一种化学修饰的木聚糖酶及其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：所述木聚糖酶的氨基酸序列如seq id no:1所示，编码基因如seq id no:2所示，化学修饰剂为右旋糖酐。2.根据权利要求1所述的化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：所述化学修饰剂为含有醛基的右旋糖酐。3.根据权利要求1所述的化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：化学修饰剂与木聚糖酶通过氨基酸的氨基进行偶联。4.根据权利要求2所述的化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：所述含有醛基的右旋糖酐采用naio4氧化右旋糖酐的邻羟基获得。5.根据权利要求2所述的化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：所述含有醛基的右旋糖酐采用150kda的右旋糖酐。6.权利要求1所述的化学修饰的木聚糖酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）木聚糖酶的制备将木聚糖酶编码基因与表达载体pet28a( )相连接，并将连接产物转化至大肠杆菌bl21(de3) 细胞，获得重组菌株；培养重组菌株进行发酵表达，发酵液破碎离心后，将上清液进行硫酸铵沉淀、离子交换柱纯化，获得木聚糖酶液；（2）含醛基右旋糖酐的制备避光下将2.4g naio4溶于10ml纯水制得naio4溶液，将其倒入10ml浓度为2g/ml的右旋糖酐溶液中，室温下避光搅拌8h，反应完成后加入5ml的乙二醇反应2h后，反应液在8000
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14000的透析袋中，过夜透析；（3）木聚糖酶化学修饰物的制备取1ml修饰剂与2ml木聚糖酶酶液，用ph 7.5的pbs溶液定容到10ml，加入0.1g木聚糖，35℃ph 7.0下反应6h后，加入0.1g氰基硼氢化钠，继续反应1h后，4℃下透析4h，得到木聚糖酶化学修饰物。

技术总结
本发明公开了一种化学修饰的木聚糖酶及其制备方法和应用，属于酶工程领域。利用NaIO4的氧化特点，将右旋糖酐上的羟基氧化为醛基后对木聚糖酶进行化学修饰。修饰后的酶拥有右旋糖酐结构，可以与木质纤维素中纤维素结合，达到一种固定化作用，从而使酶活力提高了237%，同时拥有更高的最大反应速率Vmax，该方法克服了木聚糖酶在木质纤维素中反应速率低的缺点，提高了木聚糖酶的催化活性，具有广阔的工业应用前景。用前景。用前景。


技术研发人员：马江锋 姜岷 王寅竹 吴昊 董维亮
受保护的技术使用者：南京工业大学
技术研发日：2021.08.27
技术公布日：2021/11/9