一种具有敏感皮肤屏障修复作用的冻干粉的制备方法及应用与流程

1.本发明属于化妆品技术领域，特别涉及具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的植物组合萃取物，其制备方法及应用。
技术背景
2.皮肤过敏的主要原因是皮肤屏障功能受损，其主要诱因一般包括空气污染、紫外线照射、激素和化妆品滥用，常表现为红痒、肿痛、红血丝、长痘和粉刺等过敏症状。目前市面上护肤品多集中于短期内消除敏感症状，且停用后敏感症状常容易复发。皮肤屏障是抵御紫外线等外界理化等有害因素的重要屏障，其功能受损后，一方面会使皮肤御外界刺激能力下降，保湿因子及抗炎因子减少,过敏原更容易进入皮肤，皮肤变得干燥易敏；另一方面皮肤屏障功能障碍后，皮肤角质形成细胞产生促过敏因子如tslp(胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin)，引起过敏炎症反应发生，过敏反复发作。天然植物提取物因其来源广、功效良好、安全性高等特点，而被广泛应用于护肤品中。积雪草味苦、辛，性寒，具有清热利湿，解毒消肿的功效。马齿苋含有丰富的二羟乙胺、苹果酸以及维生素e等营养物质，具有清热解毒、消肿、消炎等药用功效。仙人掌味淡而性寒，仙人掌制备成水煎液具有促进巨噬细胞的吞噬功效，可用于治疗冻伤、手癣、以及各种急性和慢性炎症。苦参性寒味苦，其主要成分是氧化苦参碱和苦参碱，具有抗菌、抗炎、抗过敏等功效。麦冬性味甘微寒，具有抗衰老、提高免疫力、降血糖等功效。寡肽为蛋白质功能片段，其具有刺激细胞增殖、促进胶原蛋白生成功能，有利于增强细胞再生能力，因而常被用于修复受损皮肤，增强细胞弹性。
3.市面上已有可以用于修复肌肤屏障的护肤品。cn109260093a公开一种具有修复皮肤屏障功效的复合制剂，所述组合物中含有甘露糖醇,积雪草提取物,胶原蛋白,寡肽1。然而目前尚无产品结合寡肽，植物提取物和植物发酵物这三种物质的功效，对受损皮肤进行屏障修复治疗，且目前，市面上产品存在对屏障损伤预防作用有限，预防时间较短等问题。因此护肤品行业需要一种能有效重建过敏后皮肤屏障，预防屏障受损的护肤品，达到加固皮肤屏障的作用，以避免肌肤修复后反复发作。


技术实现要素：

4.本发明要解决的技术问题是，一种具有敏感皮肤屏障修复作用的冻干粉的制备方法及应用所述冻干粉包含积雪草提取物、马齿苋提取物、仙人掌提取物、麦冬提取物、苦参提取物、卡瓦发酵产物、寡肽1、3、5。该组合对过敏皮肤及屏障功能受损的肌肤有一定修复作用。
5.优选的所述五种植物组合提取物（积雪草，马齿苋，仙人掌，苦参，麦冬）提取包括以下步骤：（1）仙人掌清洗去皮，果肉绞烂，苦参切片，麦冬碎成粉末，积雪草和马齿苋清洗后
捣碎。
6.（2）将步骤（1）中处理后的积雪草、马齿苋、仙人掌、苦参和麦冬混合，向植物混合物中加入纯化水和1,3丁二醇，超声提取。
7.（3）将步骤（2）中获得的混合物进行高温灭菌，搅拌破壁，冷却至低温后加入防腐剂和ph缓冲剂，随后过滤，得到五种植物组合提取液备用。
8.步骤（2）中所述积雪草、马齿苋、仙人掌、苦参和麦冬混合比例为3：2：1：2：1；步骤（2）中所述纯化水和1,3丁二醇与植物混合物比例为5：5：1；步骤（2）中所述的提取条件为30khz超声提取1小时。
9.卡瓦发酵产物制备包括以下步骤：（1）将卡瓦根茎粉碎，获得卡瓦根茎粉末；（2）向步骤（1）中所述的卡瓦根茎粉末中加入纯化水和1,3丁二醇，超声提取，获得卡瓦溶液；（3）向步骤（2）得到的卡瓦溶液中加入中和剂，调节ph为5.5。
10.（4）接种用于发酵的乳杆菌于步骤（3）中获得的卡瓦溶液，发酵后获得卡瓦发酵产物；（5）对步骤（4）中获得的卡瓦发酵产物进行灭菌、过滤。
11.步骤（2）中所述纯化水和1,3丁二醇与卡瓦根茎粉末比例为5：5：1；步骤（2）中所述的提取条件为30khz超声提取1小时。
12.所述的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的植物组合萃取物在化妆品中的应用。
13.所述化妆品可以为溶液、悬浮液、干粉、湿粉或喷剂中的任一种形式。
14.一种含植物组合萃取物的修护冻干粉,包含如下按质量百分数计的组分：水80%、甘露糖醇19%、寡肽10.01～0.03%、寡肽30.01～0.03%、寡肽50.01～0.03%、超氧化物岐化酶msod0.03～0.05%；溶媒：水94.4%、卡瓦根茎提取物0.3%～0.7%、植物组合物（积雪草，马齿苋，仙人掌，苦参，麦冬）4～5%、对羟基苯乙酮0.3～0.4%。
15.所述修护冻干粉制备工艺流程和要求：将水、甘露糖醇搅拌溶解完全，过滤。高温121
°
灭菌，冷却备用。灌装前加入寡肽1，寡肽3，寡肽5，msod原料，搅拌至完全溶解，灌装，加硅胶，启动冻干机、抽真空，出柜压盖。
16.所述溶媒工艺：将水升温至90℃，恒温20分钟，降温至80℃加对羟基苯乙酮，再降温至50℃加植物组合物，卡瓦根茎提取物。搅拌至完全溶解，出料。
17.本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：肌肤受紫外线、空气污染、化学品、激素化妆品等影响，容易导致皮肤出现一系列过敏，如红痒、肿痛、红血丝、长痘和粉刺等过敏症状等问题。本发明利用植物提取液，植物发酵液和多肽三类物的协同作用，增强单一原料的修复效果。本发明组合护肤品具有明显修复受损肌肤、重建肌肤屏障的功能。
18.实施例1一种含植物组合萃取物的修护冻干粉,包含如下按质量百分数计的组分：水80%、甘露糖醇19%、寡肽10.01%、寡肽30.03%、寡肽50.01%、超氧化物岐化酶msod0.05%；溶媒：水94.4%、卡瓦根茎提取物0.3%、植物组合物（积雪草，马齿苋，仙人掌，苦
参，麦冬）5%、对羟基苯乙酮0.3%。
19.所述五种植物组合提取物（积雪草，马齿苋，仙人掌，苦参，麦冬）提取包括以下步骤：仙人掌清洗去皮，果肉绞烂，苦参切片，麦冬碎成粉末，积雪草和马齿苋清洗后捣碎。积雪草、马齿苋、仙人掌、苦参、麦冬、纯化水、1,3丁二醇按照3：2：1：2：1：5：5的质量比例混合，随后混合物在30khz的频率下超声提取1小时。提取结束后，混合物进行灭菌，搅拌破壁，随后冷却至室温并加入防腐剂和ph缓冲剂，过滤得到五种植物组合提取液备用。
20.卡瓦发酵产物制备包括以下步骤：将卡瓦根茎粉碎，获得卡瓦根茎粉末；卡瓦根茎粉末、纯化水、1,3丁二醇按照1：5：5的质量比例混合，随后在30khz的频率下超声提取1小时，获得卡瓦溶液。卡瓦溶液中加入中和剂，调节ph至5.5。随后接种用于发酵的乳杆菌于卡瓦溶液中，发酵后获得卡瓦发酵产物；卡瓦发酵产物进行灭菌、过滤。
21.所述修护冻干粉制备工艺流程和要求：将水、甘露糖醇搅拌溶解完全，过滤。高温121℃灭菌，冷却备用。灌装前加入寡肽1，寡肽3，寡肽5，msod原料，搅拌至完全溶解，灌装，加硅胶，启动冻干机、抽真空，出柜压盖。
22.所述溶媒工艺：将水升温至90℃，恒温20分钟，降温至80℃加对羟基苯乙酮，再降温至50℃加植物组合物，卡瓦根茎提取发酵物。搅拌至完全溶解，出料。
23.实施例2一种含植物组合萃取物的修护冻干粉,包含如下按质量百分数计的组分：水80%、甘露糖醇19%、寡肽10.03%、寡肽30.02%、寡肽50.02%、超氧化物岐化酶msod0.03%；溶媒：水94.4%、卡瓦根茎提取发酵物0.7%、植物组合物（积雪草，马齿苋，仙人掌，苦参，麦冬）4.6%、对羟基苯乙酮0.3%。
24.所述五种植物组合提取物、卡瓦发酵产物制备方法、修护冻干粉制备工艺和溶媒工艺同实例1。
25.实施例3一种含植物组合萃取物的修护冻干粉,包含如下按质量百分数计的组分：水80%、甘露糖醇19%、寡肽10.02%、寡肽30.01%、寡肽50.03%、超氧化物岐化酶msod0.03%；溶媒：水94.4%、卡瓦根茎提取发酵物0.5%、植物组合物（积雪草，马齿苋，仙人掌，苦参，麦冬）4.8%、对羟基苯乙酮0.3%。
26.所述五种植物组合提取物、卡瓦发酵产物制备方法、修护冻干粉制备工艺和溶媒工艺同实例1。
27.对比例1同实施例1，区别在于冻干粉制备工艺中不加入寡肽1，而寡肽5含量改为0.02%。
28.对比例2同实施例1，区别在于冻干粉制备工艺中不加入寡肽3，而寡肽1含量改为0.02%，寡肽5含量0.03%。
29.对比例3同实施例1，区别在于冻干粉制备工艺中不加入寡肽5，而寡肽1含量改为0.02%。
30.对比例4同实施例1，区别在于溶媒工艺中不加入卡瓦根茎提取发酵物，而水含量改为
94.7%对比例5同实施例1，区别在于溶媒工艺中不加入植物组合物（积雪草，马齿苋，仙人掌，苦参，麦冬），而水改为99.4%。
31.对比例6一种含植物组合萃取物的喷雾精华水,包含如下按质量百分数计的组分：水89.65%、透明质酸钠0.05%、卡瓦根茎提取物0.3%、植物组合物（积雪草，马齿苋，仙人掌，苦参，麦冬）5%、寡肽10.01%、寡肽30.03%、寡肽50.01%、超氧化物岐化酶msod0.05%、己基乙基甘油0.4%、1.2己二醇0.5%。
32.试验例1抑制透明质酸酶能力测定将实验组分成4组并编号为a、b、c、d。向a组中加入0.5ml样品和0.5ml透明质酸酶液，b中组加入0.5ml样品和0.5ml醋酸缓冲液（ph=5.6），c组中加入0.5ml蒸馏水和0.5ml透明质酸酶液，d组中加入0.5ml蒸馏水和0.5ml醋酸缓冲液，随后将以上4组放于37℃中恒温放置20min，取出后加入0.1ml0.25mmol/lcacl2溶液，继续在37℃保温20min。向a和c组中加入0.5ml透明质酸溶液，而b和d组中加入等体积醋酸溶液，随后4组皆置于37℃中恒温40min。保温结束后，室温放置10min。向4组中分别加入0.1ml的0.4mol/lnaoh和乙酰丙酮溶液，沸水浴加热15min后，冰浴冷却5min。最后加入1.0ml埃尔利希试剂和3.0ml无水乙醇，放置20min显色，用分光光度计测定其吸光度值。计算公式：透明质酸酶抑制率(％)＝[((a
‑
b)
‑
(c
‑
d))/a
‑
b]
×
100％，表1实施案例透明质酸酶抑制率（%）实施例196实施例295实施例394对比例180对比例283对比例385对比例488对比例585对比例689由表1结果可以看出与对比例相比实施例对透明质酸酶抑制效果更显著。且实施例1冻干粉对透明质酸酶抑制效果最佳，可见本发明组合物，通过协同植物提取物，发酵物以及寡肽这三种物质的作用加强透明质酸酶抑制率，且冻干粉效果高于喷雾效果，更有利于抑制过敏反应发生。
[0033]
试验例2tslp抑制效果测定皮肤屏障损伤后，上皮细胞或角质形成细胞tslp大量表达，会造成皮肤严重瘙痒。因此，可通过测定组合物对皮肤角质形成细胞中tslp表达的抑制效果，反应护肤品对瘙痒
和皮肤屏障损伤的减轻作用。将角质形成细胞悬浮在含10％胎牛血清、1％两性霉素b和1％青霉素
‑
链霉素的dmem中，随后以1
×
105个细胞的密度接种到12孔板的每个孔中并培养4天下来，达到90%以上时，使用含浓度为1.4mm的氯化钙培养液培养2天。随后使用实施例以及对比例中的组合物进行处理，24小时后取细胞培养液，elisa法测定tslp浓度。
[0034]
表2实施案例tslp抑制（%）实施例187实施例284实施例382对比例170对比例272对比例370对比例468对比例568对比例675从表2中可以看出实施例中冻干粉对tslp抑制效果显著高于对比例，其中实施例1对tslp抑制效果为3个实施例中最佳，且组合物制成冻干粉后效果要大于喷雾。可见三种物质（植物提取物，发酵物以及寡肽）搭配有利于减缓皮肤瘙痒，避免皮肤屏障二次受损，过敏反应反复发作。
[0035]
试验例3重建肌肤屏障性能测试经皮失水值tewl，采用德国courage khazaka（ck）公司的tewameter测定；皮肤表皮含水量采用ck公司的corneometer测定；皮肤弹性修护，采用ck公司皮肤弹性测试仪mpa580；皮肤ph检测，使用ck公司ph meter测定。皮肤颜色变化采用日本柯尼卡美能达公司的chromameter cr400测量。
[0036]
实验方法：选取60名干性肌肤人群，随机分成10组，每组6名，受试者实验前15天在受试部位不能涂抹任何产品。测试前受试者用清水清洗双前臂，并在20
±
2℃、相对湿度为50％的环境中静坐30min。随后测定受试者前臂皮肤在第0天，掌侧前臂皮肤的twel值、表皮含水量、色斑黑色素含量、皮肤ph值以及皮肤弹性。随后使用胶带粘贴前臂皮肤16次以损伤皮肤屏障，记录4小时后皮肤的掌侧前臂皮肤的皮肤油脂含量、twel值、表皮含水量、色斑黑色素含量、皮肤ph值以及皮肤弹性（50名志愿者测试结果平均值为twel（g/cm2）值31、表皮含水量（au）30、皮肤颜色变化a*22、皮肤ph值7以及皮肤弹性0.66）。
[0037]
每组中挑选一名成员作为对照，其余小组成员，在随后的3天中，每天在损伤部位涂抹样品两次（使用时冻干粉与溶媒混合，充分混合后涂抹），早晚各一次，并在第二天早晨测试每组成员皮肤的上述指标。实验数据如下表所示：表3
表4表5
实验数据显示，使用实施例1
‑
3志愿者的表皮含水量、皮肤弹性随测试时间增加逐渐上升，皮肤颜色变化和tewl值则逐渐下降，皮肤ph值在使用2天后恢复至在最适范围内。然而使用对比例1
‑
6的志愿者皮肤中各项指标改善效果明显低于实施例。对比例6中所制备的喷雾中由于同样加入了三种物质，其效果稍高于其他对比例，但效果仍然不及制备成冻干粉后的组合物（实施例1）效果显著。可见志愿者在使用修复皮肤组合物后皮肤屏障的修复和重建能力得到提高，肌肤缩水性能增强，对皮肤屏障受损导致的干燥起皮达到理想的缓解功效。
[0038]
试验例4过敏预防性能选取60名曾患有炎症过敏症状，并经过治疗修复后的志愿者，随机分成10组，每组6名志愿者。连续使用样品24天，测定受试者前臂皮肤在第0天和第24天掌侧前臂皮肤的皮肤油脂含量、tewl值、表皮含水量、皮肤颜色变化、皮肤ph值以及皮肤弹性情况。
[0039]
表6
表7
由表5、6结果可看出，使用本实施例1
‑
3修复皮肤组合物的志愿者，在使用24天后皮肤表皮含水量、皮肤弹性增加，皮肤颜色变化、tewl值下降，ph维持在正常范围内。与对比例1
‑
6相比，实施例1
‑
3对皮肤各项指标的改善情况更显著，其中实施例1效果最佳。实验结果表明本发明冻干粉产品，能有效补充皮肤水分含量，防止水分蒸发，同时有效保护细胞屏障，能较好的提高亚健康和过敏恢复后肌肤的预防能力。