一种蛋白质提取试剂及其制备方法以及蛋白质提取方法与流程

1.本发明涉及蛋白质提取试剂领域，具体涉及一种蛋白质提取试剂及其制备方法以及蛋白质提取方法。


背景技术：

2.蛋白质组学研究能够通过构建细胞中蛋白质表达的时间及空间差异图谱揭示生命规律，蛋白质的sds聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术是蛋白质组学研究的关键技术，而对蛋白组学差异分析的关键技术是总蛋白是否完全提取，在总蛋白的提取上，细胞裂解液是广泛使用在蛋白分析和检测上的一种试剂，因裂解细胞或组织的强度而被分为强、中、弱三种，分别用于不同的使用中，然而这三种细胞组织裂解液均不能够完全提取出细胞或组织中的全蛋白，因为其条件的限制，往往会出现细胞沉淀或大量不溶于裂解液中的脂蛋白等；
3.近年来，蛋白提取越来越专业化，如细胞核蛋白提取、细胞膜蛋白提取、细胞浆蛋白提取和线粒体蛋白提取等，分别用于不同的科研领域，但是这些技术仍然存在不能够完全提取出总蛋白的缺点；
4.ripa提取总蛋白的方法以价格低廉、操作简单及重复性较好等特点被广泛应用在蛋白质组学研究中，广泛采用的试剂有十二烷基磺酸钠、二甲基亚砜、曲拉通等，能够起到裂解细胞促进蛋白质溶解，防止细胞裂解液中蛋白质降解等作用，大大提高了细胞或组织中全蛋白的提取，但是，在蛋白提取前处理步骤较为繁琐，大大增加了操作时间，增加了组织或细胞被污染的概率。


技术实现要素：

5.本发明要解决的技术问题是现有的在蛋白提取前处理步骤较为繁琐，大大增加了操作时间，增加了组织或细胞被污染的概率，本发明提供一种蛋白质提取试剂，本发明还提供一种蛋白质提取试剂的制备方法，本发明还提供一种蛋白质提取方法，能够不需要提取前对细胞或组织进行前处理，能够缩短提取组织或细胞中全蛋白的时间，极大的减少了蛋白质样本被污染的可能，能够大大的提高细胞和组织中总蛋白的提取效率，且成本较为低廉；依据一种蛋白提取试剂的使用方法进行蛋白质的提取能够在极短的时间内完成蛋白的提取，并在短时间内的到细胞或组织中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基苯基醚能够有效的裂解细胞和组织促进蛋白质溶解，添加的乙二胺四乙酸和二甲基亚砜，有助于抑制蛋白质降解，能够而不降低蛋白活性并提取到组织或细胞中表达量较低的蛋白，用以解决现有技术导致的缺陷。
6.为解决上述技术问题本发明提供以下的技术方案：
7.第一方面，一种蛋白质提取试剂，其中，包含尿素、十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、乙二胺四乙酸、二甲基亚砜。
8.上述的一种蛋白质提取试剂，其中，所述尿素的质量体积比为40g/l；
9.所述十二烷基硫酸钠的质量体积比为1g/l；
10.所述聚乙二醇辛基苯基醚的体积百分含量为0.1％；
11.所述氯化钠的质量体积比为8g/l；
12.所述氯化钾的质量体积比为0.2g/l；
13.所述磷酸氢二钠的质量体积比为1.42g/l；
14.所述磷酸二氢钾的质量体积比为0.27g/l；
15.所述乙二胺四乙酸的质量体积比为8g/l；
16.所述二甲基亚砜的体积百分含量为1％。
17.上述的一种蛋白质提取试剂，其中，还包含浓盐酸，采用所述浓盐酸将所述蛋白质提取试剂的ph值调至7.0
‑
7.5。
18.第二方面，一种蛋白质提取试剂的制备方法，其中，包含以下步骤：
19.步骤a1：将乙二胺四乙酸粉末溶解于800ml的去离子水中；
20.步骤a2：加入40g尿素溶解；
21.步骤a3：依次加入十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、二甲基亚砜后溶解并定容至1000ml制得蛋白质提取试剂。
22.上述的一种蛋白质提取试剂的制备方法，其中，在所述步骤a3得到的所述蛋白质提取试剂中加入浓盐酸将ph值调至7.0
‑
7.5，随后加去离子水定容至1l，在使用0.2μm的滤膜进行过滤除菌。
23.第三方面，一种蛋白质提取方法，其中，包含以下步骤：
24.步骤b1：获取组织，并将所述组织置于磷酸缓冲盐溶液中洗涤三次，去除多余的血液或培养液；
25.步骤b2：以100mg的组织或细胞配1ml的蛋白质提取试剂的比例加入离心管中，并加入研磨瓷珠置于组织匀浆器中研磨；
26.步骤b3：研磨完成后在冰上静置5min，随后离心获得总蛋白溶解上清。
27.上述的一种蛋白质提取方法，其中，步骤b2中需加入3
‑
7颗的研磨瓷珠置于组织匀浆器中以温度为4℃的条件下研磨2min。
28.上述的一种蛋白质提取方法，其中，步骤b3中所述离心的条件为12000rpm下离心5min。
29.第四方面，采用第一方面提供的一种蛋白质提取试剂在蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白western blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的应用。
30.依据上述本发明一种蛋白质提取试剂及其制备方法以及蛋白质提取方法提供的技术方案具有以下技术效果：
31.本发明提供的一种蛋白提取试剂不需要提取前对细胞或组织进行前处理，能够缩短提取组织或细胞中全蛋白的时间，极大的减少了蛋白质样本被污染的可能，能够大大的提高细胞和组织中总蛋白的提取效率，且成本较为低廉；
32.依据一种蛋白提取试剂的使用方法进行蛋白质的提取能够在极短的时间内完成蛋白的提取，并在短时间内的到细胞或组织中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基苯基醚能够有效的裂解细胞和组织促进蛋白质溶解，添加的乙二胺四乙酸和二甲基亚砜，有助于抑制蛋白质降解，能够而不降低蛋白活性并提取到组织或细胞中表达量较低的蛋白。
附图说明
33.图1为各个样品的wb检测且检测指标为gapdh的结果图；
34.图2为各个样品的wb检测且检测指标为β
‑
actin的结果图。
具体实施方式
35.为了使发明实现的技术手段、创造特征、达成目的和功效易于明白了解，下结合具体图示，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。
36.基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
37.须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。
38.同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”及“一”等的用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。
39.本发明的一较佳实施例是提供一种蛋白质提取试剂及其制备方法以及蛋白质提取方法，目的是不需要提取前对细胞或组织进行前处理，能够缩短提取组织或细胞中全蛋白的时间，极大的减少了蛋白质样本被污染的可能，能够大大的提高细胞和组织中总蛋白的提取效率，且成本较为低廉；依据一种蛋白提取试剂的使用方法进行蛋白质的提取能够在极短的时间内完成蛋白的提取，并在短时间内的到细胞或组织中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基苯基醚能够有效的裂解细胞和组织促进蛋白质溶解，添加的乙二胺四乙酸和二甲基亚砜，有助于抑制蛋白质降解，能够而不降低蛋白活性并提取到组织或细胞中表达量较低的蛋白。
40.制备蛋白质提取试剂，将乙二胺四乙酸粉末溶解于800ml的去离子水中获得质量体积比为8g/l的溶液，随后加入40g的尿素溶解，随后依次加入质量体积比为1g/l的十二烷基硫酸钠、体积百分含量为0.1％的聚乙二醇辛基苯基醚、质量体积比为8g/l的氯化钠、质量体积比为0.2g/l的氯化钾、质量体积比为1.42g/l的磷酸氢二钠、0.27g/l的磷酸二氢钾、体积百分含量为1％的二甲基亚砜后溶解并定容至1000ml制得蛋白质提取试剂；
41.随后在蛋白质提取试剂中加入浓盐酸将ph值调至7.0
‑
7.5，随后加去离子水定容至1l，在使用0.2μm的滤膜进行过滤除菌；
42.获取组织，采用大鼠肝脏330mg，分为a组、b组、c组、d组，每组组织采用50mg的大鼠肝脏，并将a组、b组、c组、d组中的组织置于磷酸缓冲盐溶液中洗涤三次，去除多余的血液或培养液，a组组织中使用biomate进行操作、b组使用solarbio进行操作、c组使用biomate进行操作并加入苯甲基磺酰氟、d组使用solarbio进行操作并加入苯甲基磺酰氟；
43.a组、b组、c组、d组分别配0.5ml的蛋白质提取试剂并加入离心管中，随后加入3
‑
7颗的研磨瓷珠置于组织匀浆器中以温度为4℃的条件下研磨2min；
44.研磨完成后在冰上静置5min，随后在12000rpm的条件下离心5min获得a组、b组、c组、d组的总蛋白溶解上清。
45.获取的a组、b组、c组、d组总蛋白溶解上清进行wb检测，检测指标为gapdh(甘油醛
‑3‑
磷酸脱氢酶)和β
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actin(肌动蛋白)，结果如图1
‑
2所示。
46.综上，本发明的一种蛋白质提取试剂及其制备方法以及蛋白质提取方法，能够不需要提取前对细胞或组织进行前处理，能够缩短提取组织或细胞中全蛋白的时间，极大的减少了蛋白质样本被污染的可能，能够大大的提高细胞和组织中总蛋白的提取效率，且成本较为低廉；依据一种蛋白提取试剂的使用方法进行蛋白质的提取能够在极短的时间内完成蛋白的提取，并在短时间内的到细胞或组织中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基苯基醚能够有效的裂解细胞和组织促进蛋白质溶解，添加的乙二胺四乙酸和二甲基亚砜，有助于抑制蛋白质降解，能够而不降低蛋白活性并提取到组织或细胞中表达量较低的蛋白。
47.以上对发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，发明并不局限于上述特定实施方式，其中未尽详细描述的设备和结构应该理解为用本领域中的普通方式予以实施；本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改做出若干简单推演、变形或替换，这并不影响发明的实质内容。