嗜酸乳杆菌及其应用的制作方法

1.本发明属于微生物发酵技术领域，特别涉及一种嗜酸乳杆菌及其应用。


背景技术：

2.β
‑
烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide)，简称nmn，是一种在人体细胞能量生成中的重要物质，参与细胞内烟酰胺嘌呤二核苷酸(nad )的合成，nmn作为nad 的前体，能有效防治衰老引起的各种疾病。研究表明，nmn 在延缓衰老，治疗帕金森等老年病，调节胰岛素分泌，调控mrna的表达等方面具有医疗保健效果。人为补充nmn可以修复脑损伤，改善胰岛功能，保护心脏免于缺血再灌注损伤，对老年退行性疾病，视网膜退行性疾病等均具有一定治疗作用。
3.目前，nmn的制备主要有化学合成法、微生物发酵法和体外酶转化法。其中，化学合成法技术最为成熟，如申请号为202010223833.x的中国发明专利，公开了一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，该制备方法将烟酰胺核糖盐与偏磷酸盐进行磷酸化反应，再将烟酰胺单核苷酸盐的中间产物酸化形成β
‑
烟酰胺单核苷酸，最后再进行产物纯化，得到β
‑
烟酰胺单核苷酸纯品，但这种方法成本高且存在食品安全问题。体外酶转化法需要使用酶转化反应的各种底物，如申请号为202010474924.0的中国发明专利，公开了一种制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的方法，该方法以β
‑
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸为底物，在β
‑
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸焦磷酸酶和/或含有β
‑
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸焦磷酸酶的重组细胞的催化作用下反应生成β
‑
烟酰胺单核苷酸，但这种方法底物所需成本较高，限制了nmn 工厂化大规模生产。微生物发酵法目前使用的大肠杆菌发酵法和酵母发酵法获得的产品得率较低，无法达不到商业化生产的需求。


技术实现要素：

4.为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的菌株及使用该菌株制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的方法。
5.为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种嗜酸乳杆菌，所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)zyhcc00027，所述嗜酸乳杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为 cgmcc no.21520。
6.上述的嗜酸乳杆菌在制备β
‑
烟酰胺单核苷酸中的应用。
7.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸，由上述的嗜酸乳杆菌制备得到。
8.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
9.将上述的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)zyhcc00027进行活化，将活化后的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)zyhcc00027接种于产β
‑ꢀ
烟酰胺单核苷酸液体培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
10.本发明的有益效果在于：本发明提供了一种用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的嗜酸乳
杆菌zyhcc00027，以及采用该嗜酸乳杆菌zyhcc00027发酵β
‑
烟酰胺单核苷酸的方法，相较于现有的微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，采用该菌株进行发酵，产品得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低、达不到商业化生产的需求的问题。
具体实施方式
11.为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
12.本发明最关键的构思在于：从白桦茸表面筛选一株β
‑
烟酰胺单核苷酸高产菌株。
13.本发明提供一种嗜酸乳杆菌，采用下述方法筛选获得：
14.白桦茸粉碎后加入适量无菌生理盐水在，在无菌环境下，使用无菌勺子(或无菌搅拌棒)反复搅拌，得到分散液，然后取0.2ml分散液于无菌固体平板培养基中，涂布均匀，于28℃培养箱培养2
‑
5天至培养皿表面长出单菌落，挑取单菌落于液体培养基中培养，培养结束后测培养基中的nmn含量，挑选最优菌株；
15.培养的条件为：温度：28
‑
30℃；转速：0
‑
50rpm；培养时间：72
‑
240h。
16.固体平板培养基和液体培养基中均包括酵母粉3
‑
10重量份、蛋白胨5
‑
10重量份、葡萄糖30
‑
50重量份、核黄素胺0.1
‑
2重量份和蒸馏水100重量份，固体培养基与液体培养基的不同在于，在液体培养基中1.5％
‑
2.0％左右的琼脂，及得固体培养基。
17.一种嗜酸乳杆菌，为嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)zyhcc00027，所述嗜酸乳杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为cgmcc no.21520，保藏日期为2020年12月23日，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
18.上述的嗜酸乳杆菌在制备β
‑
烟酰胺单核苷酸中的应用。
19.一种由上述的嗜酸乳杆菌发酵得到的β
‑
烟酰胺单核苷酸。
20.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
21.将嗜酸乳杆菌zyhcc00027进行活化，将活化后的嗜酸乳杆菌 zyhcc00027接种于产β
‑
烟酰胺单核苷酸液体培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
22.从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明提供了一种用于制备β
‑ꢀ
烟酰胺单核苷酸的嗜酸乳杆菌zyhcc00027，以及采用该嗜酸乳杆菌 zyhcc00027发酵β
‑
烟酰胺单核苷酸的方法，相较于现有的微生物发酵制备β
ꢀ‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，采用该菌株进行发酵，β
‑
烟酰胺单核苷酸的得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低、达不到商业化生产的需求的问题，且发酵生产β
‑
烟酰胺单核苷酸所需生产设备、原料成本均较低，符合商业化生产低成本的需求。
23.进一步的，所述嗜酸乳杆菌的接种量为1
‑
5％。
24.进一步的，培养的条件为：温度：28
‑
30℃；转速：0
‑
50rpm；培养时间：72
‑
240h。
25.进一步的，所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸液体培养基包括酵母粉3
‑
10重量份、蛋白胨5
‑
10重量份、葡萄糖30
‑
50重量份、核黄素胺0.1
‑
2重量份。
26.由上述描述可知，嗜酸乳杆菌zyhcc00027的发酵的条件和培养基的组成对于发酵β
‑
烟酰胺单核苷酸至关重要，保证了其较高的得率。
27.本发明的实施例一为：
28.β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
29.将嗜酸乳杆菌zyhcc00027进行活化，将活化后的嗜酸乳杆菌 zyhcc00027按1％的接种量接种于产β
‑
烟酰胺单核苷酸液体培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸；
30.培养的条件为：温度：28℃；转速：50rpm；培养时间：240h；
31.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸液体培养基由酵母粉6kg、蛋白胨5kg、葡萄糖 30kg、核黄素胺0.1kg和蒸馏水100kg制成。
32.本发明的实施例二为：
33.β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
34.将嗜酸乳杆菌zyhcc00027进行活化，将活化后的嗜酸乳杆菌 zyhcc00027按2％的接种量接种于产β
‑
烟酰胺单核苷酸液体培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸；
35.培养的条件为：温度：30℃；转速：0rpm；培养时间：110h；
36.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸液体培养基由酵母粉3kg、蛋白胨10kg、葡萄糖 40kg、核黄素胺1kg和蒸馏水100kg制成。
37.本发明的实施例三为：
38.β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
39.将嗜酸乳杆菌zyhcc00027进行活化，将活化后的嗜酸乳杆菌 zyhcc00027按5％的接种量接种于产β
‑
烟酰胺单核苷酸液体培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸；
40.培养的条件为：温度：29℃；转速：20rpm；培养时间：72h；
41.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸液体培养基由酵母粉10kg、蛋白胨8kg、葡萄糖 50kg、核黄素胺2kg和蒸馏水100kg制成。
42.综上所述，本发明提供的了一种嗜酸乳杆菌zyhcc00027，该嗜酸乳杆菌 zyhcc00027可用于发酵生产β
‑
烟酰胺单核苷酸，同时本发明还提供了采用该嗜酸乳杆菌zyhcc00027发酵β
‑
烟酰胺单核苷酸的方法，相较于现有的微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，采用该菌株进行发酵，β
‑
烟酰胺单核苷酸的得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低、达不到商业化生产的需求的问题，且发酵生产β
‑
烟酰胺单核苷酸所需生产设备、原料成本均较低，符合商业化生产低成本的需求。
43.以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。