靶向STAT1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法与流程

靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法
技术领域
1.本发明涉及一种治疗免疫性血小板减少症药物的应用，属于生物医药领域，特别是涉及一种靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用方法。


背景技术：

2.免疫血小板减少症(itp)是一种获得性自身免疫性疾病，其特点是血小板计数低，并伴有增加出血并发症的风险。itp的年发病率约为每10万名儿童2至6例，每10万名成人3例。重要的是，itp还继发于许多其他疾病，包括系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病、癌症和病毒疾病，如丙型肝炎(hcv)、艾滋病和新型冠状病毒肺炎(covid
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19)等。另外近期报道部分新冠疫苗也可引起itp风险。itp是一种多细胞机制累积的结果，包括血小板生成受阻、自身抗体介导的巨噬细胞对血小板的吞噬和破坏，或杀伤性t细胞的直接毒性等。在itp的复杂病理因素中，巨噬细胞吞噬功能的增强引发血小板的过度破坏是itp发病机制中最重要的环节之一。然而，对于itp微环境中巨噬细胞如何调控血小板吞噬的研究缺乏深入，这也阻碍了针对巨噬细胞吞噬血小板并最终治愈itp的治疗策略和药物开发。
3.目前治疗目标是停止活动性出血并降低未来出血的风险。如果患者有活动性大出血，则需要紧急治疗。适当、具体的措施包括停用抗凝剂和抗血小板药物，并使用血小板输注、糖皮质激素、静脉注射免疫球蛋白(ivig)或联合使用所有这些药物/手段。对糖皮质激素无初始反应或停用糖皮质激素后血小板计数反复下降的itp患者的药物治疗包括血小板生成素受体激动剂、利妥昔单抗和福司他替尼。然而itp治疗需长期用药，多数病人对糖皮质激素不敏感，ivig等注射剂患者顺应性不高，口服药物如艾曲波帕等的临床试验表明上述治疗药物起效时间长，有效期短、病程易复发，且伴随显著的骨髓抑制等副作用，非药物治疗的脾切除术无预测指标，且病人纳入标准高，非首选治疗手段。
4.具体地说，艾曲波帕是一种血小板生成素受体激动剂，由美国食品和药物管理局(fda)批准，并作为每日片剂(有饮食限制)使用，在给药后1至2周内起效，通常需要持续治疗以维持效果。仅有10
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30％的患者在接受血小板生成素受体激动剂数月或数年后可停止治疗，大部分病人发生晚期复发。在安全性方面，主要风险是静脉血栓栓塞的风险增加，其他不良反应包括肝脏转氨酶水平升高等。
5.利妥昔单抗是最广泛应用于itp患者的免疫调节剂，虽然它没有被fda批准用于该适应症。回顾性研究显示60％的患者使用利妥昔单抗后itp有部分缓解，有效率高，在给药后1至2周内起效，连续给药6个月时部分病人症状完全缓解，且维持时间长(2年以上)。尽管itp患者中很大一部分会复发，但大多数患者对利妥昔单抗再治疗有反应。在不良反应方面利妥昔单抗可增加轻微感染，极罕见进行性多灶性脑白质病。
6.福司他替尼是一种口服酪氨酸激酶(syk)抑制剂，于2018年获fda批准，适用于有先前失败治疗史的itp患者。有效性较艾曲波帕和利妥昔单抗低(总应答率约43％，稳定应答效率约18％)，平均反应时间为15天。常见不良反应有腹泻、高血压、转氨酶升高和恶心
等。其他免疫调节剂如霉酚酸酯、硫唑嘌呤、氨苯砜和达那唑也被临床应用于itp患者。支持其使用的数据很大程度上局限于回顾性观察研究，约30
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60％的患者有药物应答反应。
7.除药物治疗外，脾切除术仍然是itp最有效的治疗方法，在60
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70％的患者中引起了持久的缓解。然而，由于出现了有效的治疗药物，而脾切除术的潜在并发症，以及无法预测哪些患者会有反应的问题，导致考虑脾切除术的通常是限于对标准药物治疗无反应或不能接受标准药物治疗且确诊后至少一年(允许病情缓解)的患者。脾切除术的短期风险包括手术和术后并发症，长期包括静脉血栓栓塞和败血症。脾切除术患者细菌感染风险增加，需要反复接种疫苗。其他血管并发症如冠状动脉疾病、中风和慢性血栓栓塞性肺动脉高压也有偶有报道。
8.综上所述，目前治疗itp的手段和药物较为局限，而针对巨噬细胞吞噬血小板的生理过程开发的药物或治疗策略，从抑制血小板体内清除的角度，从根本上提升血小板数量，是目前临床手段的极大拓展和补充，并且两种药物属于老药新用，安全性高，副作用小，具有广大的应用前景。


技术实现要素：

9.本发明主要解决的技术问题是如何提供针对巨噬细胞吞噬血小板的生理过程开发的药物或治疗策略的靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及应用方法。
10.为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用。
11.在一个较佳实施例中，所述应用为活化抑制剂提升血小板的数量。
12.在一个较佳实施例中，所述抑制剂为氟达拉滨。
13.在一个较佳实施例中，所述应用为入核抑制剂提升血小板数量。
14.在一个较佳实施例中，所述抑制剂为伊维菌素。
15.一种靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用方法，抑制剂为氟达拉滨，包括如下步骤：
16.s1：称取stat1活化抑制剂氟达拉滨；
17.s2：将步骤s1称取的stat1活化抑制剂氟达拉滨溶于dmso中；
18.s3：使用生理盐水稀释步骤s2中的dmso，
19.其中，稀释后的溶液中dmso终体积含量为0
‑
5％。
20.一种靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用方法，抑制剂为伊维菌素，包括如下步骤：
21.ss1：称取stat1入核抑制剂伊维菌素；
22.ss2：将步骤s1称取的stat1入核抑制剂伊维菌素溶于dmso中；
23.ss3：使用生理盐水或医用玉米油稀释步骤ss2中的dmso，
24.其中，稀释后的溶液中，dmso终体积含量范围为0
‑
5％。
25.在一个较佳实施例中，在步骤ss3的稀释过程中，当步骤ss2中的dmso为低浓度时采用生理盐水进行稀释。
26.在一个较佳实施例中，在步骤ss3的稀释过程中，当步骤ss2中的dmso为高浓度时
采用注射用玉米油进行稀释。
27.本发明的有益效果是：本发明中氟达拉滨为阿糖腺苷的氟化核苷酸类似物，无放射性，是一种小分子磷酸化抑制剂，同时，伊维菌素是输入蛋白α/β1介导的细胞核导入的一种小分子抑制剂，二者生物利用度高，被广泛的运用于治疗各种血液系统疾病，安全性好，同时被应用于治疗免疫性血小板减少症，安全有效，顺应性高。
附图说明
28.为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：
29.图1是本发明靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法的对照和itp(adap
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)小鼠给予氟达拉滨(fludarabine,50mg/kg)或生理盐水治疗4天后血小板计数。
30.图2是本发明靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法的对照和itp(adap
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)小鼠给予伊维菌素(1mg/kg和3mg/kg)治疗5天后血小板计数。
31.图3是本发明靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法的对照和itp(adap
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)小鼠给予生理盐水治疗5天后血小板计数。
32.图4是本发明靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法对照和itp(adap
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‑
)小鼠给予伊维菌素(1mg/kg和3mg/kg)治疗5天后脾脏巨噬细胞表面fc受体的表达的荧光谱图。
33.图5是本发明靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法对照和itp(adap
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)小鼠给予生理盐水治疗5天后脾脏巨噬细胞表面fc受体的表达的荧光谱图。
34.图6是本发明靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法对照和itp(adap
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)小鼠给予伊维菌素(1mg/kg和3mg/kg)治疗5天后脾脏巨噬细胞表面fc受体的表达的平均荧光强度图。
35.图7是本发明靶向stat1抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用及方法对照和itp(adap
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)小鼠给予生理盐水治疗5天后脾脏巨噬细胞表面fc受体的表达的平均荧光强度图。
36.图8是本发明应用stat1制备治疗免疫性血小板减少症的氟达拉滨的方法的流程示意图。
37.图9是本发明应用stat1制备治疗免疫性血小板减少症的伊维菌素的方法的流程示意图。
具体实施方式
38.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范
围。
39.实施例1
40.一种stat1入核/活化抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用，所述应用为stat1活化抑制剂提升血小板的数量，所述抑制剂为氟达拉滨。
41.实施例2
42.一种stat1入核/活化抑制剂在治疗免疫性血小板减少症中的应用，所述应用为stat1入核抑制剂提升血小板数量，所述抑制剂为伊维菌素。
43.实施例3
44.一种应用stat1活化抑制剂制备治疗免疫性血小板减少症的氟达拉滨溶液的方法，包括如下步骤：
45.s1：称取stat1活化抑制剂氟达拉滨；
46.s2：将步骤s1称取的stat1活化抑制剂氟达拉滨溶于dmso中；
47.s3：使用生理盐水稀释步骤s2中的dmso，
48.其中，稀释后的溶液中dmso终体积含量为0
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5％。
49.实施例4
50.一种应用stat1入核抑制剂制备治疗免疫性血小板减少症的伊维菌素溶液的方法，包括如下步骤：
51.ss1：称取stat1入核抑制剂伊维菌素；
52.ss2：将步骤s1称取的stat1入核抑制剂伊维菌素溶于dmso中；
53.ss3：使用生理盐水或医用玉米油稀释步骤ss2中的dmso，
54.其中，稀释后的溶液中，dmso终体积含量范围为0
‑
5％。
55.在步骤ss3的稀释过程中，当步骤ss2中的dmso为低浓度时(0
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5％)采用生理盐水进行稀释。
56.在步骤ss3的稀释过程中，当步骤ss2中的dmso为高浓度(＞5％)时采用注射用玉米油进行稀释。
57.实施例5
58.一种应用stat1活化抑制剂氟达拉滨提升血小板数量，治疗免疫性血小板减少症的方法，包括以下操作步骤：
59.1、称取适量stat1活化抑制剂氟达拉滨溶于dmso后，用生理盐水稀释使dmso终体积含量不高于5％，稀释后立即使用。
60.2、给药方式为静脉注射，剂量为50mg/kg，连续一周。
61.实施例6
62.一种应用stat1入核抑制剂伊维菌素提升血小板数量，治疗免疫性血小板减少症的方法，包括以下操作步骤：
63.1、称取适量stat1入核抑制剂伊维菌素溶于dmso后，低浓度用生理盐水、高浓度用注射用玉米油稀释使dmso终体积含量不高于5％。稀释后立即使用。
64.2、给药方式为腹腔注射，剂量为1mg/kg或3mg/kg，连续一周。
65.在具体的试验过程中，我们给出了具体的实验数据参考图，具体的，在图中：
66.图1是对照和itp(adap
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)小鼠给予氟达拉滨(fludarabine,50mg/kg)或生理盐
水治疗4天后血小板计数，其中，对照小鼠wt,n＝4；itp小鼠adap
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，n＝4。
67.图2是对照和itp(adap
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)小鼠给予伊维菌素(1mg/kg和3mg/kg)治疗5天后血小板计数，对照小鼠wt,n＝4；itp小鼠adap
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，n＝4。
68.图3是对照和itp(adap
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)小鼠给予生理盐水治疗5天后血小板计数，对照小鼠wt,n＝4；itp小鼠adap
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，n＝4。
69.图4是对照和itp(adap
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)小鼠给予伊维菌素(1mg/kg和3mg/kg)治疗5天后脾脏巨噬细胞表面fc受体的表达，图中所示为采用流式细胞仪(facs)测定fcγri和fcγriv的荧光谱图。
70.图5是对照和itp(adap
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)小鼠给予生理盐水治疗5天后脾脏巨噬细胞表面fc受体的表达，图中所示为采用流式细胞仪(facs)测定fcγri和fcγriv的荧光谱图。
71.图6是对照和itp(adap
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)小鼠给予伊维菌素(1mg/kg和3mg/kg)治疗5天后脾脏巨噬细胞表面fc受体的表达，图中所示为为直方图表示平均荧光强度。
72.图7是对照和itp(adap
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)小鼠给予生理盐水治疗5天后脾脏巨噬细胞表面fc受体的表达，图中所示为为直方图表示平均荧光强度。
73.通过上述实施例，我们研究发现，
74.1)从药物作用机制上说，我们发现itp患者及小鼠脾脏内adap基因低水平与血小板计数低存在相关关系，分子机制研究表明adap与stat1相互作用并竞争与stat1的核穿梭受体importin 5的结合。在itp的组织微环境中，adap的缺失或水平降低增加了stat1
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importin 5复合物的组装，促进了stat1核进入，导致巨噬细胞中吞噬受体fcγri/iv的转录选择性增强。因此，抑制stat1或靶向stat1
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importin 5的相互作用可以缓解血小板减少。
75.2)我们用adap敲除小鼠作为itp模型小鼠，筛选潜在的治疗药物。在该itp小鼠模型中，每日剂量的stat1活性抑制剂(氟达拉滨)治疗，剂量为50mg/kg可显著提高外周血小板数量，6天后达到与对照小鼠相当的水平。stat1入核抑制剂(伊维菌素)在1mg/kg或3mg/kg治疗后，在第3天可诱导对照和itp小鼠血小板计数升高。并且当以3mg/kg的剂量治疗itp小鼠时，itp小鼠的血小板计数显著增加，达到与对照小鼠相当的水平。此外，伊维菌素处理降低了脾脏巨噬细胞吞噬手提fcγri和fcγriv的表达，降低了巨噬细胞活化程度，抑制血小板清除，从而提升血小板数量。
76.因此，本发明具有以下优点：
77.1、氟达拉滨为阿糖腺苷的氟化核苷酸类似物，无放射性，是一种小分子磷酸化抑制剂，生物利用度高，被广泛的运用于治疗各种血液系统疾病，安全性好，应用于治疗免疫性血小板减少症拓展其适用范围，安全有效，顺应性高。
78.2、伊维菌素是输入蛋白α/β1介导的细胞核导入的一种小分子抑制剂，通过干扰nls对hiv、denv和sars
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cov2等病毒蛋白的识别而具有强大的抗病毒活性，安全性好，应用于治疗免疫性血小板减少症拓展其适用范围，安全有效，顺应性高。
79.以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。