者的支气管痉挛的方法，其中该制剂含有有效量的他汀类药物或其异构体、对映异构体或非对映异构体，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、替伐他汀和普伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀和阿托伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀和匹伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物选自匹伐他汀及其异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物是匹伐他汀。
22.在一些实施方案中，受试者已被诊断为患有肺气道疾病。在一些实施方案中，肺气道疾病选自：哮喘；运动诱发的支气管收缩(或运动诱导的哮喘)；copd，其可包括肺气肿、慢性支气管炎和/或α
‑
1抗胰蛋白酶缺乏症(aatd)；acos；囊性纤维化；和支气管扩张。在一些实施方案中，肺气道疾病是非炎性肺气道疾病。在一些实施方案中，肺气道疾病选自运动诱发的支气管痉挛、运动诱发的哮喘、阿司匹林加剧的呼吸系统疾病、nsaid加剧的呼吸系统疾病、少粒细胞性哮喘、肥胖相关的气道高反应性和病毒后气道高反应性。在一些实施方案
中，肺气道疾病以气道平滑肌收缩为特征。在一些实施方案中，肺病选自：病毒、细菌、真菌和/或分枝杆菌感染引起的感染后支气管痉挛；充血性心力衰竭引起的气道水肿；肺水肿引起的气道水肿；心源性肺水肿引起的气道水肿；非心源性肺水肿引起的气道水肿；气道水肿引起的毛细支气管炎；由于解剖变形而不是炎症引起的支气管扩张；异物吸入；食物、液体和/或胃内容物的吸入；胃食管反流病；肺癌或肺转移性癌症，引起局部水肿和支气管痉挛；肺栓塞(其可释放因支气管痉挛引起喘息的局部因子)；气道创伤，包括手术；过敏反应和类过敏反应；神经介导的咳嗽和/或支气管痉挛；吸入性损伤相关的支气管痉挛；内分泌功能障碍相关的支气管痉挛；和副肿瘤综合征相关的支气管痉挛。
23.在一些实施方案中，肺气道疾病以支气管痉挛为特征。在一些实施方案中，使用机械吸入器实现施用。在一些实施方案中，机械吸入器是定量吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是加压气雾剂定量吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是干粉吸入器。在一些实施方案中，机械吸入器是雾化器。在一些实施方案中，机械吸入器选自：soft mist
tm
吸入器、吸入器、吸入器、吸入器、pulmosphere载体吸入器和吸入器。
24.在一些实施方案中，该制剂还包含一种、两种或三种另外的治疗剂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂被他汀类药物增强。在一些实施方案中，以亚治疗剂量施用另外的治疗剂。在一些实施方案中，以亚治疗剂量施用一种、两种或三种另外的治疗剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂选自：β
‑
激动剂；皮质类固醇；毒蕈碱拮抗剂；rhoa抑制剂；ggtase
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i或
‑
ii抑制剂；rock1和/或rock2抑制剂；可溶性环氧化物水解酶抑制剂；脂肪酸酰胺水解酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；磷酸二酯酶
‑
4抑制剂，诸如罗氟司特；5
‑
脂氧合酶抑制剂，诸如齐留通；肥大细胞稳定剂，诸如奈多罗米；茶碱；抗il5抗体；抗ige抗体；抗il5受体抗体；抗il13/4受体抗体；生物制剂，诸如美泊利单抗、瑞利珠单抗、贝那利珠单抗、奥马珠单抗和度匹鲁单抗；β
‑
激动剂和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；β
‑
激动剂和皮质类固醇组合，包括长效和短效制剂；皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；以及β
‑
激动剂、皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂。
25.在一些实施方案中，另外的治疗剂是β
‑
激动剂，其选自阿福莫特罗、布酚宁、克仑特罗、博克明(bopexamine)、肾上腺素、非诺特罗、福莫特罗、异他林、异丙肾上腺素、奥西那林、左旋沙丁胺醇(levoalbutamol)、左旋沙丁胺醇、吡布特罗、丙卡特罗、利托君、沙丁胺醇、沙美特罗、特布他林、阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基炔诺醇烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异舒普林、马布特罗、甲氧那明、奥昔非君、莱克多巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗。在一些实施方案中，另外的治疗剂是rock抑制剂，其选自：法舒地尔、瑞舒地尔、奈他地尔、rki
‑
1447、y
‑
27632、y
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30141和gsk429286a。在一些实施方案中，第二治疗剂是rhoa抑制剂罗红辛(rhosin)。
26.在一些实施方案中，药学上可接受的载体包含选自以下物质的组分：单糖、二糖、寡糖和多糖、多元醇、环糊精、氨基酸、盐，以及它们的混合物。在一些实施方案中，该组分包括选自葡萄糖、果糖和阿拉伯糖的单糖。在一些实施方案中，该组分包括选自乳糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖的二糖。在一些实施方案中，该组分包括选自葡聚糖、糊精、麦芽糖糊精、淀粉和纤维素的寡糖或多糖。在一些实施方案中，该组分包括选自山梨糖醇、甘露糖醇和木糖醇的多元醇。在一些实施方案中，该组分包括选自α
‑
环糊精、β
‑
环糊精、χ
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环糊精、甲基
‑
β
‑
环
糊精和羟丙基
‑
β
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环糊精的环糊精。在一些实施方案中，该组分包括精氨酸或盐酸精氨酸。在一些实施方案中，该组分包括选自氯化钠、氯化钾、溴化钠和碳酸钙的盐。
27.在另一个实施方案中，本公开提供了用于治疗肺气道疾病的药物制剂，该组合物包含治疗有效量的他汀类药物或其异构体、对映异构体或非对映异构体，以及适于通过吸入施用的药学上可接受的载体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、替伐他汀和普伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀和阿托伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自匹伐他汀和辛伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物是匹伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物是辛伐他汀。
28.在一些实施方案中，有效量为约0.005mg至约80mg。在一些实施方案中，有效量为约0.5mg至约15mg。在一些实施方案中，有效量为约1.0mg至约10mg。在一些实施方案中，有效量为约1.0mg至约5mg。
29.在一些实施方案中，该制剂还包含一种、两种或三种另外的治疗剂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂被他汀类药物增强。在一些实施方案中，以亚治疗剂量施用另外的治疗剂。在一些实施方案中，以亚治疗剂量施用一种、两种或三种另外的治疗剂。在一些实施方案中，该制剂还包含选自以下物质的另外的治疗剂：β
‑
激动剂；皮质类固醇；毒蕈碱拮抗剂；rhoa抑制剂；ggtase
‑
i或
‑
ii抑制剂；rock1和/或rock2抑制剂；可溶性环氧化物水解酶抑制剂；脂肪酸酰胺水解酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；磷酸二酯酶
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4抑制剂，诸如罗氟司特；5
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脂氧合酶抑制剂，诸如齐留通；肥大细胞稳定剂，诸如奈多罗米；茶碱；抗il5抗体；抗ige抗体；抗il5受体抗体；抗il13/4受体抗体；生物制剂，诸如美泊利单抗、瑞利珠单抗、贝那利珠单抗、奥马珠单抗和度匹鲁单抗；β
‑
激动剂和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；β
‑
激动剂和皮质类固醇组合，包括长效和短效制剂；皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；以及β
‑
激动剂、皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂。
30.在一些实施方案中，另外的治疗剂是β
‑
激动剂，其选自阿福莫特罗、布酚宁、克仑特罗、左旋沙丁胺醇、博克明(bopexamine)、肾上腺素、非诺特罗、福莫特罗、异他林、异丙肾上腺素、奥西那林、左旋沙丁胺醇(levoalbutamol)、吡布特罗、丙卡特罗、利托君、沙丁胺醇、沙美特罗、特布他林、阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基炔诺醇烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异舒普林、马布特罗、甲氧那明、奥昔非君、莱克多巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗。在一些实施方案中，另外的治疗剂是rock抑制剂，其选自：法舒地尔、瑞舒地尔、奈他地尔、rki
‑
1447、y
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27632、y
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30141和gsk429286a。在一些实施方案中，另外的治疗剂是rhoa抑制剂罗红辛(rhosin)。
31.在一些实施方案中，药学上可接受的载体包含选自以下物质的组分：单糖、二糖、寡糖和多糖、多元醇、环糊精、氨基酸、盐，以及它们的混合物。在一些实施方案中，该组分包括选自葡萄糖、果糖和阿拉伯糖的单糖。在一些实施方案中，该组分包括选自乳糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖的二糖。在一些实施方案中，该组分包括选自葡聚糖、糊精、麦芽糖糊精、淀粉和纤维素的寡糖或多糖。在一些实施方案中，该组分包括选自山梨糖醇、甘露糖醇和木糖醇
的多元醇。在一些实施方案中，该组分包括选自α
‑
环糊精、β
‑
环糊精、χ
‑
环糊精、甲基
‑
β
‑
环糊精和羟丙基
‑
β
‑
环糊精的环糊精。在一些实施方案中，该组分包括精氨酸或盐酸精氨酸。在一些实施方案中，该组分包括选自氯化钠、氯化钾、溴化钠和碳酸钙的盐。
32.在另一个实施方案中，本公开提供了用于治疗受试者的肺气道疾病的预填充吸入装置，该装置包括用于将治疗剂量的制剂递送至有此需要的受试者的肺气道的递送装置；和如本文所述的药学上可接受的制剂。在一些实施方案中，该装置包括加压吸入器、定量吸入器、干粉吸入器或雾化器。
33.在一些实施方案中，该装置包含多个治疗剂量。在一些实施方案中，递送装置是定量吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是加压气雾剂吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是干粉吸入器。在一些实施方案中，递送装置是雾化器。在一些实施方案中，递送装置选自：soft mist
tm
吸入器、吸入器、吸入器、吸入器、pulmosphere载体吸入器和吸入器。
34.在另一个实施方案中，本公开提供了与吸入器一起使用的预填充药筒，该预填充药筒包括：容器，该容器包括用于将该容器附接到吸入器装置的连接装置；和如本文所述的药学上可接受的制剂。在一些实施方案中，吸入器装置还包括药学上可接受的推进剂。
35.在另一个实施方案中，本公开提供了上述方法中的任一种方法，其中治疗有效量有效地用于维持肺功能；用于减少哮喘恶化；用于减少受试者对皮质类固醇的需求；用于减少受试者的支气管收缩和粘液积聚；或者用于增强呼吸引起的支气管扩张。在一些实施方案中，治疗有效量有效地用于维持肺功能；用于减少哮喘恶化；用于减少受试者的支气管收缩和粘液积聚；或者用于增强呼吸引起的支气管扩张。
36.在另一个实施方案中，本公开提供了用于减少受试者的气道高反应性(ahr)或asm高收缩的方法，该方法包括通过吸入向有此需要的受试者施用本公开的制剂，其中治疗有效量有效地减少受试者的ahr或asm高收缩。
37.在另一个实施方案中，本公开提供了用于增加受试者的拉伸诱导的气道平滑肌(asm)松弛的方法，该方法包括通过吸入向有此需要的受试者施用本公开的制剂，其中治疗有效量有效地增加受试者的拉伸诱导的asm松弛。
38.在另一个实施方案中，本公开提供了增强β2
‑
激动剂对asm的支气管扩张效果的方法，该方法包括使asm与增强量的他汀类药物接触；以及使asm与增强量的β2
‑
激动剂接触，其中所得增强效果包括asm松弛。在一些实施方案中，asm在与他汀类药物接触后约2小时至约24小时与β2
‑
激动剂接触。在一些实施方案中，asm在需要asm松弛的人类受试者中。在一些实施方案中，他汀类药物和β2
‑
激动剂通过吸入施用。在一些实施方案中，该增强效果减少asm收缩，该减少百分比比由单独的β2
‑
激动剂引起的asm收缩减少百分比和由单独的他汀类药物引起的asm收缩减少百分比的总和多至少约10％。在一些实施方案中，该增强效果减少asm收缩，该减少百分比比不存在他汀类药物的情况下的asm收缩减少百分比多约10％至约30％。
39.在一些实施方案中，使用机械吸入器实现施用。在一些实施方案中，机械吸入器是定量吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是加压气雾剂吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是干粉吸入器。在一些实施方案中，机械吸入器是雾化器。在一些实施方案中，机
械吸入器选自：soft mist
tm
吸入器、吸入器、吸入器、吸入器和吸入器。
40.在另一个实施方案中，本公开提供了治疗间质性肺病的症状的方法，该方法包括通过吸入向有此需要的受试者施用本公开的制剂，其中该间质性肺病导致气道症状，该气道症状选自asm收缩、asm过度增殖或增厚、支气管痉挛、支气管收缩、气道粘液积聚或asm释放炎性介质，其中治疗有效量有效地将症状的严重程度降低至少10％。
41.在另一个实施方案中，本公开提供了治疗受试者的肺气道疾病的方法，该方法通过吸入向患有肺病的受试者施用制剂，其中该制剂包含药学上可接受的载体和治疗有效量的他汀类药物或其异构体、对映异构体或非对映异构体；以及施用一种、两种或三种另外的治疗剂。在一些实施方案中，所述一种、两种或三种另外的治疗剂选自：β
‑
激动剂；皮质类固醇；毒蕈碱拮抗剂；rhoa抑制剂；ggtase
‑
i或
‑
ii抑制剂；rock1和/或rock2抑制剂；可溶性环氧化物水解酶抑制剂；脂肪酸酰胺水解酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；磷酸二酯酶
‑
4抑制剂，诸如罗氟司特；5
‑
脂氧合酶抑制剂，诸如齐留通；肥大细胞稳定剂，诸如奈多罗米；茶碱；抗il5抗体或抗体衍生物；抗ige抗体或抗体衍生物；抗il5受体抗体或抗体衍生物；抗il13/4受体抗体或抗体衍生物；生物制剂，诸如美泊利单抗、瑞利珠单抗、贝那利珠单抗、奥马珠单抗和度匹鲁单抗；β
‑
激动剂和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；β
‑
激动剂和皮质类固醇组合，包括长效和短效制剂；皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；以及β
‑
激动剂、皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂。
42.在一些实施方案中，另外的治疗剂是β
‑
激动剂，其选自沙丁胺醇、阿福莫特罗、福莫特罗、沙美特罗、茚达特罗、左旋沙丁胺醇、舒喘灵、特布他林、奥达特罗、维兰特罗、异舒普林、马布特罗、齐帕特罗、班布特罗、克仑特罗、福莫特罗、沙美特罗、阿比特罗和卡莫特罗、布酚宁、博克明(bopexamine)、肾上腺素、非诺特罗、异他林、异丙肾上腺素、奥西那林、左旋沙丁胺醇(levoalbutamol)、吡布特罗、丙卡特罗、利托君、阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基炔诺醇烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、甲氧那明、奥昔非君、莱克多巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗。
43.在一些实施方案中，另外的治疗剂是皮质类固醇，其选自倍氯米松、氟替卡松、布地奈德、莫米松、氟尼缩松、阿氯米松、倍氯米松、倍他米松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、双氟可龙、氟氯龙(flurclorolone)、氟米松、氟可丁、氟可龙、氟泼尼定、氟替卡松、糠酸氟替卡松、卤米松、甲泼尼松、莫米松、糠酸莫米松、帕拉米松、泼尼立定、利美索龙、乌倍他索、安西奈德、环索奈德、地夫可特、地奈德、福美可他、氟氯缩松、氟氢缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、哈西奈德和曲安奈德。在一些实施方案中，另外的治疗剂是毒蕈碱拮抗剂，其选自异丙托溴铵、噻托溴铵、胃长宁、格隆溴铵、雷芬那辛、芜地溴铵、阿地溴铵、曲司氯铵、氧托溴铵、奥昔布宁、托特罗定、索利那新、非索罗定和达非那新。在一些实施方案中，另外的治疗剂是rock抑制剂，其选自：法舒地尔、瑞舒地尔、奈他地尔、rki
‑
1447、y
‑
27632、y
‑
30141和gsk429286a。在一些实施方案中，另外的治疗剂是rhoa抑制剂罗红辛(rhosin)。
44.在一些实施方案中，另外的治疗剂是β
‑
激动剂、皮质类固醇、毒蕈碱拮抗剂或它们的任何组合。在一些实施方案中，一种、两种或三种另外的治疗剂被他汀类药物增强。在一些实施方案中，以亚治疗剂量施用一种、两种或三种另外的治疗剂。
45.在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、替伐他汀和普伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物是疏水性他汀类药物。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀和阿托伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自匹伐他汀及其异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自匹伐他汀和辛伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物是匹伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物是辛伐他汀。
46.在一些实施方案中，治疗有效量为约0.005μg至约40mg。在一些实施方案中，治疗有效量为约0.5μg至约15mg。在一些实施方案中，治疗有效量为约1.0μg至约10mg。在一些实施方案中，治疗有效量为约1.0μg至约5mg。
47.在一些实施方案中，受试者已被诊断为患有肺气道疾病。在一些实施方案中，肺气道疾病是哮喘；运动诱发的支气管收缩；copd；肺气肿；慢性支气管炎；α
‑
1抗胰蛋白酶缺乏症(aatd)；acos；囊性纤维化；支气管扩张；运动诱发的支气管痉挛、运动诱发的哮喘、阿司匹林加剧的呼吸系统疾病、nsaid加剧的呼吸系统疾病、少粒细胞性哮喘、肥胖相关的气道高反应性、病毒后气道高反应性；病毒、细菌、真菌和/或分枝杆菌感染引起的感染后支气管痉挛；充血性心力衰竭引起的气道水肿；肺水肿引起的气道水肿；心源性肺水肿引起的气道水肿；非心源性肺水肿引起的气道水肿；气道水肿引起的毛细支气管炎；由于解剖变形而不是炎症引起的支气管扩张；异物吸入；食物、液体和/或胃内容物的吸入；胃食管反流病；肺癌或肺转移性癌症，引起局部水肿和支气管痉挛；肺栓塞；气道创伤；手术；过敏反应和类过敏反应；神经介导的咳嗽和/或支气管痉挛；吸入性损伤相关的支气管痉挛；内分泌功能障碍相关的支气管痉挛；和副肿瘤综合征相关的支气管痉挛。在一些实施方案中，肺病选自运动诱发的支气管痉挛、运动诱发的哮喘、阿司匹林加剧的呼吸系统疾病、nsaid加剧的呼吸系统疾病、少粒细胞性哮喘、肥胖相关的气道高反应性和病毒后气道高反应性。
48.在一些实施方案中，肺气道疾病以支气管痉挛为特征。在一些实施方案中，肺病选自：病毒、细菌、真菌和/或分枝杆菌感染引起的感染后支气管痉挛；充血性心力衰竭引起的气道水肿；肺水肿引起的气道水肿；心源性肺水肿引起的气道水肿；非心源性肺水肿引起的气道水肿；气道水肿引起的毛细支气管炎；由于解剖变形而不是炎症引起的支气管扩张；异物吸入；食物、液体和/或胃内容物的吸入；胃食管反流病；肺癌或肺转移性癌症，引起局部水肿和支气管痉挛；肺栓塞(其可释放因支气管痉挛引起喘息的局部因子)；气道创伤，包括手术；过敏反应和类过敏反应；神经介导的咳嗽和/或支气管痉挛；吸入性损伤相关的支气管痉挛；内分泌功能障碍相关的支气管痉挛；和副肿瘤综合征相关的支气管痉挛。
49.在一些实施方案中，使用机械吸入器实现施用。在一些实施方案中，机械吸入器是定量吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是加压定量气雾剂吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是加压定量吸入器。在一些实施方案中，定量吸入器是干粉吸入器。在一些实施方案中，机械吸入器是雾化器。在一些实施方案中，机械吸入器选自：soft mist
tm
吸入器、吸入器、吸入器、吸入器和吸入器。
50.在一个实施方案中，本公开提供了用于减少由已经发生或预期在未来经历的事件引起的未来症状的方法，该方法包括向有经历未来症状风险的受试者施用本公开的制剂。
在一些实施方案中，该方法是其中未来症状是由以下状况引起的支气管痉挛：病毒、细菌、真菌和/或分枝杆菌感染引起的感染后支气管痉挛；充血性心力衰竭引起的气道水肿；肺水肿引起的气道水肿；心源性肺水肿引起的气道水肿；非心源性肺水肿引起的气道水肿；气道水肿引起的毛细支气管炎；由于解剖变形而不是炎症引起的支气管扩张；异物吸入；食物、液体和/或胃内容物的吸入；胃食管反流病；肺癌或肺转移性癌症，引起局部水肿和支气管痉挛；肺栓塞；气道创伤；手术；过敏反应和类过敏反应；神经介导的咳嗽和/或支气管痉挛；吸入性损伤相关的支气管痉挛；内分泌功能障碍相关的支气管痉挛；或副肿瘤综合征相关的支气管痉挛。
附图说明
51.图1a至图1d显示了他汀类药物对基础asm细胞收缩的抑制的不同效果是通过甲羟戊酸(ma)依赖性机制发生的。asm用1μm他汀类药物处理24小时。p值：**p<0.01，***p<0.001。nt：未处理；pra：普伐他汀；ros：瑞舒伐他汀；sim：辛伐他汀(生物活性形式，β
‑
羟基酸，“sa”)；pit：匹伐他汀。匹伐他汀和辛伐他汀在所用浓度下更有效。图1a显示了在没有甲羟戊酸存在下的效果。图1b显示了在100μm甲羟戊酸存在下的效果，其消除了他汀类药物对asm松弛的有益效果。这表明他汀类药物的效果是通过抑制甲羟戊酸途径而发生的。值得注意的是，辛伐他汀是前药(内酯形式)。一旦被吸收，它被生物转化为活性代谢物β
‑
羟基辛伐他汀酸。在血液循环中，内酯和羟基酸之间存在恒定的平衡。
52.图1c显示了在药物亲脂性范围内的他汀类药物剂量
‑
反应。辛伐他汀和匹伐他汀是高度亲脂性的，阿托伐他汀是中等亲脂性的，普伐他汀是亲脂性最低(亲水性最强)的他汀类药物。在0.4μm的剂量下处理24小时，辛伐他汀和匹伐他汀显示出应变能(由收缩细胞给予底物的能量＝收缩)的显著降低，这相当于与在这些浓度下没有表现出效果的普伐他汀相比asm松弛增加。在2μm和10μm时，辛伐他汀、匹伐他汀和阿托伐他汀与普伐他汀相比显著地(并且进一步地)降低应变能。与未处理(0μm)相比，应变能的统计学显著降低在如下条件下发生：0.4μm和10μm的辛伐他汀、2μm和10μm的匹伐他汀，以及2μm和10μm的阿托伐他汀。p值：***p<0.001，****p<0.0001。
53.图1d显示了匹伐他汀是比其他他汀类药物更有效的asm细胞收缩抑制剂。用匹伐他汀预处理(1μm，24小时)有效且显著地抑制基础asm收缩(又称为应变能)，并且匹伐他汀在相同剂量下也比辛伐他汀更有效，进一步证实了匹伐他汀与亲脂性更强的辛伐他汀相比效力增强。p值：与nt相比，**p<0.01，***p<0.001。
54.图2a至图2e显示了与已知诱导细胞凋亡的阳性对照相比，使用他汀类药物测试的细胞凋亡和坏死的结果(图2a)。在图2b至图2e中，显示了单独的他汀类药物：(2b)辛伐他汀(sa)、(2c)匹伐他汀、(2d)瑞舒伐他汀和(2e)普伐他汀。用测试的他汀类药物剂量，包括他汀类药物对asm细胞具有松弛效果的剂量，没有证据表明细胞凋亡或细胞死亡。缩写：sim(辛伐他汀)、pra(普伐他汀)、pit(匹伐他汀)、ros(瑞舒伐他汀)。
55.图3显示了辛伐他汀酸(sa)和匹伐他汀对从三个不同人供体获得的原代asm细胞的剂量依赖性效果。
56.图4a至图4c显示了他汀类药物抑制组胺诱导的asm收缩。图4a：用匹伐他汀预处理(24小时)有效地且显著地抑制基础和组胺诱导的(10μm组胺，30分钟)asm收缩，表明匹伐他
汀可防止激动剂诱导的收缩并防止气道狭窄。在0.4μm的剂量下，匹伐他汀使组胺在诱导asm收缩方面无效(基础组与组胺后处理组，p＝ns)，在更高剂量(2μm、100μm、50μm)时具有类似的效果。使用辛伐他汀(图4b)和阿托伐他汀观察到类似的模式，其中匹伐他汀是三种药物中最有效的。缩写：nt
‑
未处理，ns
‑
不显著。p值：*p<0.05，**p<0.01，****p<0.0001，####p<0.0001。图4c显示了asm松弛随时间的推移。在所有时间点(包括24小时)，无论有无培养基饥饿，匹伐他汀在1μm处均比辛伐他汀引起更大的asm松弛。h＝施用组胺。i＝施用异丙肾上腺素(β2激动剂)。组胺引起asm收缩，而异丙肾上腺素引起asm松弛。se＝应变能(asm收缩)。
57.图5a和图5b显示了他汀类药物抑制asm细胞的收缩功能。图5a显示了匹伐他汀以甲羟戊酸依赖性方式抑制人asm细胞中rho激酶(rock
‑
1)磷酸化。组胺(10μm，5分钟)诱导rock
‑
1磷酸化，并且这通过用匹伐他汀(pit，1μm)预处理(24小时)来抑制。用甲羟戊酸(ma，200μm，24小时)共处理消除了pit对rock
‑
1磷酸化的抑制效果。这证实了ma途径介导rock
‑
1激活。图5b显示了匹伐他汀抑制人asm细胞中肌球蛋白轻链
‑
2(mlc
‑
2)磷酸化。凝血酶(2单位，30分钟)诱导mcl
‑
2磷酸化，并通过用匹伐他汀预处理(24小时，1μm或10μm)而被抑制。p值：**p<0.01，***p<0.001。数据显示，他汀类药物阻断了asm收缩机制。mlc蛋白直接控制平滑肌收缩。
58.图6显示了气管内滴注的匹伐他汀的支气管扩张效果与任何抗炎效果无关。使用乙酰甲胆碱(mch)诱导的高收缩的非炎症小鼠模型，在每次mch雾化之前，用气管内匹伐他汀(5mg/kg，5天)预处理1小时，引起气道收缩％的显著降低(对照22.3％对比他汀类药物7.3％，*p＝0.0361)。使用精确切割的肺切片(n＝2只小鼠/组，13条气道/组)，测量对500nm(0.5μm)mch反应的气道收缩。
59.图7显示了非人灵长类动物吸入他汀类药物试验的实验设计。
60.图8显示了吸入的(雾化的)辛伐他汀抑制引起支气管收缩的类花生酸脂质(ltb4和txb2)的基础水平。
61.图9显示了吸入的辛伐他汀的组织分布。使用质谱和代谢组学研究吸入的(雾化的)辛伐他汀(1mg/kg)的组织分布及其对肺脂质的影响，辛伐他汀及其活性代谢物辛伐他汀酸(sa)在主支气管和下肺叶中浓缩(约0.8
‑
1μg/100,000个上皮细胞)。在肝脏中检测到高达405ng/g的sa，而在大肠和肌肉中分别检测到25ng/g和7ng/g的sa。
62.图10a至图10f显示，匹伐他汀抑制基础asm收缩、组胺诱导的asm收缩和mch诱导的asm收缩。图10a显示，与未处理(0μm)相比，收缩的统计学显著降低在如下条件下发生：0.4μm、2μm和10μm的匹伐他汀(pit)，0.4μm和10μm的辛伐他汀(sim)。普伐他汀对asm细胞松弛没有有益效果。图10b显示，虽然与对照相比，1μm sim和1μm pit均以时间依赖性方式减少了asm收缩，但在24小时时，pit明显比sim更有效(由#表示)。实验在无血清培养基条件下进行。图10c显示，0.4μm pit抑制组胺诱导的asm收缩，而0.4μm sim则不抑制。使用学生t检验进行统计比较。图10d显示，当孔用无pit的培养基重悬时，1μm pit的力抑制效果被逆转。图10e显示，他汀类药物治疗不诱导细胞凋亡。洋地黄皂苷(50μg/ml)用作阳性对照。图10f显示，与未处理(0μm)相比，在小鼠pcls中未观察到活力降低。包括0.01％处理2小时作为阳性对照。除非另有说明，否则所有细胞实验均在含血清(10％fbs)的培养基条件下进行。在图10a至图10d中使用了一种非哮喘的原代人asm供体系；图10e使用了一种非哮喘
htert asm细胞系。在所有图中，asm收缩被绘制为0小时时处理前基线值的倍数变化。p值：*,#p<0.05；**,##p<0.01；###p<0.001。对于每个组，n＝每种条件4
‑
8个单独的孔。所有数据均以平均值和平均值的标准误差(sem)报告。
63.图11a至图11c显示，匹伐他汀抑制人细胞、人pcls和小鼠中的asm收缩。图11a显示，来自哮喘患者的asm细胞比非哮喘asm细胞具有更大的基础收缩(在没有额外激动剂的情况下)。尽管存在这些基础力差异，但是在哮喘和非哮喘供体细胞中，匹伐他汀以剂量依赖性方式抑制asm收缩(与0μm处理相比，p＜0.0001)。对于每个供体，n＝每种条件4
‑
8个单独的孔。图11b显示，在mch诱导的asm高收缩的非炎症小鼠模型中，在每次mch雾化之前，用气管内匹伐他汀(5mg/kg，5天)预处理1小时，引起气道收缩％的显著降低(对照＝24.9％，溶媒＝27.2％，匹伐他汀＝14.2％，*p<0.05)。图11c显示，用5μm pit(n＝5)或溶媒(n＝3)预处理24小时并用0μm、0.1μm和1μm组胺(hist)后处理15分钟的人pcls的气道各自表现出狭窄减少。与溶媒相比，pit显著减少1μm hist诱导的支气管收缩。管腔狭窄的变化报告为与0μm hist相比的管腔面积的％变化。在0μm组胺下，pit组和溶媒组的管腔面积绝对值无统计学差异。所有数据均以平均值和平均值的标准误差(sem)报告。
64.图12a至图12b显示，匹伐他汀增强了模拟的深呼吸的asm松弛效果，匹伐他汀的有益效果是异丙肾上腺素明显没有的。图12a显示，与未处理的对照(n＝7)相比，用1μm pit(24小时)(n＝7)或10μm异丙肾上腺素(30分钟)(n＝6)预处理显著抑制了基础asm收缩。显示了相对于未处理对照组归一化的收缩值。图12b显示，作为对随后的模拟深呼吸(10％幅度，4秒持续时间)的单次拉伸
‑
非拉伸操作的反应，asm细胞迅速并显著地消除其收缩。力随后在180秒内恢复。虽然所有三组的力消融是相似的，但随后的力恢复被匹伐他汀处理显著抑制(*p<0.05；****p<0.0001)。n表示asm单层的独立孔的数量。所有数据均以平均值和平均值的标准误差(sem)报告。
65.图13显示，匹伐他汀(pit)、异丙肾上腺素(iso)、pit和iso的组合均使组胺(hist)诱导的支气管收缩减少(*p＝0.0298)。这也表明该组合至少是作用累加的，并且匹伐他汀不干扰异丙肾上腺素的作用，并且反之亦然。将来自一个人供体肺的精确切割的人肺切片用5μm匹伐他汀(pita)或溶媒(对照)预处理24小时，并用组胺(hist，10μm，15分钟)后处理，随后用异丙肾上腺素(iso，30μm，另外30分钟)后处理。管腔狭窄的变化报告为处理前状态的百分比变化(
±
sem)。在处理前状态下，pita组和对照组之间管腔气道面积的绝对值没有统计学差异。实验在无血清培养基条件下进行。n＝3
‑
7个气道/组。
66.图14a和图14b显示，匹伐他汀以ggpp依赖性方式抑制促炎细胞因子的asm细胞分泌。非哮喘的原代人asm细胞生长至汇合，并且是未处理的(对照(nt))或用2mm匹伐他汀(pit或pit)和ggpp(10mm)预处理共72小时。用il17和tnfα或il13和tnfα以10ng/ml处理细胞18小时。图14a：pit通过ggpp依赖性机制抑制il13/tnfα诱导的嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3肽分泌。图14b：pit通过ggpp依赖性机制抑制il17/tnfα诱导的il6肽分泌。il13/il17/tnfα混合物在图中表示为“cytomix(cm)”。所有实验在含血清的培养基条件(10％fbs)下进行。p值：*p<0.05，**p<0.01，****p<0.0001。
67.图15a至图15c显示，匹伐他汀通过ma依赖性机制和ggpp依赖性机制抑制asm细胞骨架。用在溶媒中的1μm匹伐他汀(pit)或单独的溶媒处理非哮喘的原代人asm细胞24小时。然后对孔进行免疫染色以获得f
‑
肌动蛋白表达。pit显著降低了基础f
‑
肌动蛋白表达(图
15a)。将非哮喘的原代人asm细胞用1μm匹伐他汀(pit)、pit与10μm ggpp或者pit与10μm ggpp和100μm ma共处理24小时。pit降低f
‑
肌动蛋白表达和asm收缩：这些降低被ggpp和ma消除(图15b)。通过蛋白质印迹分析细胞裂解物的总rock
‑
1和总rock
‑
2。pit降低了rock
‑
1和rock
‑
2二者的基础表达(图15c)。
68.图16显示，辛伐他汀和地塞米松协同抑制hbe1细胞的嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3分泌。用辛伐他汀(sim，5μm)和/或地塞米松(dex，10
‑7m)预处理hbe1细胞72小时，各自独立地抑制il13
‑
诱导的嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3的胞外分泌，辛伐他汀和地塞米松一起表现出对嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3分泌的协同抑制作用。
69.图17a显示了用适当浓度的他汀类药物进行的预处理增强了相关浓度的异丙肾上腺素的松弛效果。图17b详细描述了图17a的方框部分中所示的数据。
70.图18显示了用适当浓度的他汀类药物进行的预处理增强了地塞米松的松弛效果。将原代人气道平滑肌细胞在含血清培养基(10％fbs)中培养至汇合，然后用0.1μm、1μm或5μm地塞米松(“dex”)和0.1μm、0.5μm或1μm浓度的匹伐他汀(“pit”)或不用匹伐他汀预处理60小时。然后将asm细胞暴露于细胞因子的混合物(10n/ml il
‑
13、il
‑
17和tnfα，“cm”)15小时，并测量嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3的表达。“nt”表示未处理。当将匹伐他汀加入任何浓度的地塞米松时，观察到嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3表达的显著降低。
具体实施方式
71.概述：
72.使用他汀类药物的新方法满足了对新型支气管扩张剂的需求，他汀类药物提供了支气管扩张气道的新机制，从而在通过吸入直接递送到气道时改善肺功能并减轻症状。本公开表明，吸入他汀类药物具有独立于任何抗炎活性的治疗效果。直接向气道施用他汀类药物将有效量的他汀类药物递送至气道平滑肌(asm)，这是使用口服施用无法达到的。然而，当吸入时，他汀类药物能够诱导asm松弛、减少支气管收缩和气道粘液积聚、减少支气管痉挛、减少高反应性和高收缩、增强深呼吸诱导的asm松弛和支气管扩张、增强药剂诸如β2
‑
激动剂和吸入皮质类固醇的支气管扩张效果、减少使用吸入皮质类固醇的需要、维持肺功能和改善肺功能。因此，本公开包括用于治疗肺气道疾病和病症的新方法和制剂。吸入他汀类药物直接降低asm施加的收缩力，抑制asm细胞骨架，并抑制asm释放炎性细胞因子和介质。吸入他汀类药物与另外的治疗剂组合可提高另外的治疗剂的治疗效果，从而允许降低剂量和/或提高疗效。
73.定义：
74.除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代。例如，术语“细胞”包括一种或多种细胞，包括它们的混合物。“a和/或b”在本文中用于包括以下所有替代方案：“a”、“b”、“a或b”以及“a和b”。
75.在提供数值范围的情况下，应当理解，除非上下文另有明确规定，否则在该范围的上限和下限以及该规定范围内的任何其他规定值或中间值之间的每一个中间值，直到下限单位的十分之一，都涵盖在本公开内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在较小范围中，并且也涵盖在本公开内，但要遵守规定范围内任何明确排除的限制。在规定范围包括限值中的一个或两个的情况下，排除那些所包括的限值中的任一个或两个的范围也包括在
本公开中。
76.本文公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。任何列出的范围都可以被认为是充分描述的，并且能够使相同的范围被分成至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性示例，本文讨论的每个范围可容易地被分成下三分之一、中三分之一和上三分之一等。本领域技术人员还将理解，所有语言诸如“至多”、“至少”、“大于”、“小于”等都包括所列举的数字，并且是指随后可被分成如上所述的子范围的范围。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个单独的成员。因此，例如，具有1
‑
3个制品的组是指具有1、2或3个制品的组。类似地，具有1
‑
5个制品的组是指具有1、2、3、4或5个制品的组，等等。
77.应当理解，为了清楚起见，本公开的某些特征在单独实施方案的上下文中进行阐述，但也可以组合形式提供在单个实施方案中。相反地，本公开的各种特征为简明起见可在单个实施方案的上下文中进行阐述，也可分开地或以任何子组合形式被提供。与本公开有关的实施例的所有组合都被本公开具体地包含并且在本文中被公开，就好像每一个组合被单独且明确地公开一样。此外，各种实施方案及其元件的所有子组合也被本公开具体地包含并且在本文中被公开，就好像每个这样的组合在本文中被单独且明确地公开一样。
[0078]“他汀类药物”是小分子hmg
‑
coa还原酶抑制剂。他汀类药物被设计为阻断甲羟戊酸代谢途径，从而减少体内胆固醇的产生。本公开的合适的他汀类药物包括，但不限于，辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、替伐他汀和普伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。疏水性他汀类药物包括辛伐他汀、匹伐他汀和具有相似疏水性的其他他汀类药物。亲水性他汀类药物包括普伐他汀和具有相似亲水性的其他他汀类药物。
[0079]
术语“气道平滑肌”(“asm”)是指排列在支气管和细支气管内的平滑的、非随意肌肉组织。asm收缩会减小气道直径，而asm松弛会扩张气道。
[0080]
术语“治疗有效量”是指当通过吸入施用时足以实现可测量的有益效果的他汀类药物(或异构体、对映异构体、非对映异构体)或其混合物的量。有益效果可以是减少气道平滑肌收缩、减少支气管痉挛或支气管收缩、预防性维持肺功能、减少粘液积聚、减少控制症状所需的皮质类固醇、降低哮喘恶化的严重程度和/或频率、改善呼吸诱导的支气管扩张等。
[0081]“亚治疗剂量”是指协同或增强组合制剂、方法或系统中的一种或多种药剂的剂量，其中该药剂的剂量降低至这样的水平：当单独施用或作为非协同组合制剂、方法或系统的一部分施用时将是不足或亚治疗的，但当作为协同组合制剂、方法或系统的一部分施用时足以用于治疗用途。当作为根据本公开的非协同制剂、方法或系统的一部分通过吸入施用时，该药剂的亚治疗剂量可以是该药剂的有效剂量的约90％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。
[0082]
术语“药学上可接受的载体”是指在其施用的量和浓度下对受试者无毒的赋形剂，他汀类药物可在其中溶解和/或悬浮。在本公开的实践中，药学上可接受的载体适于通过吸入施用。
[0083]
术语“肺气道疾病”是指一种疾病或病症，其中进出肺的气流的阻塞、限制或干扰是主要症状。这种阻塞可能是由于asm的收缩(支气管收缩)和/或粘液分泌过多造成的。肺气道疾病包括但不限于：哮喘；运动诱发的支气管收缩(或运动诱发的哮喘)；慢性阻塞性肺病(copd)，其可包括肺气肿、慢性支气管炎和/或α
‑
1抗胰蛋白酶缺乏症(aatd)；哮喘
‑
copd重叠综合征(acos)(也称为哮喘
‑
copd重叠或aco)；囊性纤维化；急性支气管炎；嗜酸粒细胞性支气管炎；缩窄性细支气管炎；和支气管扩张。使用吸入他汀类药物可减少压缩力，从而减少气道重塑、粘液分泌过多和粘液栓形成。被认为是“非炎性”的肺气道疾病包括运动诱发的支气管痉挛、运动诱发的哮喘、阿司匹林加剧的呼吸系统疾病、nsaid加剧的呼吸系统疾病、少粒细胞性哮喘、肥胖相关的气道高反应性、病毒后气道高反应性，以及不是由炎症引发或维持的其他肺气道疾病。
[0084]“支气管保护”是使用本公开的方法、制剂或系统的肺“保护性”活动或施用，以减少来自已发生的或预期在未来经历的效果的未来症状或伤害，其中接受该方法、制剂或系统的受试者有经历未来症状的风险。这些未来症状可包括：病毒、细菌、真菌和/或分枝杆菌感染引起的感染后支气管痉挛；充血性心力衰竭引起的气道水肿；肺水肿引起的气道水肿；心源性肺水肿引起的气道水肿；非心源性肺水肿引起的气道水肿；气道水肿引起的毛细支气管炎；由于解剖变形而不是炎症引起的支气管扩张；异物吸入；食物、液体和/或胃内容物的吸入；胃食管反流病；肺癌或肺转移性癌症，引起局部水肿和支气管痉挛；肺栓塞(其可释放因支气管痉挛引起喘息的局部因子)；气道创伤，包括手术；过敏反应和类过敏反应；神经介导的咳嗽和/或支气管痉挛；吸入性损伤相关的支气管痉挛；内分泌功能障碍相关的支气管痉挛；副肿瘤综合征相关的支气管痉挛；以及其他可能导致支气管痉挛的事件。如果受试者由于受试者、健康、身体状况、遗传、职业、年龄或与预期的未来症状有因果关系的任何其他因素而至少有10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约100％的可能性会经历一种或多种症状，则该受试者“预期”会经历该未来症状。
[0085]
如果给定因素是疾病的特征，即如果该疾病通常与该因素有关，则肺气道疾病以该因素“为特征”，而不管该因素是否也存在于其他疾病中。例如，因为支气管收缩出现在大多数哮喘病例中，所以哮喘可以支气管收缩为特征，而不管支气管收缩也是肺气肿的特征这一事实。
[0086]“间质性肺病”是发生在肺组织中以及发生在肺气道之间的空间(例如，基底膜、血管周围和淋巴周围组织)中的疾病。尽管这些疾病不会直接影响肺气道，但它们仍可能具有影响气道和肺功能的间接作用和症状。
[0087]
制剂：
[0088]
所公开的组合物被配制成适于吸入，其中该组合物被吸入或喷入肺中。理想情况下，以这样的方式施用该组合物，使得其均匀地分布在整个气道中，直接向asm提供有效量的他汀类药物。这通常通过将制剂作为悬浮在空气或气体中的小颗粒群施用来实现，其中粒径的分布影响颗粒将穿透到气管远端的距离。该组合物可以是溶液、混悬液、粉末或其他适于肺部施用的形式。参见，例如，h.m.mansour等人，int j nanomed(2009年)第4卷：第299
‑
319页。这些组合物例如以气雾剂、雾化、喷雾或蒸发形式通过本领域已知的适当装置施用到肺部。组合物的施用量可通过提供阀门来控制，以递送计量的量，如在定量吸入器(mdi)中，该定量吸入器在每次致动装置时以喷雾形式递送固定剂量。这样，可从包含多个
剂量的装置可靠地递送适当剂量(例如，治疗有效量)的组合物。
[0089]
用于递送的制剂通常被设计成以特定的施用模式起作用，诸如气雾剂制剂、雾化器制剂或干粉制剂。
[0090]
本公开的制剂含有治疗有效量的他汀类药物。在一些实施方案中，治疗有效量为至少约0.005μg、0.01μg、0.02μg、0.03μg、0.04μg、0.05μg、0.06μg、0.07μg、0.08μg、0.09μg、0.1μg、0.2μg、0.3μg、0.4μg、0.5μg、0.6μg、0.7μg、0.75μg、0.8μg、0.9μg、1.0μg、1.5μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、6.0μg、7.0μg、8.0μg、9.0μg、10μg、12μg、14μg、15μg、17μg、20μg、25μg、30μg、35μg、40μg、45μg、50μg、55μg、60μg、65μg、70μg、75μg、80μg、85μg、90μg、95μg或100μg。在一些实施方案中，治疗有效量为至少约0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.75mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.5mg、2.0mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、6.0mg、7.0mg、8.0mg、9.0mg、10mg、12mg、14mg、15mg、17mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg或100mg。在一些实施方案中，治疗有效量将不大于约100mg、95mg、90mg、85mg、80mg、75mg、70mg、65mg、60mg、55mg、50mg、45mg、40mg、35mg、30mg、25mg、20mg、15mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg、1mg、0.9mg、0.8mg、0.7mg、0.6mg、0.5mg、0.4mg、0.3mg、0.2mg、0.1mg、0.09mg、0.08mg、0.07mg、0.06mg、0.05mg、0.04mg、0.03mg、0.02mg、0.01mg或0.005mg。
[0091]
该制剂可含有任何药学活性的他汀类药物或其混合物。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、替伐他汀和普伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀和匹伐他汀。
[0092]
本公开的制剂还可包括另外的治疗剂，该另外的治疗剂可选自：β
‑
激动剂；皮质类固醇；毒蕈碱拮抗剂；rhoa抑制剂；ggtase
‑
i或
‑
ii抑制剂；rock1和/或rock2抑制剂；可溶性环氧化物水解酶抑制剂；脂肪酸酰胺水解酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；磷酸二酯酶
‑
4抑制剂，诸如罗氟司特；5
‑
脂氧合酶抑制剂，诸如齐留通；肥大细胞稳定剂，诸如奈多罗米；茶碱；抗il5抗体或抗体衍生物；抗ige抗体或抗体衍生物；抗il5受体抗体或抗体衍生物；抗il13/4受体抗体或抗体衍生物；生物制剂，诸如美泊利单抗、瑞利珠单抗、贝那利珠单抗、奥马珠单抗和度匹鲁单抗；β
‑
激动剂和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；β
‑
激动剂和皮质类固醇组合，包括长效和短效制剂；皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂；以及β
‑
激动剂、皮质类固醇和毒蕈碱拮抗剂组合，包括长效和短效制剂。
[0093]
抗体衍生物是能够结合与抗体相似或基于抗体的抗原的蛋白质。抗体衍生物的示例包括纳米抗体、双体、三体、微体、f(ab')2片段、f(ab)v片段、单链可变片段(scfv)、单结构域抗体(sdab)，以及它们的功能片段。
[0094]
由于另外的治疗剂也不经历肝脏首过代谢，它也可以通常低于口服或肠胃外施用的有效剂量的剂量施用。在一些实施方案中，当通过吸入施用时，有效剂量小于通常推荐用于口服施用的剂量的约90％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。
neurosci(2007年)第33卷：第18
‑
24页)、n
‑
苯基
‑4‑
(3
‑
苯基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑1‑
哌嗪甲酰胺(“jnj 1661010”，t.lowin等人，arth res ther(2015年)第17卷：第321页)和n
‑3‑
吡啶基
‑4‑
[[3
‑
[[5
‑
(三氟甲基)
‑2‑
吡啶基]氧基]苯基]甲基]
‑1‑
哌啶甲酰胺(“pf
‑
3845”，s.ghosh等人，j pharmacol exp(2015年)第354卷第2期：第111
‑
120页)。合适的白三烯受体拮抗剂包括但不限于化合物，诸如扎鲁司特、孟鲁司特和齐留通。
[0100]
(a)气雾剂制剂
[0101]
气雾剂是悬浮在空气或其他气体中的小固体颗粒或液滴的混悬液，通常具有＜10μm的平均直径。用于将药物递送至呼吸道的气雾剂制剂是本领域已知的。参见例如a.adjei等人，j pharm res(1990年)第1卷：第565
‑
569页；p.zanen等人，j int j pharm(1995年)第114卷：第111
‑
115页；i.gonda，crit rev ther drug carrier syst(1990年)第6卷：第273
‑
313页；anderson等人，am rev respir dis，(1989年)第140卷：第1317
‑
1324页；所有这些文献的内容均全文以引用方式并入本文。
[0102]
用于通过加压定量吸入器(pmdi)进行气雾剂施用的组合物可被配制成溶液或混悬液。溶液组合物可以更方便地制造，因为活性剂完全溶解在推进剂溶媒中并且避免了有时与混悬组合物有关的物理稳定性问题(例如颗粒聚集)。如果药剂在推进剂中不是充分可溶的，则可使用共溶剂诸如乙醇来提供通过pmdi施用的药物组合物的增强溶解度。在一些实施方案中，该制剂包含溶解于推进剂和共溶剂中的他汀类药物。
[0103]
混悬制剂可包括药剂的小的固体颗粒，通常具有小于约10μm的平均直径。这种制剂可通过研磨或碾磨该药剂的结晶形式，或通过喷雾干燥含有该药剂的溶液来制备。在一些实施方案中，该制剂包含粉末状他汀类药物、推进剂和混悬溶媒。在一些实施方案中，该混悬溶媒选自peg400、peg1000和丙二醇(1,2
‑
丙二醇)。在一些实施方案中，该他汀类药物包含匹伐他汀。
[0104]
药物组合物可用一种或多种合适的推进剂配制，例如氢氟烷烃、co2或其他合适的气体。在一些实施方案中，可加入表面活性剂以降低组合物、推进剂和共溶剂(如果存在)之间的表面和界面张力。表面活性剂可以是任何合适的、无毒的化合物，其不与其他药物组合物组分反应，并且将组合物、推进剂和共溶剂之间的表面张力和/或界面张力降至所需程度。在一些实施方案中，制剂在正常操作条件下不需要表面活性剂来产生和/或维持稳定的药物组合物溶液，并且可以不含表面活性剂。
[0105]
(b)雾化器制剂
[0106]“雾化”是指将液体还原成细小的喷雾或薄雾。尺寸均匀的小液滴以受控方式由较大的液体制剂体产生，通常具有约0.5μm至约10μm的平均粒径。雾化可通过任何合适的方式实现，包括：机械雾化器，诸如soft mist雾化器，其中制剂在弹簧压力下被挤压通过喷嘴；喷射雾化器，其中压缩机压缩空气或氧气以高速流过液体，形成雾；超声波雾化器，其中以超声频率振荡的压电换能器被放置成与液体制剂接触，振动形成雾或气雾剂；或者振动筛网雾化器，其中具有小孔的筛网或膜在贮液器的表面振动，形成细雾。使用这些技术中的任一种技术的雾化器可商购获得。当活性成分适于通过雾化器一起或单独施用时，它们可以是雾化的含水混悬液或溶液的形式，有或没有合适的ph或张力调节，作为单位剂量或多剂量装置。
[0107]
雾化器施用中使用的制剂通常但不一定主要是水溶液。在待施用的药剂仅微溶于
水的情况下，可加入药学上可接受的共溶剂诸如乙醇以溶解或帮助溶解该药剂。另选地，制剂可以是悬浮在主要为水性的载体中的合适尺寸的颗粒的混悬液。药剂也可配制成固体脂质微颗粒(slm)、固体脂质纳米颗粒(sln)或脂质体，并悬浮在液体载体中用于雾化或气雾化。参见，例如m.paranjpe等人，int j mol sci(2014年)第15卷：第5852
‑
5873页；m.j.de jes
ú
s valle等人，j antibiot(tokyo)(2013年)第66卷第8期：第447
‑
451页，二者均以引用方式并入本文。如本领域所教导的，雾化液滴的粒径可通过许多参数来调节，这些参数包括例如制剂粘度和表面张力以及雾化器特性。
[0108]
(c)干粉制剂：
[0109]
干粉制剂，顾名思义，不含液体载体。相反，将活性剂和赋形剂研磨或碾磨成具有适于吸入的粒径的细粉。该制剂被设计成通过快速吸入和/或抽吸压缩空气或气体而被带入肺中。当施用难以溶解或悬浮在常规液体载体中的药剂时，干粉制剂特别方便。
[0110]
干粉制剂除了含有一种或多种活性剂之外，通常还含有赋形剂。通常加入这些赋形剂以改善产品的流动性质(包括分散和吸收)，以及储存期间的化学稳定性。可例如通过喷雾干燥(a.a.ambike等人，pharm res(2005年)第22卷第6期：第990
‑
998页)、研磨或碾磨、挤出、沉淀和/或使用本领域已知的方法进行的筛选以获得可吸入粉末来制备制剂。所用的赋形剂也可以是通过将不同平均粒径的赋形剂部分混合而获得的研磨赋形剂的混合物。
[0111]
可用于制备用于吸入器(或其药筒)的可吸入粉末的生理上可接受的赋形剂的示例包括单糖(例如，葡萄糖、果糖或阿拉伯糖)、二糖(例如，乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖)、寡糖和多糖(例如，葡聚糖、糊精、麦芽糖糊精、淀粉、纤维素)、多元醇(例如，山梨醇、甘露醇、木糖醇)、环糊精(例如，α
‑
环糊精、β
‑
环糊精、χ
‑
环糊精、甲基
‑
β
‑
环糊精、羟丙基
‑
β
‑
环糊精、磺丁基
‑
β
‑
环糊精)、氨基酸(例如，盐酸精氨酸)和盐(例如，氯化钠、碳酸钙)或它们的混合物。乳糖、葡萄糖和其他化合物可以它们的水合物的形式使用。赋形剂可在粉末化过程之前、期间或之后与他汀类药物组合。
[0112]
在可吸入粉末的范围内，赋形剂可具有至多约250μm、10μm至150μm或15μm至80μm的最大平均粒径。也可将平均粒径为1μm至9μm的较细赋形剂部分加入到上述赋形剂中。可使用本领域已知的方法(例如wo 02/30389)来测定平均粒径。最后，为了制备可吸入粉末，在赋形剂混合物中加入微粉化的他汀类药物晶体，其特征在于平均粒径为约0.5μm至约10μm、或约1μm至约5μm(参见，例如wo 02/30389)。用于研磨和微粉化活性物质的方法是本领域已知的。如果不使用特别制备的赋形剂混合物作为赋形剂，则可使用平均粒径为10μm
‑
50μm，并且10％细成分含量为0.5μm
‑
6μm的赋形剂。在一些实施方案中，最大平均粒径小于约250μm、225μm、200μm、190μm、180μm、170μm、160μm、150μm、140μm、130μm、125μm、120μm、115μm、110μm、105μm、100μm、95μm、90μm、85μm、80μm、75μm、70μm、65μm、60μm、55μm、50μm、45μm、40μm、35μm、30μm、25μm、20μm、19μm、18μm、17μm、16μm、15μm、14μm、13μm、12μm、11μm、10μm、9μm、8μm、7μm、6μm、5μm、4μm、3μm、2μm或1μm。在一些实施方案中，平均粒径为至少约0.001μm、0.005μm、0.01μm、0.02μm、0.03μm、0.04μm、0.05μm、0.06μm、0.07μm、0.08μm、0.09μm、0.1μm、0.2μm、0.3μm、0.4μm、0.5μm、0.6μm、0.7μm、0.8μm、0.9μm、1.0μm、2μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、10μm、12μm、15μm、17μm、19μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、45μm或50μm。在一些实施方案中，平均粒径小于约250μm、225μm、200μm、190μm、180μm、170μm、160μm、150μm、140μm、130μm、125μm、120μm、115μm、110μm、105μm、100μm、95μm、90μm、85μm、80μm、75μm、70μm、65μ
m、60μm、55μm、50μm、45μm、40μm、35μm、30μm、25μm、20μm、19μm、18μm、17μm、16μm、15μm、14μm、13μm、12μm、11μm、10μm、9μm、8μm、7μm、6μm、5μm、4μm、3μm、2μm或1μm。
[0113]
在一种用于制备干粉制剂的方法中，将赋形剂和活性剂置于合适的混合容器中。在一些实施方案中，活性剂的平均粒径为0.5μm至10μm、1μm至6μm、或2μm至5μm。使用筛目尺寸为0.1mm至2mm、0.3mm至1mm、或0.3mm至0.6mm的筛或造粒筛加入赋形剂和活性剂。可首先将赋形剂加入混合容器中，然后再加入活性剂。在该混合过程中，可分批加入两种组分，并且在交替层中筛分两种组分。赋形剂与活性剂的混合可在仍在加入两种组分的同时进行。
[0114]
可吸入粉末也可配制成pulmosphere(参见，例如j.g.weers等人，ther deliv(2014年)第5卷第3期：第277
‑
295页；j.g.weers等人，aaps pharscitech(2019年)第20卷第3期：第103页；以及美国专利9452139，所有这些文献以引用方式并入本文)，其中对微粉化药物颗粒的混悬液进行喷雾干燥以形成粉末。另选地，粉末和混悬液可由自组装纳米颗粒配制(参见，例如n.j.kenyon等人，plos one(2013年)https://doi.org/10.1371/journal.pone.0077730)。
[0115]
吸入器
[0116]
吸入器的三种主要类型为雾化器、加压定量吸入器(pmdi)和干粉吸入器(dpi)。雾化器将药物的液体溶液或混悬液转化成细雾滴，然后被吸入肺中。雾化器通常需要比pmdi或dpi更长的时间来给药，并且由于药物在装置中和周围空气中的损失，在吸收药物的精确剂量方面不太准确。然而，它们通常最容易使用，并且可用于年龄太小而不能操作pmdi或dpi的受试者，或者无意识的受试者。雾化器通常包括容纳药物制剂的储液器、雾化腔室、面罩和用于雾化制剂的机构。在喷射式雾化器中，机构包括空气高速通过的喷嘴，该喷嘴通过毛细管向上抽吸液体制剂。制剂的液滴夹带在空气射流中，并撞击挡板，该挡板减小液滴尺寸并且/或者筛出过大的液滴。挡板还降低了空气速度，使得所产生的薄雾以较低的速度离开雾化器，并且更有可能到达下气道。由于液滴的蒸发，这些装置中的雾化过程通常还降低了制剂的温度。喷射式雾化器通常需要压缩机来产生气流，这使得这些喷射式雾化器与其他吸入器相比噪音更大，便携性也更差。
[0117]
超声雾化器采用以超声频率振动的元件将液体制剂破碎成液滴。振动元件通常是刚性网或穿孔膜。这些雾化器通常比喷射式雾化器更安静，并且不需要压缩机，但它们仍然需要电源。超声振动通常使制剂的温度升高。
[0118]
pmdi含有在压力下药物在推进剂中的溶液或混悬液，并且包括在被致动时递送精确测量的量的制剂的阀。推进剂通常是气体(诸如氢氟烷烃推进剂)，其与药物和任选的共溶剂(诸如乙醇和/或表面活性剂)组合。将制剂压缩成液态，并装入pmdi或pmdi药筒中。典型的pmdi将液体形式的制剂释放到确定剂量的量的计量腔室中。当装置被致动时，测量的制剂被释放到膨胀腔室中，推进剂在该膨胀腔室中挥发。为了有效且一致地递送药物，使用pmdi的受试者必须使其呼吸与装置的致动相协调，以确保尽可能多的量的气雾剂到达下气道。现代pmdi还可包括仅当受试者吸气时释放气雾剂的阀或传感机构。大多数pmdi还采用了隔离物，该隔离物基本上为pmdi和受试者之间的管，其提高了气雾剂递送的效率，并允许推进剂有更多的时间蒸发(产生更小的液滴)。
[0119]
dpi通常含有测量的量的干粉形式的药物，该药物任选地含有干粉载体，诸如粉末状乳糖。dpi依赖于受试者的快速吸入来分配粉末状制剂，而非形成薄雾或气雾剂。它们通
常比pmdi更容易使用，尽管递送效率部分取决于受试者能够产生的空气速度。目前正在开发由呼吸触发但有动力辅助的新版dpi。
[0120]
可使用市售吸入装置，诸如雾化器，例如但不限于soft mist
tm
吸入器；吸入器，诸如吸入器、吸入器、吸入器、吸入器等施用本公开的制剂。可提供预填充的吸入器，该预填充的吸入器含有一个或多个治疗剂量的本公开的制剂，或可被配置为接受预填充有一个或多个治疗剂量的本公开的制剂的药筒。
[0121]
例如，可使用吸入器施用可吸入粉末和气雾剂，该吸入器通过测量腔室(参见，例如us 4,570,630)或通过其他装置(参见，例如de 3625685)计量来自储液器的单剂量。在一些实施方案中，将可吸入粉末包装到胶囊或药筒中，该胶囊或药筒用于吸入器，诸如wo 94/28958中所述的吸入器。
[0122]
用于吸入器的胶囊和药筒可配制成含有所公开的化合物或药物组合物和合适的粉末基质(诸如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
[0123]
系统
[0124]
还可使用本公开的系统来实践本公开的方法，该系统包含他汀类药物或他汀类药物制剂，以及一种或多种另外的治疗剂或包含一种或多种另外的治疗剂的制剂。在本公开的系统中，他汀类药物和另外的治疗剂不需要存在于相同的制剂中，并且可在不同的时间施用。在一些实施方案中，系统包含他汀类药物，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、替伐他汀和普伐他汀，以及它们的异构体、对映异构体和非对映异构体。在一些实施方案中，该他汀类药物选自辛伐他汀、匹伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀和替伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物是疏水性他汀类药物。在一些实施方案中，该他汀类药物是辛伐他汀或匹伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物是匹伐他汀。在一些实施方案中，该他汀类药物是辛伐他汀。
[0125]
在一些实施方案中，该制剂是干粉制剂。在一些实施方案中，该制剂是气雾剂制剂。在一些实施方案中，该制剂是可雾化制剂。在一些实施方案中，该可雾化制剂包含他汀类药物的水溶液。在一些实施方案中，该可雾化制剂还包含药学上可接受的醇。在一些实施方案中，该药学上可接受的醇包括乙醇。
[0126]
另外的治疗剂可以是本公开中所述的任何另外的治疗剂。在一些实施方案中，另外的治疗剂是倍氯米松、氟替卡松、布地奈德、莫米松、氟尼缩松、阿氯米松、倍氯米松、倍他米松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、双氟可龙、氟氯龙(flurclorolone)、氟米松、氟可丁、氟可龙、氟泼尼定、氟替卡松、糠酸氟替卡松、卤米松、甲泼尼松、莫米松、糠酸莫米松、帕拉米松、泼尼立定、利美索龙、乌倍他索、安西奈德、环索奈德、地夫可特、地奈德、福美可他、氟氯缩松、氟氢缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、哈西奈德或曲安奈德或它们的组合。在一些实施方案中，另外的治疗剂是沙丁胺醇、阿福莫特罗、布酚宁、克仑特罗、博克明(bopexamine)、肾上腺素、非诺特罗、福莫特罗、异他林、异丙肾上腺素、奥西那林、左旋沙丁胺醇(levoalbutamol)、左旋沙丁胺醇、吡布特罗、丙卡特罗、利托君、沙丁胺醇、沙美特罗、特布他林、阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基炔诺醇烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异舒普林、马布特罗、甲氧那明、奥昔非君、莱克多巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗或净特罗或它们的组合。在
一些实施方案中，另外的治疗剂是沙丁胺醇。
[0127]
在一些实施方案中，另外的治疗剂是异丙托溴铵、噻托溴铵、胃长宁、格隆溴铵、雷芬那辛、芜地溴铵、阿地溴铵、曲司氯铵、氧托溴铵、奥昔布宁、托特罗定、索利那新、非索罗定、达非那新或它们的组合。在一些实施方案中，另外的治疗剂是罗氟司特、齐留通、奈多罗米、茶碱、抗il5抗体或抗体衍生物、抗ige抗体或抗体衍生物、抗il5受体抗体或抗体衍生物、抗il13/4受体抗体或抗体衍生物、美泊利单抗、瑞利珠单抗、贝那利珠单抗、奥马珠单抗、度匹鲁单抗或它们的组合。在一些实施方案中，另外的治疗剂是ts
‑
f22、at13148、gsk429286a、rki
‑
1447、y
‑
27632、ccg
‑
1423、ggti
‑
du40、ggti
‑
297、ar9281、tppu、am
‑
1172、jnj 1661010、pf
‑
3845、扎鲁司特、孟鲁司特、齐留通或它们的组合。
[0128]
在一些实施方案中，另外的治疗剂在包含该另外的治疗剂和药学上可接受的载体或溶媒的制剂中提供。在一些实施方案中，制剂适于通过吸入施用。在一些实施方案中，制剂适于口服或通过注射施用。
[0129]
另外的治疗剂可治疗与他汀类药物相同的疾病、病症或症状，或者可治疗相同疾病或病症的不同症状。在一些情况下，一种或多种他汀类药物与一种或多种另外的治疗剂的组合显示出累加效果，其中由于组合制剂而产生的反应程度与每种药剂单独施用时产生的反应程度的总和基本上相同。组合也可产生亚累加效果，其中组合产生的反应程度小于每种药剂单独施用时产生的反应程度的总和(但仍大于每种药剂单独产生的反应)，或产生协同效果，其中组合产生的反应程度大于每种药剂单独施用时产生的反应程度的总和。因此，一种或多种他汀类药物和一种或多种另外的治疗剂的组合可用于在施用给定剂量时实现更大的反应，在施用减少的剂量时实现相同的反应，或它们的任何组合。
[0130]
如果组合产生的效果程度大于期望或所需的程度，则可减少一种或两种药剂的剂量，直到达到期望的效果程度。每种药剂的剂量减少量不一定是相同的量或百分比。这可用于减少副作用，或最大程度地降低遇到副作用的可能性。因此，协同组合制剂中的一种或多种药剂的剂量可降低至这样的水平：当单独施用或作为非协同组合制剂的一部分施用时将是不足或亚治疗的，但当作为协同组合制剂的一部分施用时足以用于治疗用途。当作为根据本公开的非协同制剂的一部分通过吸入施用时，协同组合制剂中药剂的亚治疗剂量可以是该药剂的有效剂量的约90％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。
[0131]
在一些系统中，吸入的他汀类药物的施用增强了在给定的时间段之后施用的另外的治疗剂的效果，并且提供了比单独的他汀类药物或另外的治疗剂更大的治疗效果。在一些系统中，吸入的他汀类药物的施用增强了另外的治疗剂的除asm松弛外的效果。在一些系统中，另外的治疗剂在他汀类药物之后施用。在一些实施方案中，时间段为至少约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时或24小时，或约1天、2天或3天。在一些实施方案中，时间段不超过约72小时、48小时、36小时、24小时、23小时、22小时、21小时、20小时、19小时、18小时、17小时、16小时、15小时、14小时、13小时、12小时、11小时、10小时、9小时、8小时、7小时或6小时。
[0132]
在一些系统中，吸入的他汀类药物增强或增加了另外的治疗剂的抗炎效果。在一些实施方案中，增强程度是在施用剂量下另外的治疗剂的效果的约1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、2.0倍、2.5倍、3.0倍、3.5倍、4.0倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、12倍、15倍、17倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、75倍或100倍。在一些实施方案中，协同治疗效果比组合的药剂以存在于组合中的相同剂量单独施用时的总和产生的效果大10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、110％、120％、125％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、225％、250％、275％、300％、350％、400％、450％、500％、600％、700％、800％、900％或1,000％。
[0133]
在一些实施方案中，效果是抗炎效果。在一些实施方案中，另外的治疗剂是β2
‑
激动剂或抗炎皮质类固醇。在一些实施方案中，另外的治疗剂是β2
‑
激动剂。在一些实施方案中，β2
‑
激动剂是沙丁胺醇、阿福莫特罗、布酚宁、克仑特罗、博克明(bopexamine)、肾上腺素、非诺特罗、福莫特罗、异他林、异丙肾上腺素、奥西那林、左旋沙丁胺醇(levoalbutamol)、左旋沙丁胺醇、吡布特罗、丙卡特罗、利托君、沙丁胺醇、沙美特罗、特布他林、阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基炔诺醇烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异舒普林、马布特罗、甲氧那明、奥昔非君、莱克多巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗或净特罗或它们的组合。在一些实施方案中，β2
‑
激动剂是沙丁胺醇或异丙肾上腺素。
[0134]
在一些实施方案中，另外的治疗剂是皮质类固醇。在一些实施方案中，皮质类固醇是倍氯米松、氟替卡松、布地奈德、莫米松、氟尼缩松、阿氯米松、倍氯米松、倍他米松、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、双氟可龙、氟氯龙(flurclorolone)、氟米松、氟可丁、氟可龙、氟泼尼定、氟替卡松、糠酸氟替卡松、卤米松、甲泼尼松、莫米松、糠酸莫米松、帕拉米松、泼尼立定、利美索龙、乌倍他索、安西奈德、环索奈德、地夫可特、地奈德、福美可他、氟氯缩松、氟氢缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、哈西奈德或曲安奈德或它们的组合。
[0135]
治疗方法
[0136]
(a)通过吸入施用
[0137]
本公开的治疗方法基于通过吸入施用合适的他汀类药物。本公开的方法、制剂和系统治疗并非直接由炎症引起的肺病，从而提供了对用现有治疗剂不能有效或完全治疗的疾病的疗法。另外，本公开的方法、制剂和系统增强了其他治疗剂诸如β2
‑
激动剂和皮质类固醇的活性，从而提高了其他治疗剂的活性(其可包括抗炎活性)。通过吸入施用具有以下优点：(a)与呼吸道直接接触，(b)避免首过肝脏代谢，和(c)避免注射(j.l.rau，resp care(2005年)第50卷第3期：第367
‑
382页；m.ibrahim等人，med dev evidence res(2015年)第8卷：第131
‑
139页)。因为药物不经历首过代谢，并且局部施用至肺而非系统施用至全身，所以吸入药物的剂量通常小于口服施用的量。此外，本公开的增强其他治疗剂的活性的方法、制剂和系统可提供具有更高活性的治疗，或与使用较低剂量的其他治疗剂进行的现有治疗相匹配的治疗，或它们的组合。
[0138]
如本文所述，本公开的制剂借助于吸入装置(“吸入器”)进行施用，该吸入装置可以是雾化器、pmdi、dpi或能够将制剂输送到下气道中的其他装置。施用频率将取决于他汀
类药物和/或另外的治疗剂从受试者肺中的清除速率。在一些实施方案中，他汀类药物制剂施用不超过每天8次、7次、6次、5次、4次、3次、2次或1次，或不超过每2天、3天、4天、5天、6天或7天1次。在一些实施方案中，他汀类药物制剂每4天、3天或2天施用至少一次，或每天施用至少1次、2次、3次、4次、5次或6次。
[0139]
在本公开的方法中，治疗组合物直接施用至肺，因此不在肝脏中经历首过代谢。因此，制剂中的活性剂不在患者全身中稀释，也不被肝脏代谢，使得在受试者的气道中达到治疗浓度所需的量比常规口服施用所需的量少。治疗有效量将取决于待治疗的病况、病况的严重性、受试者的一般健康和状态，以及所选择的特定他汀类药物(和/或异构体、对映异构体和/或非对映异构体)。因此，在本公开的实践中，他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。在本公开的实践中，他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0140]
在一些实施方案中，他汀类药物的治疗有效量为至少约0.005μg/kg、约0.008μg/kg、约0.01μg/kg、约0.05μg/kg、约0.08μg/kg、约0.1μg/kg、约0.5μg/kg、约0.8μg/kg、约1μg/kg、约2μg/kg、约3μg/kg、约4μg/kg、约5μg/kg、约6μg/kg、约7μg/kg、约8μg/kg、约9μg/kg、约10μg/kg、约11μg/kg、约12μg/kg、约14μg/kg、约15μg/kg、约16μg/kg、约18μg/kg或约20μg/kg。在一些实施方案中，他汀类药物的治疗有效量不高于约40mg/kg、20mg/kg、18mg/kg、15mg/kg、12mg/kg、10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg或1mg/kg。
[0141]
(b)减少气道平滑肌收缩
[0142]
哺乳动物肺中的气道以气道平滑肌(asm)为内衬，该asm被一层薄的气道上皮细胞(aec)覆盖。asm是一种通过收缩和松弛而有助于肺功能调节的非随意肌肉组织，其控制气道(支气管和细支气管)的直径。在一些病症中，asm收缩不当，使气道狭窄并增加呼吸所需的努力。常规疗法试图通过阻断或减少炎性刺激来抑制收缩。在本公开的方法中，通过直接对气道施用本公开的制剂而使asm松弛。不希望受任何特定理论的束缚，本公开的方法降低收缩反应性，降低asm施加的力，并抑制asm的过度增殖(其也引起气道狭窄)。在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入施用有效量的本公开的制剂来减少asm收缩的方法。
[0143]
在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入向受试者施用治疗有效量的他汀类药物(或其异构体、对映异构体或非对映异构体)和药学上可接受的载体来减少受试者气道平滑肌(asm)收缩的方法。asm的松弛减少了呼吸阻塞，并可增加静息肺容量。因此，本公开的方法可用于治疗肺病，其特征在于或以其他方式包括受试者气道阻塞的肺病，诸如哮喘、copd、acos、囊性纤维化、支气管扩张、特发性肺纤维化、α
‑
1抗胰蛋白酶缺乏症(aatd)等中固有的支气管收缩或支气管痉挛。可对肺气道具有直接或间接作用(并因此可用本公开的方法改善)的其他肺部疾病和病症包括间质性肺病(ild)，诸如但不限于肺纤维化、特发性肺纤维化(ipf)、脱屑性间质性肺炎(dip)、急性间质性肺炎(aip)、非特异性间质性肺炎(nsip)、呼吸性细支气管炎间质性肺病(rb
‑
ild)、隐源性机化性肺炎(cop)、淋巴样间质性肺炎(lip)。可涉及肺并且可从本公开的方法受益的其他疾病和病症包括结节病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(sle)、系统性硬化症、多肌炎、皮肌炎、抗合成酶综合征、肺部感
染、超敏性肺炎，以及急性或慢性暴露于外来物质(诸如石棉、铍、二氧化硅、工业化学品和刺激性颗粒)的反应。在这些另外的肺部疾病和病症中，症状诸如气道壁厚度增加(参见，例如j.m.oldham，ann am thorac soc(2019年)第16卷第4期：第432
‑
433页；e.r.miller等人，ann am thorac soc(2019年)第16卷第4期：第447
‑
454页)可通过吸入施用他汀类药物来改善。
[0144]
asm松弛可在体外通过例如但不限于测量细胞力的方法以及通过测量肺组织样品中的气道管腔变化来确定。例如，asm收缩力可使用r.rokhzan等人，lab invest(2019年)第99卷第1期：第138
‑
145页中所述的技术来测量，其中测量了荧光珠粒在已知刚度的底物上的位移。肺组织样品中气道腔变化的测量可使用在k.r.patel等人，faseb j(2017年)第31卷第10期：第4335
‑
4346页中所述的方法来完成，其中测量了精确切割的肺切片中的气道直径。
[0145]
asm松弛可通过标准肺功能测试在体内测定，例如但不限于肺活量测定和肺容积测定。肺活量测定是对呼吸的测量，包括空气的体积和/或其被吸入或呼出的速率。典型的测量包括用力肺活量(fcv)，其中受试者尽其所能地深呼吸，并且尽可能用力地且长时间地向肺活量计呼气；1秒内用力呼气量(fev1)，其为受试者在1秒内可以呼出多少空气的测量；最大自主通气量(mvv)；用力呼气流量(fef)等。其他参数包括肺容积、肺容量、肺活量等，这些参数通常也通过肺活量测定来测量。上述值中任何值的增加表示asm松弛，因为asm松弛减少阻塞并能增加肺的肺活量。这些值中任何值的增加可针对治疗前受试者的测量值和/或针对具有相似身高、体重和性别的受试者的标准预测值来测量。本公开的方法诱导asm松弛至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、120％、130％、140％或150％。asm松弛的上限为约1,000％、900％、800％、700％、600％、500％、400％、300％、200％、100％、90％、80％、70％、60％或50％。
[0146]
用于诱导asm松弛的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。用于诱导asm松弛的他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0147]
(c)减少支气管痉挛
[0148]
支气管痉挛是细支气管的突然收缩或收紧，通常对炎症刺激反应，例如暴露于过敏原、肥大细胞脱颗粒和某些药物的施用。支气管痉挛发生在哮喘、慢性支气管炎和过敏反应中，并且可威胁生命。支气管痉挛是哮喘恶化(“哮喘发作”)的特征，通过吸入施用本公开的制剂通过降低气道高敏性和高反应性，使支气管痉挛不太可能发生，并且通过降低asm收缩力，使支气管痉挛在发生时不那么严重，来治疗支气管痉挛(和哮喘恶化)。在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入施用有效量的本公开的制剂来减少支气管痉挛的方法。
[0149]
支气管痉挛可包括例如病毒、细菌、真菌和/或分枝杆菌感染引起的感染后支气管痉挛；充血性心力衰竭引起的气道水肿；肺水肿引起的气道水肿；心源性肺水肿引起的气道水肿；非心源性肺水肿引起的气道水肿；气道水肿引起的毛细支气管炎；由于解剖变形而不是炎症引起的支气管扩张；异物吸入；食物、液体和/或胃内容物的吸入；胃食管反流病；肺
癌或肺转移性癌症，引起局部水肿和支气管痉挛；肺栓塞(其可释放因支气管痉挛引起喘息的局部因子)；气道创伤，包括手术；过敏反应和类过敏反应；神经介导的咳嗽和/或支气管痉挛；吸入性损伤相关的支气管痉挛；内分泌功能障碍相关的支气管痉挛；副肿瘤综合征相关的支气管痉挛。
[0150]
用于减少支气管痉挛的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0151]
可通过对一段时间内支气管痉挛事件(例如哮喘恶化)的次数进行计数，并将该频率与治疗前观察到的频率进行比较，来测量支气管痉挛的减少。还可通过在激发前测量受试者的肺功能(例如fev1)，然后施用一个剂量(或一系列增加的剂量)的雾化乙酰甲胆碱或组胺，然后再次测量受试者的肺功能，来测量支气管痉挛的减少。在获得基线值后，通过吸入本公开的制剂来治疗受试者，并且在适当量的时间后，再次进行激发。可在吸入本公开的制剂后约1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时或24小时或更多小时施用激发。通过激发后肺功能的改善，例如通过比较施用后的fev1和施用前但激发后的fev1，来确定支气管收缩的减少。本公开的方法使支气管痉挛减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、120％、130％、140％或150％。支气管痉挛减少的上限为约1,000％、900％、800％、700％、600％、500％、400％、300％、200％、100％、90％、80％、70％、60％或50％。
[0152]
(d)支气管收缩和粘液积聚的减少
[0153]
一些气道疾病导致支气管和细支气管的慢性收缩或阻塞，从而进一步引起粘液的积聚。这是疾病(诸如肺气肿、哮喘、copd、囊性纤维化、过敏原诱发的支气管收缩和运动诱发的支气管收缩(也称为运动诱发的哮喘))的特征。通过吸入施用本公开的制剂通过松弛asm和扩张气道来治疗支气管收缩和粘液积聚。在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入施用有效量的本公开的制剂来减少支气管收缩和/或粘液积聚的方法。
[0154]
尽管支气管收缩、支气管痉挛和asm松弛是不同的适应症，但各自的改善可通过肺功能测试(诸如肺活量测定)来测量，如上所述。本公开的方法使支气管收缩减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、120％、130％、140％或150％。支气管收缩减少的上限为约1,000％、900％、800％、700％、600％、500％、400％、300％、200％、100％、90％、80％、70％、60％或50％。用于减少支气管收缩的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。用于减少支气管收缩的他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0155]
(e)支气管高反应性的减少
[0156]
支气管高反应性(也称为bh、气道高反应性、ahr或气道高敏性)是易于触发或诱发
支气管痉挛的病况。本公开的方法，即通过吸入施用本公开的制剂，通过松弛asm并降低asm的敏感性来减少bh。在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入施用有效量的本公开的制剂来减少支气管高反应性的方法。
[0157]
由于bh是气道病症，其通常也通过肺活量测定和肺功能的其他量度来测量。例如，可在施用制剂并用触发物质(诸如雾化乙酰甲胆碱或组胺)激发后测量受试者的fef，并将其与用相同量的触发物质激发但未施用本公开的制剂后的fef进行比较。可在吸入本公开的制剂后约1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时或24小时或更多小时施用激发。本公开的方法使bh减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、120％、130％、140％或150％。bh减少的上限为约1,000％、900％、800％、700％、600％、500％、400％、300％、200％、100％、90％、80％、70％、60％或50％。用于减少bh的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。用于减少bh的他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0158]
(f)增加拉伸诱导的asm松弛
[0159]
可通过深呼吸(“深吸气”)(这拉伸了asm)来诱导asm在一定程度上松弛。本公开的方法增强、增加和/或延长了这种呼吸诱导的asm松弛(也称为呼吸诱导的支气管扩张或深吸气支气管扩张(dib))。在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入施用有效量的本公开的制剂来增强深呼吸诱导的asm松弛的方法。
[0160]
由于dib是气道功能，因此其通常也通过肺活量测定和肺功能的其他量度来测量。例如，可在施用制剂之后测量受试者的肺活量(vc)，并将其与未施用本公开的制剂的vc进行比较：vc增加与呼吸诱导的asm松弛增强相关。可在吸入本公开的制剂后约1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时或24小时或更多小时来测量vc。本公开的方法使dib增加至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、120％、130％、140％或150％。dib增加的上限为约1,000％、900％、800％、700％、600％、500％、400％、300％、200％、100％、90％、80％、70％、60％或50％。用于增强dib的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。用于增强dib的他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0161]
(g)皮质类固醇使用的减少
[0162]
吸入皮质类固醇(ics)通常用于治疗严重哮喘。然而，ics的长期使用也可具有显著的副作用，诸如发声困难、骨密度降低、皮肤变薄和瘀伤、白内障等。本公开的方法减少并治疗哮喘和其他气道疾病，从而减少受试者服用ics的需求。在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入施用有效量的本公开的制剂来减少ics需求的方法。
[0163]
可通过测量受试者的肺功能，例如通过肺活量测定，同时使用ics，对受试者应用通过吸入常规施用本公开的制剂的治疗方案，并逐渐减少ics使用的剂量或频率直至受试者的肺功能降低至受试者开始吸入他汀类药物治疗之前的肺功能的点(如果可以达到该点)，来测定ics需求的减少。本公开的方法使ics需求减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％(即，在该点他汀类药物完全替代ics)。ics需求减少的上限为约100％、90％、80％、70％、60％、50％、45％、40％、35％、30％或25％。用于减少ics需求的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。用于减少ics需求的他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0164]
(h)维持或改善肺功能的方法
[0165]
肺功能因受试者而异，运动员、登山运动员和生活在高海拔地区的受试者的肺功能通常更强(高于平均值)。改善的肺功能可通过肺活量测定来测量，并且通常表现为增加的vc或肺容量(lc)。本公开的方法还用于改善健康受试者以及患有气道病症的受试者的肺功能。例如，对于例如运动员、登山运动员、士兵、管乐师和演说家来说，肺功能增强是有利的。另外，受试者可例如在由于受伤而无法进行锻炼的时期期间，通过本公开的方法维持给定程度的肺功能。可通过肺活量测定如例如但不限于增加的vc或肺容量(lc)，来测量改善的(或维持的)肺功能。在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入施用有效量的本公开的制剂来维持或改善肺功能的方法。
[0166]
本公开的方法使肺功能增强至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、120％、130％、140％或150％(取决于受试者的起始状态)。肺功能增强的上限为约500％、400％、300％、200％、100％、90％、80％、70％、60％、50％、45％、40％、35％、30％、25％或20％。用于增强肺功能的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。用于增强肺功能的他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0167]
在一些情况下，维持肺功能比增强肺功能需要更少的他汀类药物，例如剂量可低至约0.001μg、0.005μg、0.008μg、0.01μg、0.05μg、0.08μg、0.1μg、0.5μg、0.8μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg、8μg、9μg、10μg、11μg、12μg、14μg、15μg、16μg、18μg或20μg。用于增强肺功能的他汀类药物的治疗有效量可高达约20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0168]
(i)减少asm增殖的方法
[0169]
除了任何支气管收缩之外，copd、acos、囊性纤维化和慢性哮喘还可表现出因与病理性气道重塑有关的asm过度增殖和增厚的气道狭窄。本公开的方法还减少asm增殖，从而治疗此类病症。可通过肺活量测定如维持的vc或肺容量(lc)，或通过成像方法诸如x
‑
射线或mri，来测量asm增殖的抑制。在一些实施方案中，本公开提供了通过吸入施用有效量的本
公开的制剂来减少asm增殖的方法。
[0170]
本公开的方法使asm增殖减少至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％(即，在该点未观察到asm增殖)。asm增殖减少的上限为约100％、90％、80％、70％、60％、50％、45％、40％、35％、30％或25％。用于减少asm增殖的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。用于减少asm增殖的他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0171]
(j)治疗间质性肺病的方法
[0172]
间质性肺病(ild)直接影响气道外的肺组织。然而，ild可对气道和asm具有影响，从而引起可通过本公开的方法治疗的一种或多种症状。这些症状可包括例如，asm收缩、asm过度增殖和肺容量丧失。在一些实施方案中，本公开提供了一种通过吸入施用足以减轻一种或多种症状的量的本公开的制剂来帮助治疗影响受试者气道的ild的方法。具体ild的示例如上所述。
[0173]
可使用肺活量测定(诸如fev1和lc)和成像技术(诸如x
‑
射线和mri)，来测量一种或多种ild症状的减轻。本公开的方法使至少一种ild症状减轻至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％(即，在该点不再观察到症状)。ild症状减轻的上限为约100％、90％、80％、70％、60％、50％、45％、40％、35％、30％或25％。用于减轻一种或多种ild症状的他汀类药物的治疗有效量可低至约0.005μg、约0.008μg、约0.01μg、约0.05μg、约0.08μg、约0.1μg、约0.5μg、约0.8μg、约1μg、约2μg、约3μg、约4μg、约5μg、约6μg、约7μg、约8μg、约9μg、约10μg、约11μg、约12μg、约14μg、约15μg、约16μg、约18μg或约20μg。用于减轻一种或多种ild症状的他汀类药物的治疗有效量可高达约40mg、20mg、18mg、15mg、12mg、10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg。
[0174]
在一些实施方案中，本公开提供了治疗受试者的copd的方法。copd的特征在于小气道和实质的破坏，从而导致肺功能的进行性损伤。该疾病可分为两个亚组，即慢性支气管炎和肺气肿。慢性支气管炎的特征在于传导气道的粘液分泌过多、支气管(气道管)产生炎症并最终形成瘢痕。许多患有copd的人同时具有这两种病况。
[0175]
实质疾病和脉管系统之间的相互作用在临床上通常表现为观察到患有严重copd的患者静息时具有轻度或中度肺动脉高压。在组织病理学上和微观上，copd中的肺部脉管系统的特征通常在于具有初始增厚伴平滑肌沉积以及肺泡间隔结构和微脉管系统的丧失。还观察到，在copd中，肺泡间隔和内皮细胞都经历细胞凋亡。
[0176]
copd的表现症状通常为伴有fev1(即，1秒内用力呼气量)和/或用力肺活量(fvc)下降的呼吸急促。copd患者呼吸困难，原因是其空气通道变小、发炎，并且部分肺泡受到破坏。慢性支气管炎也可通过询问患者是否有“排痰性咳嗽”(即，产生痰的咳嗽)来诊断。患者的症状是咳嗽和咳痰。慢性支气管炎可导致更频繁和严重的呼吸道感染、支气管狭窄和堵塞、呼吸困难和残疾。
[0177]
在一些实施方案中，本公开提供了治疗受试者的肺气肿的方法。肺气肿是影响肺
泡和/或最小支气管末端的慢性肺病。该病况的特征在于肺内肺泡(气囊)产生破坏性变化并增大。肺失去了弹性，因此肺的这些区域增大。这些增大的区域截留了不新鲜的空气，并且不能有效地将不新鲜的空气与新鲜空气交换。这导致呼吸困难，并且可能导致递送到血液中的氧气不足。肺气肿患者的主要症状是气短。
[0178]
在一些实施方案中，本公开提供了通过施用本公开的制剂代替受试者的当前药物或与其组合来治疗症状难以用当前药物控制的受试者的方法。
[0179]
在本公开的方法的实践中，通过吸入向有此需要的受试者施用制剂来减少受试者的气道平滑肌收缩，从而治疗肺病，其中该制剂含有治疗有效量的他汀类药物或其异构体、对映异构体或非对映异构体，以及药学上可接受的载体。
[0180]
实施例
[0181]
提供以下实施例用于指导，而无意限制本文权利要求的范围。
[0182]
来源于非哮喘和哮喘供体的原代人气道平滑肌(asm)细胞获自gift of hope organ and tissue donor network。这些细胞已在之前被充分表征(参见例如，h.yoshie等人，biophys j(2018年)第114卷第9期：第2194
‑
2199页)。所有测量均使用来自三个非哮喘供体的第5
‑
8代的细胞进行。细胞在含10％血清的f12完全培养基或不含血清但补充了胰岛素、转铁蛋白和硒的培养基(马萨诸塞州图克斯伯里的康宁公司(corning,tewksbury,ma))上生长。
[0183]
为了增强细胞摄取和可预测的细胞松弛性质，通过碱性水解将辛伐他汀内酯化学转化成辛伐他汀酸(sa)来激活辛伐他汀。在体内，水解也可通过内酯酶、对氧磷酶、碱性水解酶和羧酸酯酶在细胞内天然发生。使用默克公司(merck)提供的方案，通过打开辛伐他汀的内酯环来激活辛伐他汀。简而言之，将8mg辛伐他汀(0.019mm)溶于0.2ml100％乙醇，随后加入0.3ml 0.1n naoh。然后将溶液在砂浴中在50℃下加热2小时，再用hcl中和ph至7.2(c.c.ghosh等人，crit care med(2015年)第43卷第7期：第e230
‑
240页)。
[0184]
实施例1：asm收缩力的松弛
[0185]
以下实验证明他汀类药物可引起静息、非刺激细胞中asm的松弛。
[0186]
收缩力筛选：使人asm细胞在96孔板中在定制的nusil
tm 8100弹性底物(宾夕法尼亚州拉德诺艾万拓公司(avantor,inc.,radnor,pa))上生长至汇合(r.rokhzan等人，lab invest(2019年)第99卷第1期：第138
‑
145页)。将荧光珠粒(直径约400nm)嵌入底物表面，以便基于这些珠粒的位移计算牵引力。为了测量牵引力，使用配备有加热腔室(37℃)、单色照相机(徕卡dfc365 fx)和电动载物台的倒置落射荧光显微镜(dmi6000b，德国徕卡公司(leica inc.,germany))。在10x放大倍数下记录底物包埋的荧光珠粒的空间图像。基于珠粒相对于无细胞模型的位移(分辨率约15μm)，结合底物刚度和厚度的知识，使用傅里叶变换牵引细胞计量术的方法来计算牵引力(b.yeganeh等人，pharmacol ther(2014年)第143卷第1期：第87
‑
110页)，该方法被修改为细胞单层的情况(e.j.whalen等人，cell(2007年)第129卷第3期：第511
‑
522页)。根据每个牵引力图，计算均方根牵引力(rmst)值和应变能，并报告为单层正常收缩的量度。在逐孔的基础上，计算处理后与处理前的应变能的比率，将给定处理组的所有值归一化为每个处理组的平均值。
[0187]
他汀类药物的比较：为了确定他汀类药物对与炎症无关的收缩机制的效果，使原代asm细胞在珠粒包埋nusil
tm
(3kpa刚度)上生长，并在含有或不含甲羟戊酸(ma，100μm)的
情况下，用辛伐他汀酸(sa)、瑞舒伐他汀、普伐他汀和匹伐他汀(各1μm)处理。ma是hmgcr对hmb
‑
coa作用的直接产物，因此加入ma将逆转他汀类药物对hmgcr的抑制效果。收缩力筛选(cfs)表明，他汀类药物直接松弛基础状态的人asm(图1a)。亲脂性他汀类药物是最有效的(辛伐他汀<匹伐他汀)。相反，其他亲水性他汀类药物(诸如瑞舒伐他汀和普伐他汀)对asm细胞松弛的效果很小甚至没有效果，证实了他汀类药物效果的不同可能是由于亲脂性的差异。ma与他汀类药物的共同施用消除了他汀类药物对asm的松弛效果，表明asm的张力依赖于ma或ma途径，并证实了asm细胞中他汀类药物诱导的松弛的ma依赖性机制(图1b)。
[0188]
辛伐他汀酸(sa)、阿托伐他汀、普伐他汀和匹伐他汀用cfs检查以确定asm松弛效果的剂量反应。将剂量为0μm、0.08μm、0.4μm、2μm和10μm的辛伐他汀酸(sa)、阿托伐他汀、普伐他汀和匹伐他汀分别加入到如上所述的原代asm细胞中。在第二项实验中，将剂量为0μm、1μm和10μm的辛伐他汀酸(sa)、瑞舒伐他汀、普伐他汀和匹伐他汀分别加入到如上所述的原代asm细胞中。这些剂量反应实验进一步证实了他汀类药物对asm收缩的抑制效力根据亲脂性而变化(辛伐他汀～匹伐他汀＞阿托伐他汀>＞普伐他汀)，其中与亲脂性较低的阿托伐他汀和亲水性普伐他汀相比，亲脂性最强的他汀类药物辛伐他汀和匹伐他汀效果最显著(图1c、图1d)。
[0189]
接着，比较sa和匹伐他汀对获自三个不同的人供体的原代asm细胞的剂量依赖性效果，结果表明sa和匹伐他汀都以剂量依赖性方式松弛asm(图3)。
[0190]
在定制的96孔板(底物刚度＝3kpa)中进行细胞力测量，该板采用使用倒置荧光显微镜(10x显微镜物镜，徕卡dmi6000 b，伊利诺伊州布法罗格罗夫的徕卡显微系统公司(leica microsystems,buffalo grove,il))进行收缩力筛选的方法制备。根据每个asm力图，计算应变能(即，由可收缩的细胞赋予底物的能量，单位为pj)，以表示平均细胞收缩。
[0191]
使用细胞映射流变测定法施加明确限定的双轴拉伸(4秒持续时间，10％幅度)。根据每个asm力图，将应变能计算为平均细胞收缩的度量，并报告为相对于拉伸前基线值的倍数变化。
[0192]
使用收缩力筛选的方法，确定亲脂性他汀类药物匹伐他汀和辛伐他汀抑制asm收缩，而亲水性他汀类药物普伐他汀不抑制asm收缩(图10a)。此外，当与辛伐他汀比较时，匹伐他汀的松弛效果在24小时时更显著(图10b)。匹伐他汀的力抑制效果在治疗中止后是可逆的(图10d)。
[0193]
匹伐他汀未表现出任何细胞毒性(图10e)或肺组织毒性(图10f)。为了建立临床相关性，对匹伐他汀在获自非哮喘和哮喘人供体肺的多种asm细胞系中的效果进行了评估。另外，哮喘asm比非哮喘asm更具有收缩性(图11a)。无论供体(哮喘供体：d1
‑
d3；非哮喘供体：d4
‑
d6)或疾病状态(非哮喘与哮喘)如何，匹伐他汀都以剂量依赖性方式抑制asm收缩(图11a)。
[0194]
减少细胞凋亡：一些研究已表明，剂量足够高的他汀类药物可降低血管平滑肌细胞、上皮细胞和内皮细胞的活力(s.ghavami等人，biochim biophys acta(2014年)第1843卷第7期：第1259
‑
1271页；t.p.miettinen等人，cell rep(2015)第13卷第11期：第2610
‑
2620页)。为了确定他汀类药物介导的细胞松弛与细胞凋亡或细胞活力的丧失无关，在将asm用辛伐他汀(sa)、匹伐他汀、瑞舒伐他汀和普伐他汀以剂量依赖性方式处理24小时后，研究者按照制造商的方案，进行基于细胞的细胞凋亡/坏死测定(图2)。
[0195]
按照制造商的说明书(promega公司(promega inc))，通过在96孔白细胞培养板上培养asm细胞来进行realtime
‑
glo
tm
膜联蛋白v细胞凋亡和坏死测定。用剂量范围为0.08μm至100μm的辛伐他汀酸、瑞舒伐他汀、匹伐他汀和普伐他汀处理细胞。在该实时膜联蛋白v结合测定中，通过使用酶标仪，用发光信号检测细胞凋亡，并用荧光信号检测坏死。将地高辛(20μg/ml)用作阳性对照(图2)。
[0196]
在用至多30μm辛伐他汀(视为sa)、匹伐他汀、普伐他汀或至多100μm瑞舒伐他汀处理的细胞中未观察到细胞凋亡(图2)。这表明亲脂性他汀类药物在asm中耐受性良好。这进一步表明，在他汀类药物诱导的asm松弛中观察到的积极效果不是由细胞毒性或细胞死亡导致的。
[0197]
实施例2：组胺诱导的收缩
[0198]
进行这些实验以确定他汀类药物减少通过与组胺接触诱导的asm收缩的能力。
[0199]
将细胞用剂量为0μm、0.08μm、0.4μm、2μm、10μm或50μm的匹伐他汀和辛伐他汀酸预处理24小时，然后用组胺(10μm)刺激。匹伐他汀(图4a)和辛伐他汀(图4b)在完全培养基和无血清培养基中均显著降低组胺诱导的asm收缩(图4c)。在完全培养基中，0.08μm匹伐他汀足以抑制组胺介导的asm收缩(图4a)。然而，为了实现类似的保护，需要5
×
摩尔过量的辛伐他汀(sa)(图4b)。在无血清培养基中，0.4μm匹伐他汀和10μm辛伐他汀提供了相似程度的保护以防止组胺诱导的收缩。
[0200]
sa和匹伐他汀的时间依赖性效果表明，asm松弛效果早在4小时时就开始(图4c)。因此，本实验表明：a)匹伐他汀在防止组胺诱导的asm收缩方面的效力为sa的至少5倍，以及b)在肺中使用纳摩尔浓度的他汀类药物可足以抑制组胺介导的支气管收缩。
[0201]
通过gift of hope/regional organ bank of illinois获得非移植性非哮喘人供体肺，并按照公开的方案进行切片。简而言之，将肺叶用1.5％低熔点琼脂糖(ix型；密苏里州圣路易斯的西格玛公司(sigma,st.louis,mo))的hanks平衡盐溶液(ph＝7.4；加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(invitrogen,carlsbad,ca))填充，并使用vt1200s振动式超薄切片机(伊利诺伊州班诺克本的徕卡显微系统公司(leica microsystems,bannockburn,il))切片，产生250μm厚的切片。将切片冷冻保存至实验当天。
[0202]
在用组胺(1μm)激发之前，将切片用匹伐他汀(2μm)处理24小时。气道收缩测量为作为对组胺剂量增加的反应的管腔面积变化。在两组pcls样品中，使用fiji图像分析软件根据明场图像定量气道管腔面积。
[0203]
在人pcls的支气管气道中，匹伐他汀显著抑制1μm组胺诱导的气道收缩(图11c)。匹伐他汀增强拉伸诱导的asm力松弛(图12b)。值得注意的是，这种支气管扩张功能不是由异丙肾上腺素赋予asm的。因此，在现有的β2
‑
激动剂支气管扩张剂之外，匹伐他汀提供了新的和附加的治疗效果。
[0204]
实施例3：深呼吸松弛
[0205]
该实验表明，与β2
‑
激动剂异丙肾上腺素相比，匹伐他汀增强模拟的深呼吸的asm松弛效果。
[0206]
用匹伐他汀(1μm，24小时，n＝7)、异丙肾上腺素(10μm，30分钟，n＝6)或溶媒(n＝7)处理正常asm，并通过cfs检测，如上所述。图12a显示，与未处理的对照相比，用匹伐他汀预处理显著抑制基础asm收缩。显示了相对于未处理对照组归一化的收缩值。图12b显示，作
为对随后的模拟深呼吸(10％幅度，4秒持续时间)的单次拉伸
‑
非拉伸操作的反应，asm细胞迅速并显著地消除其收缩。收缩力在180秒内逐渐恢复。虽然所有三组的力消融是相似的，但随后的力恢复被匹伐他汀处理显著抑制(*p<0.05；****p<0.0001)。所有数据均以平均值和平均值的标准误差(sem)报告。
[0207]
实施例4：rho激酶抑制
[0208]
他汀类药物抑制动物中rho激酶(rock)的活化(a.nohria等人，atherosclerosis(2009年)第205卷第2期：第517
‑
521页)。rock在调节肌动蛋白
‑
肌球蛋白收缩中的主要底物之一是肌球蛋白轻链2(mlc2)(y.kureishi等人，j biol chem(1997年)第272卷第19期：第12257
‑
12260页)。进行这些实验以证明，他汀类药物显著降低组胺或凝血酶对rock的激活，从而降低asm收缩力。
[0209]
用于蛋白质印迹分析的针对总mlc2和磷酸化mlc2的抗体分别获自圣克鲁斯生物技术公司(santa cruz biotechnology)和cell signaling technology。针对prock1、总rock1和gapdh的抗体获自艾博抗公司(abcam)。匹伐他汀获自圣克鲁斯生物技术公司。
[0210]
在含有或不含甲羟戊酸(ma，200μm)的情况下，将人asm细胞用匹伐他汀(1μm)处理24小时，然后用组胺(10μm)处理5分钟。如图5所示，用匹伐他汀处理的asm显著降低组胺诱导的rock1磷酸化(图5a))，而ma消除了这种效果。
[0211]
将人asm细胞用匹伐他汀(1μm或10μm)处理24小时，然后用凝血酶处理(2u，30分钟)。如图5b所示，匹伐他汀(1μm或10μm)抑制凝血酶诱导的mlc2磷酸化。
[0212]
实施例5：细胞骨架抑制
[0213]
asm中的收缩力由细胞骨架介导。进行这些实验以证明，他汀类药物抑制f
‑
肌动蛋白(细胞骨架组分)的表达。
[0214]
将非哮喘的原代人asm细胞用溶媒或匹伐他汀(1μm)处理24小时。然后对细胞进行免疫染色以检测f
‑
肌动蛋白的表达。如图15a所示，匹伐他汀显著降低了基础f
‑
肌动蛋白的表达。通过蛋白质印迹分析细胞裂解物的总rock
‑
1、总rock
‑
2、总mlc
‑
2和磷酸化mlc
‑
2。如图15c和图15d所示，匹伐他汀降低了rock
‑
1、rock
‑
2和(总的和磷酸化的)mlc
‑
2的总表达。
[0215]
将非哮喘的原代人asm细胞用1μm匹伐他汀(pit)、pit与10μm ggpp或者pit与10μm ggpp加100μm ma共处理24小时。pit降低f
‑
肌动蛋白表达和asm收缩：这些降低被ggpp和ma消除(图15b)。
[0216]
实施例6：asm高收缩的减少/防止
[0217]
进行该实验以证明，他汀类药物减少或防止与任何抗炎效果无关的气道高收缩的发展。在该模型中，小鼠在出生后asm的成熟期间施用雾化乙酰甲胆碱(mch)，该mch引起高收缩表型而不诱导任何炎性反应。
[0218]
所有小鼠实验都得到了哈佛医学院附属布莱根妇女医院研究院实验动物管理和使用委员会的批准。乙酰甲胆碱诱导的高收缩小鼠模型已在k.r.patel等人，faseb j(2017年)第31卷第10期：第4335
‑
4346页中有所描述。简而言之，在p15至p20(5天)之间，每天将小鼠(c57bl/6)暴露于雾化mch(30mg/ml)中10分钟。向对照小鼠施用雾化生理盐水。这建立了mch高收缩哮喘表型，即，哮喘气道高反应性ahr的非炎性模型。在每次mch雾化前，经气管内途径(i.t.)对小鼠施用匹伐他汀(5mg/kg，五天)或溶媒对照1小时。对于气道％收缩测定，通过增加mch浓度(0.1μm
‑
100μm)来刺激小鼠精确切割的肺切片(pcl)收缩。对于每次测量，
使用来自2次独立实验的至少n＝4只小鼠，并且每个肺总共20
‑
30个气道。
[0219]
在每次mch雾化前经气管内途径(i.t.)施用匹伐他汀的预处理使气道收缩(％)在统计学上显著降低(溶媒对照22.3％与匹伐他汀7.3％，p＝0.0361，图6)。这表明匹伐他汀减少与任何抗炎效果无关的气道收缩。这进一步证实了对完整的asm收缩装置的直接作用。在分子水平上，匹伐他汀降低mlc
‑
2磷酸化(图5b)，即，调节气道高收缩的关键收缩节点。
[0220]
asm高收缩的非炎性小鼠模型表明，吸入的他汀类药物可靶向asm，以防止mch诱导的高收缩表型(图11b)。在没有出现任何气道损伤或毒性的情况下实现了这些效果(图10f)。因此，通过吸入将匹伐他汀直接递送至气道同时减弱了哮喘的两个标志性特征—气道炎症和asm收缩。
[0221]
实施例7：组合疗法
[0222]
进行该实验以证明，他汀类药物直接施用于asm不干扰β2激动剂的活性。
[0223]
将来自一个人供体肺的精确切割的人肺切片用5μm匹伐他汀或溶媒(对照)预处理24小时，并用组胺(10μm，15分钟)后处理，随后用异丙肾上腺素(30μm，另外30分钟)后处理。实验在无血清培养基条件下进行，n＝3
‑
7个气道/组。管腔狭窄的变化报告为预处理状态的百分比变化(
±
sem)(参见图13)。在预处理状态下，匹伐他汀组和对照组之间管腔气道面积的绝对值没有统计学差异。这表明匹伐他汀不干扰异丙肾上腺素的β2
‑
激动剂作用。
[0224]
进行该实验以证明，asm与他汀类药物的接触抑制炎性细胞因子(诸如嗜酸细胞活化趋化因子和il6)对il13、il17和tnfα反应的释放。
[0225]
使非哮喘的原代人asm细胞生长至汇合，并且不进行处理或者用2mm匹伐他汀和ggpp(10mm)预处理共72小时。总细胞因子刺激以10ng/ml进行18小时。如图14a所示，匹伐他汀通过ggpp依赖性机制抑制il13/tnfα诱导的嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3肽分泌。如图14b所示，匹伐他汀还通过ggpp依赖性机制抑制il17/tnfα诱导的il6肽分泌。所有实验在含血清的培养基条件(10％fbs)下进行。
[0226]
使正常的人支气管上皮细胞(细胞系hbe1)生长至汇合，并用辛伐他汀(5μm)和/或地塞米松(10
‑7m)预处理72小时。然后用il
‑
13(10ng/ml)处理细胞。如图16所示，每种治疗独立地抑制il13诱导的嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3胞外分泌，并且辛伐他汀和地塞米松的组合一起表现出对嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3分泌的协同抑制作用。
[0227]
图18显示了用适当浓度的他汀类药物进行的预处理增强了地塞米松的松弛效果。将原代人气道平滑肌细胞在含血清培养基(10％fbs)中培养至汇合，然后用0.1μm、1μm或5μm地塞米松(“dex”)和0.1μm、0.5μm或1μm浓度的匹伐他汀(“pit”)或不用匹伐他汀预处理60小时。然后将asm细胞暴露于细胞因子的混合物(10n/ml il
‑
13、il
‑
17和tnfα，“cm”)15小时，并测量嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3的表达。“nt”表示未处理。当匹伐他汀加入到各浓度的地塞米松中时，观察到嗜酸细胞活化趋化因子
‑
3表达的显著降低。这表明，他汀类药物诸如匹伐他汀增强了地塞米松的治疗效果，并且表明，吸入的他汀类药物可增强吸入的皮质类固醇的治疗效果。
[0228]
进行该实验以证明，他汀类药物对组胺诱导的asm收缩的β2
‑
激动剂松弛具有增强效果。
[0229]
在组织培养瓶中对来自非哮喘供体的原代asm细胞进行2天的血清分离，然后再在96孔牵引力测量板(3kpa刚度)中的无血清培养基中培养24小时至汇合。如上所述测定预处
理收缩力。然后将细胞用浓度为10
‑5m、10
‑6m、10
‑7m和10
‑8m的溶媒(peg400)、对照(无血清培养基)或匹伐他汀处理24小时，并测量基线收缩力。然后将asm细胞用组胺(10μm)快速处理30分钟，并测量组胺诱导的收缩力。然后将细胞用异丙肾上腺素(10
‑6m、10
‑7m、10
‑8m、10
‑9m和10
‑
11
m)处理30分钟，并测量异丙肾上腺素松弛的asm收缩力。将“组胺收缩”百分比计算为异丙基肾上腺素松弛的asm收缩力与组胺诱导的收缩力的比率。结果如图17所示，并表明，用适当浓度的他汀类药物进行的预处理增强了相关浓度的异丙肾上腺素的松弛效果。图17a显示，在10
‑
11
m异丙肾上腺素下，所有浓度的他汀类药物提供了基本相同的松弛程度，基本上与溶媒无差异。然而，10
‑7m、10
‑6m和10
‑5m匹伐他汀对10
‑9m和10
‑8m异丙肾上腺素的增强效果显著高于溶媒。图17b详细描述了图17a的方框中的数据。
[0230]
实施例8：类花生酸介质的抑制
[0231]
在本研究中，使用六只雌性恒河猴，这些恒河猴来自国际实验动物评估和认证委员会(aaalac)认证的加州国家灵长类动物研究中心(cnprc)。所有方案都得到了加州大学戴维斯分校实验动物管理和使用委员会的批准，并且符合《动物福利法》和《美国公共卫生署人道管理和使用实验动物政策》。对动物进行人道的处理，并采取护理措施以最大程度地减少和/或减轻任何疼痛或不适。研究设计如图7所示。在本研究中使用的恒河猴(n＝6)在研究开始时年龄匹配为九岁零一个月龄，并分成两个组：对照组和药物处理组。连续7天，将1mg/kg辛伐他汀或辛伐他汀溶媒(10％乙醇的pbs溶液)通过气雾剂面罩雾化40
‑
45分钟递送给动物。在每个阶段的最后一次暴露处理后一天(第8天)，对血浆、气道上皮细胞和支气管肺泡灌洗液(balf)进行采样。在他汀类药物暴露结束后五天(第12天)处死后，获得气管以及左肺和右肺组织(图8)。
[0232]
将吸入剂量的10％乙醇递送至麻醉的(10mg/kg氯胺酮 0.1mg/kg/min丙泊酚)成年雌性恒河猴，同时用由h.c.yeh等人，environ health perspect(1976年)第15卷：第147
‑
156页所述的系统改造的并流肺活量测定法气雾剂吸入系统来测量通气量。
[0233]
气雾剂用喷射式雾化器(miniheart
tm
，亚利桑那州图森的westmed公司(westmed,inc.,tucson,az))产生，其中颗粒mmad＝2.5μm，并且σg＝2。将气雾剂通过圆锥形透明塑料面罩输送，将该面罩通过柔性橡胶隔膜以及乳胶口腔橡皮障的二次密封有效地密封在每只动物的鼻子和嘴上。使用与压力换能器(mp45
‑
14型，加利福尼亚州北岭的validyne engineering公司(validyne engineering corp.,northridge,ca)和基于计算机的肺生理学平台(ponemah，明尼苏达州圣保罗的dsi公司(dsi,inc.,st.paul,mn))连接的加热的呼吸气流流速计(8300a型，密苏里州堪萨斯城的汉斯鲁道夫公司(hans rudolph,inc.,kansas city,mo))来测量通气量波动，该通气量波动提供吸入暴露期间的呼吸流量、平均分钟量和总通气量的实时测量。使用气雾剂浓度、根据空气动力学尺寸估计的沉积分数和吸入的总体积来估计剂量。
[0234]
用氯胺酮(10mg/kg)麻醉恒河猴，并用丙泊酚(0.1mg/kg/min)维持麻醉。如前所述(e.s.schelegle等人，am j pathol(2001年)第158卷第1期：第333
‑
341页)，10ml无内毒素的pbs(密苏里州圣路易斯的西格玛公司)通过支气管镜滴注。在用于每个样本之前将支气管镜用pbs冲洗三次，以排空通道并避免交叉污染。支气管镜和细胞刷作为一个整体插入气道中并从气道中取出。在收集刷检后，收集支气管肺泡灌洗液(balf)。滴注24ml或32ml pbs液体的等分试样，然后取出，对于大多数样本来说，返回了约30％
‑
50％balf。
[0235]
收集后立即将balf样品保存在冰上，以6,000rpm离心5分钟得到灌洗上清液，然后在
‑
80℃下储存。首先从右中叶收集balf，然后从左上叶中收集balf。
[0236]
用雾化辛伐他汀(1mg/kg)处理恒河猴nhp抑制两种已知为有效气道支气管收缩剂(即，白三烯b4(ltb4)和血栓烷b2(txb2)的类花生酸。在第12天(最后一次他汀类药物施用后5天)，辛伐他汀显著减少了bal液中的ltb4(*p＝0.0143)，但在肺组织中无显著变化(图9a至图9b)。在第12天，辛伐他汀显著抑制了肺组织中的txb2(*p＝0.0358)，并且bal液中txb2水平呈降低的积极趋势(p＝0.051)(图9c至图9d)。这些结果表明，即使是基础水平的促支气管收缩脂质激动剂在非炎性恒河猴肺部的气道中也会减少，这表明吸入的他汀类药物具有体内支气管保护作用。
[0237]
在第12天，对恒河猴实施安乐死，然后收集其器官，包括肺。利用基于质谱的方法，测定辛伐他汀(内酯)及其活性代谢物sa的分布。两种形式主要存在于支气管主干和下叶，在肠、肝或肌肉组织中具有相对低的水平(图9)。因此，通过吸入递送他汀类药物似乎是实现高气道分布的安全且可行的方式(图10)。
[0238]
本公开中提及的所有出版物、专利和专利申请都以引用方式并入本文，就好像每个单独的出版物或专利申请都被明确地并且单独地指出以引用方式并入。不承认本文引用的任何参考文献构成了现有技术。参考文献的讨论陈述了其作者所声称的内容，并且发明人保留质疑所引用文献的准确性和相关性的权利。应当清楚地理解，尽管本文提及了许多信息源，包括科学期刊文章、专利文献和教科书；但该提及不构成对这些文献中的任何文献形成本领域的公知常识的一部分的承认。
[0239]
虽然已经公开了本公开的特定替代方案，但是应当理解，各种修改和组合都是可能的，并且是在所附权利要求的实质和范围内考虑的。因此，无意对本文提出的确切摘要和公开内容进行限制。