一种高提取率的黄芪甲苷提取方法与流程

1.本发明涉及中药提取技术领域，尤其涉及一种高提取率的黄芪甲苷提取方法。


背景技术：

2.黄芪是属于豆科黄芪属植物，其分类有蒙古黄芪和膜荚黄芪，主要在黑龙江、吉林、内蒙古等省区分布，被称为药中之上品。黄茂微温，性甘，脾经，归肺，有利于利尿托毒、补气固表、排脓、敛疮生肌。
3.黄芪中含有黄芪多糖、皂苷类(黄芪皂苷i
‑
viii)、黄酮类(山奈酚、鼠李柠檬素、棚皮素、黄酮苷等)、氨基酸类(天冬氨酸、刀豆氨酸、丙氨酸、脯氨酸、r
‑
氨基丁酸、精氨酸等)及其他微量元素(铁、锰、锌等)。黄芪多糖和皂苷类是黄芪中的主要活性物质，黄芪皂苷(i
‑
viii)是黄芪中主要皂苷类物质。黄芪中黄芪甲苷的含量是药材质量控制的重要指标。黄芪甲苷有利于心脏正性肌力作用，也是降压重要有效成分之一。
4.黄芪甲苷是黄芪三萜皂苷中的黄芪皂苷iv，黄芪中含量黄芪甲苷极低，一般在0.04
‑
0.14％，黄芪药材中成分较多，分离、提取非常困难。目前，黄芪甲苷的提取方法一般以水提法得到黄芪提取液，然后再通过正丁醇萃取法、大孔法吸附树脂等方法纯化分离皂苷单体，但该方法周期长、操作复杂，生产成本较高，且收率较低。


技术实现要素：

5.基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，本发明黄芪甲苷的提取率高，黄芪甲苷的纯度高。
6.本发明提出了一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：将冷冻后的黄芪超微粉与碱性甲醇水溶液混匀，加压浸透，然后加水，减压提取得到提取液，纯化得到黄芪甲苷。
7.优选地，黄芪超微粉的粒径为300
‑
400目。
8.优选地，冷冻温度≤
‑
20℃，冷冻时间为8
‑
12h。
9.优选地，碱性甲醇水溶液的温度为40
‑
50℃。
10.优选地，碱性甲醇水溶液的ph＝10
‑
11。
11.可以用氢氧化钠等物质调节ph。
12.优选地，碱性甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为75
‑
80％。
13.优选地，黄芪超微粉与碱性甲醇水溶液的重量体积(g/ml)比为1:3
‑
5。
14.优选地，加压浸透的压力为11
‑
13mpa。
15.优选地，加压浸透的时间为60
‑
90min。
16.优选地，加压浸透的温度为40
‑
50℃。
17.优选地，水的温度为70
‑
80℃。
18.优选地，黄芪超微粉与水的重量比为1:10
‑
12。
19.优选地，减压提取的压力为0.03
‑
0.04mpa。
20.优选地，减压提取时间为20
‑
25min。
21.优选地，减压提取1
‑
3次。
22.优选地，纯化方法的具体步骤包括：用hpd300树脂柱洗脱提取液得到洗脱液，浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，重结晶得到黄芪甲苷。
23.优选地，用体积分数为68
‑
72％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为4
‑
5倍柱体积。
24.优选地，重结晶溶液为甲醇。
25.有益效果：
26.本发明将黄芪超微粉在低温下冷冻后，再与40
‑
50℃的碱性甲醇水溶液混匀，黄芪中的纤维、细胞壁等经过温差极大的骤热处理，会发生断裂、破碎，然后再加压浸透，会使得细胞壁进一步破碎，促进碱性甲醇水溶液进入细胞内部，从而促进有效成分的提取，另外碱性环境浸透，可以促进黄芪皂苷i
‑
ii，脱乙酰基转变成黄芪甲苷，从而提高黄芪甲苷的含量；然后加入一定温度的水，立即减压使得溶液沸腾，从而提取获得黄芪甲苷；经之前的骤热和加压浸透处理，从破碎细胞中可以更加容易、也能更加完全的提取黄芪甲苷，从而提高其提取率；然后经hpd300树脂柱洗脱、重结晶获得高纯度的黄芪甲苷；且本发明提取用的碱性甲醇水溶液和水的用量较少，可以大幅减少柱洗脱时，溶剂的用量，缩短纯化时间，减少溶剂用量，从而节约成本。
具体实施方式
27.下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
28.以下实施例1
‑
3和对比例1
‑
2的黄芪粉是从同一厂家购买的同一批次的产品，其粒径为60目。
29.实施例1
30.一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
31.称取黄芪粉进行超微粉碎得到粒径为320目的黄芪超微粉，称取5g黄芪超微粉，置于
‑
20℃冷冻10h，然后取出立即与ph＝10.5、温度为45℃、体积分数为77％甲醇水溶液20ml混匀，然后转移至反应釜，调节压力为12mpa，于45℃浸透80min，然后加入温度为75℃的水，立即减压至0.03mpa提取2次(每次水用量均为55ml，每次减压提取的时间均为23min)，合并提取液；
32.用hpd300树脂柱洗脱(用体积分数为70％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为5倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
33.实施例2
34.一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
35.称取黄芪粉进行超微粉碎得到粒径为300目的黄芪超微粉，称取5g黄芪超微粉，置于
‑
20℃冷冻12h，然后取出立即与ph＝10、温度为50℃、体积分数为75％甲醇水溶液25ml混匀，然后转移至反应釜，调节压力为11mpa，于50℃浸透60min，然后加入温度为80℃的水50ml，立即减压至0.04mpa提取1次，每次减压提取的时间均为25min，合并提取液；
36.用hpd300树脂柱洗脱(用体积分数为68％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液
的用量为5倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
37.实施例3
38.一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
39.称取黄芪粉进行超微粉碎得到粒径为400目的黄芪超微粉，称取5g黄芪超微粉，置于
‑
20℃冷冻8h，然后取出立即与ph＝11、温度为40℃、体积分数为80％甲醇水溶液15ml混匀，然后转移至反应釜，调节压力为13mpa，于40℃浸透90min，然后加入温度为70℃的水，立即减压至0.03mpa提取3次(每次水用量均为60ml，每次减压提取的时间均为20min)，合并提取液；
40.用hpd300树脂柱洗脱(用体积分数为72％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为4倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
41.对比例1(水提法)
42.一种黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
43.称取5g粒径为60目的黄芪粉末，加入水煎煮2次(每次用水55ml，每次煎煮时间为1.5h)，过滤得到提取液；
44.用hpd300树脂柱洗脱(用体积分数为70％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为5倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
45.对比例2(减压内部提取法)
46.一种黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
47.称取黄芪粉进行超微粉碎得到粒径为320目的黄芪超微粉，称取5g黄芪超微粉，与体积分数为77％甲醇水溶液20ml混匀浸透80min，然后转移至反应釜，然后加入温度为75℃的水，立即减压至0.03mpa提取2次(每次水用量均为55ml，每次减压提取的时间均为23min)，合并提取液；
48.称取5g粒径为60目的黄芪粉末，加入水煎煮2次(每次用水55ml，每次煎煮时间为1.5h)，过滤得到提取液；
49.用hpd300树脂柱洗脱(用体积分数为70％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为5倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
50.实验
51.按照对照品外标法检测提取液中的黄芪甲苷含量，并检测最终获得的黄芪甲苷的纯度，计算提取液中黄芪甲苷的提取率和最终获得黄芪甲苷成品的收率。
52.检测方法为：
53.高效液相色谱仪(agilent1200，美国)，蒸发光散射检测器elsd(2000es，美国，alltech)，旋转蒸发仪(re
‑
52aa，上海)；
54.色谱柱：agilent xdb
‑
c18(150mm
×
4.6mm，5μm)，流动相：乙腈
‑
水＝32:68(v/v)，流速＝1.0ml/min，柱温＝30℃，进样量＝5μl，elsd参数：漂移管温度为105℃，n2流速为2.9ml/min。
55.检测结果如表1所示。
56.表1检测结果
[0057][0058]
由上表可以看出，本发明对黄芪甲苷提取率高，且制得的黄芪甲苷纯度高。
[0059]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。