一种多酚修饰脂质体纳米系统及其制备方法与应用与流程

1.本发明属于医疗健康与生物医用材料技术领域，具体涉及一种多酚修饰脂质体纳米系统，还涉及一种多酚修饰脂质体纳米系统的制备方法与应用，还涉及一种多酚修饰脂质体纳米系统的应用。


背景技术：

2.酚类和多酚类物质广泛分布于植物组织中，它们与多种生物功能有关，例如化学防御、色素沉着、结构支撑和防止辐射损伤，这个大家族的成员包括表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)，表没食子儿茶素没食子酸酯(ecg)，表没食子儿茶素(egc)和单宁酸(ta)，植物多酚具有丰富而复杂的物理和化学性质，具有广泛的化学用途，包括吸收紫外线、清除自由基和金属离子络合，所以多酚也常用于促进蛋白质、核酸和常规药物分子递送。
3.脂质体作为一种新型药物载体在医药领域的研究得到了迅速的发展，脂质体是有磷脂分子构成的双分子囊泡，脂质体作为药物载体，具有诸多优点：如脂质体既能包封脂溶性药物，又能包封水溶性药物,能有效的保护被包裹药物，提高生物利用度，使药物具有八项作用，能降低药物的毒副作用，脂质体具有缓控释作用，适合多途径给药等，脂质体由于其独特的结构特点，作为一种新型药物载体使药物制剂进入了靶向给药的新天地，在医药界得到了日益广泛的关注，脂质体主要是由磷脂和胆固醇或者其他附加剂形成的类似于生物膜结构的双分子层微小囊泡，无毒、无免疫原性，对水溶性和脂溶性药物均有较好的包载能力，已广泛应用于药物输送领域，改善药物的稳定性，延长其作用时间，以及降低其刺激性，使其更加容易通过皮肤毛细孔，加速皮肤吸收，但其自身稳定性也相对减弱，影响生长因子的长效性。
4.对于多酚类与脂质体，目前常用的方法是用脂质体载多酚类物质，但是传统的方法复杂、反应时间长、成本高并且难以保证安全。


技术实现要素：

5.为解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种多酚修饰脂质体纳米系统及其制备方法与应用，具有方法简便、反应时间短、成本低以及既环保又安全的特点。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种多酚修饰脂质体纳米系统，包括脂质体、多酚、氧化剂、作为反应溶剂的缓冲液以及具有聚四氟乙烯内衬的水热反应釜。
7.作为本发明的一种优选技术方案，所述缓冲液为pbs缓冲液或tris
‑
hcl缓冲液，且缓冲液的ph值为4.0
‑
10.0。
8.本发明还公开了一种多酚修饰脂质体纳米系统的制备方法，采用薄膜干燥法制备脂质体，再通过一锅水热法制备多酚修饰脂质体纳米系统，具体包含如下步骤：
9.步骤一：在流动的n2环境下，将溶解于有机溶剂中的磷脂和胆固醇进行干燥，制得样品；
10.步骤二：真空环境下，将干燥成脂质薄膜后的样品进行二次干燥；
11.步骤三：将试样冷却至室温，之后加入适量体积生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声和挤出仪对脂质体的粒径进行控制；
12.步骤四：将步骤三得到的脂质体与所需多酚、氧化剂溶于反应溶剂中，在水热反应釜内通过一锅水热法制得多酚修饰脂质体纳米系统。
13.作为本发明的一种优选技术方案，步骤一中所用的磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油中的一种或几种的组合，所用的磷脂和胆固醇的质量比1
‑
8：1。
14.作为本发明的一种优选技术方案，步骤一中所用的有机溶剂为甲醇、氯仿或乙醇中的一种或几种的组合。
15.作为本发明的一种优选技术方案，步骤二中的真空干燥温度为50℃
‑
80℃。
16.作为本发明的一种优选技术方案，步骤三中的超声时间为1
‑
5min，挤出过膜的膜孔径为100
‑
1000nm。
17.作为本发明的一种优选技术方案，步骤四中的多酚为表没食子儿茶素没食子酸酯egcg、表没食子儿茶素没食子酸酯ecg、表没食子儿茶素egc、单宁酸ta或多巴胺盐酸盐，浓度为0.1
‑
5mg/ml。
18.作为本发明的一种优选技术方案，步骤四中的一锅水热法条件为50
‑
120℃，水热反应0.5
‑
24h，氧化剂为过氧化氢或过硫酸铵，质量浓度为0.01
‑
1％。
19.本发明还公开了将多酚修饰脂质体纳米系统作为药物载体的应用。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明以植物多酚为原料，采用薄膜干燥法制备脂质体，再通过一锅水热法制备多酚修饰脂质体纳米系统，由于构成脂质体双分子膜的主要成分是磷脂,且因脂质体特殊的类细胞结构使之更容易渗透到皮肤的角质层中并能很好的分布，由于脂质体的包裹作用，可以防止许多活性物质的降解与变质，而且多酚具有丰富而复杂的物理和化学性质，具有广泛的化学用途，包括吸收紫外线、清除自由基和金属离子络合，也常用于促进蛋白质、核酸和常规药物分子递送，所以其可以作为一种通用平台来递送蛋白质、核酸和常规药物分子等；本发明制备方法简便、反应时间短、成本低、既环保又安全。
附图说明
21.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
22.图1为本发明的流程图；
具体实施方式
23.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
24.实施例1
25.请参阅图1，本发明提供以下技术方案：一种多酚修饰脂质体纳米系统，包括脂质
体、多酚、氧化剂、作为反应溶剂的缓冲液以及具有聚四氟乙烯内衬的水热反应釜。
26.具体地，本实施例中，缓冲液为pbs缓冲液或tris
‑
hcl缓冲液，且缓冲液的ph值为4.0
‑
10.0。
27.一种多酚修饰脂质体纳米系统的制备方法，采用薄膜干燥法制备脂质体，再通过一锅水热法制备多酚修饰脂质体纳米系统，具体包含如下步骤：
28.步骤一：在流动的n2环境下，将溶解于有机溶剂中的磷脂和胆固醇进行干燥，制得样品；
29.步骤二：真空环境下，将干燥成脂质薄膜后的样品进行二次干燥；
30.步骤三：将试样冷却至室温，之后加入适量体积生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声和挤出仪对脂质体的粒径进行控制；
31.步骤四：将步骤三得到的脂质体与所需多酚、氧化剂溶于反应溶剂中，在水热反应釜内通过一锅水热法制得多酚修饰脂质体纳米系统。
32.其中，步骤一中所用的磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油中的一种或几种的组合，所用的磷脂和胆固醇的质量比1
‑
8：1，步骤一中所用的有机溶剂为甲醇、氯仿或乙醇中的一种或几种的组合，步骤二中的真空干燥温度为50℃
‑
80℃，步骤三中的超声时间为1
‑
5min，挤出过膜的膜孔径为100
‑
1000nm，步骤四中的多酚为表没食子儿茶素没食子酸酯egcg、表没食子儿茶素没食子酸酯ecg、表没食子儿茶素egc、单宁酸ta或多巴胺盐酸盐，浓度为0.1
‑
5mg/ml，步骤四中的一锅水热法条件为50
‑
120℃，水热反应0.5
‑
24h，氧化剂为过氧化氢或过硫酸铵，质量浓度为0.01
‑
1％。
33.具体采用：
34.1.脂质体的制备：
35.分别取3g磷脂和1g胆固醇，并溶解于10ml的氯仿溶剂中，震荡摇匀后置于流动n2条件下干燥，待样品干燥成脂质薄膜后，将西林瓶置于真空干燥箱中60℃真空干燥2h，以除去痕量溶剂；待试样冷却至室温后，加入5ml生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声5min，用挤出仪过100nm聚碳酸酯膜对脂质体的粒径进行控制，得到粒径为100nm左右的脂质体。
36.2.多酚修饰脂质体纳米系统的制备：
37.取3ml脂质体与30mgegcg、15mg氧化剂溶于30ml的tris
‑
hcl缓冲液(ph＝6)中搅拌均匀，将溶液加到聚四氟乙烯内衬的水热反应釜中，50℃反应3h，得到多酚修饰脂质体纳米系统。
38.实施例2
39.请参阅图1，本发明提供以下技术方案：一种多酚修饰脂质体纳米系统，包括脂质体、多酚、氧化剂、作为反应溶剂的缓冲液以及具有聚四氟乙烯内衬的水热反应釜。
40.具体地，本实施例中，缓冲液为pbs缓冲液或tris
‑
hcl缓冲液，且缓冲液的ph值为4.0
‑
10.0。
41.一种多酚修饰脂质体纳米系统的制备方法，采用薄膜干燥法制备脂质体，再通过一锅水热法制备多酚修饰脂质体纳米系统，具体包含如下步骤：
42.步骤一：在流动的n2环境下，将溶解于有机溶剂中的磷脂和胆固醇进行干燥，制得样品；
43.步骤二：真空环境下，将干燥成脂质薄膜后的样品进行二次干燥；
44.步骤三：将试样冷却至室温，之后加入适量体积生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声和挤出仪对脂质体的粒径进行控制；
45.步骤四：将步骤三得到的脂质体与所需多酚、氧化剂溶于反应溶剂中，在水热反应釜内通过一锅水热法制得多酚修饰脂质体纳米系统。
46.其中，步骤一中所用的磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油中的一种或几种的组合，所用的磷脂和胆固醇的质量比1
‑
8：1，步骤一中所用的有机溶剂为甲醇、氯仿或乙醇中的一种或几种的组合，步骤二中的真空干燥温度为50℃
‑
80℃，步骤三中的超声时间为1
‑
5min，挤出过膜的膜孔径为100
‑
1000nm，步骤四中的多酚为表没食子儿茶素没食子酸酯egcg、表没食子儿茶素没食子酸酯ecg、表没食子儿茶素egc、单宁酸ta或多巴胺盐酸盐，浓度为0.1
‑
5mg/ml，步骤四中的一锅水热法条件为50
‑
120℃，水热反应0.5
‑
24h，氧化剂为过氧化氢或过硫酸铵，质量浓度为0.01
‑
1％。
47.具体采用：
48.1.脂质体的制备：
49.分别取5g磷脂和1g胆固醇，并溶解于10ml的氯仿溶剂中，震荡摇匀后置于流动n2条件下干燥，待样品干燥成脂质薄膜后，将西林瓶置于真空干燥箱中70℃真空干燥1h，以除去痕量溶剂；待试样冷却至室温后，加入5ml生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声10min，用挤出仪过200nm聚碳酸酯膜对脂质体的粒径进行控制，得到粒径为200nm左右的脂质体。
50.2.多酚修饰脂质体纳米系统的制备：
51.取3ml脂质体与60mgegcg、15mg氧化剂溶于30ml的tris
‑
hcl缓冲液(ph＝8.5)中搅拌均匀，将溶液加到聚四氟乙烯内衬的水热反应釜中，70℃反应2h，得到多酚修饰脂质体纳米系统。
52.实施例3
53.请参阅图1，本发明提供以下技术方案：一种多酚修饰脂质体纳米系统，包括脂质体、多酚、氧化剂、作为反应溶剂的缓冲液以及具有聚四氟乙烯内衬的水热反应釜。
54.具体地，本实施例中，缓冲液为pbs缓冲液或tris
‑
hcl缓冲液，且缓冲液的ph值为4.0
‑
10.0。
55.一种多酚修饰脂质体纳米系统的制备方法，采用薄膜干燥法制备脂质体，再通过一锅水热法制备多酚修饰脂质体纳米系统，具体包含如下步骤：
56.步骤一：在流动的n2环境下，将溶解于有机溶剂中的磷脂和胆固醇进行干燥，制得样品；
57.步骤二：真空环境下，将干燥成脂质薄膜后的样品进行二次干燥；
58.步骤三：将试样冷却至室温，之后加入适量体积生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声和挤出仪对脂质体的粒径进行控制；
59.步骤四：将步骤三得到的脂质体与所需多酚、氧化剂溶于反应溶剂中，在水热反应釜内通过一锅水热法制得多酚修饰脂质体纳米系统。
60.其中，步骤一中所用的磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油中的一种或几种的组合，所用的磷脂和胆固醇的质量比1
‑
8：1，步骤一中所用的
有机溶剂为甲醇、氯仿或乙醇中的一种或几种的组合，步骤二中的真空干燥温度为50℃
‑
80℃，步骤三中的超声时间为1
‑
5min，挤出过膜的膜孔径为100
‑
1000nm，步骤四中的多酚为表没食子儿茶素没食子酸酯egcg、表没食子儿茶素没食子酸酯ecg、表没食子儿茶素egc、单宁酸ta或多巴胺盐酸盐，浓度为0.1
‑
5mg/ml，步骤四中的一锅水热法条件为50
‑
120℃，水热反应0.5
‑
24h，氧化剂为过氧化氢或过硫酸铵，质量浓度为0.01
‑
1％。
61.具体采用：
62.1.脂质体的制备：
63.分别取6g磷脂和1g胆固醇，并溶解于10ml的氯仿溶剂中，震荡摇匀后置于流动n2条件下干燥，待样品干燥成脂质薄膜后，将西林瓶置于真空干燥箱中75℃真空干燥2.5h，以除去痕量溶剂；待试样冷却至室温后，加入5ml生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声15min，用挤出仪过300nm聚碳酸酯膜对脂质体的粒径进行控制，得到粒径为300nm左右的脂质体。
64.2.多酚修饰脂质体纳米系统的制备：
65.取3ml脂质体与70mgegcg、15mg氧化剂溶于30ml的tris
‑
hcl缓冲液(ph＝9)中搅拌均匀，将溶液加到聚四氟乙烯内衬的水热反应釜中，75℃反应1.5h，得到多酚修饰脂质体纳米系统。
66.实施例4
67.请参阅图1，本发明提供以下技术方案：一种多酚修饰脂质体纳米系统，包括脂质体、多酚、氧化剂、作为反应溶剂的缓冲液以及具有聚四氟乙烯内衬的水热反应釜。
68.具体地，本实施例中，缓冲液为pbs缓冲液或tris
‑
hcl缓冲液，且缓冲液的ph值为4.0
‑
10.0。
69.一种多酚修饰脂质体纳米系统的制备方法，采用薄膜干燥法制备脂质体，再通过一锅水热法制备多酚修饰脂质体纳米系统，具体包含如下步骤：
70.步骤一：在流动的n2环境下，将溶解于有机溶剂中的磷脂和胆固醇进行干燥，制得样品；
71.步骤二：真空环境下，将干燥成脂质薄膜后的样品进行二次干燥；
72.步骤三：将试样冷却至室温，之后加入适量体积生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声和挤出仪对脂质体的粒径进行控制；
73.步骤四：将步骤三得到的脂质体与所需多酚、氧化剂溶于反应溶剂中，在水热反应釜内通过一锅水热法制得多酚修饰脂质体纳米系统。
74.其中，步骤一中所用的磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、磷脂酰甘油中的一种或几种的组合，所用的磷脂和胆固醇的质量比1
‑
8：1，步骤一中所用的有机溶剂为甲醇、氯仿或乙醇中的一种或几种的组合，步骤二中的真空干燥温度为50℃
‑
80℃，步骤三中的超声时间为1
‑
5min，挤出过膜的膜孔径为100
‑
1000nm，步骤四中的多酚为表没食子儿茶素没食子酸酯egcg、表没食子儿茶素没食子酸酯ecg、表没食子儿茶素egc、单宁酸ta或多巴胺盐酸盐，浓度为0.1
‑
5mg/ml，步骤四中的一锅水热法条件为50
‑
120℃，水热反应0.5
‑
24h，氧化剂为过氧化氢或过硫酸铵，质量浓度为0.01
‑
1％。
75.具体采用：
76.1.脂质体的制备：
77.分别取7g磷脂和1g胆固醇，并溶解于10ml的氯仿溶剂中，震荡摇匀后置于流动n2条件下干燥，待样品干燥成脂质薄膜后，将西林瓶置于真空干燥箱中80℃真空干燥1h，以除去痕量溶剂；待试样冷却至室温后，加入5ml生理盐水进行水化，水化后所获得脂质体溶液，通过超声20min，用挤出仪过350nm聚碳酸酯膜对脂质体的粒径进行控制，得到粒径为350nm左右的脂质体。
78.2.多酚修饰脂质体纳米系统的制备：
79.取3ml脂质体与75mgegcg、15mg氧化剂溶于30ml的tris
‑
hcl缓冲液(ph＝10)中搅拌均匀，将溶液加到聚四氟乙烯内衬的水热反应釜中，80℃反应2h，得到多酚修饰脂质体纳米系统。
80.最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。