一种可检测烟草凝集素蛋白的抗体及其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种可检测烟草凝集素蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：乳剂1的制备步骤：取抗原、弗氏完全佐剂以及pbs混合，制备成含抗原的乳剂1；乳剂2的制备步骤：取抗原、弗氏不完全佐剂以及pbs混合，制备成含抗原的乳剂2；免疫步骤：所述的免疫步骤包括，将乳剂1注射至动物体内对动物进行第一次免疫；第一次免疫结束后，将乳剂2注射至动物体内对动物进行第二次免疫；第二次免疫结束后，将乳剂2注射至动物体内对动物进行第三次免疫；和/或第三次免疫结束后，将乳剂2注射至动物体内对动物进行第四次免疫；抗体纯化步骤：取动物血清，从血清中纯化抗体，即得所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体；其中，乳剂1和乳剂2中的抗原，其氨基酸序列如seq id no：1所示。2.根据权利要求1所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，乳剂1的制备步骤中，抗原、弗氏完全佐剂以及pbs的用量比为300～500ug：1ml：1ml；乳剂2的制备步骤中，抗原、弗氏不完全佐剂以及pbs的用量比为300～500ug：1ml：1ml；最优选地，乳剂1的制备步骤中，抗原、弗氏完全佐剂以及pbs的用量比为400ug：1ml：1ml；最优选地，乳剂2的制备步骤中，抗原、弗氏不完全佐剂以及pbs的用量比为400ug：1ml：1ml。3.根据权利要求1所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，第一次、第二次、第三次以及第四次免疫过程中，注射的抗原量为40～60ug；最优选地，第一次、第二次、第三次以及第四次免疫过程中，注射的抗原量为50ug/只。4.根据权利要求1所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，免疫步骤中所述的注射是指皮下注射；免疫步骤中所述的动物为小鼠。5.根据权利要求1所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，第一次免疫的时间为2～3周；第二次免疫的时间为2周；第三次免疫的时间为1周；第四次免疫的时间为1周。6.根据权利要求1所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，所述的抗体纯化步骤具体包括：(1)用8～12倍柱体积的pbs缓冲液洗涤平衡层析柱；(2)将动物血清高速离心后的上清液与pbs缓冲液混合，然后加入到层析柱中；所述上清液与pbs缓冲液的体积比为1:1～2；(3)用8～12倍柱体积的pbs缓冲液洗脱，至流出液无蛋白检出，关闭层析柱停止洗脱；(4)加入2～4倍柱体积的含柠檬酸的pbs缓冲液或含柠檬酸和甘氨酸组成的pbs缓冲液，静置5～10min；接着进行洗脱，收集洗脱液，浓缩洗脱液冻干即得所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体。7.根据权利要求6所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的含柠檬酸的pbs缓冲液是指含0.1m柠檬酸的pbs缓冲液；所述的含柠檬酸和甘氨酸组成的pbs缓冲液是指含0.7m柠檬酸和0.3m甘氨酸组成的pbs缓冲液。8.权利要求1～7任一项所述的制备方法制备得到的可检测烟草凝集素蛋白的抗体。
9.根据权利要求8所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体，其特征在于，所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体具有seq id no：2或/和seq id no：3所述的氨基酸序列。10.权利要求8所述的可检测烟草凝集素蛋白的抗体在检测烟草凝集素蛋白中的应用。

技术总结
本发明涉及烟草凝集素蛋白检测技术领域，具体公开了一种可检测烟草凝集素蛋白的抗体及其制备方法和应用。所述的制备方法包含如下步骤：乳剂1的制备步骤：乳剂2的制备步骤：免疫步骤：所述的免疫步骤包括，将乳剂1注射至动物体内对动物进行第一次免疫；第一次免疫结束后，将乳剂2注射至动物体内对动物进行第二次免疫；第二次免疫结束后，将乳剂2注射至动物体内对动物进行第三次免疫；和/或第三次免疫结束后，将乳剂2注射至动物体内对动物进行第四次免疫；以及抗体纯化步骤。由该方法制备得到的抗体对于测烟草凝集素蛋白的特异性高，可以用于检测烟草凝集素蛋白，为烟草凝集素的检测提供了一种新的途径。提供了一种新的途径。


技术研发人员：袁清华 黄振瑞 马柱文
受保护的技术使用者：广东省农业科学院作物研究所
技术研发日：2021.08.05
技术公布日：2021/11/4