鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉、鹿胎盘口服液及相关制备方法与流程

1.本发明涉及蛋白提取技术领域，特别涉及鹿胎盘活性蛋白提取技术领域，具体是指一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉、鹿胎盘口服液及相关制备方法。


背景技术：

2.1、我国应用胎盘历史：我国是应用胎盘比较早的国家，胎盘作为补药在我国已有1000多年的历史了，秦始皇把胎盘(人胎盘、紫河车)作为皇室保健的首要选择；《本草拾遗》中便以“胎胞”和“胞衣”加以记载。《本草纲目》中称胎盘为“紫河车”，并对其性质、药效作了详细阐述。紫河车“味甘或咸、性温”，具有“养心安神、益气、补精、解毒、补血”的作用，对“疲劳、消瘦、衰弱”者有奇效。“久服者，耳聪目明，须发黑，延年益寿，有夺造化之功”。现代医学研究认为胎盘含蛋白、糖、钙、维生素、免疫因子、女性激素、助孕酮类、固醇类激素，促性腺激素等，能促进乳腺、子宫、阴道、睾丸的发育，对甲状腺也有促进作用，对肺结核、支气管哮喘、贫血等也有良效，研末口服或灌肠可预防或减轻荨麻疹症状。对静脉性肝硬化腹水及血吸虫晚期肝硬化腹水也有一定疗效。《2010版国家药典》项下：紫河车功能与主治为：“清热凉血、活血解毒、透疹消斑。用于血热毒盛，斑疹紫黑，麻疹不透疮疡、湿疹、水火烫伤”等。《2015版国家药典》因胎盘(紫河车)的传统食用方法的安全性难于把控，而被逐出。因此，虽然益处很多，但传统的丸、散、膏、粉及煲汤、煮食的食用方法混乱不堪、无规范性，造成无食用安全保障的局面，这些现状急需要改进与提高。
3.2、跟上国际发展步伐的需要：国际上发展科学研究证实，真正取自于胎盘里面的产品，如果生产工艺先进，可以将胎盘里面的活性的细胞因子成分保留下来。这些细胞因子成分包括各种细胞增殖因子，在专业上简称gf。特别值得一提的是日本人胎素，经过科学验证，发现其产品成分中，含有和实验室验证过的干细胞培养液中的有效成分完全一致或基本一致，都含有几十种已经被验证的细胞因子。这些细胞因子对于体内细胞的活性起到了很好的活化作用。青春不老是人类的梦想，虽然无法绝对抗老化，却可以延缓老化的发生，胎盘素(placentaextract)越来越受到科学界的注意(如日本胎盘口服液、猪胎盘口服液；韩国、新西兰鹿胎盘素胶囊等，另据报道日本川崎博士研发了糖纳高浓度胎盘素精华口服等)，我国在这一领域应及时赶上。
4.3、利用资源发展经济的需要：我国养殖梅花鹿约130万头，每年产仔约30多万头，就意味着有30多万支鹿胎盘的资源，这些资源的有效利用无疑具有对人类健康和社会经济效益的意义。
5.鹿胎盘的应用在伦理上更易被消费者接受，如果能够通过科学提取制成鹿胎盘蛋白冻干粉，其工艺先进、纯度高，杂质少，副作用小。可应用于食品、药品、保健品、化妆品领域应用，为人类的健康事业增加新的机制。应用鹿胎盘蛋白冻干粉配制的口服液将把鹿胎盘的应用提升到现代化新的高度！
6.4、社会发展科技创新的需要：生物科技的发展，新的肽类、氨基酸类材料不断涌现，如：卵酶解白蛋白肽、肌肽、r氨基丁酸、丝氨酸等，也给新产品的开发提供了更多的材料
应用空间。
7.因此，需要提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉，其工艺先进、纯度高，杂质少，副作用小，提升了鹿胎盘食用的安全性和可靠性，特别是口服液服用更为方便。


技术实现要素：

8.为了克服上述现有技术中的缺点，本发明的一个目的在于提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉，其制备工艺先进、纯度高，杂质少，副作用小，提升了鹿胎盘食用的安全性和可靠性，适于大规模推广应用。
9.本发明的另一目的在于提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉，其设计巧妙，制备简便，成本低，适于大规模推广应用。
10.本发明的另一目的在于提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法，采用该方法制备的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉制备工艺先进、纯度高，杂质少，副作用小，提升了鹿胎盘食用的安全性和可靠性，适于大规模推广应用。
11.本发明的另一目的在于提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法，其设计巧妙，操作简便，成本低，适于大规模推广应用。
12.本发明的另一目的在于提供一种鹿胎盘口服液，其营养成分多，提升了对延缓衰老、调节内分泌、补虚安神、恢复身体、淡斑养颜等康复保健功效，适于大规模推广应用。
13.本发明的另一目的在于提供一种鹿胎盘口服液，其设计巧妙，制备简便，成本低，适于大规模推广应用。
14.本发明的另一目的在于提供一种鹿胎盘口服液的制备方法，采用该方法制备的鹿胎盘口服液营养成分多，提升了对延缓衰老、调节内分泌、补虚安神、恢复身体、淡斑养颜等康复保健功效，适于大规模推广应用。
15.本发明的另一目的在于提供一种鹿胎盘口服液的制备方法，其设计巧妙，操作简便，成本低，适于大规模推广应用。
16.为达到以上目的，在本发明的第一方面，提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法，其特点是，包括以下步骤：
17.(1)将鹿胎盘破碎后加水浸提，静置冷却至第一低温，然后搅拌离心获得浸提一级清液；
18.(2)将所述浸提一级清液加热至第一高温，一段时间后静置冷却至第二低温，然后离心获得浸提二级清液；
19.(3)将所述浸提二级清液经纯化和微孔过滤获得鹿胎盘活性蛋白提取液；
20.(4)将海藻糖加入另外的所述水加热溶解，待温度降至50℃以下时，加入所述鹿胎盘活性蛋白提取液，摇匀后进行微孔过滤除菌，冻干。
21.较佳地，在所述步骤(1)中，将所述鹿胎盘剪成小块后用组织捣碎机破碎，所述水的加入量为所述鹿胎盘的重量的3倍～8倍，所述静置冷却在-20℃冰柜中进行，所述静置冷却的时间为10分钟～30分钟，所述第一低温是0℃～6℃，所述搅拌的时间为8分钟～12分钟，所述离心的转速为每分钟8000转～18000转，所述离心的时间为8分钟～15分钟；
22.在所述步骤(2)中，所述第一高温是55℃～75℃，所述一段时间是10分钟～15分钟，所述静置冷却先在常温进行，待冷却至常温后再在-20℃冰柜中进行，在所述冰柜中的
时间为10分钟～30分钟，所述第二低温是0℃～6℃；
23.在所述步骤(3)中，所述纯化采用超滤截留机进行，所述微孔过滤为微孔0.45μ过滤，在所述纯化前后均进行所述微孔过滤；
24.在所述步骤(4)中，所述海藻糖的加入量为所述的鹿胎盘的重量的0.5倍～1.5倍，所述微孔过滤除菌为微孔0.22μ过滤除菌。
25.在本发明的第二方面，提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉，其特点是，采用上述的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法制备而成。
26.在本发明的第三方面，提供一种鹿胎盘口服液，其特点是，包括以下原料及重量份：
27.上述的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉25重量份～75重量份、卵酶解白蛋白肽粉10重量份～30重量份、肌肽6.5重量份～17.5重量份、海藻糖120重量份～200重量份、ε-聚赖氨酸盐酸盐1重量份～5重量份以及大枣沙棘提取物：
28.所述大枣沙棘提取物采用如下方法制备而成：取大枣32重量份～64重量份和沙棘8重量份～24重量份加水在第二高温提取。
29.较佳地，所述加水在第二高温提取具体包括：向所述大枣和所述沙棘中加所述大枣和所述沙棘的总重量的8倍的所述水，在所述第二高温保温提取120分钟，滤出获得第一次滤液和第一次滤渣；向所述第一次滤渣中加所述总重量的6倍的另外的所述水，在所述第二高温保温提取90分钟，滤出获得第二次滤液和第二次滤渣；向所述第二次滤渣中加所述总重量的4倍的另外的所述水，在所述第二高温保温提取60分钟，滤出获得第三次滤液和第三次滤渣；将所述第一次滤液、所述第二次滤液和所述第三次滤液合并、煮沸、浓缩、低温沉淀、离心和过滤。
30.较佳地，所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉25重量份，所述卵酶解白蛋白肽粉10重量份、所述肌肽6.5重量份，所述海藻糖120重量份，所述ε-聚赖氨酸盐酸盐1重量份，所述大枣32重量份，所述沙棘8重量份。
31.较佳地，所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉50重量份，所述卵酶解白蛋白肽粉25重量份、所述肌肽12重量份，所述海藻糖160重量份，所述ε-聚赖氨酸盐酸盐2.5重量份，所述大枣48重量份，所述沙棘16重量份。
32.较佳地，所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉75重量份，所述卵酶解白蛋白肽粉30重量份、所述肌肽17.5重量份，所述海藻糖200重量份，所述ε-聚赖氨酸盐酸盐5重量份，所述大枣64重量份，所述沙棘24重量份。
33.在本发明的第四方面，提供一种上述的鹿胎盘口服液的制备方法，其特点是，包括以下步骤：
34.(a)将所述大枣沙棘提取物加入另外的所述水至900ml，加热煮沸后加入所述海藻糖，继续煮沸使所述海藻糖溶解；
35.(b)加入所述卵酶解白蛋白肽粉和所述肌肽，搅拌溶解，无菌过滤后静置降温至45℃以下，得到配液；
36.(c)将所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉和所述ε-聚赖氨酸盐酸盐溶解至100ml的另外的所述水，过滤除菌后加入所述配液；
37.(d)密封后在第三低温静置，无菌过滤。
38.较佳地，在所述步骤(a)中，所述继续煮沸的时间为3分钟～5分钟；
39.在所述步骤(c)中，所述微孔过滤除菌为微孔0.22μ过滤除菌；
40.在所述步骤(d)中，所述第三低温为0℃～10℃，所述静置的时间为168小时以上。
41.本发明的有益效果主要在于：
42.1、本发明的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法包括(1)将鹿胎盘破碎后加水浸提，静置冷却至第一低温，然后搅拌离心获得浸提一级清液；(2)将浸提一级清液加热至第一高温，一段时间后静置冷却至第二低温，然后离心获得浸提二级清液；(3)将浸提二级清液经纯化和微孔过滤除菌获得鹿胎盘活性蛋白提取液；(4)将海藻糖加入另外的水加热溶解，待温度降至50℃以下时，加入鹿胎盘活性蛋白提取液，摇匀后进行微孔过滤除菌，冻干，因此，采用该方法制备的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉制备工艺先进、纯度高，杂质少，副作用小，提升了鹿胎盘食用的安全性和可靠性，设计巧妙，操作简便，成本低，适于大规模推广应用。
43.2、本发明的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉采用上述的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法制备而成，因此，其制备工艺先进、纯度高，杂质少，副作用小，提升了鹿胎盘食用的安全性和可靠性，设计巧妙，制备简便，成本低，适于大规模推广应用。
44.3、本发明的鹿胎盘口服液包括以下原料及重量份：上述的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉25重量份～75重量份、卵酶解白蛋白肽粉10重量份～30重量份、肌肽6.5重量份～17.5重量份、海藻糖120重量份～200重量份、ε-聚赖氨酸盐酸盐1重量份～5重量份以及大枣沙棘提取物：大枣沙棘提取物采用如下方法制备而成：取大枣32重量份～64重量份和沙棘8重量份～24重量份加水在第二高温提取，因此，其营养成分多，提升了对延缓衰老、调节内分泌、补虚安神、恢复身体、淡斑养颜等康复保健功效，设计巧妙，制备简便，成本低，适于大规模推广应用。
45.4、本发明的鹿胎盘口服液的制备方法包括(a)将大枣沙棘提取物加入另外的水至900ml，加热煮沸后加入海藻糖，继续煮沸使海藻糖溶解；(b)加入卵酶解白蛋白肽粉和肌肽，搅拌溶解，无菌过滤后静置降温至45℃以下，得到配液；(c)将鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉和ε-聚赖氨酸盐酸盐溶解至100ml的另外的水，过滤除菌后加入配液；(d)密封后在第三低温静置，无菌过滤，因此，采用该方法制备的鹿胎盘口服液营养成分多，提升了对延缓衰老、调节内分泌、补虚安神、恢复身体、淡斑养颜等康复保健功效，设计巧妙，操作简便，成本低，适于大规模推广应用。
46.本发明的这些和其它目的、特点和优势，通过下述的详细说明、附图和权利要求得以充分体现，并可通过所附权利要求中特地指出的手段、装置和它们的组合得以实现。
附图说明
47.图1是本发明的鹿胎盘活性蛋白提取液的电泳照片，其中泳道1～泳道3分别是实施例1～实施例3获得的鹿胎盘活性蛋白提取液；泳道4为预染蛋白质marker(thermo-scientific pageruler预染色蛋白梯，分子量为10-180kda，赛默飞)。
具体实施方式
48.为了提升鹿胎盘食用安全性和可靠性，提高鹿胎盘有益蛋白成分纯度，避免因杂
质过多引起的不良反应，本发明人提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
49.(1)将鹿胎盘破碎后加水浸提，静置冷却至第一低温，然后搅拌离心获得浸提一级清液；
50.(2)将所述浸提一级清液加热至第一高温，一段时间后静置冷却至第二低温，然后离心获得浸提二级清液；
51.(3)将所述浸提二级清液经纯化和微孔过滤除菌获得鹿胎盘活性蛋白提取液；
52.(4)将海藻糖加入另外的所述水加热溶解，待温度降至50℃以下时，加入所述鹿胎盘活性蛋白提取液，摇匀后进行微孔过滤除菌，冻干。
53.在所述步骤(1)中，所述破碎、所述水的加入量、所述静置冷却、所述第一低温、所述搅拌、所述离心的条件可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(1)中，将所述鹿胎盘剪成小块后用组织捣碎机破碎，所述水的加入量为所述鹿胎盘的重量的3倍～8倍，所述静置冷却在-20℃冰柜中进行，所述静置冷却的时间为10分钟～30分钟，所述第一低温是0℃～6℃，所述搅拌的时间为8分钟～12分钟，所述离心的转速为每分钟8000转～18000转，所述离心的时间为8分钟～15分钟；
54.在所述步骤(2)中，所述第一高温、所述一段时间、所述静置冷却、所述第二低温的条件可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(2)中，所述第一高温是55℃～75℃，所述一段时间是10分钟～15分钟，所述静置冷却先在常温进行，待冷却至常温后再在-20℃冰柜中进行，在所述冰柜中的时间为10分钟～30分钟，所述第二低温是0℃～6℃；
55.在所述步骤(3)中，所述纯化、所述微孔过滤的条件可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(3)中，所述纯化采用超滤截留机进行，所述微孔过滤为微孔0.45μ过滤，在所述纯化前后均进行所述微孔过滤；
56.在所述步骤(4)中，所述海藻糖的加入量、所述微孔过滤除菌的条件可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(4)中，所述海藻糖的加入量为所述的鹿胎盘的重量的0.5倍～1.5倍，所述微孔过滤除菌为微孔0.22μ过滤除菌。
57.本发明还提供一种鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉，采用上述的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法制备而成。
58.本发明还提供一种鹿胎盘口服液，包括以下原料及重量份：
59.上述的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉25重量份～75重量份、卵酶解白蛋白肽粉10重量份～30重量份、肌肽6.5重量份～17.5重量份、海藻糖120重量份～200重量份、ε-聚赖氨酸盐酸盐1重量份～5重量份以及大枣沙棘提取物：
60.上述配方中，保持了鹿胎盘提取活性蛋白的活性(因提取工艺科学)；卵酶解白蛋白肽粉、肌肽都是肽类，可不经胃的分解而被人体直接吸收利用；海藻糖一是对鹿胎盘提取活性蛋白等活性营养的活性起到保护作用，二是在液体构象起到矫味作用，三是海藻糖属于低热值糖，肥胖及糖尿病人也可以服用；大枣沙棘提取物根据中医理论，具有一定的补气养血功能外，还具有娇味和调色的功能；所述ε-聚赖氨酸盐酸盐属氨基酸盐类，对产品具有防腐剂作用。
61.所述大枣沙棘提取物采用如下方法制备而成：取大枣32重量份～64重量份和沙棘8重量份～24重量份加水在第二高温提取。
62.所述第二高温可以根据需要确定，较佳地，所述第二高温是90℃～100℃。
63.所述加水在第二高温提取的条件可以根据需要确定，较佳地，所述加水在第二高温提取具体包括：向所述大枣和所述沙棘中加所述大枣和所述沙棘的总重量的8倍的所述水，在所述第二高温保温提取120分钟，滤出获得第一次滤液和第一次滤渣；向所述第一次滤渣中加所述总重量的6倍的另外的所述水，在所述第二高温保温提取90分钟，滤出获得第二次滤液和第二次滤渣；向所述第二次滤渣中加所述总重量的4倍的另外的所述水，在所述第二高温保温提取60分钟，滤出获得第三次滤液和第三次滤渣；将所述第一次滤液、所述第二次滤液和所述第三次滤液合并、煮沸、浓缩、低温沉淀、离心和过滤。
64.所述加水高温提取具体步骤中，所述低温沉淀、所述离心的条件可以根据需要确定，更佳地，所述低温沉淀的温度为0℃～10℃，所述低温沉淀的时间在48小时以上，所述离心的转速为每分钟9000转～18000转，所述离心的时间不少于10分钟。
65.所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉、所述卵酶解白蛋白肽粉、所述肌肽、所述海藻糖、所述ε-聚赖氨酸盐酸盐、所述大枣、所述沙棘的用量可以根据需要确定，较佳地，所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉25重量份，所述卵酶解白蛋白肽粉10重量份、所述肌肽6.5重量份，所述海藻糖120重量份，所述ε-聚赖氨酸盐酸盐1重量份，所述大枣32重量份，所述沙棘8重量份。或者，所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉50重量份，所述卵酶解白蛋白肽粉25重量份、所述肌肽12重量份，所述海藻糖160重量份，所述ε-聚赖氨酸盐酸盐2.5重量份，所述大枣48重量份，所述沙棘16重量份。或者，所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉75重量份，所述卵酶解白蛋白肽粉30重量份、所述肌肽17.5重量份，所述海藻糖200重量份，所述ε-聚赖氨酸盐酸盐5重量份，所述大枣64重量份，所述沙棘24重量份。
66.本发明还提供一种上述的鹿胎盘口服液的制备方法，包括以下步骤：
67.(a)将所述大枣沙棘提取物加入另外的所述水至900ml，加热煮沸后加入所述海藻糖，继续煮沸使所述海藻糖溶解；
68.(b)加入所述卵酶解白蛋白肽粉和所述肌肽，搅拌溶解(卵酶解白蛋白肽和肌肽具有短时间耐受100℃高温的特点，这样可以起到灭菌效果)，无菌过滤后静置降温至45℃以下，得到配液；
69.(c)将所述鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉和所述ε-聚赖氨酸盐酸盐溶解至100ml的另外的所述水，过滤除菌后加入所述配液；
70.(d)密封后在第三低温静置，无菌过滤。
71.在所述步骤(a)中，所述继续煮沸的时间可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(a)中，所述继续煮沸的时间为3分钟～5分钟；
72.在所述步骤(c)中，所述微孔过滤除菌的条件可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(c)中，所述微孔过滤除菌为微孔0.22μ过滤除菌；
73.在所述步骤(d)中，所述第三低温、所述静置的条件可以根据需要确定，较佳地，在所述步骤(d)中，所述第三低温为0℃～10℃，所述静置的时间为168小时以上。
74.采用本发明，(1)对鹿胎盘采用破碎、冻溶、浸提、离心、过滤、热处理、超滤、配液、除菌、冻干等30多道工序，制得鹿胎盘活性蛋白提取液冻干粉制剂(鹿胎盘固体饮料)，并应用其配制口服液，更科学、量化、方便、快捷、灵活、准确。(2)对大枣、沙棘提取液工艺先进，合理，更量化(把大枣、沙棘的三次提取液混是为了液相均匀；单独处理是为了进一步除去
杂质；再按比例还原于生态用量，以保证所配制液体含量明确，量化，进而可以保障不同批次产品质量的统一)；(3)所配制产品的基液更分子化，因此，更便于过滤除菌，使产品更安全可靠。
75.为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明。其中：
76.卵酶解白蛋白肽粉(西安百川生物科技有限公司，90％)
77.肌肽(西安百川生物科技有限公司，98％)
78.海藻糖(南宁中诺生物工程有限公司，20kg/箱)
79.ε-聚赖氨酸盐酸盐(郑州拜纳佛生物工程股份有限公司，500g/瓶)
80.大枣(和田或山东去核枣干)
81.沙棘(黑龙江六顺沙棘制品有限公司，沙棘果，1000g/包)
82.实施例1
83.1、鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉制备
84.(1)取鹿胎盘洗净，剪成2cm小块，之后用jj-2组织捣碎机破碎，加入鹿胎盘的重量的3倍的水，进行浸提；之后放入-20℃冰柜静置20分钟，冷却至温度在3℃之间，取出搅拌8分钟，再置于gl-21m高速离心机上转速在每分钟12000转的条件下，进行8分钟的离心，并收得浸提一级清液；
85.(2)将浸提一级清液加热至75℃，15分钟之后静置冷却，先常温静置冷却，待冷却至常温后放入-20℃冰柜静置冷却10分钟，至温度降至6℃之间，取出，再进行离心，收取清液，得浸提二级清液；
86.(3)将浸提二级清液进行微孔0.45μ过滤，之后用jm1812-1超滤截留机进行纯化，洗除盐类和杂类蛋白等，再微孔0.45μ过滤，得鹿胎盘活性蛋白提取液；
87.(4)将海藻糖(海藻糖加入量是鹿胎盘重量的0.5倍)加入水中加热至完全溶解，待温度降至30℃时，加入鹿胎盘活性蛋白提取液，加入水调节至总体积5l，摇匀，再在洁净条件下进行微孔0.22μ过滤除菌，得无菌鹿胎盘活性蛋白配液；将无菌鹿胎盘活性蛋白配液放入冻干盘中，每盘约放500ml，置于scientz-3冻干机中进行冻干，得鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉。
88.2、原料称取：称取鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉25g、卵酶解白蛋白肽粉10g、肌肽6.5g、海藻糖120g、大枣32g、沙棘8g、ε-聚赖氨酸盐酸盐1g。
89.3、大枣沙棘提取物：取大枣和沙棘，加大枣和沙棘的总重量的8倍的水，90℃保温提取120分钟，滤出获得第一次滤液和第一次滤渣；再在第一次滤渣中加大枣和沙棘的总重量的6倍的水，90℃保温提取90分钟，滤出获得第二次滤液和第二次滤渣；再加大枣和沙棘的总重量的4倍的水，90℃保温提取60分钟，滤出获得第三次滤液和第三次滤渣；合并三次提取滤液，煮沸，浓缩，低温(10℃)沉淀48小时，于gl-21m高速冷冻离心机离心，每分钟12000转，10分钟，之后取清液过滤，得大枣沙棘提取物100ml。
90.4、鹿胎盘口服液制备
91.a、取大枣沙棘提取物补水至900ml加热煮沸后加入海藻糖，继续煮沸5分钟使海藻糖溶解；
92.b、分别加入卵酶解白蛋白肽粉、肌肽，搅拌至完全溶解，取出于洁净室内过滤，静置降温至10℃，得到配液；
93.c、取水100ml，将鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉和ε-聚赖氨酸盐酸盐溶解，微孔0.22μ过滤除菌，洁净条件下加入配液；
94.d、密封后在低温10℃条件下静置216h，之后无菌过滤除去沉淀，灌装于灭菌瓶中并封好，即得鹿胎盘口服液i。
95.实施例2
96.1、鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉制备
97.(1)取鹿胎盘洗净，剪成1cm小块，之后用jj-2组织捣碎机破碎，加入鹿胎盘的重量的5倍的水，进行浸提；之后放入-20℃冰柜静置10分钟，冷却至温度在6℃之间，取出搅拌10分钟，再置于gl-21m高速离心机上转速在每分钟18000转的条件下，进行10分钟的离心，并收得浸提一级清液；
98.(2)将浸提一级清液加热至65℃，12分钟之后静置冷却，先常温静置冷却，待冷却至常温后放入-20℃冰柜静置冷却20分钟，至温度降至3℃之间，取出，再进行离心，收取清液，得浸提二级清液；
99.(3)将浸提二级清液进行微孔0.45μ过滤，之后用jm1812-1超滤截留机进行纯化，洗除盐类和杂类蛋白等，再微孔0.45μ过滤，得鹿胎盘活性蛋白提取液；
100.(4)将海藻糖(海藻糖加入量是鹿胎盘的重量的1倍)加入水中加热至完全溶解，待温度降至10℃时，加入鹿胎盘活性蛋白提取液，加入水调节至总体积5l，摇匀，再在洁净条件下进行微孔0.22μ过滤除菌，得无菌鹿胎盘活性蛋白配液；将无菌鹿胎盘活性蛋白配液放入冻干盘中，每盘约放500ml，置于scientz-3冻干机中进行冻干，得鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉。
101.2、原料称取：称取鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉50g、卵酶解白蛋白肽粉25g、肌肽12g、海藻糖160g、大枣48g、沙棘16g、ε-聚赖氨酸盐酸盐2.5g。
102.3、大枣沙棘提取物：取大枣和沙棘，加大枣和沙棘的总重量的8倍的水，100℃保温提取120分钟，滤出获得第一次滤液和第一次滤渣；再在第一次滤渣中加大枣和沙棘的总重量的6倍的水，100℃保温提取90分钟，滤出获得第二次滤液和第二次滤渣；再加大枣和沙棘的总重量的4倍的水，100℃保温提取60分钟，滤出获得第三次滤液和第三次滤渣；合并三次提取滤液，煮沸，浓缩，低温(5℃))沉淀60小时，于gl-21m高速冷冻离心机离心，每分钟9000转，20分钟，之后取清液过滤，得大枣沙棘提取物150ml。
103.4、鹿胎盘口服液制备
104.a、取大枣沙棘提取物补水至900ml加热煮沸后加入海藻糖，继续煮沸4分钟使海藻糖溶解；
105.b、分别加入卵酶解白蛋白肽粉、肌肽，搅拌至完全溶解，取出于洁净室内过滤，静置降温至25℃，得到配液；
106.c、取水100ml，将鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉和ε-聚赖氨酸盐酸盐溶解，微孔0.22μ过滤除菌，洁净条件下加入配液；
107.d、密封后在低温5℃条件下静置168h，之后无菌过滤除去沉淀，灌装于灭菌瓶中并封好，即得鹿胎盘口服液ii。
108.实施例3
109.1、鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉制备
110.(1)取鹿胎盘洗净，剪成0.5cm小块，之后用jj-2组织捣碎机破碎，加入鹿胎盘的重量的8倍的水，进行浸提；之后放入-20℃冰柜静置30分钟，冷却至温度在0℃之间，取出搅拌12分钟，再置于gl-21m高速离心机上转速在每分钟8000转的条件下，进行15分钟的离心，并收得浸提一级清液；
111.(2)将浸提一级清液加热至55℃，10分钟之后静置冷却，先常温静置冷却，待冷却至常温后放入-20℃冰柜静置冷却30分钟，至温度降至0℃之间，取出，再进行离心，收取清液，得浸提二级清液；
112.(3)将浸提二级清液进行微孔0.45μ过滤，之后用jm1812-1超滤截留机进行纯化，洗除盐类和杂类蛋白等，再微孔0.45μ过滤，得鹿胎盘活性蛋白提取液；
113.(4)将海藻糖(海藻糖加入量是鹿胎盘的重量的1.5倍)加入水中加热至完全溶解，待温度降至50℃时，加入鹿胎盘活性蛋白提取液，加入水调节至总体积5l，摇匀，再在洁净条件下进行微孔0.22μ过滤除菌，得无菌鹿胎盘活性蛋白配液；将无菌鹿胎盘活性蛋白配液放入冻干盘中，每盘约放500ml，置于scientz-3冻干机中进行冻干，得鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉。
114.2、原料称取：称取鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉75g、卵酶解白蛋白肽粉30g、肌肽17.5g、海藻糖200g、大枣64g、沙棘24g、ε-聚赖氨酸盐酸盐5.0g。
115.3、大枣沙棘提取物：取大枣和沙棘，加大枣和沙棘的总重量的8倍的水，95℃保温提取120分钟，滤出获得第一次滤液和第一次滤渣；再在第一次滤渣中加大枣和沙棘的总重量的6倍的水，95℃保温提取90分钟，滤出获得第二次滤液和第二次滤渣；再加大枣和沙棘的总重量的4倍的水，95℃保温提取60分钟，滤出获得第三次滤液和第三次滤渣；合并三次提取滤液，煮沸，浓缩，低温(0℃)范围沉淀72小时，于gl-21m高速冷冻离心机离心，每分钟18000转，30分钟，之后取清液过滤，得大枣沙棘提取物200ml。
116.4、鹿胎盘口服液制备
117.a、取大枣沙棘提取物补水至900ml加热煮沸后加入海藻糖，继续煮沸3分钟使海藻糖溶解；
118.b、分别加入卵酶解白蛋白肽粉、肌肽，搅拌至完全溶解，取出于洁净室内过滤，静置降温至45℃，得到配液；
119.c、取水100ml，将鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉和ε-聚赖氨酸盐酸盐溶解，微孔0.22μ过滤除菌，洁净条件下加入配液；
120.d、密封后在低温0℃条件下静置192h以上，之后无菌过滤除去沉淀，灌装于灭菌瓶中并封好，即得鹿胎盘口服液iii。
121.实施例4
122.将实施例1～实施例3获得的鹿胎盘活性蛋白提取液进行电泳分析，请参见图1所示，电泳结果表明，采用本发明的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉的制备方法，可以认为把鹿胎盘中全细胞蛋白提取出来。
123.实施例5抗疲劳试验
124.在2018年8月至2019年7月间。在吉林大学卫生检测中心检测抗疲劳试验，采用小鼠40只(雌雄各20只，体重20
±
2g)。
125.其中10只(雌雄各5只)口服鹿胎盘口服液(试验组i，采用实施例1的鹿胎盘口服液
即鹿胎盘口服液i)，10只(雌雄各5只)口服鹿胎盘口服液(试验组ii，采用实施例2的鹿胎盘口服液即鹿胎盘口服液ⅱ)，10只(雌雄各5只)口服鹿胎盘口服液(试验组iii，采用实施例3的鹿胎盘口服液即鹿胎盘口服液ⅲ)，10只(雌雄各5只)口服生理盐水(对照组)。
126.试验结果如下：
127.1、口服鹿胎盘口服液的小鼠游泳时间的测定结果
128.表1口服鹿胎盘口服液对小鼠游泳时间的影响
129.组别动物数游泳时间生理盐水组(对照组)10397.3
±
120.1鹿胎盘口服液组(试验组i)10696.1
±
211.3*鹿胎盘口服液组(试验组ⅱ)10689.8
±
193.7*鹿胎盘口服液组(试验组ⅲ)10686.7
±
197.5*
130.注：*与生理盐水组比较p＜0.05
131.经过统计学结果说明，服用鹿胎盘口服液的小鼠游泳时间明显高于对照组，表明服用鹿胎盘口服液能够延长小鼠的游泳时间，提高身体的耐力，从而起到抗疲劳的作用。
132.2、末次给口服液后，将小鼠测试完游泳试验后，进行脱臼处死，取其肝组织进行谷胱甘肽过氧化物酶的测定，结果如下：
133.表2口服鹿胎盘口服液对小鼠肝组织中gsh-px活力的影响
134.组别动物数游泳时间生理盐水组(对照组)10108.38
±
7.96鹿胎盘口服液组(试验组i)10142.3
±
31.24*鹿胎盘口服液组(试验组ⅱ)10147.7
±
29.31*鹿胎盘口服液组(试验组ⅲ)10151.5
±
28.75*
135.注：*与生理盐水组比较p＜0.05
136.口服鹿胎盘口服液与生理盐水组对照表明，口服鹿胎盘口服液能够显著提升肝组织中的gsh-px，说明口服鹿胎盘口服液能有效的清除运动产生的氧自由基，提高机体细胞的耐受力。
137.3、口服鹿胎盘口服液对小鼠mda(丙二醛)含量的影响
138.表3口服鹿胎盘口服液对小鼠mda(丙二醛)含量的影响
[0139][0140][0141]
注：*与生理盐水组比较p＜0.05
[0142]
口服鹿胎盘口服液与生理盐水组对照表明，口服鹿胎盘口服液能够显著降低肝组织中的mda，说明口服鹿胎盘口服液能有效的清除运动产生的氧自由基，mda是脂质过氧化物的代谢产物，其浓度可以反应脂质过氧化物的程度。
[0143]
综上，口服鹿胎盘口服液能够提高小鼠的运动耐力水平，提高肝组织中的谷胱甘
肽过氧化物酶的含量，降低体内mda的浓度，从而起到抗疲劳的作用。
[0144]
实施例6长期毒性试验
[0145]
为了验证鹿胎盘口服液的安全性，我们还与吉林大学做了长期毒性试验。
[0146]
取小鼠120只分成4组，每组雌雄各15只，分别对应为生理盐水对照组、鹿胎盘口服液组(试验组i采用实施例1的鹿胎盘口服液即鹿胎盘口服液i，试验组ii采用实施例2的鹿胎盘口服液即鹿胎盘口服液ⅱ，试验组iii采用实施例3的鹿胎盘口服液即鹿胎盘口服液ⅲ)。按照食品安全毒理学评价程序和方法(gb15193.13)中的有关规定进行试验。试验分为前期、中期(喂养45天)、末期(喂养90天)、恢复期(停药15天)，每期取5只进食12小时后，处死眼球取血，进行血液生物化学测定和血常规测定，同时对小鼠进行解剖，取其心、肝、脾、肾、子宫、睾丸、附睾等主要器官进行脏器系数测定。具体数据如下：
[0147]
1、各时期小鼠体重变化情况表(g)
[0148]
组别原始中期末期恢复期对照组195.4
±
13.2328.2
±
72.5392.6
±
75.8398.5
±
83.9试验组i197.2
±
14.8349.6
±
79.6410.8
±
97.6423.8
±
98.6试验组ⅱ195.8
±
16.2345.7
±
77.5406.8
±
98.3422.9
±
93.8试验组ⅲ196.5
±
15.3348.5
±
78.4407.8
±
96.4418.7
±
97.5
[0149]
经统计学计算表明，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0150]
2、中期试验数据
[0151]
表4肝体比(g/100g)
[0152][0153][0154]
组别肾睾丸附睾子宫对照组0.59
±
0.071.27
±
0.180.45
±
0.070.25
±
0.09试验组i0.62
±
0.080.99
±
0.090.42
±
0.070.38
±
0.11试验组ⅱ0.61
±
0.090.98
±
0.060.41
±
0.060.37
±
0.13试验组ⅲ0.63
±
0.050.98
±
0.080.42
±
0.050.39
±
0.11
[0155]
经统计学计算表明，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0156]
表5血常规数据表5血常规数据
[0157]
经统计学计算表明，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0158]
表6血液生化数据
[0159][0160][0161]
经统计学计算，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0162]
3、末期试验数据
[0163]
表7肝体比(g/100g)
[0164]
组别心肝脾肺对照组0.31
±
0.063.74
±
0.860.24
±
0.070.51
±
0.12试验组i0.33
±
0.073.32
±
0.260.21
±
0.020.47
±
0.17试验组ⅱ0.32
±
0.063.30
±
0.460.25
±
0.030.49
±
0.05试验组ⅲ0.32
±
0.093.52
±
0.570.23
±
0.040.48
±
0.04
[0165]
组别肾睾丸附睾子宫对照组0.62
±
0.090.98
±
0.280.38
±
0.020.24
±
0.08试验组i0.65
±
0.070.89
±
0.050.36
±
0.070.29
±
0.05试验组ⅱ0.63
±
0.120.92
±
0.140.38
±
0.030.26
±
0.37试验组ⅲ0.64
±
0.130.96
±
0.170.37
±
0.150.25
±
0.14
[0166]
经统计学计算表明，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0167]
表8血常规数据
[0168][0169]
经统计学计算表明，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0170]
表9血液生化数据
[0171][0172][0173][0174]
经统计学计算，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0175]
4、恢复期实验数据
[0176]
表10肝体比(g/100g)
[0177]
组别心肝脾肺对照组0.37
±
0.073.28
±
0.460.20
±
0.060.50
±
0.08试验组i0.32
±
0.052.98
±
0.290.22
±
0.030.46
±
0.07试验组ⅱ0.36
±
0.123.08
±
0.360.22
±
0.050.48
±
0.11试验组ⅲ0.34
±
0.243.33
±
0.340.22
±
0.080.47
±
0.14
[0178]
组别肾睾丸附睾子宫对照组0.59
±
0.070.86
±
0.160.37
±
0.050.27
±
0.09试验组i0.56
±
0.050.76
±
0.110.29
±
0.060.27
±
0.06试验组ⅱ0.57
±
0.150.79
±
0.170.31
±
0.140.27
±
0.05试验组ⅲ0.58
±
0.090.83
±
0.180.32
±
0.090.27
±
0.12
[0179]
经统计学计算表明，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0180]
表11血常规数据
[0181][0182]
经统计学计算表明，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0183]
表12血液生化数据
[0184][0185][0186]
经统计学计算，各组间比较p＞0.05，无显著差异。
[0187]
试验结论：给口服液期间不同时段(45天、90天)和恢复期(停用口服液15天)，小鼠的血液常规及血液生化检查指标，大体解剖、体重、实质脏器重量、脏器系数未见明显改变。可以认为连续给药90天的鹿胎盘口服液不会产生不可逆的毒性反应以及迟发性毒性反应。
[0188]
实施例7人体功效试验
[0189]
人体功效50例试验：其中40例鹿胎盘口服液应用试验，试验组i，采用实施例1的鹿胎盘口服液即鹿胎盘口服液i，应用20例；试验组ii，采用实施例2的鹿胎盘口服液即鹿胎盘口服液ii，应用10例；试验组iii，采用实施例3的鹿胎盘口服液即鹿胎盘口服液iii，应用10例，对照组10例不加入鹿胎盘口服液(对照组)。包括辅助睡眠试验，抗疲劳试验。
[0190]
1.辅助睡眠两组效果对比
[0191]
与对照组对比，试验组辅助睡眠有效率高于对照组高，差异具有统计学意义。
[0192]
表13辅助睡眠效果比较
[0193]
名称显效有效无效有效率试验组i(n＝20)125320(85％)试验组ⅱ(n＝10)63110(90％)试验组ⅲ(n＝10)53210(80％)对照组(n＝10)31610(40％)
[0194]
2.抗疲劳两组比较
[0195]
与对照相比较，试验组的抗疲劳水平更高，差异具有统计学意义。
[0196]
表14两组临床相关指标比较
[0197]
名称显效有效无效有效率试验组i(n＝20)135220(90％)试验组ⅱ(n＝10)54110(90％)试验组ⅲ(n＝10)62210(80％)对照组(n＝10)21710(30％)
[0198]
实施例8具体案例
[0199]
案例1：高某，女，28岁，企业白领
[0200]
个人情况及鹿胎盘口服液服用过程：高女士因妊娠期反应强烈，造成面色萎黄、黄斑明显、体子虚弱，经常性的失眠、多梦、注意力不集中及记忆力减退等，产子后。其每日食用2次鹿胎盘口服液1，一次10ml，4周后体力恢复良好，面部黄斑减少明显，皮肤光亮而富有弹性，后又续服4周进行巩固，睡眠改善如初，记忆力提升。
[0201]
案例2：王某，男，56岁，工人
[0202]
个人情况及鹿胎盘口服液服用过程：王先生因患胃病，长期营养不良，面黑肤懈，体力不佳、行动迟缓、经常感冒。其每日服用2次鹿胎盘口服液2，1次2瓶，每瓶10ml，4周后自感体力增强、上楼梯有劲了，面部也有所改善，其他症状也得到有效缓解，后续服4周，感觉自己年轻了，逢人就夸鹿胎盘口服液好！
[0203]
案例3：徐某，女，44岁，企业职员。
[0204]
个人情况及鹿胎盘口服液服用过程：徐女士因婚姻破裂，造成食欲不振、精神衰弱，面部皱纹增多、体力不支、尿频尿急等症状。其每日食用2次鹿胎盘口服液3，每次10ml，5周后郑女士精神状况完全恢复，饮食正常，神情自然,体力增强、又连续服用8周，尿频改善，皱纹减少并淡化。
[0205]
本发明产品的特点：
[0206]
1、科学、安全、可靠：本发明提供的一种鹿胎盘口服液组成中所应用的鹿胎盘部分是经过组织破碎提取经冻干的蛋白粉(也称鹿胎盘固体饮料)，保持了胎盘提取蛋白的活性，较以往应用原态组织粗粉更科学、更安全可靠。
[0207]
2、产品功能得到了提升：本发明提供的一种鹿胎盘口服液的配方更先进合理，鹿胎盘提取活性蛋白、卵蛋白酶解肽、肌肽、氨基酸(ε-聚赖氨酸盐酸盐)，其蛋白分子量大小高低搭配，蛋白、酶类营养含量高，可经胃液分解吸收；肽类、氨基酸类分子量小可不经胃液分解，直接被人体接吸收，更便于人体虚弱
[0208]
者服用。由于产品对于传统原始产品在精度上的提高，因此，提升了对延缓衰老、调节内分泌、补虚安神、恢复身体、淡斑养颜等康复保健功能。
[0209]
3、肥胖及糖尿病患者都可以放心服用：所应用的辅料海藻糖为低热值糖，肥胖及糖尿病患者都可以放心服用。
[0210]
4、无化学防腐剂添加：所应用的防腐成分ε-聚赖氨酸盐酸盐，为氨基酸盐，既有防腐抑菌作用，又是营养成分，且无任何危害。
[0211]
5、调色、调味剂绿色天然：以大枣沙棘提取物为调色、调味剂安全可靠、营养、绿色天然。
[0212]
6、可以工业流水线加工量产：通过对鹿胎盘进行了科技深加工，增加了附加值，提升了经济效益，且可以工业化量产。
[0213]
本发明与传统、国际鹿胎盘使用方法之间的对比表
[0214][0215][0216]
因此，与现有技术相比，本发明主要具有以下有益效果：
[0217]
1、提升了鹿胎盘食用的安全性和可靠性：鹿胎盘活性蛋白在提取过程中要经过破碎、冻溶、55℃～75℃，10分钟～15分钟的热处理，20倍量～30倍量的洗脱、过滤、截流、微孔除菌等工艺，充分起到了除杂、灭菌、除菌和保留蛋白活性的效果，因此，提升了其应用安全性和可靠性。
[0218]
2、提取了鹿胎盘有益蛋白成分，提升了应用效果，避免了因杂质过多引起的不良反应。
[0219]
3、提升了产品功能：由于产品对于传统原始产品在精度上的提高，并且，通过与卵蛋白肽、肌肽的复配，增加了营养成分，因此，比单方的鹿胎盘产品提升了对延缓衰老、调节内分泌、补虚安神、恢复身体、淡斑养颜等康复保健功。
[0220]
4、食用方便快捷：所加工的产品可以开盖随时食用，方便快捷。
[0221]
5、可以工业流水线加工量产：可以把采集的鹿胎盘集中工业化加工处理生产，增加了附加值，提升了经济效益。
[0222]
综上，采用本发明的鹿胎盘提取活性蛋白冻干粉制备工艺先进、纯度高，杂质少，副作用小，提升了鹿胎盘食用的安全性和可靠性，设计巧妙，制备简便，成本低，适于大规模推广应用。
[0223]
由此可见，本发明的目的已经完整并有效的予以实现。本发明的功能及结构原理已在实施例中予以展示和说明，在不背离所述原理下，实施方式可作任意修改。所以，本发明包括了基于权利要求精神及权利要求范围的所有变形实施方式。