高分子化合物、制备方法及其应用与流程

1.本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及高分子化合物、制备方法及其应用。


背景技术：

2.淋巴瘤是原发于淋巴结和结外组织的恶性肿瘤，为我国十大恶性肿瘤之一，严重危害了人类健康。临床上淋巴瘤一线疗法以化疗(利妥昔单抗，环磷酰胺，阿霉素，长春新碱和强的松等)为主，但治疗效果欠佳，有效缓解率为18％
‑
45％，病人中位生存期为3
‑
9月，部分患者存在耐药。car
‑
t全称是嵌合抗原受体t细胞免疫疗法，为淋巴瘤治疗带来希望。临床研究表明，car
‑
t疗法针对于儿童及成年人的复发性非霍金性淋巴瘤(nhl)中位生存期提升至12.9月。虽然car
‑
t治疗淋巴瘤药效得到一定提高，但是仍然亟待有效方案进一步提升car
‑
t治疗药效。淋巴瘤组织存在肿瘤免疫抑制微环境、异常血管微环境、交联致密的基质屏障，会阻碍car
‑
t淋巴瘤组织归巢、浸润、增殖及活化，是导致car
‑
t治疗淋巴瘤药效不佳的重要原因。
3.纳米药物是指通过纳米载药技术将药物与载体制备出0
‑
1000纳米之间的药物体，可以通过增强滞留和渗透效应(enhanced permeability and retention effect,epr effect)增加药物在肿瘤部位的蓄积，对药物增效减毒；同时增加药物的血液稳定性，避免药物过快被肾脏排泄而延长负载药物的半衰期，以提高药物的生物利用度。


技术实现要素：

4.针对上述问题，本发明提供高分子化合物、制备方法及其应用，主要解决了现在缺少增强car
‑
t治疗淋巴瘤治疗药效的药物，无法较好的改善肿瘤免疫抑制微环境、异常血管微环境、car
‑
t对淋巴瘤组织的浸润、肿瘤外基质密度的情况等问题。
5.为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：
6.共聚体，具有如下通式：
[0007][0008]
其中，
[0009]
n在100～5000之间，m在50～500之间，i在2
‑
9之间，更进一步，n为150～250，m为75～150，i为4
‑
7，m、n、i均为前述相应范围内任一正整数；优选的，所述n为200，m为100，i为6；
[0010]
r1
‑
r4均为卤代基、
‑
oh、
‑
or’中任一，r’为卤代基；r1
‑
r4分别为卤代基、
‑
oh、
‑
or’中任一，r1
‑
r4可相同，也可各自不同，均是本发明保护范围内；
[0011]
r5为卤代基、
‑
oh、
‑
or”中任一，
‑
r”卤代基或
‑
(ch2)koh，k为正整数。
[0012]
当i为6时通式如下：
[0013][0014]
一些方式，所述聚己内酯在羟乙基淀粉上的接枝率为0.61～1；
[0015]
优选的，所述聚己内酯在羟乙基淀粉上的接枝率为0.75，
[0016]
优选的，r1～r4均为
‑
oh。
[0017]
共聚体的制备方法，包括如下步骤：
[0018]
活化聚己内酯的羧基，
[0019]
将羧基活化的聚己内酯与羟乙基淀粉溶液进行酯化反应，
[0020]
纯化得羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体。
[0021]
一些方式，活化聚己内酯的羧基步骤为：无水二甲亚砜溶解聚己内酯，加入1
‑
羟基苯并三氮唑和n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺，进行羧基活化反应；和/或
[0022]
羟乙基淀粉溶液制备步骤为：羟乙基淀粉溶入无水二甲亚砜，优选的，在溶解过程中采用惰性气体保护；和/或
[0023]
酯化反应温度是40～80℃，优选的，反应过程中采用惰性气体保护。
[0024]
一些方式，所述惰性气体为氦气；无水二甲亚砜溶解聚己内酯温度为50
‑
70℃。
[0025]
一些方式，纯化步骤为：将酯化反应所得共聚体混合物通过pbs溶液透析，透析所得液体冷冻，进一步冻干得羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体。
[0026]
一些方式，纯化步骤具体为：
[0027]
将酯化反应所得共聚体混合物通过pbs溶液透析，除去未反应的1
‑
羟基苯并三氮唑和/或n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺和/或聚己内酯和/或dmso溶剂，
[0028]
透析所得液体在温度为
‑
20～
‑
25℃条件冷冻3～5h，
[0029]
放入温度为
‑
40～
‑
60℃条件下冷冻干燥得羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体冻干粉。
[0030]
前述共聚体在制备防治肿瘤药物中的应用。
[0031]
一些方式，所述应用为在car
‑
t治疗中作为药效增强制剂载体的应用；优选的，药效增强制剂为tgf
‑
β抑制剂和/或icg(吲哚菁绿)，更优选的，tgf
‑
β抑制剂为ly。
[0032]
载药系统，包括所述共聚体和载于共聚体的药效增强制剂；优选的，药效增强制剂
为tgf
‑
β抑制剂和/或icg，更优选的，tgf
‑
β抑制剂为ly。
[0033]
一些方式，所述载药系统药物粒径为100
‑
200nm，优选为150nm；
[0034]
所述载药系统的载药量为6wt％
‑
20wt％，优选的，icg载药量为3wt％
‑
10wt％，ly载药量为3wt％
‑
10wt％，更优选的，icg、ly载药量均为5wt％。
[0035]
一些方式，包括下述步骤：
[0036]
将前述的共聚体溶解于水中，加入ly和icg共混的三氯甲烷乳溶液，超声破碎，得到乳液；优选的，破碎过程冰浴(不限定一定使用冰浴，采用其他类似手段也应当等同，均应在本发明范围内)；
[0037]
将得到的乳液在400
‑
1000bar下均质若干次，纯化后得到共包载ly和icg的两亲性羟乙基淀粉
‑
聚己内酯高分子化合物的载药系统。
[0038]
所述载药系统在制备抗肿瘤药物中应用。
[0039]
一些方式，所述应用为在制备car
‑
t治疗的辅助药剂中的应用。
[0040]
一些方式，所述辅助药剂为car
‑
t治疗肿瘤的辅助药剂；
[0041]
优选的，所述辅助药剂为肿瘤蓄积助剂；和/或，
[0042]
所述辅助药剂为car
‑
t增值促进剂和/或活性促进剂；
[0043]
优选的，所述肿瘤为淋巴瘤。
[0044]
本发明的有益效果是：
[0045]
共聚体能够更好的用于载药，利于car
‑
t治疗肿瘤，ly/icg@hes
‑
pcl在raji(淋巴瘤细胞)细胞淋巴瘤模型上，具有良好的肿瘤蓄积效果，实现通过icg的光热效应，可以显著改善肿瘤外基质密度，提高car
‑
t对淋巴瘤组织的浸润，提升car
‑
t的增殖与活性。
附图说明
[0046]
图1为hes
‑
pcl结构通过h
‑
nmr和ftir表征情况图；
[0047]
图2为ftir氢谱图；
[0048]
图3为制备的icg/ly@hes
‑
pcl的dls图和tem图；
[0049]
图4为共聚体一种结构通式；
[0050]
图5为icg/ly@hes
‑
pcl对cd
‑
19 car
‑
t增殖及活性的影响结果图；
[0051]
图6为car
‑
t肿瘤蓄积实验结果图。
具体实施方式
[0052]
下面对本发明作进一步说明：
[0053]
当针对于上述car
‑
t治疗淋巴瘤的弊端，本发明在于提供一种羟乙基淀粉
‑
聚己内酯的纳米载体及其制备方法及应用，通过将羟乙基淀粉与羧基端的聚己内酯或采用前述两化合物的同类物、同系物等发生酯化反应，得到一种两亲性的羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体。其中，羟乙基淀粉为亲水段，聚己内酯为疏水段，通过超声乳化和高压均质技术将该两亲性高分子化合物制备得到共包载icg和ly的纳米载药系统，以此解决icg及ly的淋巴瘤组织共输送问题。
[0054]
一方面，共聚体，具有如下通式：
[0055][0056]
其中，
[0057]
n在100～5000之间，m在50～500之间，i在2
‑
9之间，优选的，i为4
‑
7，n为200，m为100；
[0058]
r1
‑
r4均为卤代基、
‑
oh、
‑
or’中任一，r’为卤代基；
[0059]
r5为卤代基、
‑
oh、
‑
or”中任一，
‑
r”为卤代基或
‑
(ch2)koh，k正整数。
[0060]
其中，所述聚己内酯在羟乙基淀粉上的接枝率为0.61～1；
[0061]
优选的，所述聚己内酯在羟乙基淀粉上的接枝率为0.75，
[0062]
优选的，r1～r4均为
‑
oh。
[0063]
hes
‑
pcl中pcl的取代度(mspcl)通过核磁共振氢谱(氘代dmso作为溶剂)计算为
[0064][0065]
其中i
b
为图1中b所标识的己内酯重复单元中两个亚甲基上的氢的峰的积分，n
cl
为平均每个pcl链中己内酯重复单元(cl)的个数，i
agu
为羟乙基淀粉脱水葡萄糖单元中三个羟基氢和1号碳上的氢的峰(4.4
‑
6.0ppm)的积分。通过对公式进行重排，hes
‑
pcl中pcl的接枝率计算为0.75。
[0066]
其中，i优选为6，其他不同的碳链长度，只要具有与本发明相似的性质，均应在本发明范围内。对于i代表的不同碳链长度的化合物，在制备过程中相应的采用不同的原料，根据情况调整反应条件，不多加赘述，凡是也具有相同相近载药能力的均应等同。
[0067]
同时，本发明还具有其他需要说明的部分，如下：
[0068]
其一，共聚体的制备方法，包括如下步骤：
[0069]
活化聚己内酯的羧基，
[0070]
将羧基活化的聚己内酯与羟乙基淀粉溶液进行酯化反应，
[0071]
纯化得羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体。
[0072]
具体的，活化聚己内酯的羧基步骤为：无水二甲亚砜溶解聚己内酯，加入1
‑
羟基苯并三氮唑和n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺，进行羧基活化反应；和/或
[0073]
羟乙基淀粉溶液制备步骤为：羟乙基淀粉溶入无水二甲亚砜，优选的，在溶解过程
中采用惰性气体保护；和/或
[0074]
酯化反应温度是40～80℃，优选的，反应过程中采用惰性气体保护。
[0075]
优化方案中，所述惰性气体为氦气；无水二甲亚砜溶解聚己内酯温度为50
‑
70℃；纯化步骤为：将酯化反应所得共聚体混合物通过pbs溶液透析，透析所得液体冷冻，进一步冻干得羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体。
[0076]
纯化步骤一种具体方案为：
[0077]
将酯化反应所得共聚体混合物通过pbs溶液透析，除去未反应的1
‑
羟基苯并三氮唑和/或n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺和/或聚己内酯和/或dmso溶剂，
[0078]
透析所得液体在温度为
‑
20～
‑
25℃条件冷冻3～5h，
[0079]
放入温度为
‑
40～
‑
60℃条件下冷冻干燥得羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体冻干粉。
[0080]
前述共聚体在制备防治肿瘤药物中的应用。
[0081]
所述应用为在car
‑
t治疗中作为药效增强制剂载体的应用；优选的，药效增强制剂为tgf
‑
β抑制剂和/或icg，更优选的，tgf
‑
β抑制剂为ly(ly2157299)。
[0082]
载药系统，包括所述共聚体载于共聚体的药效增强制剂；优选的，药效增强制剂为tgf
‑
β抑制剂和/或icg，更优选的，tgf
‑
β抑制剂为ly。
[0083]
解决了ly难溶于水，难以体内给药，icg无法靶向输送至肿瘤部位的问题。
[0084]
较为优选的，所述载药系统药物粒径为100
‑
200nm，更优选为150nm；
[0085]
所述载药系统的载药量为6wt％
‑
20wt％，优选的，icg载药量为3wt％
‑
10wt％，ly载药量为3wt％
‑
10wt％，更优选的，icg、ly载药量均为5wt％。
[0086]
载药系统的制备方法，包括下述步骤：
[0087]
将所述的共聚体溶解于水中，加入ly和icg共混的三氯甲烷乳溶液，超声破碎，得到乳液；优选的，破碎过程冰浴；
[0088]
将得到的乳液在400
‑
1000bar下均质若干次，纯化后得到共包载ly和icg的两亲性羟乙基淀粉
‑
聚己内酯高分子化合物的载药系统。
[0089]
载药系统在制备抗肿瘤药物中应用。
[0090]
所述应用为在制备car
‑
t治疗的辅助药剂中的应用。
[0091]
所述辅助药剂为car
‑
t治疗肿瘤的辅助药剂；
[0092]
优选的，所述辅助药剂为肿瘤蓄积助剂；和/或，
[0093]
所述辅助药剂为car
‑
t增值促进剂和/或活性促进剂；
[0094]
优选的，所述肿瘤为淋巴瘤。
[0095]
在一些情况中，r5主要表现为
‑
o(ch2)2oh，其余r1
‑
r4为可替换取代基，该共聚体，具有如下通式：
[0096][0097]
其中，n在100～5000之间，m在50～500之间，
[0098]
r1为卤代基或
‑
or’中任一，r2为卤代基或
‑
or’中任一，r3为卤代基或
‑
or’中任一，r4为卤代基或
‑
or’中任一，r’(
‑
r’)为卤代基，
[0099]
优选的，所述n为200，m为100。
[0100]
其中，在r5为
‑
o(ch2)2oh基础上，共聚体一些情况如下所示两种
[0101][0102]
前述式ⅰ、ⅱ中共聚体，其反应原材料也可羟乙基淀粉、聚己内酯，在反应前或反应过程中，聚己内酯部分一种表现为羟基被r1、r2、r3、r4(
‑
r1、
‑
r2、
‑
r3、
‑
r4)取代，或如r5(
‑
r5)为
‑
oh、
‑
or”中任一，其一种为
‑
och2ch2oh；并不因此局限于本发明共聚体只能为式ⅰ、ⅱ中结构；
[0103]
更详细的说明，共聚体一种具体的形式为两亲性的羟乙基淀粉
‑
聚己内酯(或同系物等聚合体)共聚体(当r1、r2、r3、r4均为
‑
oh)，具有以下通式：
[0104][0105]
其中，n在100～5000之间，m在50～500之间，
[0106]
优选的，所述n为200，m为100。
[0107]
优选的，所述聚己内酯在羟乙基淀粉上的接枝率为0.61～1，进一步优选为0.75，在为0.75时具有更好的使用效果。
[0108]
在本发明的另一个方面描述基础上，提供了一种两亲性的两亲性羟乙基淀粉
‑
聚己内酯高分子化合物的制备方法，将羧基化的聚己内酯和羟乙基淀粉进行酯化反应，得到所述的两亲性羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体。
[0109]
优选的，包括以下步骤，本发明还提供了一种上述羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体的制备方法，包括以下步骤：
[0110]
1)溶解聚己内酯并活化其羧基：用无水二甲亚砜溶解聚己内酯，随后加入1
‑
羟基苯并三氮唑和n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺，进行羧基活化反应，在室温下搅拌1
‑
4小时后得到端羧基活化的聚己内酯溶液；
[0111]
2)溶解羟乙基淀粉：氦气保护条件下，在50～70℃下将羟乙基淀粉充分溶解于无水二甲亚砜中，得到羟乙基淀粉的二甲亚砜溶液：
[0112]
3)酯化反应：将步骤1)得到的羧基活化的聚己内酯溶液与步骤2)得到的羟乙基淀粉的二甲亚砜溶液混合，在氮气保护和温度为40～80℃条件下发生酯化反应24～72h，纯化后得到共聚体混合物；
[0113]
4)纯化：将上述共聚体混合物使用pbs溶液进行共透析1
‑
5天，除去未反应的1
‑
羟基苯并三氮唑、n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺、聚己内酯以及dmso溶剂，透析完毕后将透析袋中的液体在温度为
‑
20～
‑
25℃条件冷冻3～5h，然后放入温度为
‑
40～
‑
60℃条件下冷冻干燥，将冷冻干燥后得到所述的羟乙基淀粉接枝聚己内酯共聚体冻干粉；即为羟乙基淀粉接枝聚己内酯共聚体。
[0114]
根据本发明的另一个方面，以羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体为基础，做更为详细的介绍，同时涉及羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体的纳米载药系统，所述纳米载药系统包括羟乙基淀粉
‑
聚己内酯高分子化合物和ly与icg。所述纳米药物粒径为100
‑
200nm,优选为150nm，优选的，所述纳米载药系统icg载药量为3wt％
‑
10wt％,ly载药量为3wt％
‑
10wt％，进一步优选为5wt％。
[0115]
当n或m为其他数值时，本领域技术人员采用相近的制备方法，然后控制原料比例等即可制备；采用不同缩聚度的羟乙基淀粉类缩聚物、聚己内酯类缩聚物进行反应，不多加
赘述。比如还可为n为150、175或225、250，m为75、125或150，根据不同基团需要选择不同的原料，具体制备步骤在本发明目前实施例基础上，适应性作出局部调整即可；当然，在本发明m、n范围外，但是具有于本发明相同相近性质、作用效果的也应当等同在本发明范围内容。
[0116]
羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体的纳米载药系统的制备方法，包括以下步骤：
[0117]
(1)羟乙基淀粉
‑
聚己内酯高分子化合物溶解于水中，在冰浴下超声破碎，同时加入ly和icg共混的三氯甲烷乳溶液，得到超声后的乳液；
[0118]
(2)将步骤1中得到的乳液置于高压均质机中，在400
‑
1000bar下均质1
‑
6次，纯化后得到共包载ly和icg的两亲性羟乙基淀粉
‑
聚己内酯高分子化合物的纳米载药系统。
[0119]
上述共包载ly/icg的羟乙基淀粉
‑
聚己内酯共聚体纳米载药系统的应用，应用于协同car
‑
t治疗淋巴瘤。
[0120]
实施例1：
[0121]
两亲性的羟乙基淀粉
‑
聚己内酯高分子化合物，按照以下步骤合成：
[0122]
(1)溶解聚己内酯并活化其羧基：用5ml无水二甲亚砜溶解0.5g叶酸，随后加入1
‑
羟基苯并三氮唑和n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺，在温度为60℃条件下羧基活化反应30min，在室温下搅拌2
‑
4小时后得到端羧基活化的叶酸溶液；其中，聚己内酯、1
‑
羟基苯并三氮唑和n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺的投料摩尔比为1:1:1；
[0123]
2)溶解多糖：氦气保护条件下，在50℃下将0.5g分子量为5kda的羟乙基淀粉充分溶解于无水二甲亚砜中，得到羟乙基淀粉的二甲亚砜溶液：
[0124]
3)酯化反应：将步骤1)得到的羧基活化的聚己内酯溶液与步骤2)得到的羟乙基淀粉的二甲亚砜溶液混合，在氮气保护和温度为48℃条件下发生酯化反应48h，纯化后得到共聚体混合物；
[0125]
4)纯化：将上述共聚体混合物使用pbs溶液进行透析，透析袋分子量为3500da共透析35天，除去未反应的1
‑
羟基苯并三氮唑、n
‑
n
’‑
二环己基碳二亚胺、羟乙基淀粉以及dmso溶剂，透析完毕后将透析袋中的液体转移至培养皿中，先在温度为
‑
20℃条件冷冻4h，然后放入温度为
‑
50℃条件下冷冻干燥，将冷冻干燥后得到所述的hes
‑
pcl共聚体冻干粉。所得hes
‑
pcl结构通过h
‑
nmr和ftir进行表征，结果如图1所示。
[0126]
hes
‑
pcl的核磁共振氢谱表明在化学位移1.30、1.55、2.28和3.99ppm处出现了新的峰，归属于pcl上的亚甲基氢，表明hes
‑
pcl的成功合成(图1)。ftir结果表明1730cm
‑1出现了pcl酯键峰(图2)，进一步说明了hes
‑
pcl的结构。
[0127]
制备两亲性的羟乙基淀粉偶联聚己内酯的纳米载药系统：将已纯化的hes
‑
pcl溶解至水中，利用超声破碎仪，在冰浴条件下，一边超声一边加入icg与ly以1：1比例共混的二氯甲烷溶液，超声一共5min，超声结束后将乳液加入高压均质机，在500bar下均质2次，最终得到icg/ly@hes
‑
pcl与icg、ly的混悬液，随后5000rpm下离心30min，除去未包载的ly，将icg与icg/ly@hes
‑
pcl的混悬液置于3500da的透析袋中，使用去离子水透析2天，将透析所得的纳米粒水溶液冻干后得到icg/ly@hes
‑
ch冻干粉，该步骤全程在避光条件下进行。
[0128]
通过紫外分光光度法检测icg/ly@hes
‑
pcl中ly和icg的载药量，将icg/ly@hes
‑
pcl称重质量w1，通过紫外分光光度法测得ly质量w2，icg质量w3,ly载药量公式采用w2/w1*100％计算得到5.5wt％，icg载药量采用公式w3/w1*100％计算得到4.3wt％。
[0129]
配制1mg/ml的icg/ly@hes
‑
pcl溶解于超纯水中，超声10min，备用。
[0130]
将铜网放在覆有滤纸的表面皿中，将1mg/ml的纳米粒分散液10μl滴于铜网上，室温下自然干燥，采用透射电镜(h
‑
7000fa,hitachi)观察其形貌。icg/ly@hes
‑
pcl粒径分布采用激光粒度仪测量(nano
‑
zs90，malvern)。图3为本发明制备的icg/ly@hes
‑
pcl的dls图和tem图，如图所示，纳米粒粒径为130nm，且粒径均一，呈球状。dls结果与tem结果相吻合。
[0131]
实施例2：
[0132]
本发明利用transwell实验研究了icg/ly@hes
‑
pcl对cd
‑
19

car
‑
t增殖及活性的影响，具体如下：预先在24孔板中混合raji细胞及实施例1中制备的ly/icg@hes
‑
ch纳米粒，采用近红外光照射5min，随后将细胞转移至transwell小室上室(孔径≈1μm)，下室种植car
‑
t细胞，将transwell小室置于37℃、5％co2条件下培养3天，随后通过流式对cd
‑
19 car
‑
t增殖进行分析，通过酶联免疫法检测cd
‑
19

car
‑
t培养3天内分泌的il
‑
2及tnf
‑
γ对cd
‑
19

car
‑
t活性进行分析。上述实验设置icg、icg@hes
‑
pcl纳米药物 近红外光照射组作为对照组。
[0133]
3天后，ly/icg@hes
‑
pcl组car t数量为对照组2.7倍。光热及ly释放均可促进car t增殖，ly为刺激效果更强图(4)；实验组显著提高car t活性，促进car t的il
‑
2及ifn
‑
λ释放，3天后，ly/icg@hes
‑
pcl组car t数量il
‑
2及ifn
‑
λ释放量为为对照组2.5及2.1倍(图5)。ly为car t活化的主要因素。
[0134]
实施例3：
[0135]
本发明通过动物体内实验评价ly/icg@hes
‑
pcl对cd
‑
19

car
‑
t淋巴瘤蓄积效果的影响，具体操作如下：构建nsg鼠淋巴瘤皮下瘤模型，将ly/icg@hes
‑
pcl纳米粒尾静脉注射至raji的荷瘤nsg鼠体内，按照小动物成像得到的ly/icg@hes
‑
pcl纳米粒蓄积量最高的时间点，对肿瘤进行近红外光照射。照射后，24h后继续对raji的荷瘤nsg鼠模型注射cd
‑
19

car
‑
t治疗nsg鼠。48小时后，处死小鼠，取上述各组分离的肿瘤组织，切碎，采用胶原酶将肿瘤分散至细胞单体，通过流式细胞仪检测经上述治疗后不同肿瘤组织中cd
‑
19

car
‑
t的数量。上述实验设置icg、icg@hes
‑
pcl纳米药物 近红外光照射组作为对照组。
[0136]
结果表明：(1)ly/icg@hes
‑
pcl为对照组car
‑
t数量4.45倍，显著提高cart在肿瘤部位数量；(2)光热组car
‑
t数量提升了2.96倍，高于非光热组(2.22倍)说明光热可能对肿瘤基质改善，进一步提升了car
‑
t肿瘤蓄积(图6)。
[0137]
本领域的技术人员可以明确，在不脱离本发明的总体精神以及构思的情形下，可以做出对于以上实施例的各种变型。其均落入本发明的保护范围之内。本发明的保护方案以本发明所附的权利要求书为准。