用于在治疗癌症中增强效力的IL-4/IL-13途径抑制剂的制作方法

用于在治疗癌症中增强效力的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂
技术领域
1.本公开内容涉及用于治疗癌症的方法，其包括向有此需要的对象施用与治疗有效量的程序性死亡1(programmed death 1，pd
‑
1)抑制剂组合的治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在某些实施方案中，所述il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂增强pd
‑
1阻断的抗肿瘤效力。


背景技术：

2.2型免疫在多种癌症类型中促进肿瘤生长和转移。数种2型相关细胞因子、趋化因子或受体与癌症有关，并在多种人肿瘤中过表达。例如，il
‑
4、il
‑
13、il
‑
4rα和il
‑
33在多种人癌症类型中过表达，并且与膀胱癌、乳腺癌或卵巢癌的不良预后相关(joshi et al.，cancer med.，3(6)：1615
‑
28，2014；formentini et al.，int j colorectal dis.，27(10)：1369
‑
76，2012)；tong et al.，mol oncol.10(1)：113
‑
25，2015)。2型免疫的特征在于产生许多2型细胞因子和趋化因子(例如，il
‑
4、il
‑
13、胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin，tslp)、il
‑
33)，并且通常在变应性应答或抗寄生物感染期间在组织中观察到。2型免疫应答也促进组织修复响应和纤维化(wynn，nat rev immunol.，15(5)：271
‑
82，2015；gieseck et al.，nat rev immunol.，18(1)：62
‑
76，2017)。
3.胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma，pdac)是美国癌症相关死亡的第三主要原因，5年存活率为8％。这种极其不良的预后在很大程度上是因为pdac对于大多数治疗都是难治性的。特别地，免疫检查点阻断(immune checkpoint blockade，icb)免疫治疗(例如，抗pd
‑
1或抗细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic t
‑
lymphocyte
‑
associated protein 4，ctla
‑
4))未能在pdac患者中提供临床响应。pdac中强药物抗性的一个关键促进因素是其独特的促结缔组织增生性基质——由癌症相关的成纤维细胞、免疫细胞和大量胞外基质组分组成的致密的纤维化和基质反应——其用作药物灌注和t细胞浸润的物理屏障，并且创建了抑制t细胞功能的深刻免疫抑制环境(olive et al.，science，324(5933)：1457
‑
61，2009；provenzano et al.，cancer cell，21(3)：418
‑
29，2012；feig et al.，proc natl acad sci usa.，110(50)：20212
‑
17，2013)。
4.临床前研究已表明，il
‑
13、il
‑
4r或tslp的遗传消融或阻断可在胰腺癌、乳腺癌和结直肠癌中降低肿瘤生长和转移负担。另外，显示血清il
‑
4和tslp在胰腺癌患者中预测存活(piro et al.，oncoimmunology 6(9)：e1322242，2017；de monte et al.，j exp med，208(3)：469
‑
78，2011)。2型免疫依赖性肿瘤发生的机制包括诱导纤维化形成、抑制抗肿瘤监视或提高葡萄糖和谷氨酰胺癌细胞代谢(denardo et al.，cancer cell，16(2)：91
‑
102，2009；liou et al，cell rep.，19(7)：1322
‑
33，2017；pedroza
‑
gonzalez et al.，j exp med，208(3)：479
‑
90，2011；venmar et al.，biochim biophys acta，1853(5)：1219
‑
28，2015；ostrand
‑
rosenberg et al.，j.immunol.，165：6015
‑
19，2000)。总的来说，这些数据表明2型免疫在多种癌症类型中促进肿瘤生长和转移。
5.因此，需要新且有效的治疗来治疗癌症，包括特征在于2型免疫应答的癌症和癌症类型亚组以及对先前治疗具有抗性的癌症。
6.发明概述
7.在一个方面中，所公开的技术涉及治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，其包括：(a)选择患有肿瘤的对象；以及(b)向有此需要的对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的程序性死亡1(pd
‑
1)抑制剂。在一个实施方案中，对象患有选自以下的肿瘤：结直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、脑癌、宫颈癌、膀胱癌、肛门癌、子宫癌、结肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、子宫内膜癌、骨癌、睾丸癌、皮肤癌、肾癌、胃癌、食管癌、头颈癌、唾液腺癌、骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤(hodgkin’s lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤(non
‑
hodgkin’s lymphoma)、滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤(lymphoplasmacytoid lymphoma)、边缘区淋巴瘤(marginal zone lymphoma)、套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、弥漫性大b细胞淋巴瘤、b细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、伯基特淋巴瘤(burkitt’s lymphoma)、急性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病和b细胞慢性淋巴细胞白血病。在一个实施方案中，肿瘤包括2型免疫依赖性癌症。在另一个实施方案中，2型免疫依赖性癌症包括胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、脑癌、皮肤癌、前列腺癌、肾癌、肺癌、霍奇金淋巴瘤或膀胱癌。在另一个实施方案中，肿瘤包括胰腺癌。在一个实施方案中，肿瘤是原发性、转移性或复发性的。在一个实施方案中，对象已用一种或更多种抗癌治疗进行治疗。在一个实施方案中，对象患有对先前治疗具有抗性或响应不充分的肿瘤。在一个实施方案中，对象患有对用免疫检查点抑制剂(例如，pd
‑
1抑制剂、lag3抑制剂等)进行的治疗具有抗性或无响应性的肿瘤。
8.在一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂选自抗il
‑
4抗体、抗il
‑
13抗体、抗il
‑
4/il
‑
13双特异性抗体、il
‑
4受体(il
‑
4receptor，il
‑
4r)抑制剂、il
‑
4捕获剂(trap)、il
‑
13捕获剂和抗il
‑
4r抗体。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是抗il
‑
4抗体(例如，帕考珠单抗(pascolizumab))。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是抗il
‑
13抗体(例如曲罗芦单抗(tralokinumab)、来瑞组单抗(lebrikizumab)、德屈库单抗(dectrekumab)、gsk679586或medi7836)。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是抗il
‑
4/il
‑
13双特异性抗体(例如，若奇单抗(romilkimab))。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是il
‑
4r抑制剂(例如，il
‑
4突变蛋白，例如匹曲白滞素(pitrakinra)或抗il
‑
4r抗体)。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是抗il
‑
4r抗体。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是il
‑
4或il
‑
13捕获剂。
9.在另一个实施方案中，抗il
‑
4r抗体包含含有seq id no：1的氨基酸序列的重链可变区(heavy chain variable region，hcvr)和含有seq id no：2的氨基酸序列的轻链可变区(light chain variable region，lcvr)。在另一个实施方案中，hcvr包含三个重链互补决定区(complementarity determining region，cdr)(hcdr1、hcdr2和hcdr3)，并且lcvr包含三个轻链cdr(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中：hcdr1具有seq id no：3的氨基酸序列；hcdr2具有seq id no：4的氨基酸序列；hcdr3具有seq id no：5的氨基酸序列；lcdr1具有seq id no：6的氨基酸序列；lcdr2具有seq id no：7的氨基酸序列；并且lcdr3具有seq id no：8的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗il
‑
4r抗体包含重链和轻链，其中重链具有seq id no：9的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗il
‑
4r抗体包含重链和轻链，其中轻链具有seq id no：10的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗il
‑
4r抗体包含重链和轻链，其中重链具有seq id no：9的氨基酸序列并且轻链具有seq id no：10的氨基酸序列。在另一个实施方
案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是度匹鲁单抗(dupilumab)或其生物等同物。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂选自：度匹鲁单抗、帕考珠单抗、amg317、medi2045、medi9314、曲罗芦单抗、来瑞组单抗(lebrikzimab)、安卢珠单抗(anrukinzumab)、德屈库单抗、gsk679586、medi7836、若奇单抗、il
‑
4捕获剂、il
‑
13捕获剂、aer
‑
003和匹曲白滞素。
10.在一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂选自抗pd
‑
1抗体、抗pd
‑
l1抗体和抗pd
‑
l2抗体。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂是抗pd
‑
1抗体，其包含含有seq id no：11的氨基酸序列的hcvr和含有seq id no：12的氨基酸序列的lcvr。在另一个实施方案中，hcvr包含三个重链cdr(hcdr1、hcdr2和hcdr3)，并且lcvr包含三个轻链cdr(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中：hcdr1具有seq id no：13的氨基酸序列；hcdr2具有seq id no：14的氨基酸序列；hcdr3具有seq id no：15的氨基酸序列；lcdr1具有seq id no：16的氨基酸序列；lcdr2具有seq id no：17的氨基酸序列；并且lcdr3具有seq id no：18的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗pd
‑
1抗体包含seq id no：11/12的hcvr/lcvr序列对。在另一个实施方案中，抗pd
‑
1抗体包含重链和轻链，其中重链具有seq id no：19的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗pd
‑
1抗体包含重链和轻链，其中轻链具有seq id no：20的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗pd
‑
1抗体包含重链和轻链，其中重链具有seq id no：19的氨基酸序列并且轻链具有seq id no：20的氨基酸序列。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂是西米普利单抗(cemiplimab)或其生物等同物。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂是选自以下的抗pd
‑
1抗体：西米普利单抗、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、皮地利珠单抗(pidilizumab)、medi0608、bi 754091、pf
‑
06801591、信迪利单抗(sintilimab)、agen2034、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)、jnj
‑
63723283和mcla
‑
134。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂是选自以下的抗pd
‑
l1抗体：h1h8314n、阿维单抗(avelumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、度伐单抗(durvalumab)、mdx
‑
1105、ly3300054、faz053、sti
‑
1014、cx
‑
072、kn035和ck
‑
301。
11.在另一个实施方案中，一个或更多个剂量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂与一个或更多个剂量的抗pd
‑
1抗体组合施用。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的至少一个剂量包含约0.1至约50mg/kg对象体重。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的至少一个剂量包含约0.05至约1000mg的抑制剂。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂的至少一个剂量包含约0.1mg/kg至约20mg/kg对象体重。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂的至少一个剂量包含约0.05至约500mg的抑制剂。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂在pd
‑
1抑制剂之前施用。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂在pd
‑
1抑制剂之后施用。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂与pd
‑
1抑制剂同时施用。在另一个实施方案中，所述方法在患者中促进肿瘤消退、延迟肿瘤生长、降低肿瘤细胞负荷、降低肿瘤负担、和/或防止肿瘤复发。在另一个实施方案中，与未经治疗对象或用任一种抑制剂作为单一治疗进行治疗的对象相比，所述方法在经治疗对象中促进至少约10％的更多的的肿瘤消退。在另一个实施方案中，与未经治疗对象或用任一种抑制剂作为单一治疗进行治疗的对象相比，所述方法导致肿瘤细胞或肿瘤尺寸降低至少30％或更多。
12.在另一个实施方案中，所述方法还包括施用至少一种另外的治疗剂或疗法。在另一个实施方案中，另外的治疗剂或疗法包括化学治疗、环磷酰胺、手术、辐射、癌症疫苗、lag3抑制剂、ctla
‑
4抑制剂、gitr激动剂、tim3抑制剂、btla抑制剂、tigit抑制剂、cd47抑制
剂、ido抑制剂、vegf拮抗剂、ang2抑制剂、tgfβ抑制剂、egfr抑制剂、vista抑制剂、cd38抑制剂、cd40激动剂、csf1r抑制剂、ccr2抑制剂、cxcr4抑制剂、cxcr2抑制剂、ccr4抑制剂、cxcl12抑制剂、cd28激活剂、共刺激受体的激动剂、针对肿瘤特异性抗原的抗体、抗cd3/抗cd20双特异性抗体、gm
‑
csf、细胞毒素、化学治疗剂、溶瘤病毒、il
‑
6r抑制剂、il
‑
10抑制剂、细胞因子或其衍生物(例如il
‑
12或il
‑
2)、adc、嵌合抗原受体t细胞、抗炎药、nsaid、和/或膳食补充剂。
13.在另一个方面中，所公开的技术涉及药物递送系统，其包含：(a)包含il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和可药用载体的药物组合物；以及(b)包含程序性死亡1(pd
‑
1)抑制剂和可药用载体的药物组合物。在一个实施方案中，药物组合物(a)和(b)彼此分开。在另一个实施方案中，药物组合物(a)包含一个或更多个剂量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在另一个实施方案中，至少一个剂量包含约5至1000mg的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在另一个实施方案中，药物组合物(b)包含一个或更多个剂量的pd
‑
1抑制剂。在另一个实施方案中，至少一个剂量包含约5至500mg的pd
‑
1抑制剂。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂选自：抗il
‑
4抗体、抗il
‑
13抗体、抗il
‑
4/il
‑
13双特异性抗体、il
‑
4受体(il
‑
4r)抑制剂、il
‑
4捕获剂、il
‑
13捕获剂和抗il
‑
4r抗体。在另一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂选自：度匹鲁单抗、帕考珠单抗、amg317、medi2045、medi9314、曲罗芦单抗、来瑞组单抗、安卢珠单抗、德屈库单抗、gsk679586、medi7836、若奇单抗、il
‑
4捕获剂、il
‑
13捕获剂、aer
‑
003和匹曲白滞素。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂选自抗pd
‑
1抗体、抗pd
‑
l1抗体和抗pd
‑
l2抗体。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂是选自以下的抗pd
‑
1抗体：西米普利单抗、纳武单抗、派姆单抗、皮地利珠单抗、medi0608、bi 754091、pf
‑
06801591、信迪利单抗、agen2034、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、jnj
‑
63723283和mcla
‑
134。在另一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂是选自以下的抗pd
‑
l1抗体：h1h8314n、阿维单抗、阿特珠单抗、度伐单抗、mdx
‑
1105、ly3300054、faz053、sti
‑
1014、cx
‑
072、kn035和ck
‑
301。
14.在另一个实施方案中，所述药物递送系统还包含选自以下的至少一种另外的治疗剂：环磷酰胺、癌症疫苗、lag3抑制剂、ctla
‑
4抑制剂、gitr激动剂、cd28激活剂、tim3抑制剂、btla抑制剂、tigit抑制剂、cd38抑制剂、cd47抑制剂、ido抑制剂、vegf拮抗剂、ang2抑制剂、tgfβ抑制剂、egfr抑制剂、vista抑制剂、cd40激动剂、csf1r抑制剂、ccr2抑制剂、cxcr4抑制剂、cxcr2抑制剂、ccr4抑制剂、cxcl12抑制剂、共刺激受体的激动剂、针对肿瘤特异性抗原的抗体、抗cd3/抗cd20双特异性抗体、gm
‑
csf、细胞毒素、化学治疗剂、il
‑
6r抑制剂、il
‑
10抑制剂、溶瘤病毒、细胞因子、adc、嵌合抗原受体t细胞、抗炎药、nsaid和膳食补充剂。在另一个实施方案中，所述药物递送系统用于治疗肿瘤或抑制肿瘤生长。在另一个实施方案中，肿瘤包括2型免疫依赖性癌症。
15.在另一个方面中，所公开的技术涉及药盒(kit)，其包含具有(a)包含il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和可药用载体的药物组合物，(b)包含pd
‑
1抑制剂和可药用载体的药物组合物的药物递送系统；以及将il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂与pd
‑
1抑制剂组合使用以治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的说明书(written instructions)。
16.在另一个方面中，所公开的技术涉及il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂，其用于与pd
‑
1抑制剂组合治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的每种抑制剂。在另一个方面中，所公开的技术涉及pd
‑
1抑制剂，其用于与il
‑
4/il
‑
13途径
抑制剂组合治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的每种抑制剂。
17.附图简述
18.图1a是示出了以下的线图：根据实施例1中所述的研究，自基线时的30至110mm3肿瘤体积起的肿瘤体积降低。星号(*)指示相对于同种型对照(igg)的统计学显著性程度。
19.图1b是示出了以下的条形图：根据实施例1中所述的研究，个体动物中从基线时的30至110mm3肿瘤体积至第38天的肿瘤体积的百分比变化。
20.图2a是示出了以下的线图：根据实施例1中所述的重复研究，自基线时的50至110mm3肿瘤体积起的肿瘤体积降低。星号(*)指示相对于同种型对照(igg)的统计学显著性程度。
21.图2b是示出了以下的条形图：根据实施例1中所述的重复研究，个体动物中从基线时的50至110mm3肿瘤体积至第38天的肿瘤体积的百分比变化。
22.图3a是示出了以下的条形图：皮下(sub
‑
cu)或原位(ortho)植入改造成表达致癌kras并伴随p53肿瘤抑制子功能损失的同基因胰腺肿瘤类器官细胞(kp细胞)的balb/c小鼠中相对于正常的il
‑
4和il
‑
13mrna的表达，如实施例3中所述。
23.图3b是示出了以下的条形图：皮下(sub
‑
cu)或原位(ortho)植入改造成表达致癌kras并伴随p53肿瘤抑制子功能损失的同基因胰腺肿瘤类器官细胞(kp细胞)的balb/c小鼠中的il
‑
4细胞因子产生，如实施例3中所述。
24.图4a是示出了以下的线图：根据实施例4中所述的研究，从基线时的70至100mm3肿瘤体积至第40天的肿瘤体积降低。星号(*)指示相对于同种型对照(igg)的统计学显著性程度。
25.图4b是示出了以下的条形图：根据实施例4中所述的研究，个体动物中从基线时的70至100mm3肿瘤体积至第40天的肿瘤体积的百分比变化。
26.图4c是示出了以下的一对条形图：在实施例4中所述的研究结束时在肿瘤裂解物中测量到的全身性干扰素γ(interferon gamma，ifng)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha，tnfa)的细胞因子水平。
27.图5a是示出了以下的条形图：根据实施例5中所述的研究，个体动物中从基线时的50至100mm3肿瘤体积至研究结束的肿瘤体积的百分比变化。
28.图5b是示出了以下的条形图：根据实施例5中所述的研究，针对四个处理组：iso/iso、il
‑
4r/iso、iso/pd
‑
1和il
‑
4r/pd
‑
1，如通过使用生物素化ha结合蛋白(ha
‑
binding protein，habp)进行的组织化学染色方法表示的胰腺肿瘤中的透明质酸(hyaluronic acid，ha)含量。
29.图5c是示出了以下的条形图：根据实施例5中所述的研究，针对四个处理组：iso/iso、il
‑
4r/iso、iso/pd
‑
1和il
‑
4r/pd
‑
1，如通过肿瘤浸润淋巴细胞(tumor
‑
infiltrating lymphocyte，til)标志物cd8的组织学量化表示的肿瘤床(tumor bed)内的cd8 t细胞浸润。
30.发明详述
31.应当理解，本公开内容不限于所述的特定方法和实验条件，因为这样的方法和条件可变化。还应理解，本文中使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而非旨在限制，并且本公开内容的范围将仅由所附权利要求书限制。
32.除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与所公开的本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本文中使用的术语“约/大约”在与特定记载的数值相关使用时，意味着值可与记载的值相差不超过1％。例如，本文中使用的表述“约100”包括99和101以及其间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
33.尽管类似于或等同于本文中所述的方法和材料的任何方法和材料可用于本公开内容的实践中，但是现在描述的是一些优选的方法和材料。
34.本公开内容包括用于治疗癌症的方法，其包括向有此需要的对象施用与治疗有效量的程序性死亡1(pd
‑
1)抑制剂组合的治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在一些实施方案中，所公开方法在癌症中靶向2型免疫依赖性促肿瘤发生机制，从而提供了用于治疗肿瘤(包括表现出促结缔组织增生特征的那些)或抑制其生长的新且高度有效的方法。在一些实施方案中，所公开方法使用与抗肿瘤剂组合的il
‑
4r阻断或靶向2型免疫应答途径的其他免疫治疗来治疗2型免疫依赖性癌症，所述抗肿瘤剂包括但不限于icb(例如化学治疗、双特异性抗体、抗体药物缀合物(antibody drug conjugate，adc)和嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)t细胞)。
35.本文中使用的“2型免疫基因特征”是指以下的上调或过表达：一种或更多种的2型细胞因子、2型趋化因子、2型受体和2型下游靶基因，包括但不限于il
‑
13ra2、il25、ill7rb、serpinb2、ccl24、ceacam1、ccl1、muc5b、ccl26、il
‑
13ra1、postn、il6r、ccl18、ccl17、fcer2、ccr3、il6、ccl8、crlf2、il33、tslp、il
‑
4r、ccr4、ptgdr、fcer1a、il1rl1、dpp4、il
‑
4、il5和il
‑
13。例如，如实施例3中所表明的，发现il
‑
4和il
‑
13基因表达在胰腺癌(2型免疫依赖性癌症)的体内模型中大量上调。
36.本文中使用的“2型免疫依赖性癌症”是指显示强的2型免疫基因特征的癌症或癌症亚组，例如人癌症或人癌症亚组。
37.本文中使用的“2型免疫途径阻断”是指靶向2型免疫基因特征的任何基因的免疫治疗。
38.治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法
39.本公开内容包括用于在对象中治疗癌症、改善或降低癌症的至少一种症状或适应证的严重程度，或者抑制癌症生长的方法。在该方面中，所公开方法包括选择患有肿瘤的对象，以及向有此需要的对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂(例如，抗il
‑
4抗体、抗il
‑
13抗体、抗il
‑
4/il
‑
13双特异性抗体、il
‑
4受体(il
‑
4r)抑制剂、抗il
‑
4r抗体或任何其他“il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂”，如本文中所述)和治疗有效量的程序性死亡1(pd
‑
1)抑制剂(例如，特异性地结合pd
‑
1、pd
‑
l1和/或pd
‑
l2的抗体，或任何其他“pd
‑
1抑制剂”，如本文中所述)。
40.在本公开内容中，提供了对任何特定抗il
‑
4r抗体和/或任何特定抗pd
‑
1抗体的参考以分别举例说明代表性il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和代表性pd
‑
1抑制剂，并且不限制本公开内容的范围，因为也可使用其他il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和pd
‑
1抑制剂的组合。
41.本文中使用的术语“治疗(treating)”、“治疗(treat)”等意指减轻或降低至少一种症状或适应证的严重程度，以在暂时或永久的基础上消除症状的起因，延迟或抑制肿瘤生长，降低肿瘤细胞负荷或肿瘤负担，促进肿瘤消退，引起肿瘤收缩、坏死和/或消失，防止肿瘤复发，预防或抑制转移，抑制转移性肿瘤生长，消除对手术的需要，缩小肿瘤并有助于
手术，提高切除率，和/或提高对象的存活持续时间。在许多实施方案中，术语“肿瘤”、“癌症”和“恶性肿瘤”可互换使用并且是指一种或更多种生长物。
42.在一些实施方案中，肿瘤包括2型免疫依赖性癌症。2型免疫依赖性癌症的一些实例包括但不限于胰腺癌(例如pdac)、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、肺癌、淋巴瘤和膀胱癌。
43.本文中使用的表述“有此需要的对象”意指表现出癌症的一种或更多种症状或适应证和/或已被诊断出患有癌症(包括实体瘤)并且需要对其进行治疗的人或非人哺乳动物。在许多实施方案中，术语“对象”和“患者”可互换使用。本文中所公开方法可包括选择有此需要的对象的步骤。例如，人对象可能被诊断出患有原发性或转移性肿瘤和/或具有一种或更多种症状或适应证，包括但不限于一个或更多个淋巴结增大、腹部肿胀、胸痛/胸闷(chest pain/pressure)、不明原因的体重损失、发热、盗汗(night sweat)、持续疲劳、食欲不振(loss of appetite)、脾增大、瘙痒。该表述包括患有原发性、确定性或复发性肿瘤的对象。在一些具体实施方案中，该表述包括患有和/或需要治疗实体瘤的人对象。在另一些实施方案中，该表述包括患有和/或需要治疗血红素肿瘤(heme tumor)(例如，淋巴瘤或白血病)的人对象。该表述还包括患有原发性或转移性肿瘤(晚期恶性肿瘤)的对象。该表述还包括患有以下的对象：肿瘤，其包含2型免疫依赖性癌症，包括但不限于胰腺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌和霍奇金淋巴瘤。
44.在某些实施方案中，该表述包括患有对先前治疗(例如，用抗癌剂例如il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂单一治疗、pd
‑
1抑制剂单一治疗、卡铂或多西他赛(docetaxel)进行的治疗)具有抗性或难治性或者不能被所述先前治疗充分控制的肿瘤的患者。在某些实施方案中，该表述包括患有已用一种或更多种先前治疗线进行治疗(例如，手术去除)但随后复发的肿瘤的患者。在某些实施方案中，该表述包括这样的患有肿瘤的对象，其不是治愈性手术或治愈性辐射的候选者，或者常规抗癌治疗对其来说不可取，例如由于毒副作用。
45.在另一些实施方案中，表述“有此需要的对象”包括患有已进行治疗但随后复发或转移的恶性肿瘤的患者。例如，患有肿瘤的患者可能已经接受用一种或更多种抗癌剂进行的治疗，从而导致肿瘤消退；然而，随后复发了对一种或更多种抗癌剂具有抗性的癌症(例如，化学治疗抗性癌症)，可用本公开内容的方法进行治疗。在某些实施方案中，该表述包括表现出至少一种细胞因子(例如il
‑
4和/或il
‑
13)上调的患者。在某些实施方案中，该表述包括表现出至少一种细胞因子的产生提高，例如il
‑
4的产生提高的患者。在某些实施方案中，该表述包括表现出肿瘤中透明质酸(ha)含量提高的患者。
46.根据某些实施方案，本公开内容包括用于治疗肿瘤、延迟或抑制肿瘤生长的方法。在某些实施方案中，本公开内容包括促进肿瘤消退的方法。在某些实施方案中，本公开内容包括降低肿瘤细胞负荷或降低肿瘤负担的方法。在某些实施方案中，本公开内容包括提高经治疗对象的存活、提高响应或提高响应持续时间的方法。在一些实施方案中，本公开内容包括在患有以下的对象中治疗肿瘤或抑制肿瘤生长的方法：胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌、脑癌、皮肤癌、肾癌、卵巢癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、霍奇金淋巴瘤或膀胱癌。
47.在一些实施方案中，所公开方法包括施用与另外的治疗剂或疗法(例如，方案或操作)组合的治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂。在某些实施方案中，所公开方法包括施用另外的治疗剂，例如抗癌药。本文中使用的“抗癌药”意指可用于治疗癌症的任何药剂，包括但不限于细胞毒素以及药剂例如抗代谢药、烷化剂、蒽环素、
抗生素、抗有丝分裂剂、丙卡巴肼(procarbazine)、羟基脲、天冬酰胺酶、皮质类固醇、米托坦(mytotane)(o，p
′‑
(ddd))、生物制剂(例如抗体和干扰素)和放射性药剂。本文中使用的“细胞毒素或细胞毒性剂”也指化学治疗剂并且意指对细胞有害的任何药剂。一些实例包括：(紫杉醇(paclitaxel))、替莫唑胺(temozolamide)、细胞松弛素b(cytochalasin b)、短杆菌肽d(gramicidin d)、溴化乙锭、依米丁(emetine)、顺铂、丝裂霉素、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinbiastine)、秋水仙碱(coichicin)、多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神霉素(mithramycin)、放线菌素d(actinomycin d)、1
‑
去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)和嘌呤霉素(puromycin)，及其类似物或同源物。可施用另外的治疗剂或疗法以提高抗肿瘤效力、降低一种或更多种治疗的毒性作用和/或降低一种或更多种治疗的剂量。在多个实施方案中，另外的治疗剂或疗法可包括以下中的一种或更多种：化学治疗、环磷酰胺、手术、辐射、癌症疫苗、淋巴细胞活化基因3(lymphocyte activation gene 3，lag3)抑制剂(例如抗lag3抗体)、细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4(ctla
‑
4)抑制剂(例如伊匹单抗(ipilimumab))、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(gitr)激动剂(例如抗gitr抗体)、含t细胞免疫球蛋白和黏蛋白
‑
3(t
‑
cell immunoglobulin and mucin containing
‑
3，tim3)抑制剂、b和t淋巴细胞弱化子(b
‑
and t
‑
lymphocyte attenuator，btla)抑制剂、具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体(tigit)抑制剂、cd47抑制剂、吲哚胺
‑
2，3
‑
双加氧酶(ido)抑制剂、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)拮抗剂(例如，“vegf捕获剂(vegf
‑
trap)”例如阿柏西普(aflibercept)或如us 7,087,411中所示的另一些vegf抑制性融合蛋白，或者抗vegf抗体或其抗原结合片段(例如，贝伐单抗(bevacizumab)或兰尼单抗(ranibizumab))或vegf受体的小分子激酶抑制剂(例如，舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)或帕唑帕尼(pazopanib)))、血管生成素2(angiopoietin
‑
2，ang2)抑制剂(例如，奈伐苏单抗(nesvacumab))、转化生长因子β(transforming growth factor beta，tgfβ)抑制剂、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，egfr)抑制剂(例如，埃罗替尼(erlotinib)、西妥昔单抗(cetuximab))、共刺激受体的激动剂(例如cd28的激动剂)、vista抑制剂、cd38抑制剂、cd40激动剂、csf1r抑制剂、ccr2抑制剂、cxcr4抑制剂、cxcr2抑制剂、ccr4抑制剂、cxcl12抑制剂、针对肿瘤特异性抗原[例如，ca9、ca125、黑素瘤相关抗原3(melanoma
‑
associated antigen3，mage3)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，cea)、波形蛋白、肿瘤m2
‑
pk、前列腺特异性抗原(prostate
‑
specific antigen，psa)、黏蛋白
‑
1、mart
‑
1和ca19
‑
9]的抗体、抗cd3/抗cd20双特异性抗体、疫苗(例如卡介苗(bacillus calmette
‑
guerin))、粒细胞
‑
巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte
‑
macrophage colony
‑
stimulating factor，gm
‑
csf)、细胞毒素、化学治疗剂、il
‑
6r抑制剂(例如沙利鲁单抗(sarilumab))、il
‑
10抑制剂、细胞因子例如il
‑
2、il
‑
7、il
‑
12、il
‑
21和il
‑
15、抗体
‑
药物缀合物(adc)(例如抗cd19
‑
dm4 adc和抗ds6
‑
dm4 adc)、溶瘤病毒、嵌合抗原受体t细胞(例如cd19靶向t细胞)、抗炎药例如皮质类固醇、非甾体抗炎药(non
‑
steroidal anti
‑
inflammatory drug，nsaid)和膳食补充剂，例如抗氧化剂。
[0048]
在某些实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和pd
‑
1抑制剂可与治疗包括化学治疗
剂(例如，达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺、环磷酰胺、多西他赛、多柔比星、柔红霉素、顺铂、卡铂、吉西他滨(gemcitabine)、甲氨蝶呤、米托蒽醌、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇和长春新碱)和/或手术组合施用。在某些实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和pd
‑
1抑制剂可与抗肿瘤治疗组合施用，所述抗肿瘤治疗包括但不限于常规抗肿瘤治疗，例如化学治疗、辐射、手术或如本文中其他地方所述。
[0049]
在某些实施方案中，所公开方法在经治疗对象中导致肿瘤生长抑制提高——例如，肿瘤消退更大。例如，与未经治疗对象或用任一种抑制剂作为单一治疗进行治疗的对象相比，所公开的施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的方法在经治疗对象中促进至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％或约80％的更多的肿瘤消退。
[0050]
在某些实施方案中，与未经治疗对象或用任一种抑制剂作为单一治疗进行治疗的对象相比，所公开的施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的方法在经治疗对象中导致肿瘤生长和发展的延迟，例如肿瘤生长可延迟约3天、超过3天、约7天、超过7天、超过15天、超过1个月、超过3个月、超过6个月、超过1年、超过2年或超过3年。
[0051]
在某些实施方案中，所公开的施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的方法导致所有肿瘤细胞迹象完全消失(“完全响应”)，导致肿瘤细胞或肿瘤尺寸降低至少30％或更多(“部分响应”)，或者导致肿瘤细胞(包括新的可测量肿瘤)完全或部分消失。肿瘤降低可通过本领域已知的任何方法来测量，所述方法例如x射线、正电子发射断层成像(positron emission tomography，pet)、计算机断层成像(computed tomography，ct)、磁共振成像(magnetic resonance imaging，mri)、细胞学、组织学或分子遗传学分析。
[0052]
在某些实施方案中，与施用“标准护理”(standard
‑
of
‑
care，soc)治疗(例如，化学治疗、手术或辐射)的对象相比，所公开的施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的方法导致对象的总存活(overall survival，os)或无进展存活(progression
‑
free survival，pfs)提高。在某些实施方案中，与施用任意一种或更多种soc治疗的对象相比，pfs提高了至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少1年、至少2年或至少3年。在某些实施方案中，与施用任意一种或更多种soc治疗的对象相比，os提高了至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少1年、至少2年或至少3年。
[0053]
在某些实施方案中，与未经治疗对象或用任一种抑制剂作为单一治疗进行治疗的对象相比，所公开的施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的方法在经治疗对象中导致响应和响应持续时间均提高，例如，提高超过2％、超过3％、超过4％、超过5％、超过6％、超过7％、超过8％、超过9％、超过10％、超过20％、超过30％、超过40％或超过50％。
[0054]
在某些实施方案中，所施用抑制剂的组合是安全的并且被对象良好地耐受，使得与用任一种抑制剂作为单一治疗进行治疗的对象相比不良副作用没有提高。
[0055]
在某些实施方案中，所公开方法包括向对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑
制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂，其中对象表现出至少一种细胞因子(例如il
‑
4和/或il
‑
13)的上调。在一些实施方案中，与不需要抗肿瘤治疗的对象相比，对象表现出至少一种细胞因子(例如，il
‑
4和/或il
‑
13)的更大上调。
[0056]
在某些实施方案中，所公开方法包括向对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂，其中对象表现出至少一种细胞因子的产生提高，例如il
‑
4的产生提高。在一些实施方案中，与不需要抗肿瘤治疗的对象相比，对象表现出至少一种细胞因子(例如，il
‑
4)的产生提高。
[0057]
在某些实施方案中，与用任一种抑制剂作为单一治疗进行治疗的对象相比，所公开的向对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的方法导致干扰素γ(ifng)的产生显著提高。在一些这样的实施方案中，这些所公开方法还导致肿瘤消退和抗肿瘤活性的增强。
[0058]
在某些实施方案中，所公开方法包括向对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂，其中对象表现出肿瘤中透明质酸(ha)含量提高。在一些这样的实施方案中，与未患有2型免疫依赖性癌症的对象相比，对象表现出更高的ha含量。
[0059]
在某些实施方案中，所公开的向对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的方法导致肿瘤中透明质酸(ha)含量降低。
[0060]
在某些实施方案中，所公开的向对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的方法导致肿瘤浸润淋巴细胞(til)密度显著提高，从而增强了组合治疗的细胞毒性抗肿瘤效力。在一些这样的实施方案中，这些所公开方法还导致肿瘤消退和抗肿瘤活性的增强。
[0061]
il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂
[0062]
本文中所公开方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。本文中使用的“il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂”(在本文中也称为“il
‑
4/il
‑
13途径拮抗剂”、“il
‑
4/il
‑
13途径阻断剂”等)是抑制或减弱以下中至少一种的任何药剂：(i)il
‑
4和/或il
‑
13与其各自受体的结合；(ii)il
‑
4和/或il
‑
13的信号传导和/或活性；和/或(iii)由il
‑
4和/或il
‑
13与其各自受体结合产生的下游信号传导/活性。示例性il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂包括但不限于抗il
‑
4抗体(例如，美国专利7740843和美国专利申请公布20100297110、20160207995中公开的抗体)、抗il
‑
13抗体(例如，美国专利7501121、7674459、7807788、7910708、7915388、7935343、8088618、8691233、9605065，美国专利申请公布20060073148、20080044420和ep2627673b1中公开的抗体)、与il
‑
4和il
‑
13结合的双特异性抗体(例如，美国专利8388965、美国专利申请公布20110008345、20130251718、20160207995中公开的抗体)和il
‑
4受体(il
‑
4r)抑制剂(下文所述)。在本文中引用的出版物中鉴定il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的部分在此通过引用并入。
[0063]
在一些实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂可以是抗体、小分子化合物、核酸、多肽，或者其功能片段或变体。合适的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂抗体的一些非限制性实例包括抗il
‑
4抗体、抗il
‑
13抗体和抗il
‑
4/il
‑
13双特异性抗体、抗il
‑
4r抗体，以及前述任一种的抗原结合片段。合适的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的另一些非限制性实例包括：rnai分子例如抗il
‑
4 rnai分子和抗il
‑
13 rnai，反义分子例如抗il
‑
4反义rna和抗il
‑
13反义rna，以及显性负蛋白例如显性负il
‑
4蛋白、显性负il
‑
13蛋白。
[0064]
本文中使用的“il
‑
4r抑制剂”(本文中也称为“il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂”、“il
‑
4rα拮抗剂”、“il
‑
4r阻断剂”、“il
‑
4rα阻断剂”等)是与il
‑
4rα或il
‑
4r配体结合或相互作用并抑制或减弱1型和/或2型il
‑
4受体的正常生物信号传导功能的任何药剂。1型il
‑
4受体是包含il
‑
4rα链和γc链的二聚体受体。2型il
‑
4受体是包含il
‑
4rα链和il
‑
13rα1链的二聚体受体。1型il
‑
4受体与il
‑
4相互作用并受其刺激，而2型il
‑
4受体与il
‑
4和il
‑
13二者相互作用并受其刺激。因此，可用于本公开内容的方法中的il
‑
4r抑制剂可通过阻断il
‑
4介导的信号传导、il
‑
13介导的信号传导或il
‑
4和il
‑
13介导的信号传导二者来发挥作用。本公开内容的il
‑
4r抑制剂因此可防止il
‑
4和/或il
‑
13与1型或2型受体的相互作用。
[0065]
il
‑
4r抑制剂类别的一些非限制性实例包括il
‑
4突变蛋白(例如匹曲白滞素)、小分子il
‑
4r抑制剂、抗il
‑
4r适配体、基于肽的il
‑
4r抑制剂(例如“肽体(peptibody)”分子)、“受体
‑
体(receptor
‑
body)”(例如，包含il
‑
4r组分的配体结合结构域的经改造分子)和特异性地结合人il
‑
4rα的抗体或抗体的抗原结合片段。本文中使用的il
‑
4r抑制剂还包括特异性地结合il
‑
4和/或il
‑
13的抗原结合蛋白。
[0066]
可在本公开内容的上下文中使用的合适的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的另一些非限制性实例包括例如匹曲白滞素(aer
‑
001；bay
‑
16
‑
9996)、aeroderm(aer
‑
003)，以及本领域称为且已知为以下的抗体：度匹鲁单抗、帕考珠单抗、amg
‑
317、milr1444a、cat
‑
354、qax576、安卢珠单抗(ima
‑
638)、isis
‑
369645(air
‑
645)、ima
‑
026、apg
‑
201、cnto
‑
607、mk
‑
6105、medi9314、medi2045、曲罗芦单抗、来瑞组单抗、若奇单抗和dom
‑
0910。
[0067]
抗il
‑
4rα抗体及其抗原结合片段
[0068]
根据本公开内容的某些示例性实施方案，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是抗il
‑
4rα抗体或其抗原结合片段。本公开内容通篇中使用的术语“抗体”包括包含通过二硫键互连的四个多肽链，两个重(h)链和两个轻(l)链的免疫球蛋白分子，及其多聚体(例如，igm)。在典型的抗体中，每个重链包含重链可变区(本文中缩写为hcvr或v
h
)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，c
h
1、c
h
2和c
h
3。每个轻链包含轻链可变区(本文中缩写为lcvr或v
l
)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(c
l
1)。v
h
和v
l
区可进一步细分为称为互补决定区(complementarity determining region，cdr)的高变区，散布有称为框架区(framework region，fr)的更保守区域。每个v
h
和v
l
由从氨基末端至羧基末端按以下顺序排列的三个cdr和四个fr构成：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。在本公开内容的不同实施方案中，抗体(或其抗原结合部分)的fr可以与人种系序列相同，或者可以是天然或人工修饰的。可基于两个或更多个cdr的并行分析来限定氨基酸共有序列。
[0069]
本公开内容通篇使用的术语“抗体”包括其抗原结合片段——即，完全抗体分子的抗原结合片段。本公开内容通篇使用的术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括特异性地结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、可酶促获得的、合成的或经遗传改造的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段可使用任何合适的标准技术，例如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变结构域和(任选地)恒定结构域的dna的操作和表达的重组遗传改造技术，例如从完全抗体分子得到。这样的dna是已知的和/或可容易地从例如商业来源、dna文库(包括例如噬菌体
‑
抗体文库)获得，或者可以合成。可对dna进行测序并且通过化学方法或通过使用分子生物学技术进行操作，例如以将一个或更多个可变和/或恒定结构域排列成合适的构型，或者以引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或缺失氨基酸等。
[0070]
抗原结合片段的一些非限制性实例包括：(i)fab片段；(ii)f(ab
′
)2片段；(iii)fd片段；(iv)fv片段；(v)单链fv(scfv)分子；(vi)dab片段；以及(vii)由模拟抗体的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元(例如，分离的互补决定区(cdr)，例如cdr3肽)，或受约束的fr3
‑
cdr3
‑
fr4肽。本公开内容通篇使用的表述“抗原结合片段”内还涵盖另一些经改造分子，例如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、cdr接枝抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体(minibody)、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块化免疫药物(small modular immunopharmaceutical，smip)和鲨鱼可变ignar结构域。
[0071]
抗体的抗原结合片段通常将包含至少一个可变结构域。可变结构域可具有任何尺寸或氨基酸组成，并且通常将包含至少一个cdr，其与一个或更多个框架序列邻近或与之共框。在具有与v
l
结构域缔合的v
h
结构域的抗原结合片段中，v
h
和v
l
结构域可以以任何合适的排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚体的并包含v
h
‑
v
h
、v
h
‑
v
l
或v
l
‑
v
l
二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可包含单体v
h
或v
l
结构域。
[0072]
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可包含与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可存在于本公开内容的抗体的抗原结合片段内的可变和恒定结构域的一些非限制性示例性配置包括：(i)v
h
‑
c
h
1；(ii)v
h
‑
c
h
2；(iii)v
h
‑
c
h
3；(iv)v
h
‑
c
h1‑
c
h
2；(v)v
h
‑
c
h1‑
c
h2‑
c
h
3；(vi)v
h
‑
c
h2‑
c
h
3；(vii)v
h
‑
c
l
；(viii)v
l
‑
c
h
1；(ix)v
l
‑
c
h
2；(x)v
l
‑
c
h
3；(xi)v
l
‑
c
h1‑
c
h
2；(xii)v
l
‑
c
h1‑
c
h2‑
c
h
3；(xiii)v
l
‑
c
h2‑
c
h
3；和(xiv)v
l
‑
c
l
。在可变和恒定结构域的任何配置中，包括上文列出的任何示例性配置中，可变和恒定结构域可以彼此直接连接，或者可以通过全部或部分铰链或接头区连接。铰链区可以由至少2个(例如5、10、15、20、40、60或更多个)氨基酸组成，其导致单个多肽分子中邻近的可变和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本公开内容的抗体的抗原结合片段可包含彼此和/或与一个或更多个单体v
h
或v
l
结构域(例如，通过一个或更多个二硫键)非共价缔合的以上所列可变和恒定结构域配置中任一种的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。
[0073]
本公开内容通篇使用的术语“抗体”还包括多特异性(例如，双特异性)抗体。多特异性抗体或抗体的抗原结合片段通常将包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域均能够与单独抗原或同一抗原上的不同表位特异性地结合。使用本领域可用的常规技术，任何多特异性抗体形式均可适用于本公开内容的抗体或抗体的抗原结合片段的上下文中。例如，本公开内容包括这样的方法，其包括使用其中免疫球蛋白的一个臂对il
‑
4rα或其片段具有特异性，并且免疫球蛋白的另一臂对第二治疗靶标具有特异性或缀合至治疗部分的双特异性抗体。可在本公开内容的上下文中使用的一些示例性双特异性形式包括但不限于例如基于scfv或双抗体双特异性形式、igg
‑
scfv融合体、双可变结构域(dvd)
‑
ig、四价体瘤(quadroma)、隆突
‑
入
‑
穴(knobs
‑
into
‑
holes)、共同轻链(例如，隆突
‑
入
‑
穴下的共同轻链，等)、crossmab、crossfab、(seed)体、亮氨酸拉链、duobody、igg1/igg2、双作用fab(daf)
‑
igg和mab2双特异性形式(对于前述形式的综述，参见例如klein et al.2012，mabs 4(6)：653
‑
663，以及其中引用的参考文献)。双特异性抗体也可使用肽/核酸缀合来构建，例如，其中使用具有正交化学反应性的非天然氨基酸来产生位点特异性抗体
‑
寡核苷酸缀合物，其然后自组装成具有确定的组成、价和几何形状的多聚体复合物。(参见例如kazane et al.，j.am.chem.soc.，2013，135(1)：340
‑
46)。
[0074]
本公开内容的方法中使用的抗体可以是人抗体。本公开内容通篇使用的术语“人抗体”旨在包括具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体。尽管如此，本公开内容的人抗体可包含不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在cdr中，并且特别是在cdr3中。然而，本公开内容通篇使用的术语“人抗体”并不旨在包括其中来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的cdr序列已被接枝到人框架序列上的抗体。
[0075]
本公开内容的方法中使用的抗体可以是重组人抗体。本公开内容通篇使用的术语“重组人抗体”旨在包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)、从重组组合的人抗体文库中分离的抗体(下文进一步描述)、从针对人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如小鼠)中分离的抗体(参见例如taylor et al.(1992)nucl.acids res.，20：6287
‑
6295)，或者通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他dna序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。这样的重组人抗体具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区。然而，在某些实施方案中，对这样的重组人抗体进行体外诱变(或当使用针对人ig序列转基因的动物时，进行体内体细胞诱变)，并因此重组抗体的v
h
和v
l
区的氨基酸序列是这样的序列，尽管其来源于人种系v
h
和v
l
序列并与之相关，但可能不是体内人抗体种系库中天然存在的。
[0076]
根据某些实施方案，本公开内容的方法中使用的抗体特异性地结合il
‑
4rα。术语“特异性地结合”等意指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。用于确定抗体与抗原是否特异性地结合的方法是本领域公知的，并且包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。例如，本公开内容的上下文中使用的“特异性地结合”il
‑
4rα的抗体包括以以下k
d
结合il
‑
4rα或其部分的抗体：小于约500nm、小于约300nm、小于约200nm、小于约100nm、小于约90nm、小于约80nm、小于约70nm、小于约60nm、小于约50nm、小于约40nm、小于约30nm、小于约20nm、小于约10nm、小于约5nm、小于约4nm、小于约3nm、小于约2nm、小于约1nm或小于约0.5nm，如在表面等离子体共振测定中测量的。然而，特异性地结合人il
‑
4rα的分离的抗体可与另一些抗原(例如来自其他(非人)物种的il
‑
4rα分子)具有交叉反应性。
[0077]
根据本公开内容的某些示例性实施方案，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是包含以下的抗il
‑
4rα抗体或其抗原结合片段：重链可变区(hcvr)、轻链可变区(lcvr)和/或互补决定区(cdr)，其包含如美国专利no.7,608,693中所示的抗il
‑
4r抗体的任何氨基酸序列。在某些示例性实施方案中，可在本公开内容的方法的上下文中使用的抗il
‑
4rα抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no：1的氨基酸序列的重链可变区(hcvr)的重链互补决定区(hcdr)和含有seq id no：2的氨基酸序列的轻链可变区(lcvr)的轻链互补决定区(lcdr)。根据某些实施方案，抗il
‑
4rα抗体或其抗原结合片段包含三个hcdr(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个lcdr(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中hcdr1包含seq id no：3的氨基酸序列；hcdr2包含seq id no：4的氨基酸序列；hcdr3包含seq id no：5的氨基酸序列；lcdr1包含seq id no：6的氨基酸序列；lcdr2包含seq id no：7的氨基酸序列；并且lcdr3包含seq id no：8的氨基酸序列。在另一些实施方案中，抗il
‑
4r抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no：1的hcvr和含有seq id no：2的lcvr。在某些实施方案中，本公开内容的方法包括使用抗il
‑
4r抗体，其中该抗体包含含有seq id no：9的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，抗il
‑
4r抗体包含含有seq id no：10的氨基酸序列的轻链。包含含有seq id no：1的氨基酸序列的hcvr和含有
seq id no：2的氨基酸序列的lcvr的一个示例性抗体是称为度匹鲁单抗的完全人抗il
‑
4r抗体。根据某些示例性实施方案，本公开内容的方法包括使用度匹鲁单抗或其生物等同物。对于度匹鲁单抗，术语“生物等同物”是指当在类似的实验条件下以相同的摩尔剂量(单剂量或多剂量)施用时，其吸收速率和/或程度与度匹鲁单抗的吸收速率和/或程度未显示出显著差异的作为药物等同物或药物替代物的抗il
‑
4r抗体或il
‑
4r结合蛋白或其片段。在本公开内容的上下文中，该术语是指与il
‑
4r结合、在其安全性、纯度和/或效力方面与度匹鲁单抗没有临床意义差异的抗原结合蛋白。
[0078]
根据本公开内容的某些实施方案，抗人il
‑
4r抗体或其抗原结合片段包含与seq id no：1具有90％、95％、98％或99％序列同一性的hcvr。
[0079]
根据本公开内容的某些实施方案，抗人il
‑
4r抗体或其抗原结合片段包含与seq id no：2具有90％、95％、98％或99％序列同一性的lcvr。
[0080]
根据本公开内容的某些实施方案，抗人il
‑
4r抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no：1的氨基酸序列、具有不多于5个氨基酸替换的hcvr。根据本公开内容的某些实施方案，抗人il
‑
4r抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no：2的氨基酸序列、具有不多于2个氨基酸替换的lcvr。
[0081]
序列同一性可通过本领域已知的方法(例如，gap、bestfit和blast)来测量。
[0082]
本公开内容还包括抗il
‑
4r抗体在治疗癌症的方法中的用途，其中抗il
‑
4r抗体包含具有一个或更多个保守氨基酸替换的本文中公开的任何hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列的变体。例如，本公开内容包括抗il
‑
4r抗体的用途，所述抗il
‑
4r抗体相对于本文中公开的任何hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列，具有带有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸替换的hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列。
[0083]
可在本公开内容的方法的上下文中使用的另一些抗il
‑
4rα抗体包括，例如，在本领域中称为且已知为amg317(corren et al.，2010，am j respir crit care med.，181(8)：788
‑
796)或medi 9314的抗体，或者在美国专利no.7,186,809、美国专利no.7,605,237、美国专利no.7,638,606、美国专利no.8,092,804、美国专利no.8,679,487或美国专利no.8,877,189中所示的任何抗il
‑
4rα抗体。在本文中引用的出版物中鉴定抗il
‑
4rα抗体的部分在此通过引用并入。
[0084]
在本公开内容的方法的上下文中使用的抗il
‑
4rα抗体可具有ph依赖性结合特征。例如，与中性ph相比，在酸性ph下用于本公开内容的方法中的抗il
‑
4rα抗体可表现出与il
‑
4rα的结合降低。或者，与中性ph相比，在酸性ph下本公开内容的抗il
‑
4rα抗体可表现出与其抗原的结合增强。表述“酸性ph”包括小于约6.2，例如约6.0、5.95、5.9、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更小的ph值。本公开内容通篇使用的表述“中性ph”意指约7.0至约7.4的ph。表述“中性ph”包括约7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的ph值。
[0085]
某些情况下，“与中性ph相比，在酸性ph下与il
‑
4rα的结合降低”用在酸性ph下抗体与il
‑
4rα结合的k
d
值与在中性ph下抗体与il
‑
4rα结合的k
d
值的比值来表示(反之亦然)。例如，出于本公开内容的目的，如果抗体或其抗原结合片段表现出酸性/中性k
d
比值为约3.0或更大，则抗体或其抗原结合片段可被视为表现出“与中性ph相比，在酸性ph下与il
‑
4rα的结合降低”。在某些示例性实施方案中，本公开内容的抗体或抗原结合片段的酸性/中性
k
d
比值可以为约3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、100.0或更大。
[0086]
具有ph依赖性结合特征的抗体可例如通过筛选与中性ph相比在酸性ph下与特定抗原的结合降低(或增强)的抗体群来获得。另外，在氨基酸水平上对抗原结合结构域的修饰可产生具有ph依赖性特征的抗体。例如，通过用组氨酸残基替换抗原结合结构域(例如，在cdr内)的一个或更多个氨基酸，可获得相对于中性ph在酸性ph下具有降低的抗原结合的抗体。本公开内容通篇使用的表述“酸性ph”意指6.0或更小的ph。
[0087]
pd
‑
1抑制剂
[0088]
本文中所公开的方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的pd
‑
1抑制剂。本文中使用的“pd
‑
1抑制剂”是指能够抑制、阻断、消除或干扰pd
‑
1的活性或表达的任何分子。在一些实施方案中，pd
‑
1抑制剂可以是抗体、小分子化合物、核酸、多肽，或者其功能片段或变体。合适的pd
‑
1抑制剂抗体的一些非限制性实例包括抗pd
‑
1抗体及其抗原结合片段、抗pd
‑
l1抗体及其抗原结合片段和抗pd
‑
l2抗体及其抗原结合片段。合适的pd
‑
1抑制剂的另一些非限制性实例包括：rnai分子例如抗pd
‑
1 rnai分子、抗pd
‑
l1 rnai和抗pd
‑
l2 rnai，反义分子例如抗pd
‑
1反义rna、抗pd
‑
l1反义rna和抗pd
‑
l2反义rna，以及显性负蛋白例如显性负pd
‑
1蛋白、显性负pd
‑
l1蛋白和显性负pd
‑
l2蛋白。前述pd
‑
1抑制剂的一些实例描述于例如us 9308236、us 10011656和us 20170290808中，其鉴定pd
‑
1抑制剂的部分在此通过引用并入。
[0089]
抗pd
‑
i抗体及其抗原结合片段
[0090]
在一些实施方案中，本文中所公开的方法中使用的pd
‑
1抑制剂是特异性地结合pd
‑
1的抗体或其抗原结合片段。
[0091]
术语“抗体”、“抗原结合片段”、“人抗体”、“重组抗体”和其他相关术语如上所定义。在抗pd
‑
1抗体及其抗原结合片段的情况下，本公开内容包括使用其中免疫球蛋白的一个臂对pd
‑
1或其片段具有特异性，并且免疫球蛋白的另一臂对第二治疗性靶标具有特异性或与治疗性部分缀合的双特异性抗体。可在本公开内容的上下文中使用的一些示例性双特异性形式包括但不限于例如基于scfv或双抗体双特异性形式、igg
‑
scfv融合体、双可变结构域(dvd)
‑
ig、四价体瘤、隆突
‑
入
‑
穴、共同轻链(例如，隆突
‑
入
‑
穴下的共同轻链，等)、crossmab、crossfab、(seed)体、亮氨酸拉链、duobody、igg1/igg2、双作用fab(daf)
‑
igg和mab2双特异性形式(对于前述形式的综述，参见例如klein et al.2012，mabs 4(6)：653
‑
663，以及其中引用的参考文献)。双特异性抗体也可使用肽/核酸缀合来构建，例如，其中使用具有正交化学反应性的非天然氨基酸来产生位点特异性抗体
‑
寡核苷酸缀合物，其然后自组装成具有确定的组成、价和几何形状的多聚体复合物。(参见例如kazane et al.，j.am.chem.soc.，2013，135(1)：340
‑
46)。
[0092]
术语“特异性地结合”等意指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。用于确定抗体与抗原是否特异性地结合的方法是本领域公知的，并且包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。例如，在本公开内容的上下文中使用的“特异性地结合”pd
‑
1的抗体包括以以下k
d
结合pd
‑
1或其部分的抗体：小于约500nm、小于约300nm、小于约200nm、小于约100nm、小于约90nm、小于约80nm、小于约70nm、小于约60nm、小于约50nm、
小于约40nm、小于约30nm、小于约20nm、小于约10nm、小于约5nm、小于约4nm、小于约3nm、小于约2nm、小于约1nm或小于约0.5nm，如在表面等离子体共振测定中测量的。然而，特异性地结合人pd
‑
1的分离的抗体可与另一些抗原(例如来自其他(非人)物种的pd
‑
1分子)具有交叉反应性。
[0093]
根据某些示例性实施方案，抗pd
‑
1抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(hcvr)、轻链可变区(lcvr)和/或互补决定区(cdr)，其包含美国专利no.9,987,500(其在此通过引用整体并入)中所示的任何抗pd
‑
1抗体的氨基酸序列。在某些示例性实施方案中，可在本公开内容的上下文中使用的抗pd
‑
1抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no：11的氨基酸序列的重链可变区(hcvr)的重链互补决定区(hcdr)和含有seq id no：12的氨基酸序列的轻链可变区(lcvr)的轻链互补决定区(lcdr)。根据某些实施方案，抗pd
‑
1抗体或其抗原结合片段包含三个hcdr(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个lcdr(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中hcdr1包含seq id no：13的氨基酸序列；hcdr2包含seq id no：14的氨基酸序列；hcdr3包含seq id no：15的氨基酸序列；lcdr1包含seq id no：16的氨基酸序列；lcdr2包含seq id no：17的氨基酸序列；并且lcdr3包含seq id no：18的氨基酸序列。在另一些实施方案中，抗pd
‑
1抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no：11的hcvr和含有seq id no：12的lcvr。在某些实施方案中，本公开内容的方法包括使用抗pd
‑
1抗体，其中该抗体包含含有seq id no：19的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，抗pd
‑
1抗体包含含有seq id no：20的氨基酸序列的轻链。包含含有seq id no：11的氨基酸序列的hcvr和含有seq id no：12的氨基酸序列的lcvr的一个示例性抗体是完全人抗pd
‑
1抗体，称为西米普利单抗(也称为regn2810)
[0094]
根据某些示例性实施方案，本公开内容的方法包括使用regn2810或其生物等同物。本文中使用的关于抗pd
‑
1抗体的术语“生物等同物”是指当在类似的实验条件下以相同的摩尔剂量(单剂量或多剂量)施用时，其吸收速率和/或程度与参照抗体(例如，regn2810)的吸收速率和/或程度未显示出显著差异的作为药物等同物或药物替代物的抗pd
‑
1抗体或pd
‑
1结合蛋白或其片段；术语“生物等同物”还包括与pd
‑
1结合并且在安全性、纯度和/或效力方面与regn2810没有临床意义差异的抗原结合蛋白。
[0095]
根据本公开内容的某些实施方案，抗人pd
‑
1抗体或其抗原结合片段包含与seq id no：11具有90％、95％、98％或99％序列同一性的hcvr。
[0096]
根据本公开内容的某些实施方案，抗人pd
‑
1抗体或其抗原结合片段包含与seq id no：12具有90％、95％、98％或99％序列同一性的lcvr。
[0097]
根据本公开内容的某些实施方案，抗人pd
‑
1抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no：11的氨基酸序列、具有不多于5个氨基酸替换的hcvr。根据本公开内容的某些实施方案，抗人pd
‑
1或其抗原结合片段包含含有seq id no：12的氨基酸序列、具有不多于2个氨基酸替换的lcvr。
[0098]
序列同一性可通过本领域已知的方法(例如，gap、bestfit和blast)来测量。
[0099]
本公开内容还包括抗pd
‑
1抗体在治疗癌症的方法中的用途，其中抗pd
‑
1抗体包含具有一个或更多个保守氨基酸替换的本文中公开的任何hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列的变体。例如，本公开内容包括抗pd
‑
1抗体的用途，所述抗pd
‑
1抗体相对于本文中公开的任何hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列，具有带有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或
更少等的保守氨基酸替换的hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列。
[0100]
可在本公开内容的方法的上下文中使用的另一些抗pd
‑
1抗体包括，例如，在本领域中称为且已知为纳武单抗、派姆单抗、medi0608、皮地利珠单抗、bi 754091、斯巴达珠单抗(也称为pdr001)、卡瑞利珠单抗(也称为shr
‑
1210)、信迪利单抗、agen2034、jnj
‑
63723283、mcla
‑
134的抗体，或者在美国专利no.6808710、7488802、8008449、8168757、8354509、8609089、8686119、8779105、8900587和9987500中以及在专利公布wo2006/121168、wo2009/114335中所示的任何抗pd
‑
1抗体。在本文中引用的出版物中的鉴定抗pd
‑
1抗体的部分在此通过引用并入。
[0101]
在本公开内容的方法的上下文中使用的抗pd
‑
1抗体可具有ph依赖性结合特征。例如，与中性ph相比，在酸性ph下用于本公开内容的方法中的抗pd
‑
1抗体可表现出与pd
‑
1的结合降低。或者，与中性ph相比，在酸性ph下本公开内容的抗pd
‑
1抗体可表现出与其抗原的结合增强。表述“酸性ph”包括小于约6.2，例如约6.0、5.95、5.9、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更小的ph值。本文中使用的表述“中性ph”意指约7.0至约7.4的ph。表述“中性ph”包括约7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的ph值。
[0102]
在某些情况下，“与中性ph相比，在酸性ph下与pd
‑
1的结合降低”用在酸性ph下抗体与pd
‑
1结合的k
d
值与在中性ph下抗体与pd
‑
1结合的k
d
值的比值来表示(反之亦然)。例如，出于本公开内容的目的，如果抗体或其抗原结合片段表现出酸性/中性k
d
比值为约3.0或更大，则抗体或其抗原结合片段可被视为表现出“与中性ph相比，在酸性ph下与pd
‑
1的结合降低”。在某些示例性实施方案中，本公开内容的抗体或抗原结合片段的酸性/中性k
d
比值可以为约3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、100.0或更大。
[0103]
具有ph依赖性结合特征的抗体可例如通过筛选与中性ph相比在酸性ph下与特定抗原的结合降低(或增强)的抗体群来获得。另外，在氨基酸水平上对抗原结合结构域的修饰可产生具有ph依赖性特征的抗体。例如，通过用组氨酸残基替换抗原结合结构域(例如，在cdr内)的一个或更多个氨基酸，可获得相对于中性ph在酸性ph下具有降低的抗原结合的抗体。本文中使用的表述“酸性ph”意指6.0或更小的ph。
[0104]
抗pd
‑
l1抗体及其抗原结合片段
[0105]
在一些实施方案中，在本文中所公开的方法中使用的pd
‑
1抑制剂是特异性地结合pd
‑
l1的抗体或其抗原结合片段。例如，在本公开内容的上下文中使用的“特异性地结合”pd
‑
l1的抗体包括以约1
×
10
‑8m或更小的k
d
(例如，较小的k
d
表示较紧密的结合)结合pd
‑
l1或其部分的抗体。“高亲和力”抗pd
‑
l1抗体是指对pd
‑
l1具有表示为以下的k
d
的结合亲和力的那些mab：至少10
‑8m，优选10
‑9m，更优选10
‑
10
m，甚至更优选10
‑
11
m，甚至更优选10
‑
12
m，如通过表面等离子体共振，例如biacore
tm
或溶液亲和elisa测量的。然而，特异性地结合人pd
‑
l1的分离的抗体可与另一些抗原(例如来自其他(非人)物种的pd
‑
l1分子)具有交叉反应性。
[0106]
根据某些示例性实施方案，抗pd
‑
l1抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(hcvr)、轻链可变区(lcvr)和/或互补决定区(cdr)，其包含美国专利no.9,938,345(其在此通过引用整体并入)中所示的任何抗pd
‑
l1抗体的氨基酸序列。在某些示例性实施方案中，
可在本公开内容的上下文中使用的抗pd
‑
l1抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(hcvr)的重链互补决定区(hcdr)和轻链可变区(lcvr)的轻链互补决定区(lcdr)，其中hcvr和lcvr包含美国专利no.9,938,345中定名为h1h8314n的抗pd
‑
l1抗体的氨基酸序列。根据某些实施方案，抗pd
‑
l1抗体或其抗原结合片段包含三个hcdr(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和三个lcdr(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3包含美国专利no.9,938,345中定名为h1h8314n的抗pd
‑
l1抗体的氨基酸序列。在另一些实施方案中，抗pd
‑
l1抗体或其抗原结合片段包含含有在美国专利no.9,938,345中定名为h1h8314n的抗pd
‑
l1抗体的氨基酸序列的hcvr和lcvr。
[0107]
根据本公开内容的某些实施方案，抗人pd
‑
l1或其抗原结合片段包含与在美国专利no.9,938,345中定名为h1h8314n的抗pd
‑
l1抗体的lcvr氨基酸序列具有90％、95％、98％或99％序列同一性的lcvr。
[0108]
根据本公开内容的某些实施方案，抗人pd
‑
l1或其抗原结合片段包含hcvr，所述hcvr包含美国专利no.9,938,345中定名为h1h8314n的抗pd
‑
l1抗体的氨基酸序列，具有不多于5个氨基酸替换。根据本公开内容的某些实施方案，抗人pd
‑
l1或其抗原结合片段包含lcvr，所述lcvr包含美国专利no.9,938,345中定名为h1h8314n的抗pd
‑
l1抗体的氨基酸序列，具有不多于2个氨基酸替换。
[0109]
序列同一性可通过本领域已知的方法(例如，gap、bestfit和blast)来测量。
[0110]
本公开内容还包括抗pd
‑
l1抗体在治疗癌症的方法中的用途，其中抗pd
‑
l1抗体包含具有一个或更多个保守氨基酸替换的本文中公开的任何hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列的变体。例如，本公开内容包括抗pd
‑
l1抗体的用途，所述抗pd
‑
l1抗体相对于本文中公开的任何hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列，具有带有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守氨基酸替换的hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列。
[0111]
可在本公开内容的方法的上下文中使用的另一些抗pd
‑
l1抗体包括，例如，在本领域中称为且已知为mdx
‑
1105、阿特珠单抗(tecentriq
tm
)、度伐单抗(imfinzi
tm
)、阿维单抗(bavencio
tm
)、ly3300054、faz053、sti
‑
1014、cx
‑
072、kn035(zhang et al.，cell discovery，3，170004(2017年3月))、ck
‑
301(gorelik et al.，american association for cancer research annual meeting(aacr)，2016
‑
04
‑
04 abstract 4606)的抗体，或者专利公布us7943743、us8217149、us9402899、us9624298、us 9938345、wo 2007/005874、wo 2010/077634、wo 2013/181452、wo 2013/181634、wo 2016/149201、wo 2017/034916或ep3177649中所示的任何其他抗pd
‑
l1抗体。在本文中引用的出版物中鉴定抗pd
‑
l1抗体的部分在此通过引用并入。
[0112]
药物组合物和施用
[0113]
所公开的方法包括向有此需要的对象施用与pd
‑
1抑制剂组合的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂，其中所述抑制剂包含在分开的药物组合物或组合的(单一)药物组合物中。本公开内容的药物组合物可与可药用载体、赋形剂和提供合适的转移、递送、耐受性等的另一些试剂一起配制。大量合适的制剂可见于所有药物化学家已知的处方集(formulary)：remington
′
s pharmaceutical sciences，mack publishing company，easton，pa中。这些制剂包括例如散剂、糊剂、软膏剂、胶冻剂(jelly)、蜡、油、脂质、含脂质(阳离子型或阴离子型)的囊泡剂(例如lipofectin
tm
)、dna缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳剂、乳剂碳
蜡(emulsion carbowax)(不同分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶剂和含有碳蜡的半固体混合物。另见powell et al.，1998，j pharm sci technol，52：238
‑
311。
[0114]
在某些实施方案中，本公开内容的药物组合物包含治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂(例如抗il
‑
4r抗体)和/或治疗有效量的pd
‑
1抑制剂(例如抗pd
‑
1抗体)和可药用载体。在某些实施方案中，所公开的药物组合物被配制成用于通过注射例如静脉内注射来施用。
[0115]
多种递送系统是已知的并且可用于施用本公开内容的药物组合物，例如封装于脂质体、微粒、微胶囊、能够表达突变体病毒的重组细胞、受体介导的内吞作用(参见，例如wu et al.，1987，j.biol.chem.262：4429
‑
4432)。施用方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和经口途径。组合物可通过任何方便的途径，例如通过输注或推注注射(bolus injection)、通过经由上皮或黏膜皮肤内膜(lining)(例如，口腔黏膜、直肠和肠黏膜等)吸收来施用，并且可与其他生物活性剂一起施用。
[0116]
本公开内容的药物组合物可用标准针和注射器皮下或静脉内递送。另外，关于皮下递送，笔式递送装置(pen delivery device)易于应用于递送本公开内容的药物组合物。这样的笔式递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔式递送装置通常使用包含药物组合物的可更换笔芯(cartridge)。一旦已施用了笔芯内的所有药物组合物并且笔芯是空的，则可容易地丢弃空的笔芯并用包含药物组合物的新笔芯替换。然后可重复使用笔式递送装置。在一次性笔式递送装置中，没有可更换的笔芯。相反地，一次性笔式递送装置预先填充有容纳在装置内的储器(reservoir)中的药物组合物。一旦储器排空药物组合物，则丢弃整个装置。
[0117]
在某些情况下，可在控释系统中递送一种或两种药物组合物。在一个实施方案中，可使用泵。在另一个实施方案中，可使用聚合物材料。参见，medical applications of controlled release，langer and wise(eds.)，1974，crc pres.，boca raton，fla。在另一个实施方案中，可将控释系统放置在组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见，例如goodson，1984，medical applications of controlled release，vol.2，pp.115
‑
138)。在langer，1990，science 249：1527
‑
1533中讨论了另一些控释系统。
[0118]
合适的可注射制剂可包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射、滴注等的剂型。这些可注射制剂可通过已知方法制备。例如，可注射制剂可通过例如将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备。作为用于注射的水性介质，有例如生理盐水、含有葡萄糖和其他辅助剂的等张溶液等，其可与合适的增溶剂例如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子型表面活性剂[例如，聚山梨酯80、hco
‑
50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等组合使用。作为油性介质，使用例如芝麻油、大豆油等，其可与增溶剂例如苯甲酸苄酯、苄醇等组合使用。由此制备的注射剂优选地填充在合适的安瓿中。
[0119]
有利地，将上述用于经口或肠胃外使用的药物组合物制备成适合于配合一定剂量的活性成分的单位剂量的剂型。这样的单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂(安瓿剂)、栓剂等。
[0120]
药物组合物的可注射制剂可通过已知方法制备。例如，可注射制剂可通过例如将抑制剂(例如，抗pd
‑
1抗体或抗il
‑
4r抗体)或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射的无菌
水性介质或油性介质中来制备。作为用于注射的水性介质，有例如生理盐水、含有葡萄糖和其他辅助剂的等张溶液等，其可与合适的增溶剂例如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子型表面活性剂[例如，聚山梨酯80、hco
‑
50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等组合使用。作为油性介质，使用例如芝麻油、大豆油等，其可与增溶剂例如苯甲酸苄酯、苄醇等组合使用。由此制备的可注射制剂优选地填充在合适的注射安瓿中。在一些实施方案中，可注射制剂可包含一定浓度的抑制剂(例如，抗pd
‑
1抗体或抗il
‑
4r抗体)和一种或更多种可药用溶剂(例如，蒸馏水、盐水等)。
[0121]
可在本公开内容的上下文中使用的包含抗il
‑
4r抗体的一些示例性药物组合物公开于例如美国专利no.8,945,559中，其鉴定包含抗il
‑
4r抗体的药物组合物的部分在此通过引用并入。可在本公开内容的上下文中使用的包含抗pd
‑
1抗体的一些示例性药物组合物公开于例如us 2019/0040137中，其鉴定包含抗pd
‑
1抗体的药物组合物的部分在此通过引用并入。
[0122]
药物递送系统
[0123]
在一些实施方案中，用于所公开方法的药物组合物可在包含以下的药物递送系统中提供：(i)包含治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的药物组合物；以及(ii)包含治疗有效量的pd
‑
1抑制剂的药物组合物。在本公开内容的这一方面中，药物组合物彼此分开，但可在单个药物递送系统中提供或者可作为药盒(即，附带有将il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂与pd
‑
1抑制剂组合使用以治疗本文中公开的肿瘤或抑制其生长的说明书的药物递送系统)来提供。在某些实施方案中，药物递送系统包含一个或更多个剂量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在某些实施方案中，药物递送系统包含一个或更多个剂量的pd
‑
1抑制剂。
[0124]
在一些实施方案中，药物递送系统还包含一种或更多种另外的治疗剂，例如任何前述另外的治疗剂。例如，包含含有il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的药物组合物和含有pd
‑
1抑制剂的药物组合物的药物递送系统还可包含选自以下的一种或更多种另外的治疗剂：环磷酰胺、癌症疫苗、lag3抑制剂(例如，抗lag3抗体)、ctla
‑
4抑制剂(例如，伊匹单抗)、gitr激动剂(例如，抗gitr抗体)、tim3抑制剂、cd28激活剂、btla抑制剂、tigit抑制剂、cd38抑制剂、cd47抑制剂、ido抑制剂、vegf拮抗剂(例如，“vegf捕获剂”例如阿柏西普或us 7,087,411中所示的另一些vegf抑制性融合蛋白，或者抗vegf抗体或其抗原结合片段(例如，贝伐单抗或兰尼单抗)或vegf受体的小分子激酶抑制剂(例如，舒尼替尼、索拉非尼或帕唑帕尼))、ang2抑制剂(例如，奈伐苏单抗)、tgfβ抑制剂、egfr抑制剂(例如，埃罗替尼、西妥昔单抗)、共刺激受体的激动剂(例如，cd28的激动剂)、vista抑制剂、cd40激动剂、csf1r抑制剂、ccr2抑制剂、cxcr4抑制剂、cxcr2抑制剂、ccr4抑制剂、cxcl 12抑制剂、针对肿瘤特异性抗原[例如，ca9、ca125、mage3、cea、波形蛋白、肿瘤m2
‑
pk、psa、黏蛋白
‑
1、mart
‑
1和ca19
‑
9]的抗体、抗cd3/抗cd20双特异性抗体、溶瘤病毒、疫苗(例如，卡介苗)、gm
‑
csf、细胞毒素、化学治疗剂、il
‑
6r抑制剂(例如沙利鲁单抗)、il
‑
10抑制剂、细胞因子例如il
‑
2、il
‑
7、il
‑
12、il
‑
21和il
‑
15、adc(例如，抗cd19
‑
dm4 adc和抗ds6
‑
dm4 adc)、嵌合抗原受体t细胞(例如，cd19靶向t细胞)、抗炎药例如皮质类固醇、nsaid和膳食补充剂例如抗氧化剂。在一个实施方案中，药物递送系统在有此需要的对象中与手术组合使用。
[0125]
施用方案
[0126]
在一些实施方案中，所公开的方法包括向有此需要的对象依次施用与治疗有效量
的pd
‑
1抑制剂组合的治疗有效量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂，其中每种抑制剂以一个或更多个剂量施用于对象，例如作为特定治疗给药方案的一部分。在某些实施方案中，本公开内容的方法包括施用具有相加或协同活性的抑制剂来治疗癌症，优选2型免疫依赖性癌症，例如胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、脑癌、皮肤癌、前列腺癌、肾癌、肺癌、霍奇金淋巴瘤或膀胱癌。
[0127]
本文中使用的“依次施用”意指在相隔预定间隔(例如，数小时、数天、数周或数月)的不同时间点例如在不同天向对象施用每个剂量的抑制剂。在一些实施方案中，所公开的方法包括向对象依次施用单一初始剂量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂，随后是一个或更多个第二剂量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂，并且任选地随后是一个或更多个第三剂量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在某些实施方案中，该方法还包括向对象依次施用单一初始剂量的pd
‑
1抑制剂，随后是一个或更多个第二剂量的pd
‑
1抑制剂，并且任选地随后是一个或更多个第三剂量的pd
‑
1抑制剂。
[0128]
在一些实施方案中，治疗给药方案包括施用与一个或更多个剂量的pd
‑
1抑制剂组合的一个或更多个剂量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在某些实施方案中，将一个或更多个剂量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和/或一个或更多个剂量的pd
‑
1抑制剂以以下频率施用于对象：约每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次或更低频率地。
[0129]
本文中使用的表述“与
……
组合”意指il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂在pd
‑
1抑制剂之前、之后或与pd
‑
1抑制剂同时施用。术语“与
……
组合”还包括il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和pd
‑
1抑制剂的依次或同时施用。
[0130]
例如，当il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂在pd
‑
1抑制剂“之前”施用时，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂可在pd
‑
1抑制剂施用之前多于150小时、约150小时、约100小时、约72小时、约60小时、约48小时、约36小时、约24小时、约12小时、约10小时、约8小时、约6小时、约4小时、约2小时、约1小时、约30分钟或约15分钟施用。当il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂在pd
‑
1抑制剂“之后”施用时，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂可在pd
‑
1抑制剂施用之后约15分钟、约30分钟、约1小时、约2小时、约4小时、约6小时、约8小时、约10小时、约12小时、约24小时、约36小时、约48小时、约60小时、约72小时或多于72小时施用。与pd
‑
1抑制剂“同时”施用il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂意指在施用pd
‑
1抑制剂的15分钟内(之前、之后或同时)以单独的剂型将il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂施用于对象，或作为包含il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和pd
‑
1抑制剂二者的单一组合剂量制剂施用于对象。
[0131]
在某些实施方案中，所公开的方法包括施用另外的(例如，第三)治疗剂或疗法，例如本文所列的任一种药剂或疗法。
[0132]
本文中使用的术语“初始”、“第二”、“第三”等是指施用的时间顺序。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时施用的剂量(也称为“基线剂量”)；“第二剂量”是在初始剂量之后施用的剂量；并且“第三剂量”是在第二剂量之后施用的剂量。初始、第二和第三剂量可都包含相同量的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂或pd
‑
1抑制剂。然而，在某些实施方案中，在治疗过程期间，初始、第二和/或第三剂量中包含的量彼此不同(例如，根据情况向上或向下调整)。在某些实施方案中，在治疗方案开始时以“负荷剂量”，随后是基于较低频率施用的后续剂量(例
如，“维持剂量”)来施用一个或更多个(例如，1、2、3、4或5个)剂量。例如，可以以约1mg/kg至约20mg/kg的负荷剂量，随后是约0.1mg/kg至约10mg/kg患者体重的一个或更多个维持剂量将il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂或pd
‑
1抑制剂施用于患有癌症的患者。
[0133]
在本公开内容的一个示例性实施方案中，每个第二和/或第三剂量在前一剂量之后1/2至14周或更长时间(例如，1/2、1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2或更多周)施用。本文中使用的短语“前一剂量”意指在多次施用的序列中，在没有间插剂量的情况下按顺序下一剂量施用之前向对象施用的抗pd
‑
1抗体的剂量。
[0134]
类似地，“初始治疗周期”是在治疗方案开始时施用的治疗周期；“第二治疗周期”是在初始治疗周期之后施用的治疗周期；并且“第三治疗周期”是在第二治疗周期之后施用的治疗周期。在本公开内容的上下文中，治疗周期可彼此相同或不同。
[0135]
剂量
[0136]
在某些实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的至少一个剂量包含约0.1至50mg/kg，例如约0.1至10mg/kg对象体重。例如，至少一个剂量可包含约0.1、1、0.3、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg对象体重。在某些实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂的至少一个剂量包含约0.05至1000mg的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂，例如约5、10、15、20、25、40、45、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900mg或更多的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在一个实施方案中，il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂为regn668(度匹鲁单抗)。
[0137]
在某些实施方案中，pd
‑
1抑制剂的至少一个剂量包含约0.1至20mg/kg对象体重，例如约0.1、1、0.3、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg对象体重。在某些实施方案中，pd
‑
1抑制剂的至少一个剂量包含约0.05至500mg的pd
‑
1抑制剂，例如约5、10、15、20、25、40、45、50、60、70、80、90、100mg或更多的pd
‑
1抑制剂。在一个实施方案中，pd
‑
1抑制剂为regn2810(西米普利单抗)。
[0138]
根据本文中所公开的方法向对象施用的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂和pd
‑
1抑制剂的量是治疗有效量。本文中使用的术语“治疗有效量”意指导致以下中的一项或更多项的每种抑制剂的量：(a)癌症(例如，肿瘤病变)的症状或适应证的严重程度或持续时间降低；(b)抑制肿瘤生长，或提高肿瘤坏死、肿瘤收缩和/或肿瘤消失；(c)肿瘤生长和发育延迟；(d)抑制肿瘤转移；(e)防止肿瘤生长复发；(f)患有癌症的对象的存活提高；和/或(g)与未经治疗对象或用任一种抑制剂作为单一治疗进行治疗的对象相比，常规抗癌治疗的使用或需求降低(例如，消除对手术的需求或者对化学治疗剂或细胞毒性剂的使用降低或消除)。
[0139]
在il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂(例如，抗il
‑
4r抗体)的情况下，治疗有效量可以为约0.05mg至约1000mg，例如约0.05mg、约0.1mg、约1.0mg、约1.5mg、约2.0mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg、约600mg、约610mg、约620mg、约630mg、约640mg、约650mg、约660mg、约670mg、约680mg、约690mg、约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg、约750mg、约
760mg、约770mg、约780mg、约790mg、约800mg、约810mg、约820mg、约830mg、约840mg、约850mg、约860mg、约870mg、约880mg、约890mg、约900mg、约910mg、约920mg、约930mg、约940mg、约950mg、约960mg、约970mg、约980mg、约990mg或约1000mg的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。在某些实施方案中，向对象施用10mg、25mg、50mg、75mg、150mg、300mg、600mg或900mg的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂。
[0140]
在pd
‑
1抑制剂(例如，抗pd
‑
1抗体)的情况下，治疗有效量可以为约0.05mg至约500mg、约1mg至约500mg、约10mg至约450mg、约50mg至约400mg、约75mg至约350mg或约100mg至约300mg的抗体。例如，在多个实施方案中，pd
‑
1抑制剂的量为约0.05mg、约0.1mg、约1.0mg、约1.5mg、约2.0mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg或约500mg的pd
‑
1抑制剂。
[0141]
在某些实施方案中，向对象施用的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂(例如，抗il
‑
4r抗体)和/或pd
‑
1抑制剂(例如，抗pd
‑
1抗体)的个体剂量量可小于治疗有效量，即亚治疗剂量。例如，如果抑制剂的治疗有效量包含3mg/kg，则亚治疗剂量包含小于3mg/kg，例如2mg/kg、1.5mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg或0.3mg/kg的量。如本文中定义的，“亚治疗剂量”是指通过自身不会导致治疗效果的抑制剂的量。然而，在某些实施方案中，可施用抑制剂的多个亚治疗剂量以在对象中共同实现治疗效果。
实施例
[0142]
接下来通过以下实施例来描述所公开的技术。这些实施例和在说明书中任何地方的其他实例的使用仅是举例说明性的，并且绝不限制本发明或任何示例形式的范围和意义。同样，本发明不限于本文中所述的任何特定优选实施方案。事实上，本发明的修改和变化对于本领域技术人员在阅读本说明书之后是显而易见的，并且可在不脱离本发明精神和范围的情况下进行。因此，本发明仅受权利要求书的条款以及权利要求书所享有的等同方案的全部范围的限制。另外，虽然已努力确保所用数值(例如，量、温度等)的准确性，但应考虑到一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数为按重量计份数，分子量为平均分子量，温度以摄氏度计，并且压力为大气压或接近大气压。
[0143]
实施例1：与抗pd
‑
1抗体组合的il
‑
4r抗体在胰腺癌模型中的体内增强效力
[0144]
本实施例涉及使用kp类器官细胞皮下植入模型(即人胰腺癌(2型免疫依赖性癌症)的小鼠模型)证明在单独的单一治疗和与体内抗pd
‑
1治疗组合的情况下il
‑
4r阻断的抗肿瘤效力增强的研究。在该研究中，每个处理组的8至10只小鼠被植入kp肿瘤类器官细胞，并且当起始肿瘤体积为30至110mm3时，开始对荷瘤小鼠进行处理。
[0145]
本实施例中使用的il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂是标识为regn1103的小鼠抗il
‑
4r抗体，其是针对人il
‑
4r、标识为regn668(也称为度匹鲁单抗)的人单克隆抗体的小鼠替代抗体。regn1103包含seq id no：21/22的hcvr/lcvr氨基酸序列对，并且对小鼠il
‑
4r的亲和力与度匹鲁单抗对人il
‑
4r的亲和力在相似范围内。另外，regn1103以分别为1.9nm和11pm的
ic50抑制il
‑
4和il
‑
13依赖性的细胞系增殖。
[0146]
本实施例中使用的pd
‑
1抑制剂是标识为rpmi
‑
14(bio x cell)的抗小鼠pd
‑
1克隆，其是通常用于小鼠同基因肿瘤模型的替代抗pd
‑
1抗体。
[0147]
研究设计
[0148]
为了评价在胰腺癌的体内模型中2型免疫应答是否被激活，在基于植入的胰腺癌模型中评估了il
‑
4和il
‑
13表达水平以及il
‑
4细胞因子产生。balb/c小鼠被皮下或原位植入改造成表达致癌kras并伴随p53肿瘤抑制剂功能损失的同基因肿瘤类器官细胞(kp)，并在植入之后4周收集肿瘤。
[0149]
也使用kp类器官细胞皮下植入模型以评价在单一治疗和/或与体内抗pd
‑
1icb治疗组合的情况下il
‑
4r阻断的抗肿瘤效力。
[0150]
材料和方法
[0151]
动物。balb/c小鼠购自jackson实验室，并根据iacuc批准的指南进行实验。
[0152]
kp类器官生成。从野生型balb/c小鼠的胰腺组织中分离正常的胰腺上皮类器官。将胰腺组织切碎并在37℃下在胶原酶p缓冲液(fisher sci，50
‑
100
‑
3398)中消化15分钟。将细胞悬液通过500μm过滤器，并随后再通过100μm过滤器。然后将细胞接种在具有完全类器官培养基的基质胶覆盖物(matrigel overlay)(vwr，354234)上；所述完全类器官培养基是补充有1
×
p/s/l
‑
谷氨酰胺、1
×
b27(invitrogen)、1mm n
‑
乙酰半胱氨酸(sigma
‑
aldrich)、10nm h促胃液素(hgastrin)(sigma
‑
aldrich)、50ng/ml megf(life technologies)、1μg/ml mrspo1(peprotech)、25ng/ml h头蛋白(hnoggin)(peprotech)、100ng/ml hfgf10(peprotech)和10mm烟酰胺(sigma
‑
aldrich)的dme/f12(boj et al.，mol cell oncol，3(1)：e1014757，2015)。
[0153]
然后将所得类器官维持在生长因子降低的基质胶中，该基质胶覆盖了补充有10nm rock抑制剂y
‑
27632(sigma
‑
aldrich，y0503)的完全类器官培养基。为了传代，使用细胞回收溶液(corning)从基质胶中洗出类器官，在冰上持续2小时，并随后使用accutase解离成细胞悬液。每周以1∶4的比例进行一次传代。
[0154]
对于类器官的慢病毒转导，将胰腺类器官解离成单细胞悬液并在存在凝聚胺(8μg/ml)的情况下，使用旋转感染(spinfection)方法针对kras
v12
表达以及针对p53表达的缺失或针对p53
r175h
的表达用慢病毒转导。
[0155]
然后将经转导的kp
‑
类器官原位植入到同基因balb/c小鼠的胰腺的头中(每次植入50∶50pbs/基质胶溶液中的0.1至0.5e6个细胞)，这导致在植入之后数月内的肿瘤生长。
[0156]
收集所得kp肿瘤，并使用胶原酶xi/分散酶溶液在37℃下过夜分离胰腺癌细胞。然后将细胞在pbs中洗涤并重悬于覆盖有完全类器官培养基的生长因子降低的基质胶中。
[0157]
处理
[0158]
在每个处理组(在下表1中列出)中，8至10只小鼠被植入kp肿瘤类器官细胞，并且一旦肿瘤建立(基线时肿瘤体积为30至110mm3)则开始处理。从kp细胞注射(0.1e6至0.5e6个细胞)之后的第13天开始，每3至4天向小鼠腹膜内注射与10mg/kg抗mpd1(克隆rpmi
‑
14)或同种型对照大鼠igg2a组合的25mg/kg regn1103(抗mil
‑
4r抗体)或同种型对照migg1 ab，持续7个剂量。
[0159]
表1
[0160][0161]
balb/c小鼠皮下接受在50∶50pbs/基质胶溶液中的1e5至2.5e5个同基因kp类器官来源的细胞。在体内植入之前使用impact测试对细胞进行测试。每周两次通过卡尺测量肿瘤，并通过(l*w2)/2计算体积，其中l是最长直径并且w是垂直直径。
[0162]
结果
[0163]
发现相对于缺乏il
‑
4和il
‑
13基因表达的正常胰腺，il
‑
4和il
‑
13基因表达在原位和皮下植入的肿瘤中大量上调。类似地，如通过elisa测定测量的，il
‑
4细胞因子产生在原位和皮下肿瘤模型二者中均被大量上调，而正常胰腺未显示出il
‑
4细胞因子的产生。这些数据表明，胰腺癌的kp类器官细胞植入肿瘤模型表达高水平的il
‑
4和il
‑
13(其是两种中心2型相关细胞因子)，从而表明2型免疫应答在这些胰腺癌体内模型中被激活。
[0164]
此外，抗il
‑
4r处理增强了体内pd
‑
1阻断的抗肿瘤效力。图1a和1b中示出了基线时肿瘤体积为30至110mm3的处理研究的结果。图2a和2b中示出了基线时具有50至110mm3的肿瘤体积的肿瘤的经处理小鼠亚组的结果。抗mpd
‑
1单一治疗显示了部分抗肿瘤效力，其中8只小鼠中的4只显示出肿瘤消退，包括2只完全响应，而抗mil
‑
4r单一治疗未显示出抗肿瘤活性。然而，抗il
‑
4r与抗pd
‑
1的组合治疗显示出抗肿瘤效力的显著增强，其中10只小鼠中的7只表现出肿瘤消退，包括6只完全消退。这是出乎意料的优异结果。
[0165]
因此，2型免疫依赖性癌症中的il
‑
4/il
‑
13 2型免疫应答可通过阻断il
‑
4/il
‑
13途径而被有效地靶向。该研究表明，在胰腺癌(其是2型免疫依赖性癌症的代表)的皮下动物模型中，抗il
‑
4r治疗显著增强抗pd
‑
1治疗的抗肿瘤效力至出乎意料的程度。
[0166]
实施例2：人胰腺癌和另一些人癌症类型中的亚组显示出强的2型免疫特征
[0167]
为了评估人癌症类型内和跨人癌症类型的2型免疫应答活化的程度，设计了2型免疫基因特征，其包含2型相关细胞因子、趋化因子和它们的受体，以及2型免疫下游靶基因(il
‑
13ra2、il25、il17rb、serpinb2、ccl24、ceacam1、ccl1、muc5b、ccl26、il
‑
13ra1、postn、il6r、ccl18、ccl17、fcer2、ccr3、il6、ccl8、crlf2、il33、tslp、il
‑
4r、ccr4、ptgdr、fcer1a、il1rl1、dpp4、il
‑
4、il5和il
‑
13)。这种2型免疫特征被应用于可从癌症基因组图谱(the cancer genome atlas，tcga)数据库获得的多种人癌症类型
‑
即brca(乳腺癌)、coad(结肠腺癌)、gbm(多形性胶质母细胞瘤)、kirc(肾肾细胞癌)、lgg(低级胶质瘤)、luad(肺腺癌)、lusc(肺鳞状细胞癌)、ov(卵巢癌)、paad(胰腺腺癌)、prad(前列腺腺癌)和skcm(皮肤皮肤性黑素瘤)的表达谱。fpkm(每百万映射读取的每千碱基转录物的片段)中的上分位数归一
化表达值用作原始输入。针对热图中显示的所有肿瘤样品中的每个基因表达生成z
‑
评分。对于th2特征评分计算，将z
‑
评分的上限(最高z
‑
评分)设置为 4；并且将z
‑
评分的下限(最低z
‑
评分)设置为
‑
4。然后针对每个样品计算th2特征基因列表中每个基因的z
‑
评分的总和。组合表达(z
‑
评分)代表样品的th2特征水平。
[0168]
对这种2型免疫特征热图的分析表明，胰腺癌、非小细胞肺癌和肺鳞状细胞癌表现出这种2型免疫特征的最强整体表达，具有最小异质性。其他癌症类型中的亚组，包括乳腺癌和结肠癌中的亚组也显示出强的整体2型免疫特征。然而，其他癌症类型(例如，多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme，gbm)、胶质瘤、黑素瘤、前列腺)表现出该特征的整体低表达。总之，这些数据表明人胰腺癌和肺癌以及其他人癌症类型(包括乳腺癌和结肠癌)中亚组的2型免疫活性强。
[0169]
实施例3：il
‑
4和il
‑
13细胞因子在胰腺癌体内模型中大量上调并产生
[0170]
本实施例涉及通过在基于植入的胰腺癌模型中评估il
‑
4和il
‑
13表达水平以及il
‑
4细胞因子产生，在胰腺癌的体内模型中是否激活2型免疫应答的研究。实施例1中描述的关于动物和kp类器官生成的材料和方法与本实施例3相同。
[0171]
balb/c小鼠被皮下(sub
‑
cu)或原位(ortho)植入改造成表达致癌kras并伴随p53肿瘤抑制剂功能损失的同基因胰腺肿瘤类器官细胞(kp细胞)，并在植入之后4周收集肿瘤(每种条件n＝4至5只小鼠)。
[0172]
细胞因子测量。将肿瘤样品重悬于补充有蛋白酶抑制剂混合物的组织蛋白提取试剂(tissue protein extraction reagent，t
‑
per；thermo fisher，waltham，mass)中，并用tissuelyser ii(qiagen，hilden，germany)机械匀浆。肿瘤蛋白质提取物中的总蛋白质含量通过使用bradford测定(pierce
tm 660nm蛋白质测定(thermo fisher，waltham，mass)进行测量。细胞因子浓度通过使用定制的msd试剂盒和quickplex sq120读板仪(meso scale discovery，rockville，md)进行确定。
[0173]
结果
[0174]
发现相对于缺乏il
‑
4和il
‑
13基因表达的正常胰腺，il
‑
4和il
‑
13基因表达二者在原位和皮下植入的肿瘤中大量上调(图3a)。类似地，如通过elisa测定测量的，il
‑
4细胞因子产生在原位和皮下肿瘤模型二者中大量上调，而正常胰腺未显示出il
‑
4细胞因子的产生(图3b)。这些数据表明，胰腺癌的kp类器官细胞植入肿瘤模型表达高水平的il
‑
4和il
‑
13(其是两种中心2型免疫相关细胞因子)，从而表明2型免疫应答在这些胰腺癌体内模型中被激活。因此，il
‑
4/il
‑
13诱导的2型免疫应答可通过il
‑
4r阻断被有效地靶向(harb et al.，clin exp allergy，50(1)：5
‑
14，2019；le floc’h et al.，allergy，dec 2019)。
[0175]
实施例4：组合的抗il
‑
4r和抗pd
‑
1阻断在较大肿瘤中一致地导致体内抗肿瘤效力的增强
[0176]
本实施例是实施例1的重复研究，并且评估了组合的抗il
‑
4r/pd
‑
1组合治疗对较大肿瘤的效力。具体地，在该研究中，当已建立的肿瘤的体积在70至100mm3范围内时开始处理。
[0177]
结果
[0178]
抗il4r单一治疗显示出对肿瘤生长控制的趋势，而抗mpd
‑
1单一治疗未显示出整体抗肿瘤活性。相比之下，抗il
‑
4r/pd
‑
1组合治疗相对于单一治疗对照组(arm)显示出抗肿
瘤效力的显著增强，在7只小鼠的4只中控制肿瘤生长。在图4a和4b中示出了该处理研究的结果。
[0179]
另外，在研究结束时间点时在肿瘤裂解物中测量了全身性干扰素γ(interferon gamma，ifng)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha，tnfa)细胞因子水平。与单一药剂或同种型对照组相比，在组合治疗组中ifng和tnfa产生显著提高(图4c)。特别地，肿瘤内ifng的最高水平(＞50pg/ml)对应于每个处理组中最具响应性的肿瘤。总体而言，前述发现表明，抗il
‑
4r/pd
‑
1组合治疗诱导ifng依赖性抗肿瘤活性的提高。
[0180]
实施例5：组合的抗il
‑
4r和抗pd
‑
1阻断显示出肿瘤基质和肿瘤免疫调节活性
[0181]
本实施例是实施例1的重复研究，但探究了抗il
‑
4r/pd
‑
1组合治疗在携带pdac肿瘤的小鼠中的基质和免疫调节活性。在其中每个处理组的8至10只小鼠被植入kp肿瘤类器官细胞的该短终点处理研究中进行了基质含量的组织学分析。当肿瘤体积达到50至100mm3时开始处理。在2个处理剂量之后收集肿瘤以避免过度的肿瘤消退，使得进行无偏组织学分析。图5a中示出了处理组肿瘤体积的百分比变化。
[0182]
透明质酸(hyaluronic acid，ha)是胰腺肿瘤微环境的主要组分，其已被证明在肿瘤床内抑制药物灌注(provenzano et al.，cancer cell，21(3)：418
‑
29，2012，jacobetz et al.，gut，62(1)：112
‑
20，2013)。ha的酶促耗竭在pdac临床前模型中已被证明增强了细胞毒性抗肿瘤效力，并在胰腺癌患者中与化学治疗或免疫检查点阻断组合进行探究。使用生物素化ha结合蛋白(habp)和数字化病理学分析，使用组织化学染色方法确定了胰腺肿瘤微环境中的ha含量(图5b)。
[0183]
免疫染色。将样品在10％中性福尔马林中固定16至24小时，并转移到70％乙醇中用于石蜡包埋。所有染色均在小鼠组织的5μm石蜡切片上进行。
[0184]
对于免疫染色，将切片去石蜡、再水化并用rtu ar citra溶液(biogenex，san ramon，ca)进行抗原修复。使用h2o2封闭内源性过氧化物酶。用10％山羊血清(sigma，st louis，ma)封闭非特异性蛋白质结合。将切片在4℃下与抗cd8一抗(cell signaling technologies，danvers，ma)一起孵育过夜并与辣根过氧化物酶缀合二抗(cell signaling technologies)一起孵育。在苏木精复染的情况下，使用合适的vectastain elite abc试剂盒(vector labs.)和dab过氧化物酶底物(vector labs.)进行其余步骤。使用来自indica labs的halo图像分析平台进行habp沉积和cd8 t细胞密度的数字量化。
[0185]
ha组织化学。使用生物素化的ha结合蛋白(biotinylated ha binding protein，bhabp，millipore danvers ma usa)。将切片去石蜡、再水化并用3％牛血清白蛋白(bsa)封闭，然后在4℃下与bhabp(在1％bsa中的1∶200)一起孵育过夜。在苏木精复染的情况下，使用vectastain elite abc试剂盒标准品(vector labs.burlingame ca)和dab过氧化物酶底物(vector labs.)进行其余步骤。
[0186]
结果
[0187]
图5a显示了在研究结束时肿瘤体积的百分比变化(相对于基线)。与抗pd
‑
1单一治疗和同种型对照组相比，抗il
‑
4r单一治疗组和抗il
‑
4r/pd
‑
1组合治疗组中的ha含量显著降低(图5b)。ha含量的这种降低特别地与抗il
‑
4r/pd
‑
1组合治疗组中肿瘤床内cd8 t细胞浸润的提高有关，如通过肿瘤浸润淋巴细胞(tumor
‑
infiltrating lymphocyte，til)标志物cd8的组织学量化所示(图5c)。另外，在抗il
‑
4r/pd
‑
1组合治疗组中，t细胞浸润的提高与
显著的协同抗肿瘤效力有关。
[0188]
前述数据表明，在2型免疫极化纤维化胰腺肿瘤的情况下，il
‑
4r阻断通过双重作用机制发挥抗肿瘤活性：(i)强效的基质调节和ha沉积的调节；以及(ii)当与抗pd
‑
1治疗剂组合时，til浸润的显著增强。
[0189]
实施例6：与抗il
‑
4r抗体组合的抗人pd
‑
1抗体对植入的肿瘤的效力
[0190]
对于该实施例中的实验，使用技术(valenzuela et al 2003，nat.biotechnol.21：652
‑
659；另见us 9,987,500)生成了表达人pd
‑
1的胞外部分以及该蛋白质的小鼠形式的跨膜和胞内部分的人源化小鼠。
[0191]
用于该研究的示例性抗pd
‑
1抗体是完全人抗体(西米普利单抗)，其与人pd
‑
1特异性地结合并且包含seq id no：13
‑
14
‑
15
‑
16
‑
17
‑
18的hcdr1
‑
hcdr2
‑
hcdr3
‑
lcdr1
‑
lcdr2
‑
lcdr3和seq id no：11/12的hcvr/lcvr。该实施例中使用的示例性il
‑
4/il
‑
13途径抑制剂在实施例1中进行了描述。
[0192]
从pd
‑
1人源化小鼠中分离胰腺上皮类器官并如实施例1中所述进行处理以产生kp
‑
肿瘤类器官细胞(胰腺癌细胞)。
[0193]
pd
‑1‑
人源化小鼠在第0天被植入1.5
×
106个kp
‑
肿瘤类器官细胞，并且一旦肿瘤建立则开始处理。从kp细胞注射(0.1e6至0.5e6个细胞)之后的第13天开始，每3至4天向小鼠腹腔内注射与10mg/kg西米普利单抗或同种型对照组合的25mg/kg regn1103(抗mil
‑
4r抗体)或同种型对照ab，持续7个剂量。在实验期间，每周两次通过卡尺监测肿瘤体积。
[0194]
抗il
‑
4r处理增强了西米普利单抗的抗肿瘤效力。与西米普利单抗单一治疗相比，在用组合治疗处理的小鼠中看见肿瘤消退和完全响应。
[0195]
实施例7：临床研究
[0196]
在临床研究中，对患有胰腺癌、肺癌、多发性骨髓瘤、乳腺癌和结肠癌的患者施用与度匹鲁单抗组合的西米普利单抗。施用西米普利单抗和度匹鲁单抗的患者比施用任一药物作为单一治疗的患者表现出更强的肿瘤抑制。