一种莼菜多糖及其提取方法和应用与流程

1.本发明涉及植物活性物质提取技术领域，涉及一种莼菜多糖及其提取方法和应用，尤其涉及一种具有保湿、改善皮肤弹性、抗衰老或抗紫外功效的莼菜多糖及其提取方法和应用。


背景技术：

2.莼菜(brasenia schreberi)，俗称蒪菜、马蹄菜、湖菜，是一种多年生水生宿根草本植物。莼菜作为珍贵蔬菜之一，含有丰富的酸性多糖、蛋白质、氨基酸、维生素、组胺和微量元素等物质，具有清热、利水、消肿的功效，且口感丰富，有良好的医用和食用价值。
3.近些年来，有研究表明莼菜的粘液中的多糖不仅具有降低血糖和血浆胆固醇的作用，而且在动物试验中对某些肿瘤的生长具有抑制作用；其中莼菜多糖中的酸性杂多糖被证实是一种较好的免疫促进剂，能够促进巨噬细胞对异物的吞噬，从而增强机体的免疫性能，预防疾病的发生。
4.目前，植物提取多糖的方法有冷热水提法、超声法、微波法等，其中冷热水提法因操作简单、成本低的优点应用广泛，但效率有待提高；而超声法和微波法虽然能够提高提取效率，但存在降解多糖的风险。因此，采用不同方法联合提取多糖已经成为植物多糖提取工艺的发展趋势。
5.cn110156903a公开了一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括：预处理、冷热水提、超声及超滤膜的过滤等操作，最终得到灰白色胶状的莼菜多糖。所述莼菜多糖提取方法得到的莼菜多糖的纯度高，提取效率高，且以水溶性多糖为主，具有较高的生物活性。但该研究中公开的提取方法步骤较为繁琐，耗时耗力，且提取效率有待提高。
6.cn110194810a公开了一种提高降血糖活性的莼菜体外胶多糖的分级纯化方法，所述方法包括莼菜预处理、碱性溶液的加热浸提、过滤、多级超滤等操作，最终得到了不同分子量的莼菜体外胶多糖组分；其中，分子量最大的莼菜体外胶多糖组分具有较高的抗氧化性能和抑制体外酶活性的能力。但该研究中的提取方法提取多糖的效率仍然有待进一步提高，且碱性溶液的使用使得操作人员存在安全风险。
7.cn106146685a公开了一种莼菜多糖的提取与分离纯化工艺，所述分离纯化工艺采用超临界co2萃取技术，克服了热水浸提法和碱性溶液提取法提取率较低的缺点，通过对莼菜多糖粗品纯化，采用碱性蛋白酶处理除去蛋白质；随后十六烷基三甲基溴化铵与莼菜多糖形成季胺盐络合物，高离子强度大下，络合物解离、溶解；最终使用阴离子交换树脂层析，进一步去除杂质，得到分离纯化后的莼菜多糖。但该研究公开的超临界co2萃取技术需要在很高的压力下进行，成本较高，不利于实现工业化。
8.基于以上研究，可以看到莼菜多糖的提取方法多种多样，但各有利弊。因此，找到一种不同方法联合、安全无毒且成本低廉的莼菜多糖提取方法是目前亟需解决的问题。


技术实现要素：

9.针对现有技术的不足和现实实际的需求，本发明的目的在于提供一种莼菜多糖及其提取方法和应用。所述的提取方法简便快速，利用不同类型的交联树脂和分子筛通过物理吸附作用去除大分子蛋白和小分子杂质，并采用反渗透对莼菜多糖进行进一步浓缩，调整莼菜多糖的分子量分布状态，得到的莼菜多糖可应用于皮肤保湿剂、皮肤弹性改善剂、抗衰剂或抗紫外剂等方面。
10.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
11.第一方面，本发明提供了一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
12.(1)取莼菜，与交联树脂混合均匀，得到混合物，并对混合物进行离心，得到离心液体；
13.(2)将步骤(1)中得到的离心液体与分子筛混合均匀，进行吸附，随后除去分子筛，得到吸附后的液体；
14.(3)将步骤(2)中吸附后的液体进行反渗透，取未透膜的部分，进行干燥，得到所述莼菜多糖。
15.本发明采用交联树脂，通过物理吸附作用进行大分子的蛋白除杂；采用分子筛吸附分子量较小的杂质；随后采用反渗透分离低分子糖类物质和其他剩余的小分子物质，对提取的莼菜多糖进行进一步浓缩；优化了提取工艺，能够防止细胞破壁，避免大量叶绿素和酚类成分的吸附，以减少后续除杂的步骤。
16.需要说明的是，本发明通过交联树脂、分子筛及反渗透三者之间的协调复配作用，依次除去大分子蛋白、小分子物质等杂质，并进行进一步的浓缩，最终得到集中分子量分布的莼菜多糖。
17.本发明中，所述交联树脂包括聚苯乙烯树脂、氨基甲基聚苯乙烯树脂、4
‑
(羟甲基)苯氧甲基聚苯乙烯树脂、n
‑
(2
‑
氨基乙基)氨基甲基聚苯乙烯树脂、4
‑
溴聚苯乙烯树脂或双(三氟甲磺酰基)甲基四氟苯基聚苯乙烯树脂中的任意一种或至少两种的组合；所述至少两种的组合例如可以是聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的组合、4
‑
(羟甲基)苯氧甲基聚苯乙烯树脂和n
‑
(2
‑
氨基乙基)氨基甲基聚苯乙烯树脂的组合、聚苯乙烯树脂和4
‑
溴聚苯乙烯树脂的组合等，其他任意组合的方式均可选择，在此便不再一一赘述，优选聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的组合；
18.优选地，所述聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的质量比为(1
‑
3):1。
19.所述交联树脂采用聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的组合，能够提高对大分子蛋白质的吸附能力，保证对大分子蛋白杂质的去除，且所述交联树脂能够重复使用，可有效降低经济成本，减少污水的排放。
20.优选地，所述交联树脂的添加量为莼菜质量的0.5
‑
2.0倍，优选为1
‑
1.5倍，例如可以是0.5倍、0.6倍、0.7倍、0.8倍、0.9倍、1.0倍、1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍或1.5倍等，但并不仅限于所列举的数值，上述各数值范围内其他未列举的数值同样适用。
21.所述的交联树脂添加量过高会造成目标分子量范围内的多糖损失严重，添加量过低会导致吸附蛋白杂质不彻底，因此交联树脂的添加量一般为莼菜质量的0.5
‑
2.0倍。
22.优选地，步骤(1)所述混合的方式为搅拌。
23.优选地，所述搅拌的速率为200
‑
400rpm，例如可以是200rpm、220rpm、240rpm、
260rpm、280rpm、300rpm、320rpm、340rpm、360rpm、380rpm或400rpm等，所述搅拌的时间为0.5
‑
3h，例如可以是0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h或3h等，但并不仅限于所列举的数值，上述各数值范围内其他未列举的数值同样适用。
24.优选地，步骤(1)所述混合物进行离心之前，采用滤布进行包裹并封口。
25.优选地，所述滤布的目数为50
‑
300目，例如可以是50目、100目、150目、200目、250目或300目等，但不仅限于所列举的数值，上述各数值范围内其他未列举的数值同样适用。
26.本发明中，步骤(1)所述离心的时间为2
‑
5min，例如可以是2min、2.5min、3min、3.5min、4min、4.5min或5min等，所述离心的离心力为1000
‑
6000g，优选为2000
‑
5000g，例如可以是1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、3500g、4000g、4500g、5000g、5500g或6000g等，但不仅限于所列举的数值，上述各数值范围内其他未列举的数值同样适用。
27.优选地，步骤(2)所述混合的方式为搅拌。
28.优选地，所述搅拌的时间为0.5
‑
2h，例如可以是0.5h、1h、1.5h或2h等，但不仅限于所列举的数值，上述各数值范围内其他未列举的数值同样适用。
29.本发明中，步骤(3)所述的分子筛包括天然沸石和/或水合硅铝酸盐，优选天然沸石和水合硅铝酸盐的组合。
30.优选地，所述天然沸石和水合硅铝酸盐的质量比为(1
‑
3):1。
31.所述分子筛采用天然沸石和水合硅铝酸盐的组合，能够保证对小分子杂质的去除率，防止杂质对提取的莼菜多糖后续应用的干扰，且所述分子筛能够重复使用，可有效降低经济成本。
32.优选地，所述分子筛的添加量为莼菜质量的0.2
‑
0.5倍，优选为0.3
‑
0.4倍，例如可以是0.2倍、0.3倍、0.4倍或0.5倍等，但不仅限于所列举的数值，上述各数值范围内其他未列举的数值同样适用。
33.所述的分子筛添加量过高会造成目标分子量范围内的多糖含量降低，添加量过低会导致吸附小分子物质不完全，因此分子筛的添加量一般为莼菜质量的0.2
‑
0.5倍。
34.优选地，步骤(3)所述的反渗透膜包括陶瓷膜。
35.优选地，所述反渗透膜的截留分子量为1
‑
50kd，优选为15
‑
40kd；例如可以是1kd、5kd、10kd、15kd、20kd、25kd、30kd、35kd、40kd、45kd或50kd等，但不仅限于所列举的数值，上述各数值范围内其他未列举的数值同样适用。
36.所述反渗透膜的分子量过高会导致目标分子量范围内的莼菜多糖流失，过低不仅会导致目标分子量范围内的莼菜多糖流失，也会造成小分子杂质去除不彻底，可以看出，反渗透的分子量过高或过低均无法得到目标分子量范围内的莼菜多糖，因此反渗透膜的分子量一般为1
‑
50kd，而选择15
‑
40kd能使最终获得的莼菜多糖在各方面的功效更优越。
37.优选地，步骤(3)所述的干燥包括真空干燥或冷冻干燥，优选为冷冻干燥。
38.所述冷冻干燥能够得到粉末更细腻、干度更好的莼菜多糖，方便后续的加工和应用。
39.作为优选技术方案本发明提供了一种如第一方面所述的莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
40.(1)取莼菜，添加莼菜质量的0.5
‑
2.0倍的交联树脂，混合均匀，得到混合物，并用滤布包裹，封口，将混合物在1000
‑
6000g下离心2
‑
5min，得到离心液体；
41.(2)将步骤(1)中的离心液体与0.2
‑
0.5倍的莼菜质量的分子筛混合均匀，进行吸附，随后除去分子筛，得到吸附后的液体；
42.(3)随后采用1
‑
50kd的反渗透膜对步骤(2)中吸附后的液体进行过滤，取未透膜的部分，进行干燥，得到所述莼菜多糖。
43.第二方面，本发明提供了一种如第一方面所述的莼菜多糖的提取方法制得的莼菜多糖。
44.第三方面，本发明提供一种如第二方面所述的莼菜多糖在制备皮肤保湿剂、皮肤弹性改善剂、抗衰剂或抗紫外剂中的应用。
45.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
46.(1)本发明利用不同类型的交联树脂和分子筛进行物理吸附以除去蛋白和小分子杂质，并采用反渗透分离其余小分子杂质和低分子糖类物质，通过交联树脂、分子筛及反渗透三者之间的协调复配作用，进行多重吸附和分离，得到集中分子量的莼菜多糖；
47.(2)本发明优化了莼菜多糖的提取工艺，能够防止细胞破壁，避免大量叶绿素和酚类成分的吸附，以减少后续除杂的步骤；
48.(3)本发明得到的莼菜多糖应用范围广泛，能够用于制备皮肤保湿剂、抗衰老剂、增强皮肤弹性的精华液及抗紫外剂。
具体实施方式
49.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
50.下述实施例或对比例中所涉及的相关原料和材料的来源信息如下：
51.其中，莼菜购自石柱特产美食馆；聚苯乙烯树脂购自上海源叶，型号为y57577；氨基甲基聚苯乙烯树脂购自阿拉丁试剂(上海)有限公司，型号为a118270；4
‑
(羟甲基)苯氧甲基聚苯乙烯树脂购自梯希爱化工贸易有限公司，型号为h0986；4
‑
溴聚苯乙烯树脂购自梯希爱化工贸易有限公司，型号为b2172；双(三氟甲磺酰基)甲基四氟苯基聚苯乙烯树脂购自梯希爱化工贸易有限公司，型号为b2292；反渗透膜购自millipore，型号为cdrc00201。其它材料和试剂，如无特殊说明均可从商业途径获得。
52.实施例1
53.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
54.(1)取新鲜的莼菜，去离子水清洗3遍，添加莼菜质量的1.5倍的聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂(聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的质量比为2:1)，在300rpm下搅拌2h，得到混合物，用200目的滤布包裹，封口，将混合物在2000g下离心5min，得到离心液体；
55.(2)将步骤(1)的离心液体与0.4倍的莼菜质量的天然沸石和水合硅铝酸盐分子筛(天然沸石和水合硅铝酸盐的质量比为2:1)混合均匀，进行吸附，1h后除去分子筛，得到吸附后的液体；
56.(3)随后采用25kd的反渗透膜对步骤(2)中吸附后的液体进行过滤，取未透膜的部分，进行冷冻干燥，得到所述莼菜多糖。
57.实施例2
58.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
59.(1)取新鲜的莼菜，去离子水清洗1遍，添加莼菜质量的0.5倍的聚苯乙烯树脂和4
‑
(羟甲基)苯氧甲基聚苯乙烯树脂(聚苯乙烯树脂和4
‑
(羟甲基)苯氧甲基聚苯乙烯树脂的质量比为2:1)，在200rpm下搅拌2h，得到混合物，用50目的滤布包裹，封口，将混合物在1000g下离心2min，得到离心液体；
60.(2)将步骤(1)的离心液体与0.2倍的莼菜质量的天然沸石和水合硅铝酸盐分子筛(天然沸石和水合硅铝酸盐的质量比为2:1)混合均匀，进行吸附，20min后除去分子筛，得到吸附后的液体；
61.(3)随后采用10kd的反渗透膜对步骤(2)中吸附后的液体进行过滤，取未透膜的部分，进行冷冻干燥，得到所述莼菜多糖。
62.实施例3
63.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
64.(1)取新鲜的莼菜，去离子水清洗2遍，添加莼菜质量的2.0倍的双(三氟甲磺酰基)甲基四氟苯基聚苯乙烯树脂和4
‑
溴聚苯乙烯树脂(双(三氟甲磺酰基)甲基四氟苯基聚苯乙烯树脂和4
‑
溴聚苯乙烯树脂的质量比为2:1)，在400rpm下搅拌2h，得到混合物，用300目的滤布包裹，封口，将混合物在6000g下离心4min，得到离心液体；
65.(2)将步骤(1)的离心液体与0.5倍的莼菜质量的天然沸石和水合硅铝酸盐分子筛(天然沸石和水合硅铝酸盐的质量比为2:1)混合均匀，进行吸附，40min后除去分子筛，得到吸附后的液体；
66.(3)随后采用45kd的反渗透膜对步骤(2)中吸附后的液体进行过滤，取未透膜的部分，进行冷冻干燥，得到所述莼菜多糖。
67.实施例4
68.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，与实施例1的区别仅在于，采用聚苯乙烯交联树脂代替聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的组合，树脂的用量与实施例1中树脂的总量保持一致，其余参数与实施例1保持一致。
69.实施例5
70.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，与实施例1的区别仅在于，采用氨基甲基聚苯乙烯树脂代替聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的组合，树脂的用量与实施例1中树脂的总量保持一致，其余参数与实施例1保持一致。
71.实施例6
72.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，与实施例1的区别仅在于，所述聚苯乙烯交联树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的添加量为莼菜质量的2.5倍，树脂的用量与实施例1中树脂的总量保持一致，其余参数与实施例1保持一致。
73.实施例7
74.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，与实施例1的区别仅在于，所述聚苯乙烯交联树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的添加量为莼菜质量的0.3倍，树脂的用量与实施例1中树脂的总量保持一致，其余参数与实施例1保持一致。
75.实施例8
76.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，与实施例1的区别仅在于，采用水合硅铝
酸盐代替天然沸石和水合硅铝酸盐的组合，水合硅铝酸盐的用量与实施例1中分子筛的总量保持一致，其余参数与实施例1保持一致。
77.实施例9
78.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，与实施例1的区别仅在于，采用天然沸石代替天然沸石和水合硅铝酸盐的组合，天然沸石的用量与实施例1中分子筛的总量保持一致，其余参数与实施例1保持一致。
79.实施例10
80.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，与实施例1的区别仅在于，所述反渗透膜的截留分子量为60kd，其余参数与实施例1保持一致。
81.实施例11
82.本实施例提供一种莼菜多糖的提取方法，与实施例1的区别仅在于，所述反渗透膜的截留分子量为0.8kd，其余参数与实施例1保持一致。
83.对比例1
84.本对比例提供一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
85.(1)取新鲜的莼菜，去离子水清洗3遍，在300rpm下搅拌2h，用200目的滤布包裹，封口，在2000g下离心5min，得到离心液体；
86.(2)将步骤(1)的离心液体与0.4倍的莼菜质量的天然沸石和水合硅铝酸盐分子筛(天然沸石和水合硅铝酸盐的质量比为2:1)混合均匀，进行吸附，1h后除去分子筛，得到吸附后的液体；
87.(3)随后采用25kd的反渗透膜对步骤(2)中吸附后的液体进行过滤，取未透膜的部分，进行冷冻干燥，得到所述莼菜多糖。
88.对比例2
89.本对比例提供一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
90.(1)取新鲜的莼菜，去离子水清洗3遍，添加莼菜质量的1.5倍的超聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂(聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的质量比为2:1)，在300rpm下搅拌2h，得到混合物，用200目的滤布包裹，封口，将混合物在2000g下离心5min，得到离心液体，搅拌1h；
91.(2)随后采用25kd的反渗透膜对步骤(1)中的离心液体进行过滤，取未透膜的部分，进行冷冻干燥，得到所述莼菜多糖。
92.对比例3
93.本对比例提供一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
94.(1)取新鲜的莼菜，去离子水清洗3遍，在300rpm下搅拌2h，用200目的滤布包裹，封口，在2000g下离心5min，得到离心液体，搅拌1h；
95.(2)随后采用25kd的反渗透膜对步骤(1)中的离心液体进行过滤，取未透膜的部分，进行冷冻干燥，得到所述莼菜多糖。
96.对比例4
97.本对比例提供一种莼菜多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
98.(1)取新鲜的莼菜，去离子水清洗3遍，添加莼菜质量的1.5倍的聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂(聚苯乙烯树脂和氨基甲基聚苯乙烯树脂的质量比为2:1)，在300rpm
下搅拌2h，得到混合物，用200目的滤布包裹，封口，将混合物在2000g下离心5min，得到离心液体；
99.(2)将步骤(1)的离心液体与0.4倍的莼菜质量的天然沸石和水合硅铝酸盐分子筛(天然沸石和水合硅铝酸盐的质量比为2:1)混合均匀，进行吸附，1h后除去分子筛，得到吸附后的液体；
100.(3)对步骤(2)中吸附后的液体进行冷冻干燥，得到所述莼菜多糖。
101.测试例1
102.本测试例对实施例1
‑
11与对比例1
‑
4得到的莼菜多糖进行bca蛋白浓度测定。测定方法为：采用bca蛋白浓度测定试剂盒，将20μl样品(实施例1
‑
11与对比例1
‑
4得到的莼菜多糖)与200μl的bca工作液试剂混合均匀，在37℃放置30min，在562nm处进行检测。采用试剂盒中蛋白标准品绘制标准曲线y＝1.5157x 0.0901，r2＝0.9983，将样品测定吸光值代入标准曲线中，计算样品蛋白含量。
103.测定样品蛋白质量(g)＝代入标准曲线计算浓度(mg/ml)
×
稀释倍数
×
溶解体积(ml)
×
0.001
104.蛋白含量(％)＝测定样品蛋白质量(g)/样品冻干粉质量(g)。检测结果统计如表1所示：
105.表1
106.[0107][0108]
如表中数据所示，与对比例相比，本发明所涉及的提取方法得到的莼菜多糖的蛋白含量很低，表明提取方法能够达到良好的蛋白除杂效果，且通过实施例1与实施例4
‑
7相比，发现交联树脂的选择及添加量会影响蛋白除杂效果。
[0109]
测试例2
[0110]
本测试例采用苯酚硫酸法对实施例1
‑
11与对比例1
‑
4得到的莼菜多糖进行多糖含量测定。测定方法为：
[0111]
取1ml含1％冻干粉样品水溶液添加4ml的无水乙醇，搅拌后，在4℃条件下静置24h。取沉淀复溶，在硫酸作用下，与苯酚反应生成橙黄色物质，该物质在490nm处有特征吸收。
[0112]
其中，多糖含量(％)＝测定样品多糖质量(g)/样品冻干粉质量(g)，测定结果统计如表2所示：
[0113]
表2
[0114][0115][0116]
如表中数据所示，与对比例相比，本发明所涉及的提取方法得到的莼菜多糖的多糖很高，表明提取方法能够达到良好的多糖提取效果，且通过实施例1与实施例10
‑
11相比，发现反渗透膜的截留分子量会影响多糖提取效果。
[0117]
测试例3
[0118]
本测试例对实施例1
‑
11与对比例1
‑
4得到的莼菜多糖进行对线虫应激抵抗实验，并设置了空白对照组。实验方法为：
[0119]
将同期化后的线虫置于20℃的ngm/op50上培养，96h后将其转移至含有5mg/ml的实施例1
‑
11和对比例1
‑
4的产品培养基内继续培养，将线虫置于2个254nm，1000j/m2，15w紫外灯下9min.紫外照射后，将线虫20℃培养，3.0h后观察存活率，每组n＝25，p＜0.05。结果统计如表3所示：
[0120]
表3
[0121]
[0122][0123]
如表中数据所示，与对比例相比，在本发明所涉及的提取方法得到的莼菜多糖产品中线虫的存活率较高，表明提取方法得到的莼菜多糖具有良好的抗紫外性能，且通过实施例1与实施例4
‑
7和实施例10
‑
11相比，发现交联树脂的选择和添加量以及反渗透膜的截留分子量会影响所得莼菜多糖产品中线虫的存活率。
[0124]
测试例4
[0125]
本测试例对实施例1、实施例8及对比例1
‑
4得到的莼菜多糖进行分子量的测定，测定方法为：
[0126]
采高效尺寸排阻色谱
‑
多角度激光光散射
‑
示差折光联用测定分子量，采用tsk gel pw
‑
m两柱串联，柱温37℃，流动相为0.7％硫酸钠，流速0.5ml/min，进样量20μl，示差折光检测器温度设置为40℃。莼菜多糖的高分子量为2.44
×
106。
[0127]
其中，莼菜多糖(高分子)得率％＝2.44
×
106分子量的峰面积/所有的峰面积
×
100％。测定结果统计如下表4所示：
[0128]
表4
[0129]
编号莼菜多糖(高分子)得率(％)实施例1100.0实施例8100.0对比例175.0对比例268.9对比例341.2对比例482.5
[0130]
如表中数据所示，与对比例相比，本发明所涉及的提取方法得到的莼菜多糖(高分子)得率很高，表明提取方法能够缩短莼菜多糖分子量的分布。
[0131]
测试例5
[0132]
本测试例探究实施例1
‑
11与对比例1
‑
4得到的莼菜多糖对胶原蛋白酶的影响，实验方法为：
[0133]
将实施例1
‑
11与对比例1
‑
4得到的莼菜多糖配制为5mg/ml的水溶液，使用falgpa(c
23
h
32
n4o7)作为底物，底物浓度为1mmol/l，以分光光度法测定单个样品的胶原蛋白酶抑制效果，并通过监测335nm处的吸光值，考察胶原蛋白酶的活性。其中，抑制率(％)＝(1
‑
样品吸光值/无样品吸光值)
×
100，测定结果如下表5所示所示：
[0134]
表5
[0135]
[0136][0137]
由表中数据可知，与对比例相比，在本发明所涉及的提取方法得到的莼菜多糖对胶原蛋白酶的抑制率较高，表明提取方法得到的莼菜多糖可增强皮肤弹性，且通过实施例1与实施例4
‑
7相比，表明交联树脂的选择和添加量会影响莼菜多糖对胶原蛋白酶的抑制效果。
[0138]
测试例6
[0139]
本测试例对实施例1
‑
11与对比例1
‑
4得到的莼菜多糖进行保湿效果的评价，评价方法为：称取称量瓶的重量，记为m1；称取2g待测样品(实施例1
‑
11与对比例1
‑
4得到的莼菜多糖)置于称量瓶中，记为m2；将称量瓶放入装有硅胶的干燥室中(湿度60％)，室温下放置并在24h后称重，记为mn。
[0140]
保湿率(％)＝(mn
‑
m1)/m2
×
100％
[0141]
每组三次平行，试验结果可直接计算保湿率。评价结果统计如表6所示：
[0142]
表6
[0143][0144][0145]
如表中数据所示，与对比例相比，在本发明所涉及的提取方法得到的莼菜多糖的保湿率较高，表明提取方法得到的莼菜多糖具有良好的保湿性，且通过实施例1与实施例4
‑
7相比，表明交联树脂的选择和添加量会影响莼菜多糖的保湿效果。
[0146]
测试例7
[0147]
本测试例对实施例1
‑
11与对比例1
‑
4配制为10mg/ml的水溶液，进行abts

·
清除能力测定，评价方法为：
[0148]
取abts储备液，用10mmol/l的pbs(ph＝7.4)稀释40～50倍，使其在734nm处吸光值为0.7
±
0.02(30℃)，得到abts工作液；
[0149]
a1：吸取6mlabts工作液，加入60μl样品溶液，振荡10s，30℃条件下静置6min，测定734nm处吸光值；
[0150]
a2：吸取6ml pbs缓冲液，加入加入60μl样品溶液，振荡10s，30℃条件下静置6min，测定734nm处吸光值；
[0151]
a0：吸取6mlabts工作液，加入60μlpbs缓冲液，振荡10s，30℃条件下静置6min，测定734nm处吸光值；
[0152]
abts清除率(％)＝(1
‑
(a1
‑
a2)/a0)
×
100
[0153]
表7
[0154]
[0155][0156]
如表中数据所示，与对比例相比，在本发明所涉及的提取方法得到的莼菜多糖的自由基清除率较高，表明提取方法得到的莼菜多糖具有良好延缓衰老的功效，且通过实施例1与实施例4
‑
7相比，表明交联树脂的选择和添加量会影响莼菜多糖的延缓衰老的效果。
[0157]
综上所述，依次采用交联树脂和分子筛对莼菜进行大分子蛋白除杂和小分子杂质的去除，最后采用1
‑
50kd的反渗透膜进行过滤，分离出低分子糖类和其余小分子杂质，最终能够得到目标分子量范围内的莼菜多糖，得到的莼菜多糖具有良好的保湿性能、延缓衰老的功效、增强皮肤弹性及抗紫外能力等。
[0158]
申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。