一种用于重症急性胰腺炎肠道功能障碍的小分子多肽的制作方法

1.本发明涉及一种用于重症急性胰腺炎肠道功能障碍的小分子多肽，属于生物医药技术领域。


背景技术：

2.重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，sap)是临床上常见的急危重症之一，其病情凶险、并发症多。近来研究发现，直接威胁sap患者的不是胰腺坏死，而是与肠道细菌移位，肠源性内毒素血症密切相关：在急性胰腺炎起病的早期即出现肠屏障功能障碍，肠道通透性增加导致细菌易位，进而继发感染、肠源性败血症、二次加重全身炎症反应综合征，进而引起多器官功能障碍综合征，甚至死亡。因此，保护正常的肠黏膜功能与结构，预防sap时的肠源性感染，对sap的治疗能起到极为重要的作用。
3.目前，保护肠屏障功能的措施有液体复苏、抗氧化应激、抗炎性介质、肠内营养、调节肠道菌群和中医中药等治疗。虽然一定程度上缓解了患者的临床症状，但重症急性胰腺炎并发肠源性感染后的死亡率仍较高。
4.近年来，多肽类药物由于其毒性低、免疫反应小、分子量小等优势成为生物药物研发的热门方向之一。越来越多具有诊断及治疗潜能的内源性多肽被应用于代谢性疾病、心血管疾病、神经系统疾病、肿瘤等领域的治疗。然而，目前具有保护sap肠道功能障碍的小分子多肽类药物未见报道。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题是：开发一种用于重症急性胰腺炎的小分子多肽药物。
6.为了解决上述技术问题，本发明公开了一种用于重症急性胰腺炎肠道功能障碍的小分子多肽，该小分子多肽的氨基酸序列如seq id no：1所示。
7.优选地，所述的小分子多肽的纯度为95％以上。
8.本发明还提供了上述的用于重症急性胰腺炎肠道功能障碍的小分子多肽在制备治疗和/或预防重症急性胰腺炎肠道功能障碍的药物中的应用。
9.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
10.1.本发明首次筛选得到一条来源于apaf
‑
1(凋亡蛋白酶激活因子1)的小分子多肽，该小分子多肽在重症急性胰腺炎肠道屏障功能障碍大鼠血清中高表达；该小分子多肽的不稳定系数为27.76，脂肪指数为79.53，亲水性为
‑
0.337，属稳定型多肽，且脂溶性好，易于进入细胞；
11.2.本发明将小分子多肽用于制备治疗sap肠道功能障碍的药物，并且通过动物模型实验验证了该小分子多肽能够明显改善sap大鼠肠粘膜的结构；能够显著提高sap大鼠肠组织dao水平；以及能够明显增加sap大鼠肠道紧密连接蛋白的表达。
附图说明
12.图1：小分子多肽在sap大鼠血清中的表达明显升高；
13.图2：小分子多肽明显改善sap大鼠肠粘膜的结构；
14.图3：小分子多肽显著提高sap大鼠肠组织dao水平；
15.图4：小分子多肽明显增加sap大鼠肠道紧密连接蛋白的表达；
16.其中，图1、2～4中的*号代表具有显著性差异，p<0.05。
具体实施方式
17.为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
18.实施例1
19.小分子多肽的筛选及制备：
20.应用nano lc
‑
ms/ms质谱技术筛选重症急性胰腺炎肠道屏障功能障碍相关的多肽，在差异多肽中，根据
①
质谱信号高
②
组内差异小
③
组间差异大的筛选原则，筛选出一条来源于apaf
‑
1(凋亡蛋白酶激活因子1)的多肽，该多肽在重症急性胰腺炎肠道屏障功能障碍大鼠血清中高表达，如图1所示。该小分子多肽的序列为hacfsqdgqriascgadktlqvfkaetgeklldikahedevlc(seq id no：1)，其具有43个氨基酸，不稳定系数为27.76，脂肪指数(aliphatic index)为79.53，亲水性(grandaverage of hydropathicity，gravy)为
‑
0.337，属稳定型多肽，且脂溶性好，易于进入细胞。该多肽的制备由上海科肽生物技术公司通过固相化学合成，纯度在95％以上。
21.实施例2
22.小分子多肽的应用：
23.采用牛磺胆酸胰胆管逆行注射法制备sap肠损伤模型，术后0h、3h通过腹腔注射多肽(5mg/kg)，对照组注射同剂量生理盐水，观察实施例1的小分子多肽对sap肠道损伤的保护作用，术后24h处死大鼠，取回肠组织，进行组织切片染色。结果发现：he染色表明假手术组肠组织结构正常；sap肠损伤组可观察到肠黏膜出现片状坏死、糜烂、固有层结构破坏、绒毛脱落，腺体受损；多肽治疗组肠粘膜结构损伤明显减轻，如图2所示。取回肠组织，使用分光光度计法测定dao，结果显示多肽治疗组dao明显高于sap组，如图3所示。进一步pcr检测回肠组织紧密连接蛋白zo
‑
1和claudin
‑
1，提示多肽治疗可明显改善sap肠屏障功能损伤所致紧密连接蛋白的表达变化，如图4所示。以上实验结果表明实施例1的小分子多肽在sap肠粘膜屏障功能损伤中发挥保护作用。
24.上述实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。


技术特征：
1.一种用于重症急性胰腺炎肠道功能障碍的小分子多肽，其特征在于，该小分子多肽的氨基酸序列如seq id no：1所示。2.如权利要求1所述的用于重症急性胰腺炎肠道功能障碍的小分子多肽，其特征在于，所述的小分子多肽的纯度为95％以上。3.权利要求1或2所述的用于重症急性胰腺炎肠道功能障碍的小分子多肽在制备治疗和/或预防重症急性胰腺炎肠道功能障碍的药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种用于重症急性胰腺炎肠道功能障碍的小分子多肽。本发明小分子多肽具有43个氨基酸，其氨基酸序列为HACFSQDGQRIASCGADKTLQVFKAETGEKLLDIKAHEDEVLC。本发明的小分子多肽的不稳定系数为27.76，脂肪指数为79.53，亲水性为


技术研发人员：陈玉梅 童朝阳 杜施霖
受保护的技术使用者：复旦大学附属中山医院
技术研发日：2021.08.09
技术公布日：2021/11/4